TGFβ1反义RNA对腹膜间皮细胞分泌细胞外基质的影响

目的：研究转化生长因子β1（TGFβ1）反义RNA对体外培养的人腹膜间皮细胞（HPMC）细胞外基质合成与分泌的影响。 方法：将反义TGFβ1基因真核表达载体转染HPMC，用ELISA法检测转染细胞上清液中纤维连接蛋白（FN）和Ⅰ型纤溶酶原激活物抑制剂（PAI-1）的蛋白质水平；用半定量逆转录多聚酶链反应（RT-PCR）法检测转染细胞内FN，PAI-1和胶原Ⅰ（ColⅠ）的mRNA表达，并与未转染HPMC对照组和转染空载体组比较其变化。 结果：TGFβ1反义RNA转染HPMC后，与对照组相比，转染24 h后，FN，ColⅠ，PAI-1 mRNA分别下调17％，26％，9.6％；转染48ｈ后 FN，PAI-1蛋白含量亦明显下降（P<0.05）。 结论：人反义TGFβ1基因真核表达载体可抑制HPMC合成细胞外基质，在腹膜纤维化的研究及防治中有潜在的应用价值。     

己酮可可碱对乳酸盐腹膜透析液致人腹膜间皮细胞损伤和TGF-β1、FN分泌的影响

目的研究己酮可可碱对乳酸盐腹膜透析液致人腹膜间皮细胞（HPMC）损伤和TGF-β1、FN分泌的影响。方法采用胰蛋白酶-EDTA消化法,从人腹膜组织中分离间皮细胞,并体外培养HPMC。采用自动生化分析仪检测培养液中乳酸脱氢酶（LDH）水平以示细胞损伤程度 ELISA法检测细胞培养液中TGF-β1、FN的水平。结果与单纯对照组相比,2.5%L-PDS致培养液中LDH水平明显增高（P〈0.01） 同时培养液中TGF-β1、FN蛋白质水平增加。在2.5%L-PDS刺激下,100μg/ml己酮可可碱与下调培养液LDH,提高MTT渗入量,并减少TGF-β1、FN蛋白质水平。结论己酮可可碱可拮抗乳酸盐腹膜透析液致HPMC损伤并下调TGF-β1和FN的表达。     

TGF-β1对人腹膜间皮细胞分泌细胞外基质和bFGF的影响

目的 :研究TGF - β1对人腹膜间皮细胞分泌细胞外基质和bFGF的影响。方法 :人腹膜间皮细胞(HPMC)作体外培养 ,在第三代 ,将细胞转板至细胞融合后 ,将其分为对照组 (F12 )和TGF - β1刺激组两组(F12 TGF - β15ng/ml) ,分别在 2 4 ,4 8h采用ELISA法检测上清液中纤维连接蛋白 (FN)和纤溶酶原激活物抑制剂 (PAI- 1)的含量 ;采用半定量逆转录多原酶链反应 (RT -PCR)检测HPMC细胞内FN ,PAI - 1和碱性成纤维细胞生长因子 (bFGF)mRNA的表达。结果 :HPMC表达FN ,PAI - 1和bFGF ;HPMC在 5ng/mlTGF - β1刺激下分泌FN及PAI - 1明显的增加 ,与对照组比较差异有显著性意义 (P <0 .0 5 ) ;HPMC经TGF- β1作用 12h后 ,FNmRNA ,PAI- 1mRNA和bFGFmRNA半定量结果与对照组相比 ,其表达量分别上调18.5 4 % ,8.6 %和 6 6 .9%。结论 :TGF - β1可促进HPMC合成与分泌细胞外基质和bFGF。     

高糖对人腹膜间皮细胞的增殖和损伤及分泌细胞因子的影响

目的：探讨高糖介导腹膜纤维化的可能机制。方法：原代培养的第3代人腹膜间皮细胞（HPMCs）分为不同时间（24，48h）的对照组（F12）和高糖组（F12＋4％葡萄糖）。用MTT法测定细胞增殖，乳酸脱氢酶（LDH）法观察细胞损伤程度，采用酶联免疫法（ELISA）测定纤维连接蛋白（FN）、转化生长因子β1（TGF-β1）和结缔组织生长因子（CTGF）蛋白水平以及采用RT-PCR测定FN，TGF-β1和纤溶酶原激活物抑制剂-1（PAI-1）mRNA表达。结果：①高糖明显抑制细胞增殖，24h和48h高糖组与同一时间点对照组比较，MTT吸光度值均明显下降（P〈0．001或P〈0.01）；②高糖明显导致细胞损伤，24h和48h高糖组与同一时间点对照组比较，培养液中LDH含量均明显增加（均P〈0.001）；③高糖培养24，48h均使FN，CTGF和TGF-β1蛋白表达增加（P〈0．05或P〈0.001）；④高糖使FN，TGF-β1和PAI-1 mRNA表达均上调。结论：高糖能够抑制HPMCs增殖，损伤HPMCs，并刺激HPMCs分泌更多的TGF-β1，CTGF，FN和PAI-1，从而使HPMCs细胞外基质生成增多、降解减少，最终导致腹膜纤维化的形成。     

高糖对人腹膜间皮细胞纤维连接蛋白及纤溶酶原激活物抑制剂-1的影响

目的 研究高糖对人腹膜间皮细胞（HPMC）纤维连接蛋白（FN）及纤溶酶原激活物抑制剂-1（PAI-1）的影响。方法 利用HPMC体外培养模型，HPMC分别经含1．5％、2．5％、4．25％葡萄糖的1640培养基培养6、12、24、48h后，用ELISA法检测HPMC分泌FN及PAI-1的情况。结果 ①1．5％、2．5％、4．25％葡萄糖作用于HPMC，使培养上清中的FN明显高于对照组（P〈0．05），且FN增高的程度与葡萄糖浓度和作用时间呈依赖关系。②2．5％、4．25％的葡萄糖作用于HPMC，使培养上清中PAI-1明显高于对照组（P〈0．05），且增高的程度与葡萄糖浓度和作用时间呈依赖关系，1．5％葡萄糖液与对照相比没有差别（P〉0．05）。结论 高糖促使HPMC分泌FN、PAI-1增加，在腹膜纤维化的进程中起一定作用。     

TGFβ1反义RNA对腹膜间皮细胞分泌细胞外基质的影响

目的 :研究转化生长因子 β1(TGFβ1)反义RNA对体外培养的人腹膜间皮细胞 (HPMC)细胞外基质合成与分泌的影响。方法 :将反义TGFβ1基因真核表达载体转染HPMC ,用ELISA法检测转染细胞上清液中纤维连接蛋白 (FN)和Ⅰ型纤溶酶原激活物抑制剂 (PAI 1)的蛋白质水平 ;用半定量逆转录多聚酶链反应 (RT PCR)法检测转染细胞内FN ,PAI 1和胶原Ⅰ (ColⅠ )的mRNA表达 ,并与未转染HPMC对照组和转染空载体组比较其变化。结果 :TGFβ1反义RNA转染HPMC后 ,与对照组相比 ,转染 2 4h后 ,FN ,ColⅠ ,PAI 1mRNA分别下调 17% ,2 6 % ,9.6 % ;转染 4 8h后FN ,PAI 1蛋白含量亦明显下降 (P <0 .0 5 )。结论 :人反义TGFβ1基因真核表达载体可抑制HPMC合成细胞外基质 ,在腹膜纤维化的研究及防治中有潜在的应用价值     

人腹膜间皮细胞的培养及特征

目的 :建立人腹膜间皮细胞 (HPMC)培养模型 ,检测HPMC细胞外基质蛋白及白细胞介素 (IL - 8)的表达。方法 :采用胰蛋白酶 -EDTA消化法 ,从人的腹膜组织中分离HPMC。采用形态学和链霉菌抗生物素蛋白 过氧化物酶连接法 (即SP法 ) ,对培养细胞进行鉴定。采用SP法检测HPMC纤维连接蛋白 (FN)、胶原Ⅲ和胶原V及转化生长因子 (TGF) β1表达。采用逆转录多聚酶链反应 (RT -PCR)检测HPMCIL - 8mRNA和FNmRNA的表达。结果 :光镜示细胞融合后呈多边形 ,超微结构下可见丰富的微绒毛和内质网 ,免疫组化染色结果示HPMC可表达角蛋白 ,波形蛋白 ,胶原Ⅲ ,FN ,TGFβ1蛋白 ,Ⅷ因子、胶原V表达阴性。人腹膜间皮细胞亦表达FNmRNA和IL - 8mRNA。结论 :HPMC培养模型的建立 ,可为进一步研究腹膜纤维化的防治及IL - 8在腹膜透析中的作用提供理论依据。     

AGEs对人腹膜间皮细胞FN和CTGF的合成和表达作用研究

目的 观察糖基化终末产物（AGEs）对体外培养的人腹膜间皮细胞（HPMC）纤维连接蛋白（FN）和结缔组织生长因子（CTGF）表达的影响.方法 分别以不同浓度的AGEs（0、200、600、1 000mg/L）刺激HPMC 48h后,用RT-PCR法检测FN的表达情况.同时将体外培养的HPMC分为正常组（未加任何刺激因素）和AGEs组（终浓度为600mg/L）,两组均予刺激HPMC48h后,用RT-PCR及ELISA法检测细胞内FN和CTGF mRNA及蛋白的表达水平.结果 AGEs呈剂量依赖性上调HPMC FN mRNA的水平;AGEs组FN、CTGF mRNA和蛋白表达水平均较正常组明显增加（P＜0.05或0.01）.结论 AGEs可诱导体外培养HPMC的FN、CTGF基因和蛋白高表达.     

吲哚美辛对人腹膜间皮细胞分泌FN和PAI-1的影响

目的:探讨吲哚美辛对人腹膜间皮细胞分泌FN和PAI-1的影响。方法：用LPS或2.5%葡萄糖分别与不同浓度的吲哚美辛作用于体外培养的人腹膜间皮细胞，采用酶联免疫吸附法检测上清液中纤维连接蛋白(FN)和纤溶酶原抑制剂-1(PAI-1)的含量。结果：腹膜间皮细胞在2.5%葡萄糖或10mg/L LPS刺激下分泌FN及PAI-1明显增加，与对照组比较差异有显著性意义(P<0.01)；0.15mg/L及0.75mg/L吲哚美辛可明显抑制2.5%葡萄糖或10mg/L LPS刺激的腹膜间皮细胞24h内分泌FN及PAI-1蛋白水平(P<0.05)。结论：吲哚美辛可抑制人腹膜间皮细胞合成细胞外基质，在腹膜纤维化的防治中有潜在的应用价值。     

益肾化浊注射液对高糖培养肾小球系膜细胞表达FN及PAI-1 mRNA的影响

观察高糖对体外培养肾小球系膜细胞表达纤维连接蛋自 (FN)、纤溶酶原激活物抑制物(PAI 1)mRNA以及细胞增殖、分泌FN的影响 ,同时观察益肾化浊注射液对高糖引起上述各指标变化的影响。采用体外培养肾小球系膜细胞方法 ,用高糖及益肾化浊注射液作为刺激物 ,四甲基偶氮唑盐微量酶比色法 (MTT)检测细胞增殖 ,酶联免疫吸附测定法 (ELISA)测定细胞上清FN含量 ,Northem杂交检测FN、PAI 1mRNA表达水平。结果表明 ,高糖可促进分泌FN ,上调PAI 1mRNA的表达 ,明显抑制系膜细胞的增殖 ;而益肾化浊注射液可缓解高糖所引起的上述指标的改变 ,并可下调FNmRNA的表达。     

黄芪对TGF—β1致人腹膜间皮细胞分泌细胞外基质的影响

OBJECTIVE: To study the effect of huangqi on peritoneal sclerosis and its possible mechanism. METHODS: Isolated human peritoneal mesothelial cells (HPMC) was cultured. Cultured HPMC were treated with F12 without serum (control group), F12 with TGF-beta 1 (TGF-beta 1 group), F12 with TGF-beta 1 and huangqi 100 micrograms/ml (huangqi 1 group), F12 with TGF-beta 1 and huangqi 1 mg/ml (huangqi 2 group). Fibronectin(FN) and plasminogen activator inhibitor-1 (PAI-1) were detected by ELISA method. The expression of FN mRNA, PAI-1 mRNA and bFGF mRNA was detected by RT-PCR method. RESULTS: 1. HPMC expressed FN, PAI-1, and bFGF. 2. Fn and PAI-1 significantly increased compared with control with 5 ng/ml TGF-beta 1 stimulated at 24 hours and 48 hours(P < 0.05); 3. The different concentration of huangqi decreased FN and PAI-1 expression compared with TGF-beta 1 group, especially 1 mg/ml huangqi at 24 hours(P < 0.05). 4. FN, PAI-1 and bFGF mRNA expression were higher in 12 hours after stimulation with TGF-beta 1 compared with control. FN, PAI-1 and bFGF mRNA expression were lower in 12 hours after stimulation with different concentration of huangqi (100 micrograms/ml and 1 mg/ml) than those in the TGF-beta 1 group. CONCLUSION: TGF-beta 1 promotes extracellular matrix synthesis and secretion of HPMC. Huangqi partly counteracts the synthesis of human peritoneal mesothelial cell's extracellular matrix by the stimulation of TGF-beta 1.     

黄芪对TGF-β1致人腹膜间皮细胞分泌细胞外基质的影响

目的 :探讨黄芪对腹膜纤维化的作用及可能机制。方法 :人腹膜间皮细胞 (HPMC)作体外培养 ,在第三代 ,将细胞转板至细胞融合后 ,将其分为对照组 (F12 ) ,TGF β1组 (F12 +TGF β15ng/ml) ,TGF β1加黄芪 1组(F12加TGF β1加黄芪 ,黄芪终浓度为 10 0 μg/ml,TGF β1加黄芪 2组 (F12加TGF β1加黄芪 ,黄芪终浓度为 1mg/ml) ,分别在 2 4,48h采用ELISA法检测上清液中纤维连接蛋白 (FN)和纤溶酶原抑制剂 (PAI 1)的含量 ;FNmRNA ,PAI 1mRNA和碱性成纤维细胞生长因子 (bFGF)mRNA的表达采用半定量逆转录多聚酶链反应 (RT PCR)检测。结果 :①HPMC表达FN ,PAI 1和bFGF ;②HPMC在 5ng/mlTGF β1刺激下分泌FN及PAI 1明显的增加 ,与对照组比较差异有显著性意义 (P <0 .0 5 ) ;③HPMC在TGF β1和不同浓度的黄芪刺激后 ,在 2 4h内可使FN及PAI 1减少 ,尤其是PAI 1与TGF β1组比差异有显著性意义 (P <0 .0 5 )。④HPMC经TGF β1作用 12h后 ,FNmRNA ,PAI 1mRNA和bFGFmRNA半定量结果与对照组相比 ,其表达量分别上调 18.5 4%,8.6 %和 6 6 .9%,HPMC经 10 0μg/ml和 1mg/ml黄芪作用 12h后FN ,PAI 1和bFGFmRNA的表达与TGF β1组比较均下调 ,其结果分别为5 .3 %,1.3%,3 .8%和 5 .4%,74.3 %,2 3 .7%。结论 :TGF β1可促进HPMC合成     

氯沙坦对高糖诱导大鼠肾近端小管上皮细胞纤溶酶原激活物及其抑制物表达的影响

目的 研究高糖对正常大鼠肾近端小管上皮细胞纤溶酶原激活物(tPA和uPA)及其抑制物-1(PAI-1)表达的影响,并探讨血管紧张素Ⅱ受体阻滞剂氯沙坦对其改善作用.方法 培养大鼠肾近端小管上皮细胞,并分组为正常对照组、甘露醇组(5 mmol/L D-葡萄糖 25 mmol/L 甘露醇)、高糖组(30 mmol/L D-葡萄糖)、氯沙坦组(10-3 mmol/L氯沙坦)、高糖 氯沙坦组(30 mmol/L D-葡萄糖 10-3 mmol/L氯沙坦).RT-PCR法检测各组细胞tPA、uPA及PAI-1 mRNA表达. 结果与正常对照组比较,高糖组肾小管上皮细胞tPA和uPA mRNA表达下降(P＜0.01), PAI-1 mRNA表达增加(P＜0.01);氯沙坦可部分逆转高糖的作用,高糖加氯沙坦组tPA、uPA表达分别是高糖组的2.06倍、1.69倍(P＜0.01),PAI-1表达为高糖组的44% (P＜0.01). 结论高糖可使肾近端小管上皮细胞PA/PAI-1 mRNA异常表达, 氯沙坦可以在肾小管中通过维持PA/ PAI-1的平衡,对糖尿病肾病防治起一定的作用.     

贝前列素钠对高糖条件下大鼠系膜细胞细胞外基质代谢的影响

目的探讨前列环素类似物贝前列素钠（BPS）对高糖条件下大鼠系膜细胞细胞外基质代谢的影响及其可能的机制。方法
将实验分为对照（NG）组、高糖（HG）组和高糖联合不同浓度BPS组（0.5、1、2、5 μmol/L）。体外培养系膜细胞,收集24、48 h时细
胞培养上清液,Elisa法测转化生长因子β1（TGFβ1）、纤维连接蛋白（FN）及基质金属蛋白酶-2（MMP-2）蛋白的表达;提取细胞总
蛋白,免疫印迹法测Smad3磷酸化蛋白的表达。结果与NG组相比,HG培养24及48 h细胞TGFβ1、FN蛋白表达均显著增加
（P<0.01）,MMP-2蛋白表达量显著下降（P<0.01）;细胞培养24、48 h后,与HG组相比,HG+1 μmol/L BPS组、HG+2 μmol/L BPS
组及HG+5 μmol/LBPS组细胞TGFβ1蛋白表达量均显著降低（P<0.01）;HG+2 μmol/L BPS组、HG+5 μmol/L BPS组细胞FN蛋
白表达量均显著降低（P<0.01）;HG+2 μmol/L BPS组及HG+5 μmol/L BPS组细胞MMP-2蛋白表达量均显著增加（P<0.05）;HG
组细胞Smad3 磷酸化蛋白表达较NG组显著增加（P<0.01）;与HG组相比,HG+2 μmol/L BPS组与HG+5 μmol/L BPS组细胞
Smad3蛋白磷酸化水平显著下降（P<0.05）。结论BPS可能通过抑制TGFβ1/Smad3通路活性对高糖条件下系膜细胞ECM代谢
起到了保护性的调节作用。
     

高糖对人腹膜间皮细胞增殖及损伤作用的影响

目的研究高糖对人腹膜间皮细胞（HPMC）增殖及损伤作用的影响。方法利用HPMC体外培养模型,HPMC分别经含1.5%、2.5%、4.25%葡萄糖的1640培养基培养6、12、24、48 h后,以四甲基偶氮多胍（MTT）法,测定HPMC增殖程度,采用自动生化仪检测培养液中乳酸脱氢酶（LDH）分泌水平。结果不同浓度葡萄与Control组间MTT OD值不同、LDH值亦不同,但时间效应均相近。而不同浓度葡萄糖组间MTT OD值、LDH值均相近、时间效应均相近。结论高糖可抑制HPMC增殖,促进LDH分泌,在腹膜损伤及纤维化进程中起一定作用。     

PDGF对大鼠肾小球系膜细胞表达纤维连接蛋白和PAI-1的影响

目的：探讨血小板源性生长因子fPDGF）对体外培养的大鼠肾小球系膜细胞表达纤维连接蛋白（VN）和纤溶酶原激活物抑制剂-1（PAI-1）的影响。方法：分别以0、5、10ng／rnl的PDGF—BB刺激体外培养的大鼠肾小球系膜细胞12、24、48h．以ELISA法检测培养上清中FN水平，发色底物显色法检测PAI-1的活性；以0、5、10ng／ml的PDGF—BB刺激大鼠系膜细胞24h和10ng／ml PDGF-BB分别作用0、12、24、48h。RT-PCR方法检测系膜细胞PAI-1 mRNA的表达。结果：PDGF-BB在10ng／ml以内随浓度增加可促进大鼠肾小球系膜细胞PAI-1 mRNA和FN表达．在48h内其表达呈时间依赖性。而PAI-1活性在24h时表达最高，以后逐渐下降、结论：PDGF-BB可上调FN和PAI-1及其mRNA表达．提示PDGF可能通过促进细胞外基质合成并抑制其降解而导致肾小球细胞外基质的积聚。