WWOX基因在贲门腺癌中的异常甲基化及其表达

目的:探讨贲门腺癌(gastric cardia adenocarcinoma,GCA)中WWOX( WW domain-containing oxidoreductase)基因启动子区及第1外显子区的甲基化状态及其对表达的影响,并分析贲门腺癌中WWOX与Smad4(mothers against decapentaplegic homolog 4)蛋白表达之间的关系.方法:分别应用甲基化特异性PCR和免疫组织化学法检测贲门腺癌组织及其相应癌旁组织中WWOX基因的甲基化和蛋白的表达情况:应用免疫组织化学法检测贲门腺癌组织及其相应癌旁组织中Smad4蛋白的表达.结果:贲门腺癌组织中WWOX基因启动子区(- 382～- 41 bp)及第1外显子区(- 27～+344 bp)的甲基化率[26.4％ (33/125)和23.2％ (29/125)]显著高于其相应的癌旁常组织(0％和0％)(P＜0.01),并与贲门腺癌TNM分期和上消化系统肿瘤家族史有关(P＜0.05).贲门腺癌组织中WWOX蛋白的表达阳性率显著低于相应癌旁组织(P＜0.01),WWOX蛋白的表达与WWOX启动子区和第1外显子区甲基化状态之间呈负相关(r=-0.216,r=-0.255,P＜0.05).贲门腺癌组织中Smad4蛋白表达的阳性率(47.2％)显著低于相应癌旁组织(94.4％)(P＜0.01),且与WWOX在贲门腺癌中的表达呈明显的正相关(r=0.622,P＜0.01).结论:WWOX基因启动子区及第1外显子区的高甲基化导致的基因表达下调可能在贲门腺癌中发挥重要作用.     

MSP法检测胃癌组织中RASSF1A基因启动子区甲基化改变

目的:探讨抑癌基因RASSF1A启动子区CpG岛甲基化与胃癌及临床病理特征的关系.方法:采用甲基化特异性PCR(methylation-specific PCR,MSP)法检测60例胃癌组织及相应癌旁组织和30例对照组织中RASSF1A基因启动子区甲基化状态.结果:胃癌组织中RASSF1A基因启动子区CpG岛甲基化率为65.0%(39/60),显著高于癌旁组织6.7%(4/60),及对照组0%(0/30)(P＜0.01).胃癌组织中不同年龄、性别、分化程度及淋巴结转移与否的RASSF1A基因甲基化率的差异均无统计学意义.结论:胃癌中RASSF1A基因启动子区的高甲基化提示其与胃癌的发生密切相关,MSP法对RASSF1A基因启动子区甲基化的检测有望成为胃癌早期监测的重要方法.     

食管鳞癌中hMLH1、E-cadherin、p16^INK4a基因启动子甲基化及其意义

背景与目的:目前认为抑癌基因启动子甲基化导致转录抑制是恶性肿瘤发生的重要机制之一,hgLH1、E-cadherin及p16INK4a基因在多种恶性肿瘤中都已被证实存在较高频率的甲基化.本研究通过检测食管鳞癌组织及癌旁组织中hMLH1、E-cadherin,p16INK4a基因启动子甲基化的发生情况,探讨hMLH1、E-cadherin、p16INK4a基因启动子甲基化在食管鳞癌发生发展中的作用.方法:采用酚-氯仿法提取105例食管鳞癌组织及癌旁组织的基因组DNA,应用甲基化特异性PCR对所提DNA进行hMLH1、E-cadherin、p16INK4a基因甲基化检测.采用EnVison免疫组织化学二步法对癌组织中上述3种基因蛋白表达进行检测.结果:癌组织中E-cadherin、hMLH1、p16INK4a基因启动子甲基化的阳性率分别为57.1%(60/105)、20.9%(22/105)和50.5%(53/105),而癌旁食管组织中相应的3个基因的甲基化率分别为10.5%(11/105)、1.9%(2/105)和7.6%(8/105),均显著低于癌组织.E-cadherin(P=0.021)及p16INK4a(P=0.026)基因甲基化与蛋白表达缺失密切相关,而hMLH1基因甲基化与蛋白表达无显著相关性.E-cadherin基因启动子甲基化与淋巴结转移有关(P=0.016),p16INK4a基因启动子甲基化与低分化癌有关性(P=0.024).hMLH1基因甲基化与各项临床病理特征均无关.结论:食管鳞癌中p16INK4a基因启动子甲基化与相应蛋白表达缺失密切相关,且在低分化癌中更多见;E-cadherin基因启动子甲基化与相应蛋白质表达缺失有相关性,并且有淋巴结转移多见的显著特征,这2个基因的甲基化位点与食管鳞癌密切相关.hMLH1基因甲基化可能并不直接参与食管鳞癌的发生、发展.     

MicroRNA-335的表遗传学调控机制及其与胃癌患者临床病理特征的关系

目的:探索miR-335基因启动子区甲基化状态对胃癌组织及细胞系中miR-335表达水平的影响,以及miR-335基因启动子区甲基化状态与胃癌患者临床病理特征以及预后的关系。方法:收集2012年7月1日-2014年7月1日中国医科大学附属第四医院就诊经病理诊断为原发性胃癌并行根治性手术的108例新鲜胃癌组织及配对癌旁组织,1株永生化的胃黏膜上皮细胞系(GES-1)和4株胃癌细胞系(SGC-7901、MKN-45、BGC-823和AGS)。实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测胃癌细胞株及108例胃癌患者肿瘤组织中miR-335的表达水平。甲基化特异性PCR(MSP)方法检测胃癌细胞系及胃癌患者肿瘤组织中miR-335的基因启动子区甲基化状态。分析miR-335基因启动子区甲基化状态对胃癌患者临床病理特征的影响。结果:qRT-PCR检测结果显示,miR-335在胃癌细胞株中的表达水平显著低于正常胃黏膜上皮细胞株GES-1［MKN-45,0.154±0.016-fold(P＜0.01);SGC-7901,0.138±0.013-fold(P＜0.01);BGC-823,0.432±0.076-fold(P＜0.01);AGS,0.749±0.072-fold(P=0.01)］。miR-335在108例胃癌组织中的表达水平较癌旁组织存在明显下降,差异显著（P＜0.001）。MSP的实验结果表明,MKN-45、SGC-7901、AGS和BGC-823细胞株均存在基因启动子区异常高甲基化状态。miR-335基因启动子区的高甲基化状态与肿瘤大小(P=0.004)、淋巴结转移(P=0.046)、淋巴管浸润(P=0.001) 和miR-335 低表达 (P<0.001) 显著相关。结论:miR-335启动子区的高甲基化状态抑制了miR-335在胃癌细胞中的表达,miR-335的基因启动子区异常高甲基化状态与胃癌患者的肿瘤大小、淋巴结转移以及淋巴管浸润显著相关。     

食管鳞癌中p16基因启动子区甲基化及其表达

 目的探讨食管鳞癌（ESCC）p16基因甲基化的状况及其表达与食管鳞癌临床病理特征之间的关系。方法采用甲基化特异性PCR方法（MSP）分别检测75例食管癌组织、癌旁组织和切缘组织p16基因启动子区域CpG岛甲基化状态。采用Envision免疫组化法检测食管癌组织及癌旁组织的p16蛋白的表达。结果75例标本中，食管癌组织、癌旁组织和切缘细织p16基因甲基化率分别为41．3％（31／75）、13．3％（10／75）和6．67％（5／75）。癌组织和癌旁组织P16蛋白的阳性表达率分别为29．3％（22／75）和56．7％0（17／30）。31例癌组织p16基因甲基化阳性标本中有2例（6．4％）检测到P16蛋白的表达，而44例癌组织p16基因甲基化阴性标本中有20例（45．5％）检测到P16蛋白的表达。食管癌组织p16基因甲基化率显著高于癌旁组织和切缘组织（P〈0.01），P16蛋白表达与p16基因甲基化呈负相关。p16基因启动子区甲基化与食管癌的组织学分级、肿瘤部位无明显相关，与临床分期、淋巴转移密切相关。结论p16基因甲基化在食管癌发生发展中起着重要作用，食管鳞癌的分期和淋巴结转移与p16基因甲基化之间有密切关系。     

凋亡蛋白酶活化因子-1基因在贲门腺癌中的甲基化状态及其临床意义

目的:探讨贲门腺癌(gastric cardiac adenocarcinoma,GCA)中凋亡蛋白酶活化因子-1(apoptosis protease activating factor-1,Apaf-1)基因启动子区甲基化状态及其与果蝇zeste基因增强子人类同源物2(enhancer of zeste homolog 2,EZH2)蛋白表达之间的相关性.方法:应用甲基化特异性PCR(methylation specific polymerase chain reaction,MSP)检测GCA组织及癌旁组织中Apaf-1基因甲基化状态,应用免疫组织化学法检测GCA组织及癌旁组织中Apaf-1和EZH2蛋白的表达情况.结果:GCA组织中Apaf-1基因甲基化率显著高于癌旁组织[49.6％ (62/125)vs4.0％(5/125),P＜0.01],Ⅲ期和Ⅳ期GCA组织中Apaf-1基因甲基化率显著高于Ⅰ期和Ⅱ期(58.8％vs 38.6％,P＜0.05),但GCA组织中Apaf-1基因甲基化率与GCA的组织学分化程度无关(P＞0.05).GCA组织中Apaf-1蛋白表达阳性率显著低于相应癌旁组织(39.2％ vs 96.0％,P＜0.O1),且与Apaf-1基因甲基化状态相关.GCA组织中EZH2蛋白表达阳性率显著高于相应癌旁组织(74.4％vs 11.2％,P＜0.01),且与Apaf-1蛋白的表达呈负相关.结论:GCA组织中Apaf-1基因启动子区呈高甲基化,Apaf-1和EZH2蛋白可能共同参与了GCA的发展.     

胃癌组织RASAL1基因启动子甲基化及临床意义研究

目的:研究胃癌组织中RASAL1基因启动子的甲基化状态并分析其与临床病理资料的关系,初步探讨RASAL1基因启动子甲基化在胃癌发生发展中的意义。方法:取40例胃癌患者手术标本,使用甲基化特异性PCR(MSP)技术分别检测胃癌组织及相应癌旁组织中RASAL1基因启动子的甲基化状态,并分析其与胃癌临床病理特征的关系。结果:胃癌组织和癌旁组织中RASAL1基因启动子甲基化率分别为70%(28/40)和30%(12/40),胃癌组织中RASAL1基因启动子的甲基化发生率明显高于癌旁组织,P<0.01。胃癌组织中RASAL1基因启动子的甲基化率与性别(P=0.622)、年龄(P=0.168)无明显相关;但与分化程度(P=0.006)、肿瘤大小(P=0.043)、侵袭深度(P=0.015)和淋巴结转移相关(P=0.010);在肿瘤体积大、分化程度差、侵袭深度较深和有淋巴结转移的胃癌组织中,RASAL1基因启动子甲基化率明显增高。结论:胃癌组织中RASAL1基因启动子区域甲基化发生率高,且与分化程度及进展阶段相关,提示RASAL1基因启动子的异常甲基化可能参与了胃癌的发生发展过程。     

乳腺癌APC基因甲基化状况及其蛋白表达

背景与目的:结肠腺瘤性息肉病基因(adenomatous polyposis coli,APC)蛋白表达产物是Wnt信号转导途径重要组成部分,该基因失活使β-catenin蛋白降解障碍,从而使Tcf/Lef激活,引起基因异常转录,最终产生癌变.启动子区甲基化是导致抑癌基因转录失活的重要机制.本研究探讨乳腺癌APC基因启动子1A区甲基化状态与其蛋白表达的关系,并分析APC基因异常甲基化与乳腺癌临床病理特征的关系.方法:应用甲基化特异性PCR和免疫组织化学方法检测76例乳腺癌及相应癌旁乳腺组织中APC基因启动子1A区甲基化状态以及蛋白表达.结果:癌旁乳腺组织中均未发现APC基因启动子1A区甲基化,乳腺癌组织中APC基因启动子1A区甲基化率为36.8%.癌旁乳腺组织中APC蛋白阳性率为100%,乳腺癌中APC蛋白阳性率为52.4%.乳腺癌组织中APG基因甲基化与APC蛋白表达呈负相关(r=-0.351,P＜0.05),与TNM分期呈正相关(r=0.335,P＜0.05).结论:乳腺癌发展过程中APC基因启动子1A区出现异常甲基化,是导致该蛋白表达缺失的主要原因,是导致该基因失活的重要机制之一.     

河南林州地区贲门癌和癌旁组织中p16基因启动子甲基化及蛋白表达

目的探讨贲门癌变过程中p16基因启动子区甲基化和p16蛋白表达变化特征和规律及其相互关系。方法采用甲基化特异PCR（MSP）及免疫组化方法,检测林州地区32例贲门癌患者癌组织、癌旁不典型增生组织和正常组织p16基因启动子区甲基化状态及蛋白表达情况。结果p16基因在癌组织中表达缺失18例（56%）,不典型增生组织中表达缺失8例（73%）;26例（81%）癌组织、7例（64%）不典型增生组织和18例（67%）正常组织发生了p16基因启动子区的甲基化。贲门癌组织中p16基因甲基化与表达缺失一致率为56%。差异无统计学意义,P〉0.05。结论p16蛋白表达缺失可能是贲门癌变过程中的重要分子事件,p16基因启动子区甲基化可能是导致其蛋白表达缺失的机制之一。     

慢性乙型肝炎病毒感染与p16INK4A基因启动子甲基化关系的研究

目的探讨慢性乙型肝炎病毒(HBV)感染对p16INK4A基因启动子甲基化的影响及其在HBV相关肝细胞癌(HCC)形成中的作用。方法选取23例HBV相关HCC癌及癌旁组织、25例慢性乙型肝炎肝穿刺组织,采用甲基化特异性PCR(MSP)检测p16INK4A基因启动子的甲基化状态;免疫组化EnVision二步法测定肝组织内HBsAg、HBcAg、HBeAg和HBx蛋白的表达;荧光实时定量PCR检测肝组织HBV DNA含量;PCR扩增和直接测序检测HBV x基因变异。结果癌组织p16INK4A基因启动子甲基化阳性率(47.83%)明显高于癌旁组织(17.39%),慢性乙型肝炎患者p16INK4A基因启动子甲基化阳性率(36.00%)与癌组织、癌旁组织差异无统计学意义。在癌旁组织和慢性乙型肝炎, p16INK4A基因启动子甲基化者HBx蛋白表达中位数分别为3.000和0.250,明显高于非甲基化者(0.500和0.000),但在癌组织中,HBx蛋白的表达与p16INK4A基因启动子甲基化状态无关。HBsAg、HBcAg、组织HBV DNA含量和x基因突变均与p16INK4A基因启动子甲基化状态无关。结论在癌前病变中,p16INK4A基因启动子甲基化与HBx蛋白高表达有关,HBx蛋白可能通过诱导p16INK4A基因启动子甲基化而使该抑癌基因失活,在HBV相关HCC形成中起重要作用。