PCSK9与细胞凋亡

前蛋白转化酶枯草溶菌素转化酶9(proprotein convertase subtilisin/kexin 9,PCSK9)基因所编码的蛋白为神经凋亡调节转化酶-1(neural apoptosis-regulated convertase1,NARC-1),PCSK9主要在肝脏表达,它的主要作用是降解细胞表面的低密度脂蛋白受体(low density lipoprotein receptor,LDLR),从而调节胆固醇代谢.另有研究表明,PCSK9还参与细胞的凋亡,影响神经系统的分化和发育,并与炎症过程及糖尿病有一定的相关性.神经细胞凋亡是神经退行性疾病的主要病理基础之一,研究PCSK9对细胞凋亡的作用及机制,对于防治神经退行性疾病等细胞凋亡所引起的疾病,具有十分重要的意义.本文对PCSK9与细胞凋亡之间的关系作一综述.     

PCSK9与动脉粥样硬化的研究进展

动脉粥样硬化是一种累及动脉壁的炎症性疾病,其主要特征是脂质和炎症细胞在大动脉内膜下聚积.前蛋白转化酶枯草溶菌素9(PCSK9)抑制剂目前是临床上常用的降血脂药之一,虽然临床试验已证实PCSK9是降低血脂和预防及治疗动脉粥样硬化进展的生物靶点,但其生理作用尚未被完全阐明.目前多项证据表明,PCSK9可以通过调控脂蛋白代谢...     

前蛋白转化酶枯草溶菌素9与动脉粥样硬化及斑块破裂的关系

前蛋白转化酶枯草溶菌素9(PCSK9)属于目前发现的哺乳动物前蛋白转化酶家族9大成员之一,是脂质代谢调节蛋白。PCSK9基因编码可与自身前体形成复合体后结合低密度脂蛋白受体,使其本身失活,从而升高血中低密度脂蛋白水平。PCSK9过表达或缺乏影响着小鼠动脉粥样硬化发生及进展期病变,而降低血中低密度脂蛋白水平一直是防治动脉粥样硬化及心血管疾病的重点,PCSK9已成为降脂药物开发的重点,为临床防治高胆固醇血症提供了理论依据。     

PCSK9 siRNA对THP-1源性巨噬细胞CD36?SR-A1及SR-B1表达的影响

目的:研究前蛋白转换酶枯草溶菌素9(PCSK9) siRNA对THP-1源性巨噬细胞CD36?SR-A1及SR-B1表达的影响?方法:以THP-1源性巨噬细胞为研究对象,应用Lipofectamine 2000转染不同浓度PCSK9 siRNA进THP-1源性巨噬细胞中,RT-PCR及Western blot筛选出最有效的siRNA,再转染入THP-1源性巨噬细胞,24 h后加入ox-LDL处理24 h,采用油红O染色检测细胞内脂质蓄积情况,RT-PCR分析细胞CD36?SR-A1及SR-B1表达?结果:浓度为80 nmol/L的PCSK9 siRNA基因沉默效应最佳;油红O染色结果表明ox-LDL组细胞内脂质蓄积情况最为明显,PCSK9 siRNA转染组次之;PCSK9 siRNA转染组CD36 mRNA表达水平相对于ox-LDL组降低(P < 0.05),而ox-LDL组和PCSK9 siRNA转染组SR-A1及SR-B1 mRNA表达无明显差异?结论:PCSK9可能通过影响摄取脂质的细胞膜表面受体CD36表达,参与动脉粥样硬化的发生发展?     

血清PCSK9对2型糖尿病合并动脉粥样硬化患者病情评估的价值

目的:研究血清前蛋白转化酶枯草溶菌素9(PCSK9)对2型糖尿病合并动脉粥样硬化患者病情评估的价值。方法:选择在我院就诊的2型糖尿病合并颈动脉粥样硬化患者作为A组,2型糖尿病未合并颈动脉粥样硬化患者作为B组,健康体检者作为C组。测定各组受试者血清中PCSK9、脂质代谢指标、氧化应激反应指标的含量。结果:A组和B组血清中PCSK9、甘油三酯(TG)、胆固醇(TC)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、载脂蛋白B(ApoB)、CyPA、对氧磷酶-1(PON-1)、PON-3、丙二醛(MDA)、8-异前列腺素F-2α(8-iso-PGF2α)的含量均显著高于C组,高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、载脂蛋白AI(ApoAI)的含量均显著低于C组;A组血清中PCSK9、TG、TC、LDL-C、ApoB、CyPA、PON-1、PON-3、MDA、8-iso-PGF2α的含量均显著高于B组,HDL-C、ApoAI的含量均显著低于B组;A组中PCSK9高水平亚组血清中TG、TC、LDL-C、ApoB、CyPA、PON-1、PON-3、MDA、8-iso-PGF2α的含量均显著高于PCSK9低水平亚组,HDL-C、ApoAI的含量均显著低于PCSK9低水平亚组。结论:2型糖尿病合并动脉粥样硬化患者血清中异常升高的PCSK9能够影响脂质代谢过程、增强氧化应激反应。     

前蛋白转化酶枯草溶菌素9在肝脏胆固醇代谢中的作用研究进展

以动脉粥样硬化（AS）为主要病理变化的心脑血管疾病,如冠状动脉粥样硬化性心脏病、缺血性脑卒中等,其发病率和病死率一直居于前列,且患者逐渐呈年轻化。脂质代谢（尤其是LDL-C代谢）在动脉粥样斑块形成过程中起到非常重要的作用,是AS发病的始动因素,因此积极降脂调脂是防治AS的重要策略。前蛋白转化酶枯草溶菌素9（PCSK9）抑制剂的成功研发为众多患者提供了更多的治疗选择,PCSK9作为今后调脂药研发的重要靶点,彻底掌握其作用机制非常重要。本文就PCSK9的结构与作用、相关调控因子以及近期国内外的研究成果作一综述,为今后研究提供参考。     

PCSK9/Narc-1与神经系统疾病

神经系统退行性疾病是环境与遗传因素相互作用的结果,一些新的基因被发现可能与神经系统疾病相关,如PCSK9。PCSK9主要作用是降解细胞表面LDLR,从而调节胆固醇代谢。目前研究发现,PCSK9在胚胎发育过程中有促进神经细胞分化的作用,而体外细胞实验也证实PCSK9可促进神经细胞的凋亡。促进神经细胞分化、抑制其凋亡是防治神经系统退行性疾病的重要环节,因此深入研究PCSK9在神经系统疾病中的作用具有非常重要的意义,是一个新的值得关注的研究方向。     

阿尔茨海默病患者血清miR-202-5p、PCSK9的表达水平及其临床意义

目的 探讨阿尔茨海默病(AD)患者血清miR-202-5p、前蛋白转化酶枯草杆菌蛋白酶/kexin 9型(PCSK9)的表达水平及其临床意义。方法 选取79例AD患者为AD组,39名体检健康者为对照组。检测两组血清miR-202-5p、PCSK9水平,分析AD患者血清miR-202-5p、PCSK9水平与血清β淀粉样蛋白(Aβ)_1-40、Aβ_1-42水平和简易精神状态检查(MMSE)量表评分的相关性,并评估血清miR-202-5p、PCSK9水平单独及联合对AD的诊断价值。结果 AD组血清Aβ_1-42、miR-202-5p水平及MMSE量表评分低于对照组,血清Aβ_1-40、PCSK9水平高于对照组(P<0.05)。AD患者血清miR-202-5p水平与血清Aβ_1-40、PCSK9水平呈负相关,与血清Aβ_1-42水平、MMSE量表评分呈正相关(P<0.05);血清PCSK9水平与血清Aβ_1-40水平呈正相关,与血清Aβ     

2型糖尿病患者血清前蛋白转化酶枯草溶菌素-9水平的变化及其相关性研究

目的：探讨2型糖尿病（type 2 diabetes mellitus,T2DM）中血清前蛋白转化酶枯草溶菌素-9（plasma proprotein convertase subtilisin/kexin type 9,PCSK9）水平变化及其与体质指数（body mass index,BMI）、腰臀比（waist hip ratio,WHR）、空腹血糖（fast－ing blood glucose,FBG）、糖化血红蛋白（glycosylated hemoglobin,HbA1c）水平等的关系。方法：采用酶联免疫法测定了T2DM 54例和正常对照者58例空腹血清PCSK9水平,并分析了血清PCSK9水平与BMI、腰围、臀围、WHR、FBG、HbA1c水平等的关系。结果：①T2DM患者空腹血清PCSK9水平明显高于正常对照组[（260.53±141.70） ng/mL vs.（123.74±73.50） ng/mL,P=0.000]。②相关性研究显示,总人群血清PCSK9水平与BMI、腰围、臀围、WHR、FBG、HbA1c呈正相关（r=0.403,r=0.305,r=0.217,r=0.257,r=0.397,r=0.426,P＜0.05）;女性血清PCSK9水平与BMI、腰围、臀围、WHR、FBG、HbA1c呈正相关（r=0.509,r=0.328,r=0.244,r=0.275,r=0.472,r=0.394,P＜0.05）;男性血清PCSK9水平与腰围、FBG、HbA1c呈正相关（r=0.346,r=0.335,r=0.515,P＜0.05）。③多元逐步回归分析表明总人群中BMI、HbA1c是血清PCSK9水平的独立相关因素;腰围、HbA1c是男性独立相关因素;BMI、FBG是女性独立相关因素。结论：血清PCSK9水平与糖代谢状态有关,可能在T2DM的发生发展中具有一定的作用。     

PCSK9抑制剂与心血管事件关系的研究进展

动脉粥样硬化性心血管疾病(ASCVD)已成为全球居民死亡的主要原因.人体血脂紊乱,特别是低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)的增加,是影响动脉粥样硬化(AS)发生发展的最重要因素.前蛋白转化酶枯草溶菌素9(PCSK9)通过与低密度脂蛋白受体(LDLR)的结合,减少LDLR对血清LDL-C的清除.PCSK9抑制剂,如Alir...     

PCSK9抑制剂对穿支动脉粥样硬化病患者早期神经功能恶化的影响

目的探讨前蛋白转化酶枯草杆菌蛋白酶/kexin9型(PCSK9)抑制剂在穿支动脉粥样硬化病(BAD)治疗过程中对早期神经功能恶化发生率的影响。方法回顾性纳入郑州人民医院2020年1月至2023年4月于神经内科住院的BAD患者297例, 根据是否使用PCSK9抑制剂治疗分为PCSK9抑制剂组81例和对照组216例, 运用倾向性评分匹配(PSM)方法, 消除PCSK9抑制剂组和对照组患者的一般情况差异, 两组各成功匹配72例, 主要比较患者早期神经功能恶化(END)及低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)等相关指标;采用卒中后72 h内美国国立卫生研究院卒中量表(NIHSS)评分增加≥2分定义END, 筛选出导致END的可疑影响因素进行多因素logistic回归模型分析。结果 PSM匹配后144例患者中男90例, 女54例, 年龄(61.2±9.6)岁。匹配后PCSK9抑制剂组患者住院时间[M(Q1, Q3)][9(7, 11)d比10(8, 13)d]、出院时NIHSS评分[2(1, 3)分比3(1, 4)分]与对照组相比, 差异有统计学意义(均P<0.05);此外, PCSK9抑制剂组...     

IVGTT过程中血糖及胰岛素急遽波动对血清PCSK9水平的影响

目的：研究静脉葡萄糖耐量试验（intravenous glucose tolerance test，IVGTT）过程中血糖及胰岛素急遽波动对血清前蛋白转化酶枯草溶菌素9（proprotein convertase subtilisin/kexin type 9，PCSK9）水平的影响，及其与机体糖脂代谢之间的潜在关联。方法：对23例健康志愿者及52例肥胖或糖代谢异常患者进行病史采集、人体测量学、肝肾功能等及IVGTT检查，根据PCSK9在静脉葡萄糖负荷后4 min与0 min时的比值界定下降组、稳定组与上升组，并比较3组在各项糖脂代谢指标间的差异。进一步对39例留取的血清样本使用高通量靶向脂质组学测定游离脂肪酸、神经酰胺及其代谢产物含量，比较上述各组的差异。结果：总体基线PCSK9水平与总胆固醇、空腹C肽水平经校正后存在正相关关系，但与空腹胰岛素水平无显著相关性。随着IVGTT过程中血糖升高导致胰岛素急遽上升，伴随血清PCSK9水平波动，血清PCSK9在60 min后基本恢复至基线水平。PCSK9下降组的基础PCSK9及空腹胰岛素水平显著高于稳定组与上升组，且PCSK9下降组糖尿病前期与糖尿病者占比更高。此外，下降组血清总神经酰胺、总葡糖神经酰胺水平也明显高于其他两组；脂质亚类分析显示，基线PCSK9含量与Cer d18：1/24：0、GM3 d18：0/24：0在校正其他因素后正相关性仍存在。结论：IVGTT过程中血糖升高导致胰岛素急遽上升，伴随血清PCSK9水平波动；波动模式受基线糖脂代谢状态影响。     

缺氧通过HIF-1α/PCSK9信号途径诱导神经细胞凋亡

目的研究缺氧是否通过上调缺氧诱导因子1α(HIF-1α)水平而调控前蛋白转化酶枯草溶菌素9(PCSK9)表达并诱导神经细胞凋亡。 方法分别用0、125、250、500 μmol/L氯化钴(CoCl₂)处理PC12细胞,蛋白印迹法检测其PCSK9及HIF-1α表达;Hoechst33258核染色及流式细胞术检测CoCl₂对PC12细胞凋亡的影响。用250 μmol/L CoCl₂处理PC12细胞0、6、12、24 h,蛋白印迹法检测其PCSK9及HIF-1α表达。不同浓度HIF-1α激动剂二甲基乙二酰基甘氨酸(DMOG)或HIF-1α抑制剂利非西呱(YC-1)处理PC12细胞24 h,检测PCSK9、HIF-1α、胱天蛋白酶3(Caspase-3)、Caspase-9的表达及对PC12细胞凋亡的影响。PC12细胞经PCSK9 siRNA转染后与250 μmol/L CoCl₂孵育,检测对PC12细胞凋亡的影响及PCSK9、HIF-1α、Caspase-3、Caspase-9蛋白的表达。 结果PCSK9、HIF-1α的表达及细胞凋亡程度呈CoCl₂浓度与时间依赖性增高。PC12细胞中HIF-1α和PCSK9的表达呈DMOG浓度依赖性增高,Caspase-3、Caspase-9表达及PC12细胞凋亡率呈DMOG浓度依赖性降低;PC12细胞中HIF-1α和PCSK9的表达呈YC-1浓度依赖性降低,Caspase-3、Caspase-9表达及PC12细胞凋亡率呈YC-1浓度依赖性升高。与空白组及无义RNA组比较,PCSK9 siRNA转染组Caspase-3、Caspase-9表达减少,凋亡程度降低。 结论细胞缺氧状态下HIF-1α水平的增高能上调PCSK9表达并调控神经细胞凋亡。     

前蛋白转化酶枯草溶菌素9单克隆抗体的研究进展

前蛋白转化酶枯草溶菌素9(PCSK9)可与低密度脂蛋白(LDL)受体结合,将其运送至溶酶体进行降解,从而防止LDL受体再循环至肝细胞膜表面,增加LDL胆固醇(LDL-C)。PCSK9的功能获得型突变可明显增加血LDL-C水平,且与早期动脉粥样硬化相关,而功能丧失型突变可致低血LDL-C水平以及冠心病的发生率。PCSK9单克隆抗体可使LDL-C下降50%~70%,对患者具有良好的耐受性,且无明显的药物相关毒性,但对其是否可以降低心血管事件有待进一步研究。     

基于CRISPR/Cas9技术PCSK9基因敲除小鼠模型的构建及表型验证

目的 基于CRISPR/Cas9技术构建前枯草杆菌蛋白原转换酶9(Preprotein convertase subtilisin/kexin type9,PCSK9)基因敲除小鼠模型并对其表型进行初步验证。方法 利用非同源末端连接(NHEJ)修复引入突变的方式,针对PCSK9基因靶序列设计单链向导RNA(sgRNA),将sgRNA和Cas9 mRNA显微注射到C57BL/6J小鼠受精卵,获得F0代敲除小鼠,通过繁育及基因型鉴定获得PCSK9基因敲除(PCSK9 KO)纯合子小鼠。采用PCR方法对PCSK9 KO小鼠进行基因鉴定,Western Blot检测肝组织PCSK9及低密度脂蛋白受体(LDL-R)蛋白的表达,同时检测心、脑、肾、脂肪组织中的PCSK9蛋白表达水平,q-PCR检测PCSK9的mRNA表达水平。采用酶法检测血清中总胆固醇(TC)及甘油三酯(TG)水平。结果 PCR产物凝胶电泳以及PCSK9蛋白及mRNA表达结果表明成功获得全身性PCSK9基因敲除小鼠,肝组织LDL-R(3.42±0.56)蛋白表达显著增高。与WT组相比,PCSK9小鼠血清TC(90.75±17.81...     

PCSK9抑制剂对动脉粥样硬化性脑梗死患者血脂水平影响的临床研究

目的 观察前蛋白转化酶枯草溶菌素9 (PCSK9)抑制剂对动脉粥样硬化性脑梗死（ASCI）患者血脂水平及预后的影响。方法 将2021年1月至2021年12月于湖北孝感市中心医院收治的100例符合纳入标准的ASCI患者随机分为对照组和试验组,每组各50例。对照组予以阿托伐他汀钙片治疗,试验组予以阿托伐他汀钙片+PCSK9抑制剂（瑞百安）治疗,药物干预周期为6个月。比较两组受试者用药前后血清PCSK9浓度、血脂水平、同型半胱氨酸（Hcy）及颈动脉内中膜厚度（IMT）等卒中危险因素,分析血清PCSK9水平与ASCI常见危险因素的相关性。结果 PCSK9抑制剂在阿托伐他汀钙片治疗的基础上可以显著降低ASCI患者血清PCSK9水平和血清低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）水平（P<0.05）;与对照组相比,试验组IMT显著降低（P<0.05）;试验组血清PCSK9水平与血清LDL-C显著相关。结论 PCSK9抑制剂作为新型降脂药物在阿托伐他汀钙片治疗的基础上可以降低受试者的LDL-C水平,改善患者的预后,降低动脉硬化性脑梗死的发生率。     

运用CRISPR/Cas9技术构建PCSK9点突变家兔模型

目的：运用CRISPR/Cas9基因编辑技术构建前蛋白转化酶枯草溶菌素9（PCSK9）点突变家兔模型。方法：根据PubMed基因蛋白数据对人和兔的PCSK9蛋白功能区进行Blast分析,发现人PCSK9基因的386S（丝氨酸）氨基酸功能区与兔PCSK9基因的485S同源。根据家兔PCSK9基因的485S对应的碱基替换位置及序列分析结果设计3条单链向导RNA和1条单链寡核苷酸供体模板。将合成的单链向导RNA、Cas9 mRNA和单链寡核苷酸供体共同注射入家兔受精卵细胞质内并将胚胎移植入待孕母兔体内。对获得的F0代兔进行PCR、TA克隆、脱靶检测以鉴定PCSK9^S386A是否突变成功。利用获得的PCSK9^S386A基因点突变家兔进行繁殖,扩大群体。结果：共获得15只F0代兔,其中1只为PCSK9^S386A点突变纯合子,2只为PCSK9^S386A点突变杂合子,且该突变可以稳定遗传。结论：利用CRISPR/Cas9技术成功构建了PCSK9^S386A点突变家兔模型,为探究PCSK9功能减弱的分子机制,开发可靠、有效的诊断和治疗措施提供了良好的动物模型。     

家族性高胆固醇血症(FH)致病基因的研究进展

 家族性高胆固醇血症(familial hypercholesterolemia,FH)的临床特征为血总胆固醇升高,尤其是低密度脂蛋白胆固醇(low density lipoprotein cholesterol,LDL-c)升高,沉积于组织,形成皮肤或肌腱黄色瘤,导致动脉粥样硬化甚至早发冠心病。FH的发病机制为LDL受体(LDL receptor,LDLR)或apoB基因突变引起LDL受体途径功能缺陷,主要为常染色体显性遗传疾患,具有基因剂量效应;部分患者为常染色体隐性遗传,机制为LDL受体衔接蛋白1(LDL receptor adaptor protein 1,LDLRAP1)失功能型突变,导致LDL内化活性降低。罕见的人类枯草溶菌素转化酶9 (proprotein convertase subtilisin/kexin type 9,PCSK9)发生功能型突变也可引起严重的FH表型。PCSK9通过降解LDLR蛋白间接下调LDL受体途径,其失功能突变可致血浆LDL水平下降。因此PCSK9是目前降脂药物的研究热点。     

2型糖尿病患者血清PCSK9与动脉粥样硬化指标的相关性分析

目的:研究2型糖尿病(type 2 diabetes mellitus,T2DM)患者血清前蛋白转化酶枯草溶菌素9(proprotein convertase subtilisin/kexin 9,PCSK9)与动脉粥样硬化(atherosclerosis,AS)指标的相关性?方法:对351例T2DM患者进行病史采集?颈部及下肢血管彩色多普勒检查,测定其PCSK9水平?结果:T2DM合并AS组患者的血清PCSK9水平高于T2DM无AS组(P < 0.05),血清PCSK9水平与T2DM患者的颈总动脉内中膜厚度(carotid artery intima-media thickness,CIMT)呈正相关(P < 0.01),与右侧颈总动脉(RCCA)内径?RCCA峰值/次峰值(PI)?右侧颈内动脉(RICA)PI?左侧颈总动脉(LCCA)PI?左侧颈内动脉(LICA) PI?RICA 阻力指数(RI)?LCCA RI等颈动脉粥样硬化相关性指标呈正相关(P < 0.05),而与RCCAVmax?RCCA Vmin?RCCA Tamx等指标呈负相关(P < 0.05)?结论:T2DM患者血清PCSK9水平与评估AS程度的指标密切相关,可能成为临床预测及评估T2DM患者AS相关大血管疾病发生风险的指标?     

PCSK9抑制剂与低密度脂蛋白水平的研究进展

前蛋白转化酶枯草溶菌素9(PCSK9)抑制剂可通过阻断PCSK9-低密度脂蛋白受体(LDL-R)途径介导的LDL-R降解,降低循环中低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)水平。目前PCSK9抑制剂已成为心血管领域降脂治疗的热点,已经证明,当作为单一疗法或与他汀类药物治疗一起给药时,PCSK9抑制剂能使LDL-C水平显著降低。多种PCSK9抑制剂已进入了临床试验阶段。本文将对PCSK9分子结构及其作用机制、PCSK9抑制剂的分类及相关临床研究进展进行综述,评价PCSK9抑制剂对降低LDL-C水平的有效性及应用的安全性。