SLE患者Th1/Th2平衡状态及与外周血淋巴细胞CD28及CTLA-4分子表达的关系

目的:了解SLE患者Th1/Th2平衡状态以及共刺激分子CD28/CTLA-4与Th1/Th2平衡状态的关系。方法:研究对象为18例SLE患者(活跃期12例、缓解期6例)。对照组14例,为健康体检者。外周血单个核细胞(PBMCs)经梯度密度离心法分离后置于含PMA(5μg/L)及ionomycin(500μg/L)培养液中培养72 h。采用ELISA方法检测培养的PBMCs上清液中IFN-γ及IL-10的含量。应用流式细胞技术检测培养的淋巴细胞CD28及CTLA-4分子的表达。结果:活跃期SLE患者培养的PBMCs分泌IL-10的量(351.29 ng/L±153.31 ng/L)较对照组(254.48 ng/L±120.69 ng/L)有一定程度的升高,但差异无显著(P0.05),IFN-γ的分泌量(25.76 ng/L±16.09 ng/L)明显低于对照组(50.71 ng/L±27.92 ng/L,P0.05),IL-10/IFN-γ比值(18.74±13.77)明显高于对照组(6.66±4.95,P0.05)。培养前、后SLE患者CD3+及CD8+T细胞CD28分子表达量与对照组比较均无显著差异。培养前活跃期SLE患者CD3+T细胞CTLA-4分子表达量(0.79%+0.37%)较对照组(1.31%+0.61%)明显降低(P0.05)。培养后SLE患者CD3+T细胞及CD8+T细胞CTLA-4分子表达量仍低于对照组,但差异无显著(P0.05)。活跃期SLE患者培养的PBMCs中CD3+T细胞CTLA-4分子的表达量与上清液中IFN-γ含量呈明显的直线正相关关系(r=0.681,P0.05)、与上清液中IL-10及IL-10/IFN-γ比值呈明显的直线负相关关系(r=-0.624,P0.05;r=-0.738,P0.01)。结论:SLE患者存在Th1/Th2平衡向Th2方向偏移,即Th2优势状态。CTLA-4分子可能通过抑制CD28的信号转导参与Th2优势状态的形成。     

特发性血小板减少性紫癜患者Th1/Th2的细胞因子水平及临床意义

目的:检测特发性血小板减少性紫癜(ITP)患者外周血Th1(IL-2、IFN-γ)及Th2(IL-4、IL-10)细胞因子的变化,探讨ITP患者发病与Thl/Th2优势活化状态之间的关系.方法:通过酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测30例ITP患者治疗前、治疗后及26例健康志愿者外周血清中IL-2、IFN-γ、IL-4、IL-10水平.结果:ITP患者治疗前IFN-γ及IL-2因子水平高于治疗后和对照组,差异有统计学意义(P＜0.05),而IL-4及IL-10因子治疗前水平低于治疗后和对照组,差异有统计学意义(P＜0.05).结论:Thl型细胞因子介导的免疫应答在ITP的发病机制中占主导地位,糖皮质激素治疗可调整Th1/Th2细胞因子的偏移状态.     

CD4+CD25+CD127low调节性T细胞及相关细胞因子与慢性特发性血小板减少性紫癜的研究

目的:研究慢性特发性血小板减少性紫癜(CITP)患者外周血CD4+CD25+CD127low调节性T细胞及相关细胞因子的表达水平,探讨它们在ITP发病机制中的作用。方法:流式细胞术(FCM)检测31例ITP患者及25例健康志愿者外周血CD4+CD25+CD127low调节T细胞的数量,ELISA方法检测血清中IL-10、TGFβ-1的含量,并进行相关性分析。结果:ITP患者外周血CD4+CD25+CD127low调节性T细胞数量明显低于正常对照组(P<0.05),血清IL-10、TGFβ-1的含量也较正常对照组低(P<0.05)。CD4+CD25+CD127low调节性T细胞数量与IL-10的表达有相关性(P<0.05),与TGFβ-1的表达水平无相关(P>0.05)。结论:ITP患者CD4+CD25+CD127low调节T细胞数量减少及相关细胞因子的降低可能与ITP的细胞免疫失调有关。     

程序性死亡受体1/程序性死亡配体1信号各组分在急性冠脉综合征患者外周血中的表达及意义

目的 探讨程序性死亡受体1/程序性死亡配体1信号各组分在急性冠脉综合征(ACS)患者外周血中的表达及意义.方法 采用流式细胞术检测CD4+ CD28-T细胞表面程序性死亡受体1(PD-1)以及单核细胞表面程序性死亡配体1(PD-L1)的表达;采用酶联免疫吸附实验(ELISA)检测外周血中可溶性程序性死亡受体1(sPD-1),可溶性程序性死亡配体1(sPD-L1)和干扰素-γ(IFN-γ)的浓度.结果 与稳定性心绞痛(SA)和正常对照组(HC)相比,ACS患者CD4+ CD28-T细胞表面PD-1和单核细胞表面PD-L1的表达明显上调(P＜0.05),外周血中sPD-1、sPD-L1和IFN-γ的水平显著升高(P＜0.05).其中,sPD-L1和IFN-γ的水平呈显著正相关(r=0.772,P＜0.05).sPD-1和IFN-γ的水平无相关性(r =0.306,P＜0.05).结论 ACS患者体内CD4+ CD28-T细胞过量产生的IFN-γ是单核细胞表面PD-L1表达上调和外周血sPD-L1水平升高的原因之一,为进一步研究CD4+ CD28-T细胞的增殖活化和防治ACS提供理论依据.     

卵巢癌患者CD4+CD25+调节性T细胞的测定以及与细胞因子关系的研究

目的 探讨卵巢癌患者外周血CD4+CD25+调节性T细胞(Treg)在CD4+T细胞的分布,分析CD4+CD25+Treg与卵巢癌患者临床病理与生理特征的关系;研究CD4+CD25+Treg与TH1、TH2类细胞因子的关系.方法 流式细胞仪测定53例卵巢癌患者、44例卵巢良性疾患、45例健康人外周血CD4+CD25+Treg比例,TH1类细胞因子白细胞介素-2(IL-2)、γ-干扰素(IFN-γ)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和TH2类细胞因子IL-4、IL-6、IL-10的水平.结果 (1)卵巢癌患者外周血CD4+CD25+Treg(21.95%±6.80%)明显高于卵巢良性疾患(12.57%±5.12%)和健康对照组(10.77%±3.02%),P均＜0.001;良性疾患与健康对照组比较差异无统计学意义;手术前的卵巢癌患者CD4+CD25+Treg(21.95%±6.80%)明显高于手术后的患者(16.41%±5.84%),P＜0.001.(2)CD4+CD25+Treg与患者的年龄、职业没有关系;卵巢浆液性腺癌CD4+CD25+Treg为23.58%±7.08%,明显高于混合性瘤(18.30%±5.46%),差异有统计学意义(P＜0.05);与黏液性腺癌(22.06%±6.08%)差异无统计学意义;Ⅳ期卵巢癌患者CD4+CD25+Treg比值(28.79%±4.26%)明显高于Ⅲ期(20.01%±6.27%)和Ⅰ～Ⅱ期患者(17.97%±4.50%),P均＜0.001;CD4+CD25+Treg与肿瘤的远处转移(23.61%±6.52%)、淋巴结转移(24.05%±6.74%)、腹水的形成(24.06%±6.73%)有关(P＜0.05);低分化的卵巢癌患者CD4+CD25+Treg(25.05%±5.96%)与高分化患者(16.03%±0.80%)比较,差异有统计学意义(P＜0.05),而与中分化(21.82%±6.53%)比较差异无统计学意义.(3)卵巢癌患者TH1类细胞因子IL-2、TNF-α、IFN-γ的水平[(0.87±0.25)pg/ml、(1.09±0.34)pg/ml)、(7.56±2.25)pg/ml]明显低于健康对照[(2.38±1.09)pg/ml、(3.28±1.36)pg/ml、(19.04±4.59)pg/ml],P均＜0.001.而TH2类细胞因子IL-6的水平[(86.28±55.92)pg/ml]与对照组[(5.04±2.69)pg/ml)]比较显著升高(P＜0.001),而IL-4[(4.86±2.94)pg/ml]、IL-10[(1.07±2.30)pg/ml与健康人[(5.42±3.59)pg/ml、(4.46±2.31)pg/ml]之间差异无统计学意义.通过相关分析,卵巢癌患者外周血CD4+CD25+Treg与TH1类细胞因子IL-2、TNF-α、IFN-γ存在负相关,相关系数分别为r=-0.658,P＜0.05;r=-0.591,P＜0.05;r=-0.695,P＜0.05.与TH2类细胞因子IL-6存在正相关,相关系数r=0.784,P＜0.001.结论 (1)卵巢癌患者外周血CD4+CD25+Treg数量显著增加,这可能是卵巢癌患者免疫功能下降的一个重要原因;(2)CD4+CD25+Treg数量与肿瘤的分期、组织学类型、分化程度、浸润、淋巴结转移、腹水的形成有关.(3)卵巢癌患者外周血CD4+CD25+Treg与TH1类细胞因子之间存在着负相关,而与TH2类细胞因子IL-6之间存在正相关.CD4+CD25+Treg可能通过TH1、TH2类细胞因子的调节发挥对效应性T细胞的抑制作用.     

探讨梅毒IL-10、CD4+CD25+表达与预后的关系

目的 探讨梅毒患者外周血CD4+ CD25+调节性T细胞、血清白细胞介素-10(IL-10)的表达变化及其临床意义.方法 以本院皮肤性病科收治的67例确诊梅毒患者作为病例组,30名健康人群作为健康组,采用流式细胞仪技术检测两组研究对象外周血中CD4+ CD25+调节性T细胞、T淋巴细胞亚群水平,采用双抗体夹心酶联免疫吸附法(DABS-ELISA)测定两组研究对象血清IL-10的水平差异.结果 病例组患者的CD4+ CD25+ (12.64 ±3.86)％、CD8+ (28.27±1.86)％,显著的高于健康组(P＜0.05);病例组患者的CD4+ (31.25±6.14)％、CD4+/CD8+ (1.11 ±0.36)％,显著低于健康组患者(P＜0.05).病例组患者的IL-10 4.89±0.41pg/mL显著的高于健康组(P＜0.05).血清固定梅毒患者的CD4+CD25+、CD8+显著的高于Ⅰ期梅毒、Ⅱ期梅毒、潜伏期梅毒患者(P＜0.05),血清固定梅毒患者的CD4+、CD4+/CD8+显著低于Ⅰ期梅毒、Ⅱ期梅毒、潜伏期梅毒患者(P＜0.05).血清固定型患者的血清IL-10 5.02±0.40pg/mL显著的高于Ⅰ期梅毒、Ⅱ期梅毒(P＜0.05).结论 梅毒患者外周血CD4+ CD25+调节性T细胞、IL-10水平显著升高,同时血清固定患者的升高最显著,这可能与患者的免疫抑制具有一定的关系.     

铁皮石斛对慢性肾炎患者外周血Th1/Th2及CD28~+细胞水平的影响

为探讨铁皮石斛对慢性肾炎患者外周血Th1/Th2及CD28~+细胞水平的影响,本实验选取慢性肾炎患者60例,随机分为观察组和对照组各30例,并选择20例健康体检者作为健康组。在常规治疗基础上,对照组给予替米沙坦治疗,观察组在对照组基础上加服铁皮石斛,两组患者连续治疗3个月。比较两组患者治疗前后的外周血IFN-γ、IL-4、Th1/Th2、CD28~+、CD4~+CD28~+、CD8~+CD28~+细胞、血清胱抑素(cystatin C, CysC)、β_2微球蛋白及24h尿蛋白定量(24hurinary protein, Upr)水平,同时与健康组作比较。研究结果显示治疗前两组患者外周血IFN-γ、IL-4、Th1/Th2、CD28~+、CD4~+CD28~+、CD8~+CD28~+细胞、CysC、β_2微球蛋白及Upr水平比较,差异无统计学意义(P 0.05),与健康组比较,差异有统计学意义(P0.05);治疗后两组患者IFN-γ、Th1/Th2、CD8~+CD28~+细胞、CysC、β_2微球蛋白及Upr水平降低(P0.05),IL-4、CD28~+、CD4~+CD28~+细胞水平升高(P0.05),且观察组优于对照组,差异有统计学意义(P0.05)。综上,本研究发现铁皮石斛能够调节患者的免疫功能,改善慢性肾炎患者肾功能指标。     

特发性血小板减少性紫癜患者CD4~+ CD25~+ Treg细胞和TGF-β1的相关研究

目的:研究特发性血小板减少性紫癜(ITP)患者外周血CD4+ CD25+调节性T细胞(Treg)及相关细胞因子转化生长因子β1(TGF-β1)的表达水平,探讨二者在ITP发病机制中的作用。方法:流式细胞术(FCM)检测31例ITP患者及25例健康志愿者外周血Treg细胞的数量,ELISA方法检测血清中TGF-β1的含量,并进行相关性分析。结果:ITP患者外周血CD4+ CD25+调节性T细胞数量显著低于正常对照组(P0.05),血清TGF-β1的含量也较正常对照组明显减低(P0.05),差异有统计学意义。但CD4+ CD25+调节性T细胞比例与TGF-β1的含量无相关性(P0.05)。结论:ITP患者CD4+ CD25+调节T细胞数量减少与ITP的细胞免疫失调有关,CD4+ CD25+调节性T细胞和TGF-β1在ITP中作用机制复杂,还需要进一步研究。     

他克莫司与环孢菌素A对肝移植受者CD8+CD28-调节性T细胞的不同调节特性

目的 探讨他克莫司(FK506)与环孢菌素A(CsA)对肝移植受者CD8 GD28-调节性T细胞(Treg)及细胞因子IL-10的调节效应.方法 采用荧光标记单克隆抗体结合流式细胞技术分析接受FK506或CsA治疗的肝移植受者外周血CD8 T细胞及共刺激分子CD28的表达情况,采用流式细胞小球微阵列术(CBA)分析血浆中IL-10浓度.以健康志愿者和患终末期肝脏疾病拟进行肝移植者作为对照.结果 疾病对照组CD8 T细胞和CD8 CD28-T细胞/CD8 CD28 T细胞比值(Ratio值)显著低于健康对照组(P＜0.05).FKS06治疗组CD8 T细胞表达显著回升(P＜0.05),且增加的CD8 T细胞主要为CD8 CD28-Treg(P＜0.05).CaA治疗组CD8 T细胞和CD8 CD28-Treg未出现明显回升(P＞0.05).且FKS06治疗组CD8 CD28-Tteg表达显著高于CaA治疗组(P＜0.05).两治疗组血浆IL-10水平均显著高于健康对照组和疾病对照组(P＜0.05),但组间差别无显著性(P＞0.05).结论 FKS06可促进肝移植受者外周血CD8 CIY28-Treg表达并同时促进IL-10的产生从而加强T细胞的免疫耐受,而CaA虽不能有效促进CD8 CD28-Treg的表达但却能促进IL-10的产生.     

头孢地嗪增加老年细菌性肺炎患者外周血CD4/CD8和Th1/Th2细胞比例

目的探讨头孢地嗪对老年细菌性肺炎患者外周血T淋巴细胞CD4/CD8和Th1/Th2细胞比例的影响。方法选取老年细菌性肺炎患者63例,以随机数字表分为两组;对照组31例采用头孢三嗪静脉滴注疗法,观察组32例采用头孢地嗪静脉滴注疗法治疗。分别于治疗前后抽取患者空腹静脉血,以流式细胞仪测定CD4/CD8和Th1/Th2的细胞计数比;以ELISA试剂盒测定Th1细胞分泌因子白细胞介素2(IL-2)、γ干扰素(IFN-γ)与Th2细胞分泌因子IL-4、IL-10的血清浓度。结果治疗前,两组患者的各项指标均无明显差异。治疗后,观察组患者CD4+细胞、Th1细胞比例增加,Th2细胞比例降低,CD4/CD8和Th1/Th2比值均显著高于对照组;同时,观察组患者血清IL-2、IFN-γ浓度显著高于对照组,IL-4、IL-10浓度显著低于对照组。结论头孢地嗪能够提高老年细菌性肺炎患者细胞免疫功能,纠正外周血T淋巴细胞CD4/CD8和Th1/Th2比例失调。     

慢性乙型肝炎患者外周血细胞CD40+、CD40L+及CD8+/CD28+表达的研究

目的检测慢性乙型肝炎(简称慢乙肝)患者外周血淋巴、单核细胞表面CD40+、CD40L+及淋巴细胞表面CD8+/CD28+、CD8+/CD28-的表达,评价患者的细胞免疫状态,为临床治疗提供指导.方法流式细胞仪测定慢乙肝患者单核细胞、淋巴细胞表面CD40+、CD40L+表达的百分率及淋巴细胞表面CD8+/CD28+、CD8+/CD28-表达的百分率.结果慢乙肝组外周血淋巴、单核细胞表面CD40+、CD40L+及淋巴细胞表面CD8+/CD28+的表达明显低于正常对照组(P＜0.01,P＜0.05,P＜0.01,P＜0.05,P＜0.01),乙肝肝硬化组(简称肝硬化)均明显低于正常对照组(均P＜0.01),而慢乙肝组、肝硬化组CD8+/CD28-的表达高于正常对照组(P＜0.05,P＜0.01).慢乙肝组与肝硬化组均无显著差异(均P＞0.05).慢乙肝轻、中、重度和肝硬化三组间均无显著差异(均P＞0.05).相关性分析结果显示,慢乙肝患者淋巴、单核细胞表面CD40+和CD40L+的表达之间存在正相关,淋巴细胞CD40+、CD40L+表达与CD8+/CD28+表达存在正相关,而与CD8+/CD28-表达相关性不明显.结论慢乙肝患者外周血淋巴、单核细胞CD40+、CD40L+及淋巴细胞CD8+/CD28+表达低下,而CD8+/CD28-的表达增加.检测外周血CD40+、CD40L+及CD8+/CD28+的表达可评估患者的细胞免疫状态,对临床的抗病毒治疗提供新思路.     

间充质干细胞体外对ITP患者CD4+CD25+T细胞影响

目的:体外观察间充质干细胞(MSCs)对免疫性血小板减少症(ITP)患者CD4+ CD25+T细胞比例的影响.方法:采用Ficoll分离骨髓单个核细胞,通过体外培养,扩增出MSCs,通过Ficoll分离法和尼龙棉柱法获取正常人及ITP患者外周血T淋巴细胞,并应用流式细胞术检测T细胞中CD4+ CD25+T细胞比例;MSCs经丝裂霉素MMC处理后按不同数量(2×103、1×104、5×104个细胞/孔)接种培养板作为基底层细胞,然后分别接种体外分离纯化的异体ITP及正常人T淋巴细胞,于2、4、6天后各自收集T淋巴细胞及培养上清,用流式细胞术检测接种于骨髓MSCs的ITP患者CD4+ CD25+T细胞比例.结果:ITP患者外周血CD4+ CD25+T细胞数量及CD4+ CD25+/CD4+比值均明显低于正常对照组(P＜0.05);在PHA作用下,数量＞1×104的骨髓MSCs与T淋巴细胞共培养4天后,与正常对照组相比,MSCs可显著上调ITP患者及正常人T淋巴细胞中CD4+ CD25+T淋巴细胞比例及CD4+ CD25 +/CD4+比值(P＜0.05),且随MSCs量的增加,作用增强(P＜0.05).体外骨髓MSCs对ITP患者CD4+ CD25+T淋巴细胞具有上调作用,以上这种机制可使ITP患者的细胞因子及CD4+ CD25+T淋巴细胞逐渐接近于正常人但仍达不到正常人水平(P＜0.05).结论:MSCs在体外可能通过上调CD4+ CD25+调节性T细胞,进而诱导ITP患者免疫耐受形成.     

异丙酚对肺癌病人外周血Th亚群分化的影响

目的 探讨异丙酚麻醉对非小细胞型肺癌患者外周血T细胞Th亚群分化的影响.方法 30例肺叶切除手术病人随机分为异丙酚组(P组)和异氟烷组(Ⅰ组),于麻醉诱导前(T0)、诱导后10 min(T1)、切皮后1 h(T2)、麻醉停药即刻(T3)、术后1 h(T4)、24 h(T5)采血,测定CD4 CD28 表达率及血清IL-12、IFN-γ、IL-4及皮质醇浓度.结果与T0比较,P组T4、5时CD4 CD28 、IFN-γ明显增高(P＜0.05或P＜0.01),T5时IL-12、IFN-γ/IL-4增高明显(P＜0.05),而且均高于Ⅰ组(P＜0.05).两组IL-均有增高趋势,但组间无明显差异.T1～5时,P、Ⅰ组皮质醇浓度均增高(P＜0.05或0.01),I高于P组(P＜0.04).结论 异丙酚可增强外周血CD4 T细胞CD28的表达和IL-12、IFN-γ的分泌,增高IFN-γ/IL-4比值;促进Th1亚群的分化.     

粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子对HBV宫内感染婴儿的免疫调节作用

目的 观察粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)对HBV宫内感染免疫失败婴儿的免疫调节作用.方法 宫内感染婴儿分为治疗组和对照组(均为20例),都给予乙肝疫苗10μg免疫用量,同一部位三角肌注射(疫苗注射时间按0、1、6方案),乙肝免疫球蛋白200IU臀部肌肉注射,20天1次,共3次.治疗组注射乙肝疫苗3天后,同一部位皮内注射GM-CSF 10μg/Kg.1岁时抽外周静脉血检测T淋巴细胞亚群的水平、血清干扰素-γ(IFN-γ)和白细胞介素4(IL-4)的水平.结果 (1)治疗组CD4+T细胞百分数及CD4 +/CD8+比值高于对照组(t=11.67,P＜0.05;t=13.06,P＜0.05),CD8+百分数低于对照组(t=6.25,P＜0.05),两组比较差异均有显著意义.(2)患者外周血IFN-γ水平治疗组高于对照组(t=13.92,P＜0.05);IL-4水平与对照组相比,差异无统计学意义(t=1.30,P＞0.05).结论 GM-CSF可提高HBV宫内HBV感染免疫失败婴儿CD4 +/CD8+比值,并且调节Th1/Th2细胞因子比例平衡.     

急性冠脉综合征患者外周血CD4+CD28-T细胞与白细胞介素-6和C-反应蛋白的相关性研究

目的 检测急性冠脉综合征(ACS)患者外周血中CD4+ CD28-T细胞与IL-6和C-反应蛋白(CRP)相关性.方法 选取43例ACS患者,40例稳定性心绞痛(SAP),选取40例健康人作为正常对照.采用流式细胞分析仪测定CD4+ CD28-T细胞;IL-6和CRP水平分别采用ELISA法和特种蛋白分析仪进行测定.结果 ACS组患者的CD4+ CD28-T细胞数量和IL-6和CRP水平均显著高于SAP组(P＜0.001)或正常对照组(P＜0.001),而且ACS患者CD4+ CD28-T细胞与IL-6(r=0.79,P＜0.001)和CRP(r=0.50,P＜0.001)具有相关性.结论 ACS患者CD4+ CD28-T细胞数量的增高与IL-6和CRP高度相关,可能参与冠心病的病程进展.     

结核病患者外周血中CD4~+ CD25~+调节性T细胞水平的检测

探讨CD4~+CD25~+调节性T细胞及其转录因子Foxp3在结核病发病机制中的作用。研究对象为肺结核患者22例(病例组)以及健康对照者23例(对照组)。采用FACS检测外周血CD4~+CD25~+调节性T细胞的百分率,采用real-time PCR检测外周血单个核细胞Foxp3mRNA的表达以及CD4~+CD25~+调节性T细胞与CD4~+T细胞、CD8~+T细胞、IFN-γ和IL-4的相关性。结核病患者外周血CD4~+CD25~+调节性T细胞占CD4~+T细胞的百分率,病例组(3.38±1.23)%高于对照组(1.97±0.62)%,两组比较差异有统计学意义(P0.05)。血清单个核细胞Foxp3 mRNA相对表达水平为134.54±6.76,高于对照组(40.98±2.34,P0.05)。CD4~+CD25~+调节性T细胞与CD4~+T细胞、CD8~+T细胞以及与IFN-γ和IL-4的表达呈负相关。结核病CD4~+CD25~+调节性T细胞数量增加、特异性转录因子Foxp3 mRNA表达上升,由此引发的免疫抑制效应可能是结核病发生发展的重要原因之一。     

成人麻疹细胞免疫与CD4+ CD25+调节性T细胞的关系

目的 了解CD4+CD25+调节性T细胞(Treg)与麻疹患者细胞免疫的关系.方法 采集34例成年麻疹患者和27例健康对照的外周血,采用流式细胞术进行CD4+CD25+细胞和FoxP3+细胞的检测.用免疫磁珠从外周血单个核细胞(PBMC)分选出CD4+CD25+T细胞和CD4+CD25-T细胞,分别用抗-CD3单克隆抗体、BCG和NV减毒株进行刺激培养,收集培养上清,用ELISA法检测培养上清中的IFN-γ和IL-10.结果 麻疹患者外周血白细胞、淋巴细胞及CD3+CC4·细胞比例明显降低,而CD4+CD25+细胞与FoxP3+细胞的比例则与对照无显著差别;CD4+CD25+细胞明显抑制抗CD3刺激下CD4+CD25-T细胞产生IFN-γ,且患者和对照没有差别,而IL-10的产生没有这种改变.结论 成人麻疹患者的的免疫抑制与Treg的抑制作用无关. 4+CD25+T细胞和CD4+CD25-T细胞,分别用抗-CD3单克隆抗体、BCG和NV减毒株进行刺激培养,收集培养上清,用ELISA法检测培养上清中的IFN-γ和IL-10.结果 麻疹患者外周血白细胞、淋巴细胞及CD3+CC4+细胞比例明显降低,而CD4+CD2 +细胞与FoxP3+细胞的比例则与对照无显著差别;CD4+CD25+细胞明显抑制抗CD3刺激下CD4+CD25-T细胞产生IFN-γ,且患者和对照没有差别,而IL-10的产生     

急性免疫性血小板减少症患儿IgG-Fc受体表达变化

目的 探讨小儿急性免疫性血小板减少症(aITP)外周血单核细胞(MC) IgG-Fc受体(FcγR)表达变化.方法 急性ITP患儿组27例,同龄健康对照组25例,流式细胞术检测单核细胞表面活化型受体FcγR Ⅰ及FcγRⅢ表达;荧光定量PCR( real-time PCR)检测MC活化型FcγRⅡa及抑制型FcγRⅡb mRNA表达;酶联免疫吸附法(ELISA)检测血浆IFN-γ、IL-4和IL-10浓度.结果 (1)急性ITP患儿组MC FcγR Ⅰ和FcγRⅢ表达明显高于对照组(P＜0.05);FcγRⅡa mRNA及FcγRⅡa/FcγRⅡb mRNA比值显著高于对照组及治疗后,经地塞米松治疗后,活化型FcγR Ⅰ、FcγRⅢ、FcγRⅡa mRNA表达下降,抑制型FcγRⅡb mRNA表达增加,FcγR活化型/抑制型平衡逐渐恢复.(2)血浆炎症细胞因子IFN-γ浓度较对照组显著增高;抗炎因子IL-4显著低于对照组.IFN-γ浓度水平与MC FcγRⅡa mRNA表达显著正相关(r=0.79,P＜0.05),IL-4与FcγRⅡb mRNA表达正相关(r=0.84,P＜0.05).结论 单核细胞活化型FcγRs过度表达,抑制型FcγRⅡb表达降低,活化型/抑制型FcγRs表达失衡可能参与儿童急性ITP免疫发病机制,MC FcγRs异常表达可能与细胞因子IFN-γ、IL-4的改变有关,地塞米松治疗可恢复FcγRs活化型/抑制型平衡表达.     

强直性脊柱炎患者外周血CD4+ CD25high CD127low 、CD8+ CD28- 调节性 T 细胞水平变化及临床意义

目的:探讨CD4~+CD25~(high)CD127~(low)、CD8~+CD28~-调节性T细胞(Treg)在强直性脊柱炎(AS)患者外周血中的表达及临床意义。方法:选取2017年9月～2019年3月于我院初次就诊的AS患者77例(非活动期47例、活动期30例)及健康对照者59例。流式细胞术(FCM)检测外周血CD4~+CD25~(high)CD127~(low)、CD8~+CD28~-Treg比例,流式细胞微球芯片捕获技术(CBA)检测血清IL-2、IL-6、TNF-α、IFN-γ、IL-17A水平,分析Treg细胞与AS疾病活动度和临床炎症活动指标的相关性。结果:AS活动组CD4~+CD25~(high)CD127~(low)Treg细胞比例低于AS非活动组和正常对照组(P0.05,P0.01);AS活动组和非活动组CD8~+CD28~-Treg细胞比例较健康对照组显著降低(P0.01)。AS活动组CD8~+CD28~+Tc细胞比例和CD8~+CD28~+/CD8~+CD28~-明显高于AS非活动组和健康对照组,且AS非活动组CD8~+CD28~+/CD8~+CD28~-高于健康对照组(P0.05)。与健康对照组相比,AS活动组和AS非活动组血清IL-6、TNF-α、IL-17A水平显著升高,且AS活动组血清IL-6、IL-17A水平显著高于AS非活动组(P0.05);3组志愿者IL-2水平差异无统计学意义(P0.05)。AS活动组血清IFN-γ水平显著高于AS非活动组和健康对照组(P0.05,P0.01),但AS非活动组与健康对照组差异无统计学意义(P0.05)。AS患者CD4~+CD25~(high)CD127~(low)Treg细胞比例与BASDAI、ESR、Hs-CRP呈负相关(r=0.654、0.517、0.577,P0.01)。CD8~+CD28~+Tc细胞比例及CD8~+CD28~+/CD8~+CD28~-与BASDAI呈正相关(r=0.276、0.246,P0.05)。结论:降低AS患者外周血CD4~+CD25~(high)CD127~(low)和CD8~+CD28~-Treg细胞比例、提高炎症细胞因子水平可能在AS疾病发生发展中起重要作用。     

重症支气管哮喘患者CD4T淋巴细胞免疫功能分析

目的探讨重症支气管哮喘患者CD4 T淋巴细胞免疫功能及相关细胞因子的变化。方法选择本院收治的重症支气管哮喘患者70例(实验组)及健康人群70例(对照组)作为研究对象,采用流式细胞仪检测CD4+T细胞亚群Th1、Th2、Th17以及Treg细胞在研究对象外周血中的比例;采用荧光定量PCR检测研究对象外周血PBMC细胞IFN-γ、IL-2、IL-4、IL-10、IL-17、IL-22、TGF-β、IL-10的mRNA表达水平;采用ELISA法检测研究对象血清中IFN-γ、IL-2、IL-4、IL-17、IL-22、TGF-β、IL-10的蛋白表达浓度。结果与对照组相比,实验组外周血中Th1/Th2细胞比例显著下降,而Th17/Treg细胞比例显著增高(P0.05);实验组外周血PBMC细胞中IL-4、IL-10、IL-17、IL-22的m RNA、蛋白表达水平均显著上调(P0.05);而IFN-γ、IL-2、TGF-β的mRNA、蛋白表达水平则呈现明显下降(P0.05)。结论重症支气管哮喘患者存在Th1/Th2、Th17/Treg的细胞免疫平衡失调,这种细胞免疫应答的变化可能与重症支气管哮喘的疾病进展密切相关。