孕鼠重症急性胰腺炎巨噬细胞移动抑制因子变化及肝损伤的研究

目的 观察孕鼠重症急性胰腺炎(SAP)血清巨噬细胞移动抑制因子(MIF)水平、肝脏MIF mRNA的表达及肝损伤,探讨孕鼠SAP的肝损伤及其机制.方法 SD孕鼠分为孕鼠组和孕鼠SAP组,非孕雌鼠分为假手术组(SO组)和SAP组,分别设立3、6、12时间点,各时间点8只.观察血清MIF水平、肝功能和肝脏病理变化,检测肝脏MIF mRNA的表达.结果 孕鼠SAP组血清MIF浓度[3 h:(12.46 ±3.66)比(6.17 ±2.29) μg/L；6 h:(14.02±3.19)比(8.32±3.51) μg/L；12 h:( 13.81±3.72)比(8.53±2.46) μg/L,P＜0.01]和肝功能在各时间点均高于SAP组(P＜0.05),肝脏组织病理评分6、12h显著高于SAP组(P＜0.05),3h电镜显示孕鼠SAP组肝细胞已出现明显病理变化.孕鼠SAP组肝脏MIF mRNA的表达在3、6h显著高于SAP组(3 h:0.58±0.12比0.37±0.10,P＜0.01；6 h:0.55 ±0.11比0.41 ±0.12,P＜0.05).结论 孕鼠SAP发病更急且病情进展更迅速,更早出现肝损伤且损伤程度更重.MIF在SAP并发肝损伤中具有重要中作用.孕鼠SAP血清MIF水平和肝脏MIF mRNA表达在发病早期迅速升高,可能是病情急、重的原因之一.     

肠源性内毒素水平与肝脏Toll样受体4表达在大鼠重症急性胰腺炎肝损伤中变化

目的:探讨肠源性内毒素(ET)与肝脏Toll样受体4(TLR4)表达在重症急性胰腺炎(SAP)肝损伤中的关系.方法:48只Wistar大鼠随机均分为模型组和对照组,模型组用逆行胰胆管注射5％牛磺胆酸钠法制作SAP模型,对照组行假手术.两组分别于术后3,6,12h随机各取8只大鼠,收集胰腺、肝脏组织及外周动脉血,行病理学检查,检测血淀粉酶(AMY),谷丙转氨酶(ALT)和ET水平,并用Western blot法检测肝脏TLR4表达.结果:与对照组比较,模型组胰腺与肝脏病理学评分、血AMY,ALT,ET水平,以及肝组织TLR4蛋白表达水平均明显升高(均P＜0.05),且各指标均随时间不断升高;对照组各指标在各时间点上无明显变化(均P＞0.05);模型组肝脏TLR4蛋白表达水平与血ET呈明显正相关(r=0.863,P＜0.01).结论:SAP时血ET水平升高与肝脏TLR4蛋白的表达上调存在相关性,两者的相互作用可能参与了SAP肝损伤的机制.     

孕鼠与非孕鼠重症急性胰腺炎多器官损伤的对比

目的 观察孕鼠和非孕鼠重症急性胰腺炎(SAP)各器官的功能和组织病理变化.方法 SD孕鼠分为孕鼠组和孕鼠SAP组,非孕雌鼠分为SO组和SAP组,分别设立3、6、12 h时间点,各时间点8只.检测血清淀粉酶(AMY)、肝功能酶学指标[丙氨酸转氨酶(ALT)、天冬氨酸转氨酶(AST)]、肾功能[肌酐(Cr)、尿素氮(BUN)],观察胰腺、肝脏、肾脏、肺和心脏组织病理变化.结果 孕鼠SAP组AMY和胰腺组织病理评分在3、6h显著高于SAP组(P＜0.05),肝、肾功能在3、6、12 h均高于SAP组[3 h ALT (128.38 ±.24.92)比(99.75±16.27) U/L,AST(261.25 ± 64.98)比(194.50±49.00) U/L,Cr (52.38 ±8.99)比(41.88±7.28)μmol/L,BUN(8.63±1.24)比(7.11±1.29) mmol/L,P ＜0.05],肝脏和肾脏组织病理评分(6h肝脏2.13±.0.44比1.56±0.49,肾脏5.25 ±1.28比3.88±1.13),在6、12h,肺脏组织病理评分在12h显著高于SAP组(5.00±0.85比3.75±0.49,P＜0.05).结论 孕鼠较非孕鼠胰腺炎发病要急且病情进展更快,并发多器官损伤时间更早且损伤程度更重.     

重症急性胰腺炎患者外周血CD4+CD25high调节性T细胞的动态变化研究

目的 动态观察重症急性胰腺炎(severe acute pancreatitis,SAP)患者外周血CD4+CD25 high调节性T细胞(Treg)和Foxp3及细胞因子IL-10、IFN-γ及IL-4的变化,探讨其临床意义.方法 将2008年8月-2009年6月收治的42例SAP患者根据病程的变化分为3期:Ⅰ期(全身炎症反应综合征期即SIRS期);Ⅱ期(SIRS下调期);Ⅲ期(感染相关并发症期).对照组为同期住院的38例急性轻型胰腺炎(MAP)患者.分别抽取外周血,以流式细胞仪检测Treg及Foxp3百分率,酶联免疫吸附法(ELISA)检测IFN-γ、IL-4及IL-10的水平,并对以上指标进行相关性分析.结果 Treg百分率和IL-4水平在SAP Ⅰ期开始升高(Treg:1.37%±1.12%;IL-4:22.92±4.17),Ⅱ期高于Ⅰ期(Treg:3.12%±1.21%;IL-4:35.42±12.50),Ⅲ期升至最高(Treg:4.47%±1.04%;IL-4:76.04±14.58);IFN-γ水平在SAP Ⅰ期最高(978.57±213.29),Ⅱ期降低(571.43±157.14),在Ⅲ期降至最低(357.14±150.00);各期相比差异有统计学意义(P＜0.05),且均明显高于对照组(P＜0.05).Treg比例与IFN-γ水平负相关(r=-0.895,P＜0.01),与IL-4水平正相关(r=0.813,P＜0.01).结论 Treg可能通过抑制IFN-γ的分泌及促进IL-4的产生,对抗过度炎症反应对机体造成的损害.     

参附注射液对大鼠重症急性胰腺炎及其肝损伤的保护作用

目的 探讨参附注射液(SFI)对大鼠重症急性胰腺炎(SAP)及其肝损伤的保护作用和可能机制.方法 42只雄性Wistar大鼠随机分为3组.SAP组(n=18),采用逆行十二指肠胰胆管注射50%牛磺胆酸钠溶液制备SAP模型;SAP+SFI组(n=18),建模前2 h给予SFI 10 mL/kg(体质量)预处理.假手术(SO)组(n=6).建模成功后3,6,12 h,分别取下腔静脉血液、胰腺和肝脏组织,并记录腹水量.光镜下观察肝胰病理改变;全自动生化分析仪检测血液淀粉酶和ALT水平;半定量RT-PCR检测肝脏组织中肿瘤坏死因子TNF-α mRNA的表达;SP免疫组化法检测肝脏组织中核转录因子-kB(NF-kB)活性.结果 SAP组肝胰病理改变严重程度、腹水量、血清淀粉酶和ALT水平随时间推移不断升高,显著高于SO组(P<0.01);肝脏TNF-α mRNA表达明显升高,术后6 h最显著,均显著高于SO组(P<0.01或P<0.05);肝脏NF-kB活性明显增强,术后3h最显著,均显著高于SO组(P<0.01或P<0.05).与SAP组相比,SAP+SFI组各时点肝胰病理改变程度、腹水量均显著降低(P<0.01或P<0.05),血液淀粉酶和ALT水平显著降低(P<0.01或P<0.05),肝脏TNF-αmRNA表达显著减少(P<0.01或P<0.05),NF-kB活性显著降低(P<0.01或P<0.05).结论 SFI对大鼠SAP具有防护作用,并能减轻其肝损伤.保护肝脏的机制可能与抑制NF-kB活化进而下调炎性细胞因子TNF-α mRNA表达水平有关.     

花姜酮对重症急性胰腺炎大鼠肝损伤的保护作用及机制

目的 观察花姜酮对重症急性胰腺炎大鼠肝损伤的作用,并探讨其机制.方法 雄性56只Wistar大鼠,随机分为4组.正常对照组(SO组,n=8);重症急性胰腺炎组(SAP组)按时间分1、3、6、12h亚组(n =8);花姜酮预处理组(ZER组,n=8);花姜酮药物对照组(ZER-CON组,n=8).留取血清,固定及冻存胰腺及肝脏.血清检测血淀粉酶(AMY)、谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)以及磷脂酶A2(PLA2)水平,病理学检测胰腺与肝脏评分.提取各组大鼠新鲜肝脏组织核蛋白行凝胶电泳迁移实验(EMSA),免疫组织化学法检测各组大鼠肝脏核因子-κB p65(NF-κBp65)表达水平,提取各组大鼠肝脏组织浆蛋白检测白细胞介素-1β(IL-1β)水平.结果 SAP组大鼠血清AMY、ALT、AST、PLA2以及胰腺病理评分、肝脏病理分级较正常与药物对照组升高明显(P＜0.05);使用花姜酮后上述指标有明显下降(P＜0.05).SO、SAP 1、3、6、12 h、ZER、ZER-CON组、AMY[(U/L)1 485.6±130.5、2865.5±536.9、4 858.0±707.3、5702.3±885.2、7072.6±868.2、4 367.3±811.4、1 833.4±216.9],PLA2[(nmol/min· ml) 493.6±86.1、522.5±102.3、992.3±97.8、1 144.7±94.4、825.9±87.8、653.5±92.3、552.4±86.2],ALT[(U/L) 87.3±8.5、92.7±10.4、166.9±21.7、188.3±26.6、267.4±30.4、179.4±27.9、96.6±15.0],AST[(U/L) 103.5±11.7、230.8±48.4、381.0 ±76.0、510.7±84.3、484.1±74.5、317.1±66.2、120.3±35.1],胰腺病理评分[(分)0.40±0.39、3.45±0.93、6.70±1.40、9.35±1.68、10.85±1.89、6.96±1.21、0.52 ±0.15].SAP组大鼠肝脏NF-κB水平以及活性、IL-1β水平较正常组与药物对照组升高明显(P＜0.05),在使用花姜酮干预后,上述指标均有明显下降(P＜0.05).结论 花姜酮可以通过减少重症急性胰腺炎大鼠肝脏组织NF-κB蛋白表达,并进一步抑制下游炎性分子IL-1β,对胰腺炎肝损伤起到保护作用.     

肝部分切除诱导的肠源性内毒素血症与转化生长因子的动态比较

目的 探讨肝部分切除诱导的肠源性内毒素血症与肝脏再生有关的转化生长因子的动态变化规律及其意义.方法 102只健康雄性成年Wistar大鼠随机分为正常对照(NC)组、假手术(SO)组和肝部分切除(PH)组,在不同时间点检测循环血内毒素(ET)、TNF-α、TGF-α、TGF-β1的水平.结果 血清ET在PH术后6～72 h期间升高,在12 h、48 h呈现峰值,分别与NC组比较(P＜0.05,P＜0.01);血清ET在SO组各时间点与NC组比较差异无显著性.血清TNF-α在PH术后6 h短暂上升(与NC比较,P＜0.05)后迅速下降,在72 h降到最低值(与NC比较,P＜0.01);血清TNF-α在SO组各时间点与NC组比较差异无显著性.血清TGF-α在PH后6～72 h期间升高,与血清ET动态变化趋势呈显著正相关(r=0.778,P＜0.05),与血清TNF-α水平的动态变化趋势无相关;血清TGF-α在SO组各时间点与NC组比较差异无显著性.血清TGF-β1水平在PH后6 h明显升高,与血清ET水平动态变化趋势无相关,与血清TNF-α水平动态变化趋势显著相关(r=0.757,P＜0.01);血清TGF-β1在SO组各时间点与NC组比较差异无显著性.结论 肝部分切除诱导的肠源性内毒素血症及其激发产生的炎症介质可能通过促进与肝再生相关转化生长因子的产生调节肝组织再生.     

OX40信号调节抑制小鼠CD4+CD25+调节性T淋巴细胞Foxp3的表达

目的 探讨共刺激信号OX40对体外诱导的小鼠CD4+ CD25+适应性调节性T淋巴细胞(iTreg)的Foxp3表达的影响.方法 制备C57BL/6小鼠淋巴细胞悬液,经免疫磁珠法分选,获得CD4+ CD25-静息T淋巴细胞,与抗CD3单克隆抗体、抗CD28单克隆抗体、转化生长因子β1、白细胞介素2共孵育,诱导产生Foxp3+ iTreg.在此基础上,于培养体系中加入OX40激动型抗体及其对照抗体,利用流式细胞仪分析研究OX40信号刺激对iTreg Foxp3表达的影响.结果 C57BL/6小鼠淋巴结中CD4+ CD25+天然调节性T淋巴细胞(Treg)比例为(5.0±0.4)％,体外诱导培养的CD4+CD25+ Treg比例为(71.8±13.4)％,其中Foxp3阳性表达占(74.9±1.9)％.OX40激动型抗体组CD4+ CD25+ Treg细胞比例为(80.0±1.6)％,其中Foxp3表达水平为(59.2±0.7)％;OX40激动型抗体对照抗体组CD4+ CD25+ Treg细胞比例为(86.0±1.4)％,其中Foxp3表达水平为(70.0±0.8)％,两组间差异有统计学意义(P＜0.05).结论 静息T淋巴细胞可以在体外诱导培养获得高纯度iTreg;OX40信号刺激可以显著抑制CD25+ iTreg细胞Foxp3的表达.     

脾切除对肝大部分切除术后细菌移位的影响

目的 观察脾切除对大鼠肝大部分切除术后细菌移位的影响.方法 将SD大鼠随机分为3组:假手术组(SO组),2/3肝切除组(PHx组),肝切除加脾切除组(PHx +Sp组).85只大鼠中30只用于测定门静脉压力,55只用于分析细菌移位、血浆内毒素、血浆D-乳酸、肠组织病理学及免疫功能.结果 PHx组门静脉压力(13.34±0.64) cmH2O(1 cmH2O=0.098 kPa)显著高于SO组(7.64±0.44) cm H2O和PHx+ Sp组(10.30±0.69) cm H2O(P＜0.01).PHx组的细菌移位率高于SO组(65.00％比6.67％;P ＜0.01),也明显高于PHx+ Sp组(25.00％;P ＜0.05).大鼠血浆内毒素中位数SO组为0.00 ng/L,PHx组为4.05 ng/L,PHx +Sp组为1.47 ng/L(P ＜0.01).血浆D-乳酸在SO组和PHx+ Sp组也较PHx组低(分别为1.68、23.36、39.09 g/L,P＜0.01).结论 脾切除能降低肝大部分切除大鼠门静脉压力,增强肠黏膜屏障功能,减少内毒素和细菌移位的发生.     

胰岛素对烫伤大鼠肝脏氧自由基损伤的保护作用

目的 了解大鼠严重烫伤后早期应用胰岛素对肝脏氧自由基损伤的保护作用.方法 雄性SD大鼠84只,随机分为正常组、盐水组、胰岛素组,每组各28只.后2组大鼠在背部造成30%TBSAⅢ度烫伤,伤后立即腹腔注射等渗盐水40 ml/kg或皮下注射胰岛素3 U/kg.伤后6、12、24、48 h,检测盐水组和胰岛素组大鼠肝脏总抗氧化能力(T-AOC)、超氧化物歧化酶(SOD)、活性氧(ROS)及血清丙氨酸转氨酶(ALT)含量,同时检测肝脏胞间黏附分子1(ICAM-1),光学显微镜下观察肝细胞形态学改变.正常组大鼠亦作相应检测.结果 与正常组比较,盐水组大鼠伤后6 h肝脏T-AOC、SOD明显降低,ROS明显升高(P＜0.05或P＜0.01);伤后12～48 h血清ALT及ICAM-1均高于正常组(P＜0.01).伤后24 h,胰岛素组大鼠肝脏T-AOC、SOD分别为(386±75)、(210±39)U/g,较盐水组(124±18)、(111±9)U/g明显升高(P＜0.01);ROS为(154±29)U/g,较盐水组(351±41)U/g明显降低(P＜0.01).伤后48 h,胰岛素组大鼠血清ALT及肝脏ICAM-1与盐水组比较呈下降趋势(P＜0.01).组织病理学结果显示,胰岛素可减轻烫伤后肝细胞损伤程度.结论 严重烫伤后早期用胰岛素干预,可增强大鼠肝脏抗氧化损伤能力,对肝脏有保护作用.     

不同的免疫抑制方案对肾移植受者免疫调节性T细胞及表面因子的影响

目的比较钙调磷酸酶抑制剂[环孢素A（CsA）和他克莫司（FK506）]与西罗莫司（SRL）对CD4^＋CD25^＋免疫调节性T细胞（CD4^＋CD25^＋Tregs）及其细胞表面标志性因子细胞毒T淋巴细胞相关抗原4（CTLA-4）和叉状头／翅膀状螺旋转录因子（Foxp3）的影响，为临床合理选择免疫抑制方案提供依据。方法选择2004年1月至4月行。肾移植的患者30例，男女不限，年龄20～50岁，随机分为3组，每组10例。（1）CsA组：免疫抑制方案为CsA＋霉酚酸酯（MMF）＋泼尼松（Pred）；（2）FK506组：免疫抑制方案为FK506＋MMF＋Pred；（3）SRL组：免疫抑制方案为SRL＋MMF＋Pred；3组的免疫诱导治疗方案均相同。各组分别于术前、术后半年、1年、2年取血样检测CD4^＋CD25^＋high／CD4^＋T细胞比值及CD4^＋CD25^highT细胞表面CTLA-4和Foxp3的表达率；比较3组治疗方案对各项指标的影响。结果应用3种不同的免疫抑制方案后，各组受者CD4^＋CD25^high／CD4^＋T细胞比值及CD4^＋CD25^highT细胞表面CTLA-4和Foxp3的表达率均明显低于术前，虽然半年后有所上升，但CsA和FK506组各项指标上升明显较SRL组慢，SRL组各项指标恢复水平明显优于钙调磷酸酶抑制剂组。结论SRL与钙调磷酸酶抑制剂比较，对CD4^＋CD25^＋Treg细胞影响明显较轻，可能对器官移植术后移植免疫耐受的诱导和维持有促进作用。     

Correlation Between Percentage of Immuncompetent CD4+ and CD4+CD25+ Cells and Compatibility in the HLA System and Selected Parameters Assessing Transplanted Kidney Function

Background

Long-term kidney allograft survival is affected by many coexisting immunologic factors. Currently, only two basic immunologic parameters—HLA compatibility and panel reactive antibodies—are routinely used in kidney transplantation management. At the same time, there is a great need for immunologic biomarkers that will help inrease understanding of kidney transplant immunology and improve clinical care of kidney recipients. T regulatory cells (Tregs) represent one of the major targets of this approach. The aim of this study was to investigate possible simple associations between Tregs count in recipients' blood and other routinely assessed or easily accessible laboratory parameters.

门静脉输注供者脾细胞诱导的供者特异性免疫低反应性

目的 探讨经门静脉输注供者脾细胞能否诱导皮肤移植小鼠产生供者特异性的免疫低反应性及其可能机制.方法 取Balb/c小鼠,随机分为空白对照组(经小鼠门静脉输注RPMI 1640培养液)、受者脾细胞组(经小鼠门静脉输注Balb/c小鼠脾细胞)、供者脾细胞组(经小鼠门静脉输注C57BL/6小鼠脾细胞)、空白移植对照组(经小鼠门静脉输注RPMI 1640培养液,7 d后移植C57BL/6小鼠的皮肤)、实验对照组(经小鼠门静脉输注Balb/c小鼠脾细胞,7 d后移植C57BL/6小鼠的皮肤)、实验组(经小鼠门静脉输注C57BL/6小鼠脾细胞,7 d后移植C57BL/6小鼠的皮肤)以及第三方移植组(经小鼠门静脉输注C57BL/6小鼠脾细胞,7 d后移植C3H小鼠的皮肤).记录空白移植对照组、实验对照组、实验组和第三方移植组移植皮肤的存活时间,并观察移植皮肤的病理学变化;脾细胞输注后7 d,分别获取空白对照组、受者脾细胞组和供者脾细胞组小鼠的外周血、脾脏和肝脏,用流式细胞仪测定样本中CD4+CD25+Foxp3+调节性T淋巴细胞(CD4+CD25+Foxp3+Treg细胞)的比例.结果 实验组移植皮肤的存活时间为(19.8±4.6)d,明显长于空白移植对照组、实验对照组和第三方移植组,但仍未达到长期存活.皮肤移植后7 d,空白移植对照组和实验对照组的移植皮肤呈现重度急性排斥反应的病理学改变,而实验组移植皮肤呈现中度急性排斥反应的病理学改变.供者脾细胞组外周血、肝脏和脾脏中CD4+CD25+Foxp3+Treg细胞比例明显高于空白对照组和受者脾细胞组.结论 门静脉输注供者脾细胞可特异性地延长供者皮肤移植物的存活时间,减轻移植物的排斥反应,该效应可能与受者体内的CD4+CD25+Foxp3+Treg细胞增加有关.     

乳腺癌患者CD4+CD25+Foxp3+调节性T细胞的变化及意义

目的:探讨乳腺癌患者CD4+CD25+Foxp3+调节性T细胞(简称Foxp3+Treg)的变化及意义。方法:选择40例乳腺癌患者和32例乳腺良性肿瘤患者,采用流式细胞术检测外周血Foxp3+Treg、CD8+CD28+T细胞、NK细胞水平;用Western blot和RT-PCR病变乳腺组织Foxp3蛋白与m RNA表达。结果:乳腺癌患者外周血中Foxp3+Treg比例较乳腺良性肿瘤患者明显升高,而CD8+CD28+T细胞、NK细胞比例明显降低(均P0.05),且乳腺癌患者外周血Foxp3+Treg水平与CD8+CD28+T细胞和NK细胞水平呈负相关(r=-0.631,r=-0.578,均P0.05);乳腺癌患者术后外周血Foxp3+Treg水平较术前明显降低(P0.05)。乳腺癌组织中Foxp3蛋白与m RNA的表达均较乳腺良性肿瘤组织明显升高(均P0.05)。结论:Foxp3+Treg和其标记分子Foxp3在乳腺癌患者中的表达增加,且可能通过抑制CD8+CD28+T细胞和NK细胞而产生肿瘤免疫抑制。     

Liver allograft rejection in rats depleted of CD8+ cells

The mechanism(s) of rejection or tolerance induction is a competitive, complex process that presumably involves interactions between multiple subpopulations of T lymphocytes. We investigated the roles of CD8⁺ cytolytic and CD4+ helper T cells in rat strains that tolerate liver allografts and that differ at both the major histocompatibility complex (MHC) (RT1) and minor histocompatibility genes. Orthotopic liver transplantation (OLT) with arterial reconstruction was performed with Brown Norway (BN) (RT1ⁿ) donors and Lewis (RT1¹) recipients, some of which were untreated, others treated with anti-CD8 antibody, and still others treated with anti-CD4 antibody. Liver graft rejection was monitored for 28 days on the basis of two criteria: (1) serum levels of AST enzyme at 3-day intervals and (2) liver biopsies at weekly intervals and at the time of sacrifice at the end of the study period. In the untreated control group, an elevation of AST was found to peak at day 6 after grafting, and it remained elevated until day 28 (AST 542±72 U/l). Histologically, signs of severe rejection were first observed on day 9; these changed to moderate rejection about day 21 and to mild rejection by day 28, when the animals were sacrificed. Recipients pre-treated with anti-CD8 demonstrated a significant elevation of AST within 6 days that, unlike in the control recipients, continued to rise sharply through the observation period (AST 1127±181 U/1, P=0.009 vs control group). Liver biopsies showed mild rejection at day 9 and moderate rejection at days 21 through 28. Recipients pretreated with anti-CD4 showed a time course of enzyme elevation and severity of rejection that was not significantly different from that observed in the control group. However, anti-CD4 treatment resulted in only 75% depletion of CD4⁺ cells in peripheral blood as compared to complete elimination of CD8⁺ cells following anti-CD8 treatment. Functional studies of spleen and liver-infiltrating lymphocytes obtained after 28 days showed low proliferative response in mixed lymphocyte culture with both BN and PVG stimulator spleen and lymph node cells. These results suggest that in this donor/recipient combination, removal of CD8⁺ cells increases the severity of rejection as demonstrated by a progressive rise in AST and histology. Moreover, OLT in this combination results in a profound, nonspecific inhibition of proliferative T-cell responses to MHC alloantigens.     

硬膜外阻滞对妊高征大鼠子宫、胎盘组织CD4+及CD8+T淋巴细胞的影响

目的观察硬膜外阻滞对妊高征（PIH）大鼠子宫、胎盘组织CD4^＋、CD8^＋T淋巴细胞的影响。方法健康雌性Wistar大鼠,鼠龄3～4个月,体重230～300g,40只孕鼠于孕14d时随机分为4组（n=10）：对照组（A组）、PIH组（B组）、假手术组（C组）、治疗组（D组）。B组、C组、D组采用皮下注射甲基L-精氨酸甲酯的方法制备PIH模型,25mg/次,2次/d,连续7d；A组相同时点给予等容量生理盐水0．25ml；C组行硬膜外导管置入术；D组行硬膜外导管置入术,每天由导管注入0．125%布比卡因50μl,连续7d。孕22d时处死大鼠,测定子宫、胎盘组织CD4^＋、CD8^＋及CD4^＋mRNA、CD8^＋mRNA的表达水平。结果各组CD4^＋表达和CD4^＋mRNA表达差异无统计学意义（P＞0．05）；与A组比较,B组、C组CD8^＋表达降低（P＜0．05）；与B组和C组比较,D组CD8^＋表达和CD8^＋mRNA表达升高（P＜0．05）。结论硬膜外阻滞可增加PIH大鼠子宫、胎盘组织CD8^＋T淋巴细胞。     

不同免疫抑制剂对肝移植受者外周血中调节性T淋巴细胞比例的影响

目的 探讨西罗莫司(SRL)和钙调磷酸酶抑制剂(CNI)对肝移植受者外周血中CD4+CD25high T淋巴细胞水平的影响.方法 排除肝移植远期移植肝功能异常的受者,将移植肝功能长期(超过2年)稳定的受者47例纳入研究,其中免疫抑制方案使用SRL者15例(SRL组),使用CNI(均为他克莫司)者32例(CNI组).以同期38名健康成人志愿者作为正常对照.使用流式细胞仪检测各组受试者外周血中单个核细胞CD4、CD25及Foxp3的表达水平,比较各组间外周血中CD4+CD25high调节性T淋巴细胞(Treg细胞)的差异.结果 与正常对照组相比,CNI组外周血淋巴细胞中CD4+ CD25high T淋巴细胞的比例显著减少(P<0.05),SRL组CD4+ CD25high T淋巴细胞的比例显著升高(P<0.05).SRL组、正常对照组和CNI组受试者外周血中CD4+ CD25high Foxp3+ Treg 细胞占CD4+ T淋巴细胞的比例依次降低,分别为1.88%(1.56%～2.60%)、1.15%(0.57%～1.48%)和0.84%(0.46%～1.45%),3组间两两比较,差异均有统计学意义(P<0.01或P<0.05).CD4+ CD25 high T淋巴细胞表达Foxp3的阳性率超过95%,CD4+ CD25 low T淋巴细胞表达Foxp3的阳性率低于20%,CD4+ CD25-T淋巴细胞不表达Foxp3.结论 SRL可促进肝移植受者外周血中Treg细胞水平的升高,而CNI可降低Treg细胞的水平.     

CD4~+CD25~+调节性T细胞诱导同种异体复合组织移植免疫耐受功能的研究

目的 探讨供体抗原特异性CD4~+CD25~+调节性T细胞(Treg),对同种异体复合组织 移植(CTA)受体大鼠细胞免疫耐受功能的影响.方法 采用免疫磁珠法分选CD4~+CD25~+Treg,将数 量1×10~6的CD4~+CD25~+Treg输注入CTA受体的大鼠,术后30 d采取外周血,尼龙毛柱分离T、B细 胞,检测在IgM 抗体刺激下的增殖放射强度的液体闪烁测定(CPM)值及血清lgG和IgA水平,判断 CD4~+CD25~+Treg对T、B细胞功能的影响及CTA的存活情况,并进行统计学分析.结果 分选的CD4~+CD25~+Treg纯度为95.6%.T、B细胞CPM值:正常对照组分别为2436±358、2418±348,Treg 局部干预组为2273±136、2252±127,Treg全身干预组分别为2338±228、2315±218,Treg未干预组分 别为3749±245、3720±224;Treg 未干预组与其三组比较差异均有统计学意义(P<0.01).血清IsG、IgA水平:Treg 局部和全身干预组分别为(12.56±1.30)g/L、(2.38±0.21)g/L和(13.48±1.23) g/L、(2.86±0.24)g/L,与正常对照组(12.35±1.28)g/L、(2.36±0.12)g/L比较差异无统计学意 义(P>0.05),三组与Treg未干预组(16.58±1.12)g/L、(3.75±0.37)g/L比较差异有统计学意义 (P<0.01).Treg 局部和全身干预组CTA存活时间分别为(97±13)和(63±lO)d,显著长于Treg未 干预组的(22±8)d(P<0.01).结论 供体抗原特异性CD4~+CD25~+Treg对T、B细胞功能有明显的 抑制作用,能诱导CTA免疫耐受,延长其存活时间,且局部应用效果优于全身.