孕期低水平铅暴露对子代大鼠海马肾母细胞瘤过度表达基因的影响

目的 观察孕鼠低水平铅暴露对子代大鼠海马组织肾母细胞瘤过度表达基因(NOV)蛋白及mRNA表达的影响,探讨铅影响学习记忆的分子机制.方法 孕鼠随机分为对照组及低剂量(125 mg/L)、中剂量(250 mg/L)、高剂量(500 mg/L)3个染铅组,每组8只.母鼠自受孕1d起分别给予蒸馏水和不同剂量的醋酸铅饮水,直到仔鼠出生.分别在胚胎18 d及仔鼠出生后1、21、60 d时,采用氢化物-原子吸收光谱法测定仔鼠血铅、海马铅含量,免疫组化和原位杂交方法 检测海马NOV蛋白及mRNA的变化.结果 低、中、高剂量染铅组胚胎18d及仔鼠出生后1、21 d时,血铅[(312.46±43.55)、(419.35±62.25)、(541.45±47.90)μg/L、海马铅[(2.10±0.18)、(2.58±0.12)、(3.41±0.23)μg/L]明显高于对照组[分别为(214.31±40.77)、(0.76±0.13)μg/L伽,差异有统计学意义(P<0.05),至60 d龄时,染铅组仔鼠血铅、海马铅含量与对照组无明显差异.免疫组化结果 显示,中、高剂量染铅组在仔鼠出生后1、21 d时,NOV蛋白表达量明显低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05,P<0.01),60 d龄时无明显差异.原位杂交结果 显示,各染铅组在胚胎18 d及仔鼠出生后1、21 d时,NOV mRNA表达量明显低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05,P<0.01),60d龄时,仅高剂量组NOV mRNA表达量(0.0355±0.0100)与对照组(0.0900±0.0200)的差异有统计学意义(P<0.01).结论 孕期低水平铅暴露可使子代海马组织中NOV蛋白及其mRNA表达降低,这可能是铅影响学习记忆能力的分子机制之一.     

铅对仔鼠学习记忆及海马中CTGF表达影响

目的 探讨母体铅染毒对其仔鼠学习记忆海马组织中结缔组织生长因子(CTGF)mRNA和蛋白表达的影响,为进一步研究铅的神经毒作用机制提供科学依据.方法 采用自由饮水的方式于母鼠孕哺期染毒,染毒剂量为0.3,1,3 g/L,每组10只,用石墨炉原子吸收光谱仪测定仔鼠出生后7,14,21 d时血液和海马组织中铅含量.用RT-PCR和免疫组化方法 分别测定21 d不同剂量组仔鼠海马组织中CTGF mRNA和蛋白的表达.结果 各剂量染铅组血染、海马组织中铅含量与对照组比较,明显升高(P均<0.05),血液和海马组织的铅含量随着日龄的变化有一定的规律性;迷宫实验中,对照组、0.3,1,3 g/L组平均潜伏期分别为(39.13±6.12)(43.22±9.86),(50.85±12.35),(50.85±12.35)s,与对照组比较,0.3 g/L组差异无统计学意义(P>0.05),与1,3 g/L剂量组比较差异有统计学意义(P<0.05);在对照组、0.3,1,3 g/L组仔鼠海马组织中,CTGF mRNA的相对表达量分别为(0.354±0.603),(0.945±0.522),(1.223±0.279),(1.612±0.136);CTGF蛋白表达的灰度值分别为(126.10±32.11),(186.31±36.17),(220.94±31.27),(286.21±31.24);与对照组比,0.3,1,3 g/L组海马中(CTGFmRNA和蛋白表达明显升高(P均>0.05).结论 孕哺期母体铅暴露可使铅在仔鼠体内人蓄积,引起仔鼠学习记忆力功能损害;铅所引起的神经毒性可能通过铅诱导CTGF mRNA和蛋白的高表达,造成神经系统的损害.     

铅对仔鼠海马酸敏感离子通道表达的影响

目的 研究慢性铅染毒对仔鼠海马酸敏感离子通道(ASm)la、2a、2b mRNA和蛋白表达的影响.方法 孕鼠随机分为蒸馏水对照组及0.2%、1.0%醋酸铅组,每组5只,从妊娠第0天起开始通过自由饮水染铅.幼鼠出生后,先经哺乳染铅,断乳后则自由饮用与其母鼠浓度相同的含铅水.分别于出生后第8、50天处死仔鼠,测定其脑铅含量,反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和免疫印迹(Western blotting)法分别观察各组仔鼠海马ASIC1a、ASIC2a、ASIC2bmRNA及蛋白的表达情况.结果 同一发育时期的染铅组仔鼠脑铅含量高于对照组,同一剂量染铅组出生后50 d仔鼠脑铅含量高于生后8 d的仔鼠,差异均有统计学意义(P＜0.01).与相应的对照组相比.1.0%醋酸铅组不同发育时期仔鼠海马ASIC1a mRNA表达升高,差异有统计学意义(P＜0.01).染铅组不同发育时期仔鼠海马ASIC1a蛋白表达降低,差异有统计学意义(P＜0.05).染铅组ASIC2a、ASIC2b的mRNA和蛋白表达与对照组的差异无统计学意义(P＞0.05).结论 慢性铅染毒可对仔鼠海马ASIC1a mRNA和蛋白表达产生影响.     

铅对仔鼠海马蛋白激酶C和钙调蛋白基因表达与学习记忆的影响

目的 观察慢性铅染毒对仔鼠海马蛋白激酶C(PKC)、钙调蛋白(CaM)mRNA表达的影响,探讨铅神经毒性的分子机制.方法 孕鼠随机分为对照组、0.2%醋酸铅染毒组和1.0%醋酸铅染毒组,从妊娠第0天开始通过自由饮水染毒.幼鼠出生后,先通过哺乳接触铅,断乳后则自行饮用与其母鼠相同的饮用水.出生后8 d内行悬崖回避试验,50 d行跳台试验,随后处死仔鼠,原子吸收光谱法测定脑铅含量,反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法观察各组仔鼠海马PKC、CaM的mRNA表达情况.结果 同一发育时期的染铅组仔鼠脑铅含量明显高于对照组,差异有统计学意义(P＜0.01);同一剂量染铅组出生后50 d仔鼠脑铅含量明显高于生后8 d,差异有统计学意义(P＜0.01).染铅组仔鼠悬崖回避试验完成率和跳台学习成绩明显低于对照组,差异有统计学意义(P＜0.05,P＜0.01).不同发育时期的1.0%醋酸铅染毒组仔鼠海马的PKC、CaM的mRNA表达下降(分别为0.53±0.04、0.59±0.02和0.65±0.01、0.62±0.01),与相应的对照组相比,差异有统计学意义(P＜0.05,P＜0.01).结论 慢性铅染毒可使仔鼠海马PKC、CaM的mRNA表达降低,这可能是铅致仔鼠学习记忆功能损害的分子机制之一.     

铅对仔鼠学习记忆及海马中IL-1β表达影响

目的 探讨母体铅染毒对其仔鼠学习记忆及海马中白细胞介素-11β(IL-1β)mRNA和蛋白表达量的影响,为进一步揭示铅的神经毒性机制提供科学依据.方法采用自由饮水的方式于母鼠孕哺期染毒,染毒剂量为0.3、1.0、3.0g/L,每组10只;仔鼠出生后7、14、21 d分别测其血铅,海马铅浓度;仔鼠21d时,测定其学习记忆能力的变化和海马组织中IL-1p mRNA和蛋白表达.结果各剂量染铅组血铅、海马铅含量与对照组比较明显升高(P＜0.05);迷宫实验中,与对照组比较,1.0和3.0 g/L组差异均有统计学意义(P＜0.05);逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR),ELISA实验中,在对照组0.3、1.0、3.0 g/L组仔鼠海马组织中,IL-1β mRNA的相对表达量分别为(0.073±0.016)、(0.572±0.287)、(1.090±0.521)、(1.312±0.837);IL-1ββ蛋白表达分别为(0.708±2.260)、(8.958±2.257)、(19.375±1.644)、(25.125±4.748);与对照组比较,染毒组海马IL-1β mRNA和蛋白表达量明显升高(P＜0.05).结论铅可能通过诱导海马中IL-1β高表达,影响学习记忆,从而造成神经系统的损害.     

铅对仔鼠学习记忆及其海马中突触体相关蛋白-25基因和蛋白表达的影响

目的 探讨母体铅染毒对仔鼠学习记忆及海马中突触体相关蛋白-25(SNAP-25)mRNA 表达的影响.方法 雌性小鼠自妊娠第1天开始经饮水染铅(0.3、1.0、3.0g/L),对照组饮蒸馏水,至仔鼠出生后21 d断乳为止.随机抽取各组仔鼠,在出生后第7、14、21天分别测其血液和海马组织中铅的含量;在出生后第21天时,进行水迷宫试验,分别采用反转录-聚合酶链反应和免疫组化方法测定各组海马组织中SNAP-25 mRNA和蛋白的表达.结果 与对照组比较,各剂量染铅组血液、海马组织中铅含量均明显升高,差异均有统计学意义(P<0.05).仔鼠错误次数有随母鼠染铅剂量增加而增加的趋势,1.0、3.0g/L组错误次数分别为5.89±0.54、9.53±1.03,与对照组(1.73±0.07)比较,差异有统计学意义(P<0.05,P<0.01).与对照组相比,染铅组海马中SNAP-25 mRNA和蛋白表达明显降低,差异均有统计学意义(P<0.05).结论 母体铅暴露可导致仔鼠学习记忆功能损害,铅下调SNAP-25 mRNA的表达,可能影响了突触前末梢神经递质的释放,造成神经系统的损害.     

妊娠大鼠低铅暴露对子代海马GFAP表达影响

目的观察母体孕期低水平铅暴露对子代大鼠海马组织胶质原纤维酸性蛋白（GFAP）和mRNA表达的影响，探讨铅影响学习记忆的分子机制。方法孕鼠随机分为4组，自怀孕1d起分别给予蒸馏水、125，250，500mg／L醋酸铅饮水，直到仔鼠出生。分别在仔鼠出生后1，21，60d，采用免疫组化和原位杂交方法观察海马CA1区GFAP蛋白和mRNA表达的变化。结果各染铅组仔鼠1，21d时海马CA1区GFAP蛋白和mRNA阳性细胞数显著高于对照组（P〈0．05），而60d时未见明显差异。结论妊娠期母体低水平铅暴露可以使仔鼠海马CA1区GFAP蛋白和mRNA表达增加，这可能是铅影响学习记忆的分子机制之一。     

铅暴露对大鼠海马组织APP和tau蛋白表达影响

目的探讨长期铅暴露对大鼠海马组织淀粉样前体蛋白(APP)和tau基因、蛋白表达影响。方法将SPF级雌性SD大鼠随机分为3组,分别为对照组(去离子水),低、高剂量铅组(乙酸铅800、1 500 mg/L),所生雄性仔鼠分别继续饮用去离子水(对照组),300 mg/L(低剂量铅组),900 mg/L(高剂量铅组)乙酸铅溶液,分别与生后3周(PNW3)、中年期(PNW41)、老年期(PNW70)测定雄性仔鼠血、海马组织中铅含量;采用荧光定量PCR(q PCR)和蛋白印迹(WB)检测APP和tau mRNA及蛋白表达水平。结果与对照组比较,各年龄染铅组雄性仔鼠血铅、海马铅含量明显增加(P0.05);与对照组比较,高剂量铅组PNW70雄性仔鼠海马APP mRNA和蛋白表达水平[分别为(1.398±0.827)、(1.454±0.190)]均明显上升(P0.05);与对照组比较,低、高剂量铅组PNW3雄性仔鼠海马tau蛋白表达水平[分别为(4.850±1.257)、(5.557±1.880)]明显上升(P0.01);对照组比较,高剂量铅组PNW70雄性仔鼠海马磷酸化tau蛋白表达水平(3.225±1.098)升高(P0.05)。结论长期铅暴露可导致断乳期和老年期大鼠海马组织APP和tau基因与蛋白表达上调。     

生后早期镧暴露对大鼠海马基质金属蛋白酶–9表达影响

目的探讨出生后镧暴露对大鼠海马基质金属蛋白酶–9(MMP–9)蛋白和mRNA表达水平影响。方法将Wistar孕鼠随机分为对照组和低、中、高剂量染镧组,自孕鼠分娩至仔鼠断乳后1个月通过自由饮水染镧。采用Western blot法检测仔鼠海马MMP–2和MMP–9蛋白表达,Real-Time PCR法检测仔鼠海马MMP–2/9和Timp–2/1mRNA表达。结果与对照组比较,中、高剂量染镧组仔鼠海马MMP–9蛋白表达水平[分别为(0.172±0.017)、(0.236±0.022)]、mRNA表达水平[分别为(1.267±0.102)、(1.456±0.081)]均显著升高(P<0.05)。与对照组比较,高剂量染镧组仔鼠海马Timp-1 mRNA表达水平(0.784±0.034)显著降低(P<0.05)。结论镧可上调仔鼠海马MMP–9蛋白和mRNA表达,下调Timp–1 mRNA表达,诱导MMP–9活化进而降解紧密连接蛋白,致使血脑屏障破坏。     

铅对仔鼠海马蛋白激酶C和钙调蛋白表达的影响

目的 研究慢性铅染毒对不同发育时期仔鼠海马蛋白激酶C(PKC)、钙调蛋白(CaM)表达的影响.方法 孕鼠随机分为蒸馏水对照组、0.2%醋酸铅和1.0%醋酸铅组,从怀孕第0灭起开始通过自由饮水染毒.幼鼠出生后,先通过哺乳接触铅,断乳后则自行饮用与其母鼠浓度相同的含铅水.分别于出生后8、50 d处死仔鼠,原子吸收光谱法测定脑铅含量,Western-blotting法观察各组仔鼠海马PKC、CaM的蛋白表达情况.结果 同一发育时期的染铅组仔鼠脑铅含量明显高于对照组,差异有统计学意义(P＜0.01).同一剂量染铅组出生后50 d仔鼠脑铅含最明显高于出生后8 d,差异有统计学意义(P＜0.01).不同发育时期的染铅组仔鼠海马的PKC、CaM的蛋白表达均相应地下降,与对照组相比,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 仔鼠海马PKC、CaM的蛋白表达降低可能是铅致仔鼠学习记忆功能损害的分子机制之一.     

孕哺期铅暴露对雄性子代大鼠海马组织中沉默信息调节因子表达的影响

目的探讨大鼠孕期及哺乳期铅暴露对雄性仔鼠海马组织中沉默信息调节因子(silent information regulator1,SIRT1)表达的影响。方法将12只健康SPF级雌性SD孕鼠随机分为3组,分别为对照组(去离子水)、低剂量铅暴露组(0.5 g/L乙酸铅)和高剂量铅暴露组(2.0 g/L乙酸铅),每组4只。采取自由饮水的方式进行染毒,自妊娠第1天开始至仔鼠21 d断乳为止。在仔鼠断乳后,采用电感耦合等离子体原子发射光谱法(ICP-AES)检测6只雄性仔鼠全血和海马组织中铅的含量,采用RT-PCR检测6只雄性仔鼠海马组织SIRT1 mRNA水平的变化,采用Western blot和免疫荧光组织化学法检测6只雄性仔鼠海马组织SIRT1蛋白水平的变化。结果孕哺期不同剂量铅暴露后,雄性仔鼠血铅和海马组织中铅含量均高于对照组,海马中SIRT1 mRNA和蛋白水平的表达均低于对照组,且高剂量铅暴露组仔鼠海马中SIRT1mRNA和蛋白水平低于低剂量组,差异均有统计学意义(P0.05)。结论孕哺期铅暴露可下调仔鼠海马中SIRT1基因表达,从而可能影响海马神经元功能及仔鼠学习记忆能力。     

二十二碳六烯酸对老龄大鼠海马磷脂,突触蛋白-I和生长相关蛋白43表达影响的研究

目的 研究二十二碳六烯酸(DHA)对海马磷脂,突触蛋白-I(SYN-1)和生长相关蛋白43(GAP-43)的影响.方法 青龄组为7月龄雄性Wistar大鼠巧只,20月龄雄性Wistar大鼠45只,随机分为老龄对照组和老龄实验组,其中老龄实验组又分为:DHA小剂量组,每天灌喂量:180 mg/(kg·d).DHA大剂量组...     

REM睡眠对幼鼠海马突触可塑性影响的分子机制研究

【目的】 观察幼鼠快速眼动(rapid eye movement,REM)睡眠剥夺及恢复过程中海马GAP-43表达水平,探讨睡眠影响学习记忆功能的突触前机制。 【方法】 将30只雄性Sprague-Dawle幼鼠随机分为5组:空白对照组、环境对照组、48 h REM睡眠剥夺组、睡眠恢复24 h组、睡眠恢复48 h组;每组6只。采用多平台改良法建立幼鼠REM睡眠剥夺及睡眠恢复模型。应用RT-PCR技术和Western-blot技术分别检测GAP-43基因和蛋白表达水平;并对幼鼠海马切片进行免疫荧光组化分析。 【结果】 48 h睡眠剥夺组Gap-43基因表达显著高于其他各组(P<0.05);该组GAP-43蛋白及其水解片断GAP-43-3在海马组织的表达量上升,但磷酸化程度下降;而睡眠恢复组的GAP-43蛋白及其水解片断GAP-43-3在海马组织的表达量下降,磷酸化程度有所上升; 同时,48 hREM睡眠剥夺组和恢复睡眠24 h组的幼鼠海马组织GAP-43分布范围扩大。 【结论】 REM睡眠于转录、翻译和翻译后修饰三个层次作用于GAP-43,影响其功能状态,从而实现对学习记忆功能的突触前调控作用。     

妊娠期母体低水平铅暴露对大鼠子代学习记忆能力的影响

目的探讨大鼠妊娠期间低水平铅暴露对其子代学习记忆能力的影响.方法孕鼠随机分为4组,3个处理组自怀孕第1天起分别给予醋酸铅含量为125、250和500 mg/L的饮水,对照组给予不含铅的双重蒸馏水,采用流动注射氢化物发生-原子吸收光谱法测定仔鼠血铅、脑海马组织铅含量,以避暗穿梭箱试验、Morris水迷宫试验测定仔鼠的学习记忆能力.结果各处理组的1、21 d龄仔鼠血铅、海马组织铅水平明显高于对照组仔鼠,差异有统计学意义（P＜0.05）,至60 d龄,差异无统计学意义（P＞0.05）;Morris水迷宫试验显示,各处理组21、60 d龄仔鼠连续4 d训练期间,第2、3、4天潜伏期均高于同期对照组仔鼠,差异有统计学意义（P＜0.05）;避暗穿梭箱试验显示,各处理组21、60 d龄仔鼠连续5 d训练期间,主动回避次数低于同期对照组仔鼠,差异有统计学意义（P＜0.05）;主动回避潜伏期、被动回避潜伏期高于同期对照组仔鼠,差异有统计学意义（P＜0.05）.结论母体妊娠期低水平铅暴露可以影响仔鼠的空间学习记忆能力,且影响至少可持续至仔鼠成熟期.     

铅对大鼠脑组织神经生长因子表达的影响及甲状腺激素的调节作用

目的　研究醋酸铅对大鼠脑组织神经生长因子 (NGF)表达的影响及甲状腺激素的调节作用。方法　对SD大鼠用 2 5、5 0、10 0mg/kg体重的醋酸铅腹腔注射 ;用丙基硫氧嘧啶 (PTU)制作甲状腺机能减退大鼠模型 ,再给予 5 0mg/kg体重的醋酸铅 ,分别以免疫组化测定脑组织中NGF蛋白的表达。以放射免疫方法测定血清中三碘甲状腺原氨酸 (T3 )、甲状腺素 (T4)、促甲状腺激素 (TSH)的含量及脑组织中T3 、T4的含量。结果　中、高剂量组皮层组织NGF平均灰度 (180 .4 9± 10 .33、16 9.72±19 .75 )与对照组 (2 0 0 .75± 3.2 7)相比 ,差异有显著性 (P <0 .0 1) ;各剂量组海马组织NGF面密度 (0 .0 8± 0 .14、0 .12± 0 .0 2、0 .13± 0 .0 4 )与对照组 (0 .0 2 5± 0 .0 15 )相比 ,差异有显著性 (P <0 .0 5 )。甲状腺机能减退后再用醋酸铅处理 ,皮层、海马组织NGF面密度和平均灰度未见明显改变。各剂量染铅组大鼠血清中T3 [(0 .6 8± 0 .0 2 )、(0 .5 7± 0 .0 4 )、(0 .5 4± 0 .0 2 ) μg/L]和T4[(2 8.30± 1.83)、(2 7.35± 2 .5 5 )、(2 4 .0 0± 3.0 1) μg/L]含量明显下降 ,而TSH[(6 .34± 1.13)、(7.74± 0 .79)、(9.16± 0 .77)IU]增高 ,与对照组T3 [(0 .97± 0 .14 ) μg/L]、T4[(5 4 .5 0± 3.70 ) μg/L]和TSH     

铅暴露对仔鼠海马中β淀粉样蛋白40表达影响

目的探讨母体铅染毒对子一代小鼠海马组织中β-淀粉样蛋白40(Aβ40)表达影响。方法雌性小鼠自妊娠第1 d开始经饮水染铅(0.3、1.0、3.0 g/L,对照组饮蒸馏水)至仔鼠出生后21 d,随机抽取各组21日龄仔鼠,分别测其血液和海马组织中铅含量,并采用western blot方法测定海马组织中Aβ40表达水平。结果孕哺期不同剂量铅暴露21 d后,仔鼠血铅、海马铅水平明显高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);western blot结果显示,中、高剂量铅暴露组仔鼠海马组织中Aβ40表达明显高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);相关分析显示,Aβ40蛋白表达与血铅、海马铅呈明显正相关(r=0.524、0.613,P=0.001)。结论母体铅暴露使铅在仔鼠体内蓄积,增强了仔鼠海马组织中Aβ40聚集。