塞来昔布联合顺铂对SGC-7901人胃癌细胞凋亡及Bcl-2表达的影响

目的:探讨选择性环氧化酶-2(COX-2)抑制剂塞来昔布联合顺铂对SGC-7901人胃癌细胞生长、凋亡及Bcl-2表达的影响.方法:终浓度为100、200及300 μmol/L的塞来昔布作用于SGC-7901入胃癌细胞24 h后加入顺铂(2.0 μg/mL),采用M开比色法测定细胞的生长抑制率,流式细胞仪检测细胞周期、细胞凋亡率及Bcl-2表达水平.结果:不同浓度的塞来昔布对SGC-7901人胃癌细胞均有抑制作用,抑制率与对照组相比.差异有统计学意义(P<0.05);流式细胞学检测到凋亡峰,细胞阻滞于G0/G1期.同时伴随Bcl-2表达水平下降,其抑制作用呈时间-剂量依赖性,且以上抑制作用与顺铂具有协同作用.结论:塞来昔布能促进顺铂诱导胃癌细胞凋亡,进而抑制胃癌细胞的增殖,这可能是COX-2抑制剂抗肿瘤的机制之一.     

塞来昔布对PC12细胞的凋亡作用及对血管内皮生长因子表达的影响

目的体外探讨COX-2抑制剂塞来昔布对PC12细胞的生长影响及血管内皮生长因子VEGF的表达的调控。方法应用噻唑蓝（MTT）比色法观察塞来昔布对大鼠嗜铬细胞瘤细胞系PC12细胞的生长抑制作用;Wrights-Giemsa染色法观察细胞形态学;流式细胞技术观察细胞在各时间点的凋亡率;Western blot检测VEGF-165蛋白的表达变化。结果塞来昔布呈时间、剂量依赖性抑制PC12细胞,24h半数抑制浓度（IC50）为100μmol/L;各点凋亡率均高于空白对照组;塞来昔布能抑制PC12细胞的VEGF-165蛋白表达,且跟时间正相关。结论 COX-2抑制剂塞来昔布能抑制PC12细胞增殖,诱导细胞凋亡,抑制VEGF蛋白表达。     

塞来昔布对人结肠癌细胞生长及裸鼠肝转移瘤形成的影响

目的探讨塞来昔布对体外培养的结肠癌细胞生长及裸鼠肝转移瘤的影响。方法以人结肠癌细胞株HT-29（COX-2高表达）和HCT-116（COX-2低表达）为研究对象，采用噻唑蓝（MTT）比色法检测塞来昔布对2种细胞的增殖抑制效应，应用流式细胞术检测2种细胞的周期分布情况；将2种细胞接种裸鼠，观察其肝转移瘤形成情况。结果①塞来昔布对人结肠癌细胞株生长的抑制作用呈时间、剂量依赖性效应（P〈0．05，P〈0．01），且对HT-29细胞的作用强于HCT-116细胞（P〈0．05）。②塞来昔布可改变结肠癌细胞株细胞周期的分布，明显降低其增殖指数。③塞来昔布具有明显的抑制裸鼠肝转移瘤生长的作用。结论塞来昔布可能通过抑制COX-2酶活性而抑制结肠癌细胞的分裂和增殖，诱导其凋亡，干预结肠癌的转移与复发。     

埃罗替尼和塞来昔布协同抑制胆管癌细胞生长

目的:观察表皮生长因子受体(EGFR)酪氨酸激酶抑制剂埃罗替尼(erlotinib)与环氧合酶(COX-2)抑制剂塞来昔布(celecoxib)对胆管癌细胞生长的协同抑制作用。方法:采用甲基噻唑基四唑(MTT)比色法检测胆管癌细胞株QBC939增殖,流式细胞术检测用药前、后细胞凋亡和细胞周期的变化,逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)、Western印迹方法观察用药前、后细胞中COX-2、EGFR下游信号及凋亡、细胞周期相关基因蛋白表达的变化。结果:QBC939细胞表达COX-2 mRNA和EGFR mRNA及相应蛋白。埃罗替尼、塞来昔布抑制QBC939细胞增殖,促进细胞凋亡,诱导细胞周期阻滞于G0/G1期。同时,塞来昔布增强了埃罗替尼抑制细胞生长、诱导细胞凋亡的作用。联合用药显著降低p-MAPK、p-Akt及PGE2表达。结论:塞来昔布和埃罗替尼均可抑制胆管癌细胞的生长,而联合用药具有协同作用,能同时阻断EGFR和COX-2信号通路。在胆管癌治疗中具有一定应用前景。     

塞来昔布对人膀胱肿瘤细胞株T24体外增殖和凋亡的影响

目的：研究选择性环氧化酶2（Cox-2）抑制剂塞来昔布对人膀胱肿瘤细胞株T24体外增殖和凋亡的影响。方法：常规培养的贴壁生长的T24细胞,分别与不同浓度塞来昔布、POE2等共培养,MTT法测定塞来昔布及PGE。对T24细胞增殖活性的影响,流式细胞仪测定塞来昔布及PGEz处理后T24细胞的凋亡率;建立细胞悬浮培养体系,将悬浮生长的T24细胞,分别与塞来昔布、PGE。等共培养,流式细胞仪测定塞来昔布及PGE2处理后T24细胞的凋亡率（失巢凋亡率）。结果：塞来昔布呈剂量依赖性地显著抑制贴壁生长的T24细胞的增殖、增加其凋亡,而PGE2和对贴壁生长的T24细胞增殖和凋亡无明显影响;塞来昔布显著增加而PGE2显著抑制T24的失巢凋亡。结论：选择性Cox-2抑制剂塞来昔布可显著抑制T24细胞的生长,诱导贴壁及悬浮生长状态的T24细胞产生凋亡,其可能机制之一是逆转了Cox-2产物PGE2对T24细胞的抗凋亡保护作用,包括对抗肿瘤药物及脱壁诱导的细胞凋亡的抑制作用。     

Lupeol对肝癌SMMC-7721细胞增殖及凋亡的影响

【摘要】〓目的〓探讨羽扁豆醇(lupeol)对人肝癌SMMC-7721细胞生长和凋亡的作用及机制。方法〓采用MTT法检测lupeol对肝癌细胞 SMMC-7721和正常肝细胞L-02的增殖抑制作用,流式细胞法检测细胞凋亡情况,Western blot检测TRAIL受体及抗凋亡蛋白表达变化,比色法分析caspase-8、-9、-3酶活性改变。结果〓lupeol对SMMC-7721细胞具有明显的增殖抑制作用(IC50=40 μmol/L),而对正常肝细胞L-02无细胞毒作用;lupeol在30、40、50 μmol/L浓度范围诱导SMMC-7721细胞48小时的凋亡率分别为5.5%、12.6%、28%;抗凋亡蛋白c-FLIPL表达下调,caspase-8及caspase-3活性增强均呈剂量依赖性。结论〓Lupeol通过下调c-FLIPL表达激活caspase通路诱导肝癌细胞凋亡,对肝癌细胞增殖发挥抑制作用。     

塞来昔布联合HMG-CoA还原酶抑制剂对人肝癌裸鼠皮下移植瘤生长的影响

目的探讨选择性环氧化酶-2(Cyclooxygenase-2,COX-2)抑制剂塞来昔布(celecoxib)联合HMG-CoA还原酶抑制剂氟伐他汀(fluvastatin)对实验性人肝癌裸鼠皮下移植瘤生长的影响。方法接种BEL-7402肝癌细胞株的裸鼠,分别予以塞来昔布,氟伐他汀及联合用药,并对肿瘤生长进行评估。ki67免疫组化染色检测肿瘤细胞增殖,TUNEL法检测凋亡,免疫蛋白印迹法(Western blot)检测Akt、磷酸化Akt(p-Akt)蛋白的表达。结果联合应用塞来昔布及氟伐他汀明显抑制肿瘤生长,其机制可能与抑制肿瘤细胞增殖、诱导凋亡以及抑制Akt磷酸化有关。结论本研究表明塞来昔布及氟伐他汀联合用药可能更有效地治疗肝癌,为进一步防治肝癌提供了新的方法。     

阿司匹林对肝癌细胞生长的抑制作用及其机制

目的 观察阿司匹林(AS)对肝癌细胞SMMC-7721生长的作用,并探讨其作用机制.方法 采用噻唑蓝(MTT)比色法检测不同浓度阿司匹林对肝癌细胞细胞生长的抑制作用以及流式细胞仪检测不同浓度阿司匹林对肝癌细胞细胞周期的影响;免疫组织化学方法检测阿司匹林对肝癌细胞细胞增殖核抗原(PCNA)、环氧合酶-2(COX-2)表达的影响;并用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)测定COX-2基因的表达.结果 肝癌细胞经不同浓度的阿司匹林作用后,其生长抑制率明显升高(P<0.05),且与阿司匹林浓度有关和作用时间相关.细胞周期检测结果显示,经不同浓度阿司匹林作用后的SMMC-7721细胞,细胞周期发生明显变改.表现为随着阿司匹林浓度的增加,S期细胞比例下降明显,G0/G1期及G2/M期细胞比例则上升(10-2、10-3moL/L AS组与对照组比较P<0.05).免疫细胞化学染色显示,阿司匹林能下调肝癌细胞COX-2、PCNA的表达.RT-PCR检测表明,COX-2基因表达电泳条带与对照组比较辉度明显降低,其中10 mmol/L阿司匹林组最低,说明随着阿司匹林浓度增加,COX-2表达逐渐减少,阿司匹林能下调SMMC-7721细胞表达COX-2基因.结论 阿司匹林能有效抑制肝癌细胞SMMC-7721的生长,这种作用可能是其通过抑制细胞增殖,与抑制COX-2、PCNA的表达有关.     

动脉粥样硬化组织中环氧化酶-2的表达以及选择性环氧化酶-2抑制剂塞来昔布对人血管平滑肌细胞增殖与凋亡的作用

目的 观察环氧化酶-2(COX-2)在动脉粥样硬化组织中的表达以及选择性COX-2抑制剂塞来昔布对体外培养的人血管平滑肌细胞(VSMCs)在细胞增殖和凋亡中的作用.方法 对22例动脉粥样硬化组织切片进行COX-2免疫组织化学染色;对体外培养的原代人VSMCs以不同浓度的塞来昔布处理24 h,以噻唑蓝(MTT)细胞增殖及细胞毒性检测法检测细胞增殖,以流式细胞仪检测细胞早期凋亡.结果 免疫组织化学染色阳性表达率为95％,且在血管内膜、中膜和外膜均有阳性细胞存在;体外培养的人VSMCs中加入塞来昔布可明显抑制COX-2的表达;浓度为0、10、20、40、80 μmol/L的塞来昔布作用于VSMCs 24 h后,以MTF法检测细胞存活率分别为100.00％、90.06％、81.38％、75.41％、68.90％;流式细胞仪检测细胞早期凋亡率分别为0.02％、0.62％、0.92％、1.17％、1.63％.结论 COX-2大量表达于动脉粥样硬化组织中,特别表达于炎性巨细胞以及中层VSMCs中,塞来昔布可抑制体外培养的人VSMCs中COX-2的表达,从而抑制其增殖并诱导其凋亡,两者均呈剂量依赖性.     

三氧化二砷诱导肝癌细胞株凋亡的实验研究

目的明确三氧化二砷对人肝癌细胞体外生长的影响，并探讨其作用机制。方法采用四甲基偶氮唑蓝法、^3H-TdR掺入法、TUNEL法、透射电镜观察及流式细胞术，观察不同浓度的三氧化二砷对体外培养的人肝癌细胞株SMMC-7721的生长活力、细胞凋亡、DNA合成能力的影响。结果三氧化二砷能显著地抑制人肝癌细胞SMMC-7721的生长，并且具有时间和剂量依赖性；发生作用后，细胞生长有明显的凋亡特征性改变；细胞DNA合成能力下降。结论三氧化二砷能有效地抑制体外肝癌细胞生长，其机制可能与抑制肝癌细胞DNA合成及诱导肝癌细胞凋亡有关。     

青蒿素联合全转铁蛋白对肝癌的选择性抑制作用

目的 观察青蒿素联合全转铁蛋白在体外对人肝癌SMMC-7721细胞的选择性抑制作用.方法 采用嚷唑蓝(MTT)着色细胞计数及锥虫蓝染色计数检测青蒿素联合全转铁蛋白对人肝癌SMMC-7721细胞的细胞生长、增殖和细胞活力的影响.结果 青蒿素在各种浓度显著地抑制SMMC-7721细胞的生长、集落形成以及细胞活力(P<0.05).青蒿素导致所有实验细胞株的肿瘤细胞死亡,但是敏感性有所变化,在加入全转铁蛋白后,青蒿素对人肝癌SMMC-7721细胞的选择性毒性作用明显增强(P<0.01).结论 青蒿素联合全转铁蛋白能有效地抑制人肝癌SMMC-7721细胞的生长、细胞增殖和细胞活力.     

环氧化酶-2抑制剂塞来昔布对膀胱癌T24细胞杀伤作用的研究

目的：体外观察塞来昔布对人膀胱癌T24细胞株的抑制作用,并探讨其可能的机制。方法i采用MTT法检测塞来昔布对T24细胞的生长抑制作用;采用Hoechst 33258染色观察细胞凋亡形态;采用Western印迹法检测塞来昔布作用前后T24细胞COX-2蛋白的表达变化;采用RT—PCR法检测塞来昔布作用前后T24细胞Bcl-2及Bax基因的表达变化。结果：塞来昔布（≥100μmol／L）作用24h及48h后能明显抑制T24细胞的生长并诱导凋亡;塞来昔布100μmol／L作用,24h及48h后,T24细胞COX-2蛋白表达量下降,Bcl-2基因表达亦下调,而Bax基因在塞来昔布作用24h后变化不明显,48h后表达上调。结论：塞来昔布能抑制T24细胞增殖并诱导其凋亡,可能与下调Bcl-2、上调Bax基因表达有关。     

丁酸钠对人肝癌细胞株SMMC-7721的诱导分化作用及其机制

目的 探讨丁酸钠(Sodium Butyrate,NaB)抑制人肝癌细胞株SMMC-7721细胞生长、诱导其凋亡的分子机制.方法 采用噻唑蓝(MTT)比色法、倒置显微镜观察药物对细胞生长的影响并绘制细胞增殖抑制曲线;透射电镜观察细胞凋亡的形态变化;流式细胞术分析细胞周期;半定量RT-PCR方法检测细胞p21WAF1基因mRNA的表达水平;Western blot检测细胞p21WAF1蛋白的表达变化.结果 NaB对人肝癌细胞生长的抑制呈剂量依赖和时间依赖关系.将细胞周期阻滞于G0/G1期,NaB上调p21WAF1 mRNA及蛋白的表达.结论 NaB具有抑制人肝癌SMMC-7721细胞增殖、诱导其凋亡的作用,这种作用可能是通过上调p21WAF1 mRNA及蛋白完成的.     

AG1024对肝癌细胞系增殖与凋亡的影响

目的 探讨胰岛素样生长因子Ⅰ型受体(IGF-IR)酪氨酸激酶阻断剂AG1024(3-溴-5-叔丁基-4-羟基苯叉苹果酸腈)对人肝癌癌细胞的增殖抑制作用和凋亡诱导作用.方法 采用MTY、流式细胞术、细胞侵袭实验、RT-PCR和Western blot等方法检测在不同浓度(0～40 μmol/L)的AG1024作用下,人肝癌细胞系HepG2和SMMC-7721的细胞形态学及分子生物学特性的改变.结果 MTT检测显示,AG1024剂量依赖性地抑制肝癌细胞的增殖.流式细胞术提示,AG1024明显促进肝癌细胞的凋亡.Transwell小室侵袭实验显示,AG1024能明显抑制肝癌细胞系HepG2和SMMC-7721的侵袭能力,与对照组比较差异有统计学意义(P＜0.05).RT-PCR结果显示,肝癌细胞中IGF-IR呈高表达,不同浓度AG1024作用后,剂量依赖性地增加细胞色素C的表达.Western blotting结果显示,AG1024降低胞外途径信号调节激酶(extracellular signal-regulated kinase,ERK)的磷酸化水平,下调procaspase-3的表达,而总ERK保持不变.结论 AG1024阻断胰岛素样生长因子1型受体,从而阻断其下游的信号传导途径,抑制肝癌细胞的增生,诱导凋亡.     

埃罗替尼和塞来昔布抑制胆管癌生长和血管生成

目的:观察表皮生长因子受体(EGFR)酪氨酸激酶抑制剂埃罗替尼与环氧合酶(COX-2)抑制剂塞来昔布对胆管癌荷瘤裸鼠的肿瘤生长协同抑制作用。方法:联合EGFR酪氨酸激酶抑制剂(EGFR-selective tyrosine kinaseinhibitor,EGFR TKI)埃罗替尼和COX-2抑制剂塞来昔布作用于胆管癌细胞株QBC939荷瘤裸鼠,评价药物体内作用效果。结果:埃罗替尼、塞来昔布联合用药显著抑制肿瘤生长,与对照组、埃罗替尼、塞来昔布单药组相比,均有显著性差异。抑制肿瘤生长的作用伴随EGFR下游活性蛋白p-MAPK的下调和VEGF、Ki-67表达的降低。肿瘤组织微血管密度降低。结论:埃罗替尼、塞来昔布抑制胆管癌荷瘤生长,抑制肿瘤细胞增殖,同时抑制肿瘤新生血管。两者具协同作用。靶向抑制EGFR和COX-2通路可以作为胆管癌的潜在治疗方法。     

环孢素A及FK506对人肝癌细胞株增殖的影响

目的:探讨免疫抑制剂环孢素(CsA)及他克莫司(FK506)对肝癌细胞增殖的影响及可能机制。方法:采用噻唑蓝(MTT)比色法观察CsA及FK506对QGY鄄7701、QGY鄄7703、SMMC鄄7721和BEL鄄7402等4株肝癌细胞增殖的影响。还应用Hoechst33258荧光染料涂片,在荧光显微镜下观察用药组细胞的形态学改变。结果:随着作用时间延长,10μM的CsA对4株肝癌细胞均呈现明显的生长抑制效应(P<0.01),而0.5μM的FK506与对照组相比,其生长抑制作用不明显(P>0.05)。荧光显微镜下CsA用药组肝癌细胞呈现凋亡改变;而FK506用药组与对照组无显著差异。结论:免疫抑制剂CsA非但未促进体外肝癌细胞生长,相反呈明显的抑制效应。FK506尽管未呈现对肝癌细胞增殖的抑制效应,也未显示有生长促进作用。CsA对肝癌细胞的增殖抑制作用与诱导癌细胞发生凋亡有关。     

奥曲肽对人肝癌细胞的抑制及其机制的研究

目的 探讨生长抑素类似物奥曲肽对人肝癌细胞产生抑制作用及其抑制机制。方法 以奥曲肽作用于人肝癌细胞株SMMC-7721细胞，以人成纤维细胞株HF为正常细胞对照，以5-Fu为阳性药物对照。通过噻唑蓝比色实验（MTT实验），细胞增殖生长反应及传代实验和流式细胞术分析，得出结论。结果 在体外，奥曲肽对SMMC-7721细胞产生抑制作用。该抑制作用具有量效关系和饱和性，奥曲肽与5-Fu对SMMC-7721的抑制程度无明显差异。且对HF细胞无影响。结论 奥曲肽对SMMC-7721细胞具有抑制作用。诱导肿瘤细胞凋亡是其作用机制之一。     

塞来昔布协同顺铂P13K/Akt途径诱导骨肉瘤MG-63细胞凋亡的实验研究

目的 探讨环氧化酶-2(COX-2)选择性抑制剂塞来昔布对人骨肉瘤MG-63细胞增殖和凋亡的影响及作用机制.方法 塞来昔布(50 μmol/L或100 μmol/L)和(或)顺铂(10 μg/ml)作用骨肉瘤MG-63细胞48 h后,MTT法测定细胞增殖的抑制率,电子显微镜和流式细胞仪检测细胞凋亡,RT-PCR法检测基因水平COX-2表达变化,Western blot检测COX-2及凋亡相关蛋白表达变化.P13K抑制剂Wortmannin作用MG-63细胞48 h,检测蛋白表达变化.结果 塞来昔布导致MG-63细胞阻滞在G1期,通过激活半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶(caspase)-9的内源性凋亡途径诱导细胞凋亡;顺铂单药作用后骨肉瘤MG-63细胞凋亡率为5.93%,而联合应用塞来昔布50μmol/L或100 μmol/L后,凋亡率分别为6.66%和37.15%,与顺铂联合具有明显的协同作用;COX-2蛋白表达未降低.塞来昔布联合顺铂明显降低P13K/Akt、survivin、Bcl-2的表达,检测到caspase-9、caspase-3的激活和PARP裂解片段.Wortmannin作用MG-63细胞48 h,检测到pAkt(Thr308)、Bcl-2、survivin表达下调.结论 塞来昔布可通过非COX-2途径诱导骨肉瘤MG-63细胞凋亡,与P13K/Akt、survivin、Bcl-2蛋白相关,并且PI3K/Akt途径在survivin、Bcl-2表达调控中发挥重要作用.这可能是塞来昔布药物干预的中心环节.     

多西紫杉醇诱导人肝癌细胞凋亡及其机制的研究

目的 探讨多西紫杉醇(docetaxel,DTX)对人肝癌细胞诱导凋亡的作用及其机制.方法 人肝癌细胞株HepG2和Huh7用于实验.通过WST-1细胞增殖实验观察DTX对细胞生长的抑制作用,采用Hoechst 33342荧光染色和DNA凝胶电泳检测细胞的凋亡情况,采用Western印迹法检测DTX对Caspase-3和Caspase-9酶原的激活作用.结果 DTX对HepGZ和Huh7的生长有明显的抑制作用;经Hoeehst 33342荧光染色和DNA凝胶电泳检测发现DTX可诱导HepG2和Huh7细胞凋亡;在DTX诱导肝癌细胞凋亡的过程中.凋亡效应分子Caspase-3和Caspase-9酶原被剪切激活;Caspase3抑制剂Z-VAD-FMK抑制DTX诱导的肝癌细胞凋亡.结论 DTX对肝癌细胞具有较强的增殖抑制作用,凋亡是其抑瘤的机制之一.DTX导致肝癌细胞凋亡程序依赖于激活Caspase-3酶原途径.     

塞来昔布对SGC-7901人胃癌细胞NHE1表达及细胞内pH的影响

目的探讨选择性COX-2抑制剂塞来昔布对SGC-7901人胃癌细胞钠氢交换体1(NHE1)表达及细胞内pH的影响。方法以SGC-7901人胃癌细胞为研究对象,不同浓度的塞来昔布(5、12.5、25、50、75和100μmol/L)作用于SGC-7901细胞不同时间后,采用MTT法检测塞来昔布对胃癌细胞生长的抑制作用;采用Western blot技术检测不同浓度塞来昔布对SGC-7901细胞NHE1表达的影响;在此基础上,采用BCECF-AM免疫荧光测定不同浓度塞来昔布对SGC-7901细胞内pH的影响。结果塞来昔布能抑制SGC-7901细胞的生长,在一定范围内,其抑制作用随着塞来昔布浓度的增加而增强;同一浓度条件下,其抑制作用随着作用时间的延长也相应增强(P0.05)。不同浓度塞来昔布(除5μmol/L组外)作用于SGC-7901细胞后,NHE1表达均有下调,并呈浓度依赖性(P0.05)。SGC-7901细胞内pH为碱性,不同浓度(除5μmol/L组外)塞来昔布干预24 h后,SGC-7901细胞内pH较对照组细胞明显下降(P0.05),并且下降情况呈浓度依赖关系(P0.05)。结论塞来昔布对SGC-7901细胞生长抑制作用可能通过下调NHE1表达和降低细胞内pH实现。