自制扣式负压抽提装置在甲型流感病毒检测中的应用

目的:探讨自制扣式负压抽提装置在甲型流感病毒检测中的应用效果。方法:随机抽取2015年7月～2017年7月我院420份呼吸道分泌物样本,随机分成实验1组(180份)与实验2组(240份),实验1组采用的采用柱式抽提法,实验2组是自制扣式负压抽提法,观察两种方法的抽提效率与定量检测结果,同时观察两种方法对RNA的完整性的影响。结果:实验2组的抽提效率明显高于实验1组,并且定量检测结果的准确性与一致性明显优于实验1组;自制扣式负压抽提法对RNA完整性的影响低于柱式抽提法(P0.05)。结论:自制扣式负压抽提装置在甲型流感病毒检测中效率更好,并且提取纯度更高于柱式抽提法。     

高原地区大鼠耳蜗RNA提取条件优化

目的探讨在高原地区采用AMBION抽提试剂盒提取RNA的最佳条件。方法采用AMBION抽提试剂盒,对126份大鼠耳蜗(每份耳蜗分为2组,实验组和对照组)提取RNA,实验组采用AMBION抽提试剂盒优化条件提取RNA,对照组按照AMBION抽提试剂盒说明书提取RNA。结果实验组和对照组均能成功提取大鼠耳蜗组织RNA,总RNA的提取量分别为:0.896±0.348μg,0.536±0.404μg(P0.05);实验组RNA浓度高于对照组,分别为:0.147±0.047μg/μl,0.072±0.022μg/μl(P0.05);实验组RNA纯度高于对照组,纯度指标A260/280分别为:2.096±0.044,1.900±0.113(P0.05);实验组RNA完整性指标RIN值高于对照组,分别为:9.689±0.459,8.588±0.662(P0.05);实验组和对照组28S/18S分别为:1.967±0.141,1.863±0.192(P0.05)。结论在高原地区采用AMBION抽提试剂盒提取大鼠耳蜗组织RNA,需要优化提取条件,其RNA浓度、纯度和质量都能满足后续实验要求,且样本重复性好。     

不同方法提取血清总RNA的性能评价

目的 评价3种方法提取血清总RNA的性能.方法 分别用Trizol法、磁珠总RNA提取法(磁珠法)、柱式总RNA提取法(柱式法)提取血清总RNA.通过测定样品OD260/OD280值评价提取的总RNA纯度、产量;通过设计引物及TaqMan探针扩增总RNA的管家基因(GAPDH),以观察各方法提取的总RNA用于RT-PCR的效果.结果 3种方法提取总RNA纯度分别为Trizol法(1.83±0.19)、磁珠法(1.94±0.11)、柱式法(1.92±0.12);扩增管家基因GAPDH,其Ct值分别为Trizol法(19.37±3.51)、磁珠法(18.33±1.11)、柱式法(18.85±1.20).结论 磁珠法、柱式法明显优于Trizol法,磁珠法与柱式法结果 差异无统计学意义(P>0.05).     

两种从陈旧血中抽提基因组DNA方法的比较

目的 比较盐析法和磁珠法从陈旧血中抽提基因组DNA的效果和特点,以便常规用于骨髓库HLA基因分型.方法 使用TECAN全自动工作站为平台,分别用Gentra盐析法DNA抽提试剂盒和Promega磁珠法DNA抽提试剂,从48份陈旧全血样本中抽提基因组DNA,提取的基因组DNA均溶于100 μlTE中;然后用紫外分光光度计测定其产量和纯度,并用琼脂糖凝胶电泳法测定DNA样本的完整性.结果 从400 μl陈旧全血中提取基因组DNA,用盐析法获得的DNA含量为28.6±8.7 ng/μl,A260/A280值平均为1.63±0.209;用磁珠法获得的DNA含量为94.2±10.3 ng/μl,A260-A320/A280-A320值平均为1.821±0.102;琼脂糖电泳法检测表明两种方法提取的DNA的分子量均大于15 kb.结论 使用磁珠法从陈旧血中所获得的DNA的产量和纯度明显高于盐析法,适合于骨髓资料库陈旧血样本的常规HLA基因分型实验以及下游的分子生物学实验.     

高海拔地区血液基因组DNA提取条件优化

目的探讨在高海拔地区应用血液基因组DNA提取试剂盒的最佳条件。方法应用RelaxGene Blood DNA System血液基因组DNA提取系统,对109份血样(每份血样分为2组,实验组和对照组)提取DNA,实验组采用优化条件提取DNA、对照组采用试剂盒说明书方法提取DNA。结果实验组109份样品中有13份DNA浓度在20-50ng/μL之间,35份在51-80ng/μL之间,61份样品80ng/μL;DNA浓度比例高于对照组(P0.05)。实验组109份样品中DNA纯度OD260/OD280比值在≥1.7-1.9之内的有105份,比值小于1.7的有3份,比值≥1.9的有1份,DNA纯度比例高于对照组(P0.05)。结论在高海拔地区采用试剂盒提取血液基因组DNA,需要优化提取条件,所得到的DNA浓度和纯度均能满足下游实验要求,且重复性好。     

两种负压引流装置用于乳腺癌术后引流效果的比较

目的:比较两种负压引流装置用于乳腺癌术后引流的效果。方法:96例行乳腺癌根治术或乳腺癌改良根治术患者分为两组:实验组和对照组,每组48例。实验组采用自制的负压引流装置行负压引流;对照组采用一次性负压引流器行负压引流。并观察两组患者皮下积液和伤口愈合时间情况。结果:实验组的皮下积液发生率为8.3%,明显低于对照组的25.0%(P<0.05),实验组和对照组伤口愈合时间分别为(14.9±2.5)d和(16.8±4.4)d,两组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:自制的负压引流装置对乳腺癌术后患者伤口进行负压引流,能使手术创面充分引流,明显降低并发症的发生,缩短伤口愈合时间。     

两种从陈旧血中抽提基因组DNA方法的比较

目的比较盐析法和磁珠法从陈旧血中抽提基因组DNA的效果和特点,以便常规用于骨髓库HLA基因分型。方法使用TECAN全自动工作站为平台,分别用Gentra盐析法DNA抽提试剂盒和Promega磁珠法DNA抽提试剂,从48份陈旧全血样本中抽提基因组DNA,提取的基因组DNA均溶于100μlTE中;然后用紫外分光光度计测定其产量和纯度,并用琼脂糖凝胶电泳法测定DNA样本的完整性。结果从400μl陈旧全血中提取基因组DNA,用盐析法获得的DNA含量为28.6±8.7ng/μl,A260/A280值平均为1.63±0.209;用磁珠法获得的DNA含量为94.2±10.3ng/μl,A260-A320/A280-A320值平均为1.821±0.102;琼脂糖电泳法检测表明两种方法提取的DNA的分子量均大于15kb。结论使用磁珠法从陈旧血中所获得的DNA的产量和纯度明显高于盐析法,适合于骨髓资料库陈旧血样本的常规HLA基因分型实验以及下游的分子生物学实验。     

不同预处理方法对提取尿液脱落细胞mRNA质量的影响

目的 探索合适的处理尿标本的方法获得尿脱落细胞mRNA。方法 比较尿液容量、尿液标本冻存时间、处理方式对提取尿液脱落细胞RNA的产量与质量的影响,并进行qPCR的试验。结果 40 ml尿液标本组及10 ml尿液标本组RNA总量均值分别为886.94±222.93 ng及211.22±62.01 ng,两组A_260nm/A_280nm比值分别为1.80±0.10和1.77±0.09; 尿液标本量与RNA总量相关(t=3.604,P=0.002),不同尿液标本量RNA质量差异无统计学意义(t=0.708,P值>0.05)。实时离心提取及冰冻保存尿液7天后提取两种预处理方法RNA总量分别为886.94±945.84 ng及881.50±829.02 ng,A_260nm/A_280nm比值分别为1.80±0.10及1.80±0.87; RNA总量与A_260nm/A_280nm比值差异无统计学意义(t=-0.221～0.085,P值均>0.05)。直接冰冻尿液标本与TRIzol保存沉渣细胞两种预处理方法RNA总量分别为637.81±525.24 ng及639.86±535.42 ng,A_260nm/A_280nm比值分别为1.84±0.13及1.83±0.96; RNA总量与A_260nm/A_280nm比值差异无统计学意义(t=-0.47～0.293,P值均>0.05)。尿脱落细胞mRNA中可以检测到足细胞的标记蛋白WT-1,podocin和synaptopodin的基因表达。结论 尿液标本量是提取脱落细胞RNA量的关键因素,-80℃低温冻存尿标本7天或Trizol预处理冻存均对提取尿液沉渣细胞RNA数量和质量无影响。     

全血抽提基因组DNA数量与纯度影响因素的探讨

目的研究全血标本在反复冻融后对抽提基因组DNA数量和纯度的影响.方法本研究随机抽取100份样本,相隔24小时连续进行反复冻融四次,将每次融化的样本抽提基因组DNA,并用紫外分光光度仪测定其浓度和纯度.结果全血样本反复冻融组间比较抽提基因组DNA的数量检测结果比较提示均有显著差异(P＜0.01),但纯度反复冻融组间比较的检测结果提示均无统计学意义(P＞0.05).结论反复冻融对全血标本抽提基因组DNA的数量有使其下降的作用,对纯度则无影响.     

无限增殖化人类B淋巴细胞基因组DNA提取方法的建立

目的建立从无限增殖化人类B淋巴细胞提取基因组DNA的方法,并评价提取DNA的质量和产量。方法用DNA提取试剂盒提取基因组DNA;用紫外分光光度法测定DNA样本的纯度和产量;用琼脂糖电泳法测定DNA样本的完整性。结果(1~2)×107个B淋巴细胞提取基因组DNA的平均浓度为174±61.3 ng/μl,DNA的纯度平均为1.73±0.047(A260nm/A280nm),琼脂糖电泳测得DNA分子量约为21 kb,且无污染。结论该方法可以从无限增殖化人类B淋巴细胞提取高质量高浓度的基因组DNA。     

病毒灭活血浆残余亚甲蓝对人外周血单个核细胞免疫功能影响的体外研究

目的利用人外周血单个核细胞(PBMC)研究用于血浆病毒灭活后残余的亚甲蓝是否对人体免疫细胞功能产生影响。方法采用Ficoll-Hypaque密度梯度离心法分离PBMC,在T细胞特异性刺激因子Anti-CD3/CD28存在的条件下,加或者不加不同浓度的亚甲蓝共培养,培养至72h,收集培养上清液,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测细胞因子分泌情况;培养66h后,加入CCK-8染料继续培养4~6h,于A_(450)处测定细胞增殖情况。结果高浓度剂量亚甲蓝(1.25、2.5、5μmol/L组)对AntiCD3/28刺激PBMC的增殖均有明显抑制作用(P0.01),其OD值由0.897±0.385分别降至0.632±0.334、0.524±0.254、0.445±0.287,呈一定的剂量依赖效应。高浓度亚甲蓝(1.25、2.5、5μmol/L组)可下调Anti-CD3/28诱导PBMC分泌细胞因子白细胞介素(IL)-17a、IL-10、γ-干扰素(IFN)-γ,且呈剂量依赖效应。1.25、2.5、5μmol/L的亚甲蓝影响PBMC分泌IL-17a,IL-17a水平由(406±57)pg/mL分别降至(276±38)、(192±31)、(134±24)pg/mL;影响PBMC分泌IL-10,IL-10水平由(184±15)pg/mL分别降至(132±13)、(110±12)、(42±8)pg/mL;影响PBMC分泌IFN-γ,IFN-γ水平由(4 512±187)pg/mL分别降至(2 876±143)、(2 234±153)、(1 988±112)pg/mL。结论高浓度亚甲蓝(≥1.25μmol/L)对人PBMC的增殖以及分泌细胞因子功能有显著抑制作用,换而言之,血浆病毒灭活后残余浓度(≤0.33μmol/L)的亚甲蓝对PBMC免疫功能无明显影响,但该浓度的亚甲蓝对人纯T细胞免疫功能是否有影响需要进一步评估研究。     

固定剂及固定时间对DNA提取质量的影响

目的 探讨10％福尔马林、95％乙醇、中性缓冲福尔马林、4％多聚甲醛-0.1 moL/L磷酸缓冲液4种固定剂对新鲜组织DNA质量及PCR的影响。方法 选取16例单纯性扁桃体炎组织标本的冷冻切片,进行不同时段的固定,比较提取物OD260nm/OD280nm比值、DNA浓度和PCR结果。结果 各组之间同一时间、同一组内不同时间OD260nm/OD280nm比值比较差异不显著(P>0.05);而同一固定时间段,个别组间DNA浓度以及同一组内不同时间DNA浓度差异显著(P<0.05)。固定72h后,各组的PCR阳性率分别为66.7％、100％、93.3％、80％、100％。结论95％乙醇固定效果最佳,其余3组固定剂随固定时间的延长,PCR阳性率逐渐降低。     

剑鞘样气管的临床与CT研究

目的：对剑鞘样气管（saber-sheath intrathoracic trachea）的临床资料及CT图像特点进行分析,探讨其诊断价值.材料与方法：回顾性分析100例胸部CT检查患者图像及临床资料,均为男性,年龄50-75岁（65.70±6.99岁）,对其CT特点及临床资料进行研究.结果：气管横径8.0mm-17.0mm（10.99 ±2.36mm）,95％可信区间（10.53-11.47mm）;气管纵径13.4mm-28mm （20.44±5.03mm）,95％可信区间（19.45-21.44mm）;气管指数0.44-0.66（0.57 ±0.06）,95％可信区间（0.56-0.58）.有吸烟史者92名（92％）,慢性支气管炎病史89名（89％）,肺气肿85名（85％）,慢性阻塞性肺部疾病88名（88％）.CT表现：气管纵径正常,横径狭窄,气管指数＜ 2/3,气管内缘凹陷,形如剑鞘,内壁光滑,前壁局部气管软骨钙化,部分患者伴有慢支、肺气肿及肺大泡.结论：剑鞘样气管具有典型的临床表现及CT特征,结合两者可做出明确诊断.     

联合检测CA125、VEGF-C、β2-MG对卵巢癌淋巴结转移早期诊断的价值

目的探讨卵巢癌患者血清糖链抗原125(CA125)、血管内皮生长因子C(VEGF-C)及β2微球蛋白(β2-MG)联合检测对卵巢癌腹膜后淋巴结转移的早期诊断价值。方法纳入51例卵巢癌行腹膜后淋巴结清扫术的患者作为试验组,其中卵巢癌腹膜后淋巴结转移阳性者29例,选取同期卵巢良性肿瘤患者32例作为对照组。采用化学发光法检测血清CA125,采用ELISA法检测血清VEGF-C,采用胶乳增强免疫比浊法检测血清β2-MG,比较各组血清CA125、VEGF-C、β2-MG水平。结果试验组血清CA125、VEGF-C、β2-MG水平分别为(1 682.5±261.5)μg/mL、(2 125.6±96.7)pg/mL、(2.52±0.61)mg/L,对照组分别为(30.5±6.3)μg/mL、(1 738.0±79.8)pg/mL、(1.87±0.56)mg/L,差异有统计学意义(P0.01)。29例卵巢癌腹膜后淋巴结转移阳性者血清CA125、VEGF-C、β2-MG水平更加显著,分别为(1 997.3±376.8)μg/mL、(2 895.2±126.8)pg/mL、(4.95±0.69)mg/L,与对照组比较,差异有统计学意义(P0.01)。联合检测血清VEGF-C、β2-MG、CA125,对卵巢癌腹膜后淋巴结转移的诊断灵敏度、特异度、准确率分别为95.8%、97.3%、98.5%。结论联合检测血清CA125、VEFG-C、β2-MG对早期诊断卵巢癌腹膜后淋巴结转移有重要的临床价值。     

右美托咪定联合舒芬太尼应用于结肠癌术后的镇痛效果

目的探讨结肠癌手术后应用右美托咪定联合舒芬太尼的镇痛效果。方法将118例全身麻醉行结肠癌根治术的患者随机分为对照组(舒芬太尼+高乌甲素+雷莫司琼进行静脉自控镇痛)与观察组(右美托咪定+舒芬太尼+高乌甲素+雷莫司琼进行静脉自控镇痛),每组各59例。采用疼痛视觉模拟评分法(VAS)分别评价两组患者术后1、3、6、12、24、48h疼痛情况,统计两组患者切口刺激疼痛敏感面积及不良反应情况。结果观察组术后24h内各时间点VAS评分均明显低于对照组,差异均有统计学意义(P0.05);观察组术后24、48、72h切口机械性刺激疼痛敏感面积分别为(12.8±2.4)、(24.7±2.9)、(23.9±3.2)cm2明显少于对照组的(32.9±3.6)、(56.8±4.1)、(53.6±3.6)cm~2,差异均有统计学意义(P0.05)。两组治疗期间均无明显不良反应。结论于全身麻醉行结肠癌根治术期间应用右美托咪定联合舒芬太尼具有较好镇痛效果。     

慢性乙型肝炎患者趋化因子Mig表达水平的研究

目的研究慢性乙型肝炎患者中趋化因子Mig的表达水平。方法分别采用酶联免疫吸附测定法(ELISA)、逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和Western-blotting分析88例慢性乙型肝炎患者和53例健康人群血清、外周单个核细胞及肝脏组织中Mig的表达水平,同时以免疫组化技术分析Mig在肝脏组织中的分布情况。结果乙型肝炎e抗原(HBeAg)阴性乙肝患者血清、外周单个核细胞和肝组织中Mig表达量分别为(247.03±63.14)pg/mL、(0.95±0.21)、(0.79±0.23),乙型肝炎e抗原(HBeAg)阳性乙肝患者血清、外周单个核细胞和肝组织中Mig表达量分别为(243.05±53.00)pg/mL、(0.98±0.35)、(0.74±0.18),与健康人群血清、外周单个核细胞和肝组织中Mig表达量比较,差异均有统计学意义(P0.05)。结论慢性乙型肝炎患者体内Mig呈现较高的表达水平可能与患者机体状态相关。     

血小板功能相关指标检查在脓毒症患者中的采用分析

目的检测脓毒症患者血小板功能相关指标变化,并分析其临床意义。方法选取医院2014~2015年的50例脓毒症患者作为研究组,选取同期50例体检健康对象作为对照组,检测2组血小板功能相关指标,观察其变化及意义。结果研究组患者血小板计数(PLT)、血小板分布宽度(PDW)、血小板平均容积(MPV)、大血小板比率(P-LCR)和P选择素分别为(145.7±21.5)×109/L、(24.6±6.3)%、(12.4±2.0)fL、(65.3±7.3)%、(81.5±9.7)%,对照组患者PLT、PDW、MPV、P-LCR和P选择素分别为(251.3±27.8)×109/L、(15.3±3.7)%、(7.7±1.6)fL、(32.2±6.2)%、(61.5±8.4)%。研究组患者PLT值显著低于对照组,而PDW、MPV、P-LCR和P选择素均显著高于对照组,2组数据差异有统计学意义(P0.05)。急性生理学与慢性健康状况评分Ⅱ(APACHEⅡ)评分小于10分组PLT值显著高于APACHEⅡ评分大于或等于10且小于或等于19分组、APACHEⅡ评分大于或等于20分组,而PDW、MPV、P-LCR和P选择素均显著低于APACHEⅡ评分大于或等于10且小于或等于19分组、APACHEⅡ评分大于或等于20分组,3组间数据比较差异有统计学意义(P0.05)。结论脓毒症患者的血小板处于激活状态,且各项指标的检测对判断脓毒症病情程度有重要意义。     

乙肝患者血清高尔基蛋白73水平改变及其临床意义

目的探讨乙肝患者血清高尔基蛋白(GP)73水平改变及其临床意义。方法连续性纳入2013年1月至2015年6月于镇江市中西医结合医院就诊的300例慢性乙肝病毒感染患者,根据病情分为乙肝病毒携带(HBV-C)组共50例,慢性乙肝(CHB)组共120例,乙肝相关肝硬化(LC)组共60例,乙肝相关肝细胞癌(HCC)组70例。比较各组之间血清GP73水平差异,并通过相关性分析和受试者工作特征曲线(ROC曲线)分析比较GP73对不同乙肝患者病变程度的诊断学价值。结果 CHB组、HCC组和LC组患者GP73水平分别为(117.3±12.8)、(181.5±21.7)、(263.2±33.4)ng/mL,均明显高于HBV-C组患者的(39.2±3.5)ng/mL,差异均有统计学意义(P0.05)。HCC组和LC组患者GP73水平又明显高于CHB组,差异有统计学意义(P0.05)。代偿LC亚组GP73水平[(245.6±29.3)ng/mL]明显低于失代偿LC亚组[(279.5±39.6)ng/mL],差异有统计学意义(P0.05)。血清GP73水平与天门冬氨酸氨基转移酶(r=0.554,P0.05)、丙氨酸氨基转移酶(r=0.409,P0.05)、清蛋白(r=0.445,P0.05)、Child-pugh分级(r=0.609,P0.05)和失代偿LC(r=0.722,P0.05)呈正相关。GP73对于CHB的ROC曲线下面积(AUC)为0.741,95%CI为0.519~0.813,cut off值为176.3ng/mL,敏感性为77.8%,特异性为77.2%;GP73对于HCC的AUC为0.749,95%CI为0.676~0.834,cut off值为232.0ng/mL,敏感性为78.0%,特异性为82.5%;GP73对于LC的AUC为0.738,95%CI为0.636~0.841,cut off值为292.2ng/mL,敏感性为74.4%,特异性为80.9%;GP73对于失代偿性LC的AUC为0.802,95%CI为0.699~0.932,cut off值为319.3ng/mL,敏感性为84.2%,特异性为90.3%。结论 GP73可以作为一种较为敏感且特异性较高的肝脏标记物,不但有助于早期诊断HCC和LC,还有助于辅助判断LC患者肝功能代偿状态。     

中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白与β_2-微球蛋白对糖尿病肾病早期预测的临床价值

目的研究中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白(NGAL)与β2-微球蛋白(β2-MG)对糖尿病肾病(DN)的预测价值。方法选择2015年1月至2016年5月在该院接受治疗的DN患者78例(观察组),选择同期该院体检健康志愿者50例(健康对照组),比较2组研究对象的NGAL、β2-MG、尿素氮(BUN)、肌酐(SCr)及肾小球滤过率(eGFR)水平,并进行阳性率和相关性分析。结果观察组患者NGAL与β2-MG分别为(473.21±127.09)ng/mL、(2.76±0.45)mg/L,显著高于健康对照组的(61.36±14.230)ng/mL、(0.81±0.14)mg/L;观察组NGAL与β2-MG阳性检出率分别为96.15%(75/78)、91.03%(71/78),均显著高于健康对照组的2.00%(1/50)、6.00%(3/50);观察组BUN、SCr也显著高于健康对照组,但eGFR水平显著低于健康对照组,差异均有统计学意义(P0.05)。NGAL、β2-MG与BUN、SCr呈正相关(R=0.812,P=0.000;R=0.728,P=0.001;R=0.748,P=0.001;R=0.685,P=0.021),与eGFR呈负相关(R=-0.415,P=0.000;R=-0.371,P=0.000)。结论 DN患者NGAL与β2-MG显著升高,两者还与BUN等存在明显的相关性,具有临床价值。     

Hcy、vWF及D-D联合检测对下肢深静脉血栓形成的诊断价值

目的探讨血浆同型半胱氨酸(Hcy)、血管性血友病因子(vWF)和D-二聚体(D-D)的水平及联合检测对下肢深静脉血栓(LEDVT)患者的诊断价值。方法选取118例LEDVT患者和60例同期健康体检者,分别检测样本中Hcy、vWF和D-D水平,使用ROC曲线确定此3项结果诊断LEDVT的临界值。结果 LEDVT组Hcy、vWF和D-D水平分别为(23.9±8.6)mol/L、(197.8±58.8)%、(3.21±2.82)g/mL,正常对照组分别为(17.7±4.7)mol/L、(125.9±35.6)%、(0.49±0.35)g/mL。LEDVT组的3项检测指标均明显高于正常对照组,差异有统计学意义(P0.05)。Hcy、vWF、D-D的ROC曲线下面积(AUC)为0.747、0.857、0.892。3项指标联合检测对LEDVT诊断的灵敏度为95.8%。结论Hcy、vWF、D-D是LEDVT的敏感指标,三者对LEDVT的早期诊断有着重要的临床价值。