噬菌体法直接检测痰标本中结核分枝杆菌利福平耐药性的研究

目的 应用噬菌体生物扩增（PhaB）法直接检测痰标本中结核分枝杆菌（MTB）利福平（RFP）耐药性,探讨其在临床MTB耐药性测定中的应用价值。方法应用PhaB法检测临床40例痰标本中MTB对利福平（RFP）的耐药性．并与绝对浓度法检测结果进行比较。结果40例痰标本PhaB法与绝对浓度法RFP耐药性检测均阳性25例,均阴性7例,两法不相符8例。以绝对浓度法检测结果为判断标准,则PhaB法RFP耐药性检测的敏感性、特异性、准确性分别是78．13％、87．50％、80．00％。结论PhaB法检测痰标本中结核分枝杆菌fMTB）对RFP的耐药性具有较高的敏感性和特异性,只需要3天时间．简便快速。不需要特殊仪器设备,费用低廉．可作为MTB耐药性检测的快速筛选方法。     

噬菌体法直接检测痰标本中结核分枝杆菌利福平耐药性的研究

目的 应用噬菌体生物扩增(PhaB)法直接检测痰标本中结核分枝杆菌(MTB)利福平(RFP)耐药性,探讨其在临床MTB耐药性测定中的应用价值.方法 应用PhaB法检测临床40例痰标本中MTB对利福平(RFP)的耐药性,并与绝对浓度法检测结果 进行比较.结果 加例痰标本PhaB法与绝对浓度法RFP耐药性检测均阳性25例,均阴性7例,两法不相符8例.以绝对浓度法检测结果 为判断标准,则PhaB法RFP耐药性检测的敏感性、特异性、准确性分别是78.13%、87.50%、80.00%.结论 PhaB法检测痰标本中结核分枝杆菌(MTB)对RFP的耐药性具有较高的敏感性和特异性,只需要3天时间,简便快速,不需要特殊仪器设备,费用低廉,可作为MTB耐药性检测的快速筛选方法 .     

噬菌体法与BacT／ALERT3D检测吡嗪酰胺对耐药性结核分枝杆菌的比较研究

【目的】建立噬菌体生物扩增法（PhaB法）快速测定吡嗪酰胺（PZA）耐药性,探讨其在结核分枝杆菌（MTB）PZA耐药性测定中的应用价值。【方法】应用MTB噬茵体法快速MTB耐药的PhaB方法并用于测定115株MTB-1盎床分离株耐药性。同时与BacT／ALERT3D药敏试验结果相比较,对耐药性测定结果不符合的菌株测定其最低抑茵浓度（MIC）。【结果]PhaB法检测PZA耐药性的最佳测定条件为pH值5．5、药物浓度200mg／L、37℃作用48h。115株临床分离株,PhaB法敏感90株,耐药25株;BacT／ALERT3D法敏感87株,耐药28株;其中两种方法均敏感85株,均耐药24株,即测定结果相符109株,符合率94．78％;测定结果不符6株,不符合率5．22％。如以BacT／ALERT3D测定结果为判断标准,则PhaB检测PZA耐药性的敏感性为85．71％（24／28）,特异性为97．70％（85／87）,阳性预测值为96％（24／25）,阴性预测值为94．44％（85／90）,准确性为94．78％（109／115）。【结论]PhaB法检测PZA耐药性只需2～3d时间,操作简便,不需特殊仪器设备,可作为MTB的PZA耐药性快速筛选方法。     

噬菌体生物扩增法和最低抑菌浓度法检测结核分枝杆菌氧氟沙星耐药性

目的探讨噬菌体生物扩增法（PhaB）和液体培养基最低抑菌浓度法（MIC）检测结核分枝杆菌（MTB）氧氟沙星（OFX）耐药性的临床应用价值。方法应用两种方法同时检测90株MTB临床分离株OFX耐药性，并与绝对浓度法比较检测结果的敏感性、特异性及准确性。结果90株MTB临床分离株用绝对浓度法、MIC、PhaB三种方法分别测得70株、60株、67株敏感株和20株、30株、23株耐药株。若以绝对浓度法测定结果为判断标准，则PhaB检测OFX耐药性的敏感性、特异性和准确性分别为85．0％、91．4％和90．0％；MIC检测的敏感性、特异性和准确性分别为100．0％、85．7％和88．9％；若以绝对浓度法和MIC测定结果为判断标准，则PhaB检测的敏感性为85．0％，特异性为98．3％，准确性为95．0％。结论PhaB检测OFX耐药性有较高的敏感性和特异性，只需要3d，且操作简单、不用特殊仪器设备，可作为OFX耐药性的快速筛选方法；液体培养基MIC测定OFX耐药性平均需要20d，不能满足快速药敏试验需要。     

噬菌体生物扩增法检测结核分枝杆菌及其耐药性方法评价

1997年，Wilson等建立了噬菌体生物扩增法（PhaB），并将其用于结核分枝杆菌（MTB）耐药性测定。随后，又有学者将其用于结核患者痰标本的快速检测。我们分析了该技术在MTB诊断和耐药性测定方面的相关报道，综述如下。     

噬菌体法与比例法在结核分枝杆菌药敏检测的比较研究

目的 探讨噬菌体检测技术(PhaB)同时快速检测4种一线抗结核药物耐药性的可能性,分析其临床应用价值.方法 应用PhaB同时测定53株结核分枝杆菌(MTB)临床分离株对链霉素、异烟肼、利福平和乙胺丁醇的耐药性,并与比例法的药敏结果比较,对2种方法检测结果不符的菌株进行Bactec-960药敏测定.结果 PhaB检测链霉素、异烟肼、利福平、乙胺丁醇药敏结果与比例法药敏结果符合率分别为94.3%、90.6%、96.2%和88.7%.共有7株菌株16个药敏结果PhaB与比例法检测结果不符.Bactec-960检测结果有5株12个药敏结果支持PhaB结果,2株4个药敏结果支持比例法结果.结论 PhaB同时检测链霉素、异烟肼、利福平、乙胺丁醇药敏结果与比例法检测结果有较高的符合率,可作为MTB耐药性的快速筛选方法.     

噬菌体生物扩增法直接检测痰标本中结核分枝杆菌异烟肼耐药性的研究

目的利用噬菌体生物扩增法(PhaB法)直接检测痰结核分枝杆菌(MTB)对异烟肼的耐药性,以建立一种特异性强,敏感性高的MTB药敏试验方法。方法选取临床上初步诊断为耐药肺结核的40例患者痰标本,使用PhaB法直接检测痰MTB对异烟肼的耐药性,同时用绝对浓度法检测异烟肼的耐药性,将两者结果进行比较。结果 40例患者痰标本PhaB法与绝对浓度法异烟肼耐药性检测结果均阳性22例,均阴性11例,两法不相符7例。以绝对浓度法检测结果为判断标准,则PhaB法异烟肼耐药性检测的敏感性、特异性、准确性分别是78.57%(22/28)、91.67%(11/12)、82.50%(33/40);Kappa检验,k=0.63 P=0.00<0.05。结论 PhaB法直接检测痰MTB对异烟肼的耐药性简便快速,具有较高的敏感性、特异性和准确性,且与绝对浓度法有较好的一致性。     

结核分枝杆菌噬菌体法直接药敏试验的临床应用

目的 探讨噬茵体微孔纸片法直接检测痰标本中结核分枝杆菌(MTB)及其对4种抗结核药物耐药性的临床应用价值.方法 用噬菌体微孔纸片法检测215例痰标本中的MTB,同时检测其对链霉素、异烟肼、利福平和乙胺丁醇的耐药性.MTB检测结果与改良罗氏培养法、噬菌体生物扩增法(PhaB法)结果进行比较,药敏试验结果与比例法、PhaB法结果进行比较.结果 ①微孔纸片法的MTB检测阳性率33.0%,改良罗氏培养法32.8%,PhaB法34.8%.以改良罗氏培养法结果为评价标准,微孔纸片法检测MTB的敏感度92.5%,特异度为94.9%,准确度94.1%,阳性预测值(PPV)为89.9%.阴性预测值(NPV)为96.3%.②微孔纸片法直接药敏试验成功率21.5%,涂阳痰标本成功率73.8%,均为痰茵(++)及以上标本.以比例法药敏结果为评价标准,微孔纸片法检测MTB对4种药物耐药性的敏感度、特异度、PPV、NPV和准确度分别为:(链霉素)91.7%、90.9%、78.6%、96.8%和91.1%;(异烟肼)86.7%、96.7%、92.9%、93.5%和93.3%;(利福平)89.5%、91.7%、85.O%、94.3%和88.9%;(乙胺丁醇)87.5%、86.2%、77.8%、92.6%和88.9%.结论 微孔纸片法直接检测痰标本中MTB及其耐药性快速、简便、价廉,且观察结果直观,不需特殊仪器设备,适于基层医院推广应用.     

噬菌体生物扩增法检测肺结核患者痰标本临床应用研究

结核病乃是严重威胁人类健康的重大传染病，其实验室快速诊断一直是国内外研究的焦点内容之一。噬菌体生物扩增方法（PhaB）是近年来建立的一种细菌学快速诊断新技术，具有简便、快速、灵敏、价廉的优点，非常适合结核分枝杆菌（结核菌）这类生长缓慢细菌的快速诊断。我们在建立PhaB快速检测结核菌方法学基础上，将其用于临床标本的检测，并与涂片、培养和PCR结果进行比较。     

回顾性分析噬菌体生物扩增技术在肺结核诊断中的应用

目的评价噬菌体生物扩增技术（PhaB）在肺结核诊断中的应用。方法回顾性分析采用PhaB法、3D培养法、直接涂片法检测373份痰标本的抗酸杆菌结果。结果 PhaB法、3D培养法、直接涂片法检测抗酸杆菌的阳性率分别为53.6%、56.6%及20.1%。以3D培养法结果为标准,直接涂片法的敏感性、特异度、准确性分别为33.2%、95.7%及60.3%;PhaB法的敏感性、特异度、准确性分别为89.1%、93.6%及90.6%。直接涂片法与PhaB法检测结果比较,差异有统计学意义（χ2=94.7,P〈0.01）;PhaB法与3D培养法检测结果比较,差异无统计学意义（χ2=3.46,P〉0.05）。结论 PhaB法检测结核分枝杆菌具有较高的敏感性、特异度、准确性,值得在临床推广。     

环介导等温扩增技术快速检测结核分枝杆菌核酸

摘要:目的：建立一种快速准确的检测结核分枝杆菌（MTB）核酸的环介导等温扩增（LAMP）方法。 方法：以重复插入序列IS6110为目的基因,设计LAMP引物,特异检测MTB核酸。用本法与痰涂片抗酸染色镜检法、实时荧光PCR法对100例可疑患者痰标本进行对比检查。 结果：LAMP法特异性强,仅扩增MTB复合群核酸;灵敏度高,检测限达100 fg;而实时荧光PCR检测限为1 pg。对100例疑似结核病患者痰液标本检测,涂片抗酸染色法、LAMP法、实时荧光PCR法的阳性率分别为28%、39%和38%。 结论：本研究建立的LAMP方法检测MTB核酸特异性强、灵敏度高、时间短且操作简便,有望成为临床快速检测MTB的新方法。     

XpertMTB/RIFAssay在结核病诊断中的应用

目的：对 Xpert MTB／RIF 检测结核分枝杆菌（MTB）方法进行临床研究,评价其在结核病诊治中的应用价值。方法应用 Xpert MTB／RIF 法检测结核患者的 MTB,以 BACTEC MGIT 960培养法为参考方法,获得该方法的灵敏度、特异度。结果对123例结核患者的临床样本进行 Xpert MTB／RIF 法检测、BACTEC MGIT 960培养及细菌涂片抗酸染色法检查,其灵敏度和特异度分别为65．9％、47．2％、31．2％和100．0％、96．0％、100．0％。结论Xpert MTB／RIF 检测 MTB 速度快,灵敏度高,特异度强,对结核患者的早期诊断及治疗有着重要的意义。     

噬菌体生物扩增法快速检测结核分枝杆菌的临床应用

目的探讨噬菌体生物扩增法（料-aB）快速检测结核分枝杆菌的临床应用价值。方法对108例肺结核患者痰标本进行噬菌体裂解试验，并与集菌涂片，BacT／ALERT 3D检测仪法相比较。结果噬菌体裂解法阳性率59．3％（64／108），与集菌涂片法28．7％（31／108）、BacT／ALERT3D检测仪法43．5％（47／108）相比差别有显著意义。结论PhaB快速、简便、灵敏、特异，有助于结核分枝杆菌的检测，可用于结核病的快速诊断。     

Xpert MTB/RIF检测痰标本结核分枝杆菌与利福平耐受性的临床应用研究

目的分析Xpert MTB/RIF方法用于临床快速检测结核分枝杆菌(MTB)与利福平耐受性的临床意义。方法收集2015年1-12月在惠州市结核病防治研究所及5个县区医院结核科就诊的肺结核患者痰标本552例,进行涂片镜检、Xpert MTB/RIF核酸检测和改良罗氏培养,并对培养阳性者进行药敏实验。评价各种方法 MTB检测灵敏度与特异度,对比传统药敏方法和Xpert MTB/RIF检测利福平耐药性的结果并分析。结果 Xpert MTB/RIF与改良罗氏培养法对MTB检测结果相比,敏感度95.3%、特异度93.1%;耐药性对比结果中,所有阳性标本中利福平耐药的敏感度82.1%,特异度97.8%;Xpert MTB/RIF检测MTB分级与改良罗氏培养分级一致性分析中,kappa=0.688,提示两者结果具有良好的一致性。结论 Xpert MTB/RIF可用于临床早期快速检测结核分枝杆菌与利福平耐药检测的筛查,有利于临床快速决策。     

核酸薄膜导流杂交技术快速检测结核分支杆菌rpoB基因片段及突变

摘要：目的：探讨用低密度核苷酸薄膜导流杂交技术快速检测结核分支杆菌（Mycobacterium tuberculosis,MTB）的可行性。 方法：根据MTB rpoB基因设计12个野生型及常见突变型寡核苷酸特异探针,制作低密度核苷酸薄膜微阵列,通过导流杂交技术与薄膜杂交鉴定,并与DNA测序法对比。 结果：81株MTB的耐药性试验及DNA测序结果显示,27株耐利福平MTB株中20株（74.1%）存在突变。以DNA测序结果为标准,31株标本（20株耐利福平MTB突变株,11株利福平敏感MTB野生株）低密度核苷酸薄膜导流杂交的敏感性为85%（17/20）,特异性为100%（11/11）,阳性预测值为100%(17/17),阴性预测值为78.6%(11/14);与DNA测序法的符合率为90.3%(28/31)。 结论：用低密度核苷酸薄膜导流杂交能快速、简便检测MTB,并可提示其是否对利福平耐药,指导临床合理用药。     

痰噬菌体生物扩增法联合胶体金法检测对肺结核的诊断价值

目的评价痰噬菌体生物扩增法(PhaB)与胶体金法联合检测在肺结核诊断中的临床价值。方法对临床确诊的364例肺结核患者和67例其他呼吸系统疾病患者分别采用痰PhaB法和胶体金法进行检测,比较痰PhaB法、胶体金法单独及联合检测诊断肺结核的敏感度、特异度、阳性预测值、阴性预测值。结果痰PhaB法与胶体金法联合检测的敏感度[82.14%(299/364)]高于痰PhaB法、胶体金法单独检测,但特异度[86.57%(58/67)]却有所下降。联合检测对涂片阳性肺结核患者的检出率为99.07%(107/108),明显高于胶体金法72.22%(78/108),差异有统计学意义(χ2=31.675,P0.001);联合检测对涂片阴性肺结核患者的检出率为75.00%(192/256),明显高于痰PhaB法54.69%(140/256)、胶体金法60.16%(154/256),差异均有统计学意义(χ2=23.167,P0.001;χ2=12.872,P0.001)。结论痰PhaB法对肺结核诊断提供新的检测途径,其与胶体金法联合检测更利于肺结核尤其是涂片阴性肺结核的准确诊断。     

基因芯片法检测结核分枝杆菌耐药性的可行性分析

目的分析基因芯片法检测结核分枝杆菌(MTB)耐药性的灵敏度、特异度及符合率,为临床提供方便、准确、快速的MTB耐药性的检测方法。方法以DNA测序法为金标准,采用基因芯片法与比例法药敏试验同时对2014年8~12月收治的250例结核病患者的痰液标本分离MTB菌株进行耐药性检测,比较两种方法检测MTB对利福平和异烟肼耐药性的效能。结果基因芯片法与比例法药敏试验检测MTB对利福平的耐药率分别为3.0%、3.5%,对异烟肼的耐药率分别为6.7%、8.2%。以DNA测序法为金标准,基因芯片法检测MTB对利福平与异烟肼耐药性的灵敏度、特异度及符合率均高于比例法药敏试验,且检测时间短于比例法药敏试验,差异均有统计学意义(P0.05)。结论运用基因芯片法检测MTB对利福平和异烟肼的耐药性,具有较高的灵敏度、特异度与符合率,可以代替比例法药敏试验成为检测MTB耐药性的有效方法。     

噬菌体生物扩增法快速检测脊柱结核脓液中结核分枝杆菌

[目的]探讨噬菌体生物扩增(PhaB)法快速检测脊柱结核脓液中结核分枝杆菌的临床应用价值.[方法]应用直接涂片法,BACTEC MGIT-960法及PhaB法分别检测56例脊柱结核患者的56份脓液标本以及10株结核分枝杆菌标准株,15株非结核分枝杆菌及5株非分枝杆菌.[结果]PhaB法检测10株结核分支杆菌标准株均为阳性,15株非结核分支杆菌和5株非分支杆菌均为阴性.46份BACTEC MGIT-960培养阳性和10份BACTEC MGIT-960培养阴性的标本中,PhaB法分别有42份(91.3%)、3份(30.0%)阳性,检出率分别为82.1%和80.4%(P＞0.05).涂片检查阳性仅13份(23.2%),阴性43份(76.8%),而应用PhaB法可以检测出45份(80.4%)阳性,其中有33份为涂片阴性的标本(P＜0.05).用PhaB法能在18～24 h内得出结果,较BACTEC MGIT-960法提前5～17 d.[结论]PhaB法与直接涂片法、BACTEC MGIT-960法相比,可以简便、快速地检测结核分支杆菌,全程只需1 d,并且具有较高的敏感性和特异性.     

显微镜观察药物敏感性技术快速检测痰标本中结核分枝杆菌的研究

目的探讨显微镜观察药物敏感性技术(MODS)在痰液标本中结核分枝杆菌(MTB)的检测效果,以评价其临床应用价值。方法收集150份患者临床痰标本,应用MODS技术、罗氏培养法进行MTB的检测,将两法的结果进行对比分析。结果 MODS技术与罗氏培养法结果符合率为77.8%,MODS技术检测痰标本中MTB的敏感性为93.3%,特异性为70.0%,阳性预测值(PPV)为60.8%,阴性预测值(NPV)为95.4%,正确性为77.8%。结论 MODS技术检测痰标本中MTB具有快速、灵敏、简便等优点,可作为结核病细菌学快速检测的新方法之一。     

结核T细胞酶联免疫斑点试验快速诊断肺外结核感染的应用价值

目的 探讨结核T细胞酶联免疫斑点试验（T-SPOT.TB）诊断肺外结核分枝杆菌（MTB）感染的临床应用价值.方法 选择肺外MTB感染者37例（肺外MTB感染组）及非结核病对照者30例（非结核病对照组）,应用T-SPOT.TB法检测外周血单个核细胞（PMBCs）经结核特异蛋白6KD早期分泌靶向抗原（ESAT-6）和培养滤液蛋白10（CFP-10）刺激产生γ干扰素（IFN-γ）的T淋巴细胞数,并与结核菌素皮肤试验（TB-PPD）法比较.结果 （1）T-SPOT.TB法在肺外MTB感染组的阳性率91.89％ （34/37）,显著高于非结核病对照组6.67％（2/30）,差异有统计学意义（x^2=48.403,P＜0.001）.（2） T-SPOT.TB诊断肺外MTB感染的敏感性为91.89％,特异性为93.33％,阳性预则值为94.44％,阴性预测值为90.32％,优于TB-PPD法（67.57％、56.67％、65.79％、58.62％）,差异有统计学意义（x^2=6.773、10.756、9.392、8.031,P=0.009、0.001、0.002、0.005）;两方法间一致性较弱（Kappa=0.311,x^2=6.801,P=0.009）.结论 T-SPOT.TB技术快速辅助诊断肺外MTB感染作用明显,其较高的阴性预测值在排除感染方面意义重大.