α3β4乙酰胆碱受体在非洲爪蟾卵母细胞上的表达

建立以哺乳动物α3β4乙酰胆碱受体(nAChR)为分子靶标的药物筛选模型。将大鼠乙酰胆碱受体的α3与β4亚基基因分别进行体外转录,获得α3与β4亚基基因的cRNA,按1∶1的比例将适量α3与β4的cRNA混合后,显微注射到新鲜分离的非洲爪蟾卵母细胞中,在ND96溶液中、17℃下培养24 h后,通过双电极电压钳技术(TEVC)检测受体α3β4 nAChR的乙酰胆碱(Ach)门控电流。同时注入α3、β4 cRNA的非洲爪蟾卵母细胞孵育24h后,可记录到明显的Ach门控内向电流,未注射或只注射ddH2O的对照组细胞则没有任何电流产生。α3β4乙酰胆碱受体在非洲爪蟾卵母细胞膜上成功表达,以此为药物作用靶点,可用于大量生物毒素等物质的活性筛选实验模型。     

非洲爪蟾卵母细胞上内源性ATP及GABA激活电流的比较

实验用双电极电压钳技术在具有滤泡膜的非洲爪蟾卵母细胞上记录三磷酸腺苷 (ATP)与γ-氨基丁酸 (GABA)激活电流 ,并对两者进行了比较。结果显示 ,在不同的非洲爪蟾卵母细胞上 ,ATP和 GABA受体分布的种类和数目不同 ;且 ATP和 GABA激活电流均与 K+通道有关     

在非洲爪蟾卵母细胞上表达大鼠肌肉乙酰胆碱受体的方法学研究

目的 :建立适合于研究肌肉松驰药作用的乙酰胆碱受体的实验模型。方法 :采用磁珠技术从大鼠肌肉中提取多聚腺嘌呤mRNA ,注入去膜的非洲爪蟾卵母细胞 ,表达为有功能的离子通道 ,并与未去膜和去膜未注射的卵母细胞比较 ,利用电压钳方法记录电压依赖性的离子通道电流 ,观察并分析三组电流特性。结果 :三组卵母细胞的静息膜电位和钳制到 - 6 0mV时的补偿电流之间无显著的统计学意义 ,通过去除卵母细胞的卵泡膜可以去除内源性受体的干扰 ,在注射大鼠肌肉mRNA的卵母细胞膜上记录到典型的N2 型ACh受体的电流。结论 :本实验建立的模型可作为在细胞和蛋白水平研究肌松药的方法。     

淀粉样β蛋白1-40对爪蟾卵母细胞表达的淋巴细胞神经递质受体功能的影响

观察淀粉样β蛋白_1-40(Aβ_1-40)对爪蟾卵母细胞表达的淋巴细胞神经递质受体(NR)功能的影响,探讨淋巴细胞NR功能检测在阿尔茨海默痴呆(AD)病理生理学上的意义. 将提取的人外周血淋巴细胞mRNA(50 ng)显微注射到成熟的非洲爪蟾卵母细胞,在(19.0±1.0)℃条件下孵育24 h后采用双电极电压钳位记录-60 mV维持电位时的受体激活电流. Aβ_1-40于记录前12 h加入孵育液. 结果发现注射人外周血淋巴细胞mRNA的爪蟾卵母细胞能表达出乙酰胆碱, 谷氨酸, 多巴胺, 5-羟色胺和γ-氨基丁酸受体. 这些表达的受体激活电流的共性是由氯离子载流的内向电流,其平衡电位接近于-22 mV. Aβ_1-40 60 nmol·L^-1对卵母细胞表达的NR功能有抑制效应,其NR峰电流降低分别为乙酰胆碱23%, 谷氨酸27%, 多巴胺25%,维生素E有拮抗Aβ_1-40效应的作用。外周血淋巴细胞NR功能检测作为AD外周评价指标值得更深入的研究.     

非洲爪蟾卵母细胞内源性ATP激活外向电流的分析

应用双电极电压钳记录及胞内透析方法对非洲爪蟾卵母细胞内源性 ATP激活外向电流进行了分析。结果表明 ,ATP电流的 H成份仍为 K+外流所致 ,而其胞内机制也有 PKC参与。     

Ⅱ、Ⅲ组亲代型谷氨酸受体激动剂对6-羟基多巴诱导的PC12细胞毒性无保护作用

阐明Ⅱ、Ⅲ组亲代谢型谷氨酸受体(metabotropic glutamate receptors,mGluRs)激动剂对6—羟基多巴(6-hydroxydopamine,6-OHDA)诱导的PC12细胞毒性是否具有保护作用。方法：应用高效液相色谱仪联用荧光检测技术测定谷氨酸浓度，应用四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法测定PC12细胞活性。结果：6—OHDA剂量依赖性地诱导PC12细胞释放谷氨酸、减低细胞活性，Ⅱ组mGluRs激动剂DCG—IV和Ⅲ组mGluRs激动剂L-AP4对6—0HDA诱导的PC12细胞释放谷氨酸和细胞活性的降低均无显影响。结论：6—OHDA对多巴胺神经元的损伤作用与其诱导谷氨酸过度释放及其继发的兴奋性神经毒性有关，Ⅱ、Ⅲ组亲代谢型谷氨酸受体激动剂对6—OHDA诱导的PC12细胞毒性无保护作用。     

亲代谢型谷氨酸受体配基对黑质6-羟基多巴损毁大鼠的抗氧化作用

目的　探讨亲代谢型谷氨酸受体 (mGluRs)配基对帕金森病 (PD )模型大鼠的抗氧化作用。方法　采用 6 羟基多巴单侧黑质损毁建立帕金森病大鼠模型 ,应用化学比色法测定血清总抗氧化能力 (T AOC)、抑制活性氧能力 (ROS)和谷胱甘肽 (GSH )含量。结果　与模型对照组相比 ,Ⅰ组mGluRs拮抗剂 (SIB 1893 ) ,Ⅱ组mGluRs激动剂 (APDC) ,Ⅲ组mGluRs激动剂 (L SOP )和L DOPA均能增加血清T AOC和GSH水平 ,提高清除ROS能力 ,尤以APDC组作用最明显。结论　Ⅰ组mGluRs拮抗剂和Ⅱ、Ⅲ组mGluRs激动剂对 6 羟基多巴损毁大鼠具有部分抗氧化功能 ,有利于机体减轻氧化应激所致的损伤     

自由基对爪蟾卵母细胞表达的大白鼠脑皮层谷氨酸受体和5－羟色胺受体的作用

采用爪蟾卵母细胞和黄嘌呤氧化酶一次黄嘌呤反应系统研究了自由基对大白鼠脑皮层谷氨酸受体和５－羟色胺受体的作用。自由基抑制谷氨酸和５－羟色胺引起的去极化反应，但不影响膜的被动电学参数。自由基对受体的作用表现为去极化幅度下降及半衰退时间缩短；去极化的潜伏期和上升时间延长（Ｐ＜０．００１或Ｐ＜００１），说明白由基作用于移植到卵母细胞膜上的受体，抑制了谷氨酸和５－羟色胺引起的去极化反应。提示在本实验条件下，神经递质受体自由基作用的敏感性高于卵母细胞的质膜。此标本适于研究自由基对神经递质受体的作用。     

α7烟碱型乙酰胆碱受体点突变体的制备及其功能研究

目的 利用氨基酸定点突变技术以大鼠野生型α7烟碱型乙酰胆碱受体(nAChR)为模板制备α7 nAChR突变体。方法 采用体外转录、定点突变、凝胶电泳、双电极电压钳等技术对α7 nAChR进行点突变,在非洲爪蟾卵母细胞上表达α7 nAChR及其突变体,并研究其受体活性功能。结果 将α7 nAChR第111位的丙氨酸突变为丝氨酸,制备了α7 nAChR的点突变体,测定了突变体对激动剂乙酰胆碱(ACh)的半数效应浓度(EC₅₀)为165.6 μmol/L。结论 该结果不仅为受体定点突变提供了一种方法,同时为药物筛选和研究α7 nAChR结构与功能关系提供了模型。     

Ⅱ、Ⅲ组亲代谢型谷氨酸受体激动剂对脂多糖抑制C6胶质瘤细胞摄取谷氨酸的影响

目的探讨Ⅱ、Ⅲ组亲代谢型谷氨酸受体(metabotropic glutamate receptors, mGluRs)激动剂对脂多糖(LPS)抑制C6胶质瘤细胞摄取谷氨酸(glutamate, Glu)的影响.方法应用同位素标记法测定C6胶质瘤细胞对[3H]-D,L-Glu的摄取.应用Hoechst染色法、噻唑蓝比色法(MTT)分别检测C6胶质瘤细胞的凋亡、细胞活力.结果LPS(4、6 μg/Ml)显著抑制C6胶质瘤细胞摄取[3H]-D,L-Glu,抑制率分别达 17.6%和 22.2%.Ⅱ组mGluRs激动剂 DCG-Ⅳ 100 μmol/L 和Ⅲ组mGluRs激动剂L-AP4 100 μmol/L 逆转LPS对C6胶质瘤细胞摄取[3H]-D,L-Glu的抑制作用,这种逆转作用分别被Ⅱ、Ⅲ组mGluRs拮抗剂 APICA和MSOP取消.结论DCG-Ⅳ和L-AP4逆转LPS引起的C6胶质瘤细胞Glu摄取抑制,提示Ⅱ、Ⅲ组mGluRs激动剂通过促进Glu摄取,降低细胞外Glu浓度,从而发挥神经保护作用.     

谷氨酸神经细胞毒作用的新途径——谷氨酸/胱氨酸转运体介导机制

谷氨酸是中枢神经系统主要的兴奋性神经递质 ,与许多神经系统疾病有密切关系。谷氨酸除通过激活谷氨酸受体产生兴奋性神经毒性外 ,还可通过抑制细胞膜上谷氨酸 /胱氨酸转运体的功能产生细胞毒性作用 ,该作用以细胞内谷胱甘肽耗竭和活性氧成分升高为主要特征 ,被称为谷氨酸的氧化毒性 ,对许多神经系统疾病的治疗具有重要意义。     

脑缺血后谷氨酸及其受体介导的神经细胞损伤及相关药物研究进展

脑缺血损伤涉及多种病理过程,其中兴奋性毒性是关键机制之一。谷氨酸是脑内主要的兴奋性递质,谷氨酸及其受体的病理变化是引起兴奋性毒性的重要病理基础。该文综述了脑缺血后谷氨酸异常释放、谷氨酸受体表达变化及受体后信号传导等病理机制,及以上述机制为靶点的药物研究进展。     

The glutamatergic system outside the CNS and in cancer biology

Glutamate is a major excitatory neurotransmitter in the CNS. The signalling machinery consists of: glutamate receptors, which are responsible for signal input; plasma glutamate transporters, which are responsible for signal termination; and vesicular glutamate transporters for signal output through exocytic release. Recently, data have suggested that the glutamatergic system plays an important role in non-neuronal tissues. In addition, the expression of glutamatergic system has been implicated in tumour biology. This review outlines the evidence, which suggests that the glutamatergic system may have an important role in cancer biology.     

代谢型谷氨酸受体与应激损伤

代谢型谷氨酸受体 (mGluRs)在应激性损伤中的作用日益受到重视 ,它可参与GC水平的调节 ,影响谷氨酸神经毒性作用和突触可塑性 (LTP、LTD)的诱导 ,由此表明mGluRs在应激性损伤中可能占有重要的地位。由于不同类型的mGluRs具有不同的作用 ,机制较为复杂 ,因此 ,今后还需进一步加强mGluRs与应激性损伤关系的研究     

Amitriptyline inhibits the activity of the rat glutamate transporter EAAT3 expressed in Xenopus oocytes

Objectives Evidence suggests that glutamatergic systems may be involved in the pathophysiology of major depression and the mechanism of action of antidepressants. We have investigated the effects of amitriptyline, a tricyclic antidepressant, on the activity of the excitatory amino acid transporter type 3 (EAAT3), a protein that can regulate extracellular glutamate concentrations in the brain. Methods EAAT3 was expressed in Xenopus oocytes. Using a two‐electrode voltage clamp, membrane currents were recorded after application of 30 μM l ‐glutamate in the presence or absence of various concentrations of amitriptyline or after application of various concentrations of l ‐glutamate in the presence or absence of 0.64 μM amitriptyline. Key findings Amitriptyline concentration‐dependently reduced EAAT3 activity. This inhibition reached statistical significance at 0.38–1.27 μM amitriptyline. Amitriptyline 0.64 μM reduced the pharmacokinetic parameter V_max, but did not affect the pharmacokinetic parameter K_m, of EAAT3 for l ‐glutamate. The amitriptyline inhibition disappeared after a 4‐min washout. Phorbol‐12‐myristate‐13‐acetate, a protein kinase C activator, increased EAAT3 activity. However, 0.64 μM amitriptyline induced a similar degree of decrease in EAAT3 activity in the presence or absence of phorbol‐12‐myristate‐13‐acetate. Conclusions Our results suggested that amitriptyline at clinically relevant concentrations reversibly reduced EAAT3 activity via decreasing its maximal velocity of glutamate transporting function. The effects of amitriptyline on EAAT3 activity may have represented a novel site of action for amitriptyline to increase glutamatergic neuro‐transmission. Protein kinase C may not have been involved in the effects of amitriptyline on EAAT3.     

谷氨酸钠注射液的酶电极法含量测定

以固定化谷氨酸氧化酶（ＥＣ１．４．３．１１）与过氧化氢电极构成电流型酶电极生物传感器，可用于测定谷氨酸钠注射液中谷氨酸钠的含量。固定化谷氨酸氧化酶膜使用寿命〉１２０ｄ，测得注射液中谷氨酸钠含量的平均回收率为１００．６％。     

Involvement of Hypothalamic Glutamate in Cisplatin-Induced Emesis in Suncus murinus (House Musk Shrew)

We investigated the effect of cisplatin on glutamate release in the hypothalamus of Suncus murinus measured by brain microdialysis. Dialysis samples were collected every 20 min for 1 h before and 3 h after the cisplatin (30 mg/kg, i.p.) administration with the animals also being observed for the development of emesis. Cisplatin increased glutamate levels within 1 h and this was closely associated with the occurrence of emesis. Pretreatment with the 5-HT₃– receptor antagonist ondansetron (2 mg/kg, i.p.) inhibited both the emesis and the increased glutamate levels. These results suggest that hypothalamic glutamate is involved in cisplatin-induced emesis in Suncus murinus.     

脑缺血时谷氨酸释放机制

谷氨酸是中枢神经系统主要的兴奋性神经递质,在脑缺血造成的神经元损伤过程中发挥重要作用。脑缺血时多种机制参与了谷氨酸释放的的调节,如Ca2+依赖性的出胞式释放、谷氨酸转运体调节的释放、水肿诱发的释放和受体调节的释放等。本文根据现有的文献资料,综述了脑缺血时谷氨酸释放机制。     

6-羟基多巴的细胞毒作用与谷氨酸转运的关系

目的探讨6-羟基多巴(6-OHDA)导致细胞毒性与谷氨酸(glutamate,Glu)递质水平和谷氨酸转运体的相关性。方法大鼠脑黑质内定位注射6-OHDA,制备帕金森病(Parkinson's disease,PD)动物模型;用在体微透析技术收集大鼠纹状体细胞外液;用高效液相色谱法测定PD大鼠纹状体和PC12细胞的细胞外液中Glu的水平;用流式细胞仪和酶标仪检测细胞凋亡率和细胞活性;通过测定L-［³H］-Glu的摄取能力确定谷氨酸转运体的功能。结果6-OHDA诱导PC12细胞和大鼠损毁侧纹状体释放Glu增加,使PC12细胞凋亡和活性降低,而PC12细胞和突触体上的谷氨酸转运体功能显著下降。结论6-OHDA引起的神经毒性与其增加Glu释放和降低谷氨酸转运体功能有关。     

The mGluR2/3 Agonist LY379268 Blocks the Effects of GLT-1 Upregulation on Prepulse Inhibition of the Startle Reflex in Adult Rats

The main glutamate transporter GLT-1 is responsible for clearing synaptically released glutamate from the extracellular space and contributes to the shaping of glutamatergic transmission. Recently, it has been shown that ceftriaxone (CEF)-induced GLT-1 upregulation is associated with an impairment of the prepulse inhibition (PPI) of the startle reflex, a simple form of information processing that is reduced in schizophrenia, and determines a strong reduction in hippocampal metabotropic glutamate receptor (mGluR)2/3-dependent long-term depression. In this study, we tested the hypothesis that administration of the mGluR2/3 agonist {"type":"entrez-nucleotide","attrs":{"text":"LY379268","term_id":"1257807854"}}LY379268 blocks the effect of GLT-1 upregulation on PPI of the startle. We showed that administration of {"type":"entrez-nucleotide","attrs":{"text":"LY379268","term_id":"1257807854"}}LY379268 (1 mg/kg) prevented PPI alterations associated with GLT-1 upregulation, suggesting that CEF-induced PPI impairment was mGluR2/3 dependent. In addition, we showed that CEF-induced GLT-1 upregulaton did not alter the expression of mGluR2/3, and also that it occurred at sites of mGluR2/3 expression. These results indicate a novel mechanism by which GLT-1 upregulation modulates PPI of the startle.