热损伤角质形成细胞培养上清液对成纤维细胞生物学行为的影响

目的 了解KC热损伤后培养上清液对真皮Fb生物学行为的影响.方法 分离培养人真皮Fb,另建立KC(选用HaCaT细胞)热损伤模型.收集正常堵养及热损伤后12 h的KC培养上清液,用无血清DMEM以1:1体积比稀释,分别制成正常KC和热损伤KC 2种条件培养液.将Fb分别用无血清DMEM和2种条件培养液培养:(1)于培养12、24、36、48 h时,采用噻唑蓝法检测Fb增殖活性;(2)于培养12 h时,用流式细胞术检测Fb的凋亡情况(Fb预先致热损伤,并增设Fb伤后无处理对照);(3)培养24 h时,用免疫荧光法检测Fb胞质α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的表达情况,并用实时定量PCR法测定Fb α-SMA mRNA的表达.对实验结果进行单因素方差分析,用LSD-t检验行组间两两比较.结果 (1)Fb增殖活性:Fb经热损伤KC条件培养液培养12、24、36、48 h时,其吸光度值均高于同时相点用无血清DMEM培养的Fb(t值分别为1.89、2.35、2.02、1.94,P值均小于0.01);其中12、24、48 h时与用正常KC条件培养液培养的Fb比较,差异有统计学意义(12 h时t=1.83,P<0.01;24 h时t=2.91,P<0.05;48 h时t=1.83,P<0.05).(2)Fb凋亡检测:热损伤KC条件培养液培养的Fb与正常KC条件培养液培养以及伤后无处理的Fb比较,凋亡率均明显下降(t=3.31,P<0.05;t=1.47,P<0.01).(3)Fb胞质α-SMA表达:荧光显微镜下可见,用无血清DMEM或正常KC条件培养液培养的Fb中,α-SMA阳性表达(红色荧光)细胞较少;热损伤KC条件培养液培养的Fb中,α-SMA阳性表达细胞明显增多.(4)α-SMA mRNA表达:热损伤KC条件培养液培养的Fb α-SMA mRNA相对表达量为1.32±0.06,高于正常KC条件培养液培养的Fb(1.14±0.07,t=2.51,P<0.05)和无血清DMEM培养的Fb(1.00±0.09,t=1.77,P<0.05).结论 KC热损伤后12 h培养上清液可明显促进Fb增殖、抑制Fb凋亡、促进Fb向肌成纤维细胞转分化.     

神经激肽1受体非肽类拮抗剂对严重深Ⅱ度烫伤大鼠早期炎性神经递质P物质免疫活性物质含量的影响

目的:探讨静脉给予L-703,606后严重烫伤大鼠P物质免疫活性含量的变化规律。方法:实验于2003-03/2004-01在第四军医大学西京医院烧伤外科实验室完成。选择SD大鼠76只,按随机数分为正常对照组(4只),烫伤对照组(24只),L-703,606组(24只),β-七叶皂甙钠组(24只),运用放射免疫测定方法,动态检测经尾静脉给予神经激肽1受体非肽类拮抗剂L-703,606(250nmol/kg)后深II度烫伤大鼠(20%TBSA)烫伤后早期72h创周及空肠P物质免疫活性物质含量的变化。结果:76只大鼠进入结果分析。①与正常对照组相比,L-703,606组、β-七叶皂甙钠组大鼠创周及空肠P物质免疫活性物质含量同烫伤对照组具有类似规律。烫伤后早期(1h)P物质免疫活性物质含量明显升高,(P<0.01),但均低于烫伤对照组(P<0.01);而后逐渐下降。与烫伤对照组相比,L-703,606组P物质免疫活性物质含量的病理性改变明显较轻,且轻于β-七叶皂甙钠组。结论:神经激肽1受体非肽类拮抗剂L-703,606能抑制严重烫伤大鼠早期P物质免疫活性物质含量的变化,为减轻严重烧伤后早期包括血管通透性增加、血浆蛋白外渗等炎症反应及局部和全身水肿形成提供新的思路。     

碱性成纤维细胞生长因子对增生性瘢痕的作用

目的：探讨碱性成纤维性细胞生长因子（bFGF)对移植至裸鼠皮下的人增生性瘢痕的作用。方法：将烧伤患者手术切除的增生性瘢痕移植到裸鼠背部皮下，动物随机分为5组：对照组，bFGF组，胶原酶组， FGF 胶原酶组和玻璃酸钠组，瘢痕块移植后2周分别用上述不同药物局部注射至瘢痕内共3次，每次间隔3d，后观察疤痕大小的1／2－1／3且软，能使粗大密集的胶原束变松散成团，其结构大部分消失，bFGF 胶原酶组所移植的瘢痕组织块有2／3消失，结论：增生性瘢痕局部应用bFGF可以降低瘢痕胶原，瘢痕中粗大的胶原束结构大部分消失。     

降钙素基因相关肽对培养的血管内皮细胞缺氧再给氧的影响

目的:观察降钙素基因相关肽(CGRP)对培养的人脐静脉血管内皮细胞缺氧再给氧损伤的影响。方法:用培养的人脐静脉血管内皮细胞建立缺氧再给氧模型,观察血管内皮细胞在缺氧再给氧状态下台盼兰摄取率、细胞内乳酸脱氢酶(LDH)活性,钙、镁含量和丙二醛(MDA)含量的变化以及CGRP对培养的血管内皮细胞的影响。结果:1×10^-8mol/LCGRP可降低缺氧再给氧时血管内皮细胞的台盼兰摄取率、钙含量及MDA含量,降低LDH活性,减少细胞内镁的丢失。结论:CGRP对缺氧再给氧的血管内皮细胞具有直接保护作用,其作用可能与CGRP具有抗脂质过氧化,减轻细胞内钙超载以及减少镁与酶的丢失有关。     

血小板衍化生长因子对血管平滑肌细胞增殖及胶原蛋白合成的影响

目的 :观察血小板衍化生长因子 （PDGF）对培养的血管平滑肌细胞 （VSMC）增殖及胶原蛋白合成的影响。方法 :采用培养的兔动脉 VSMC,应用 3H- Td R的 3H-脯氨酸掺入方法 ,观察 PDGF- BB对兔 VSMC DNA合成以及胶原蛋白合成的影响。结果 :PDGF- BB可促进处于静止状态的兔 VSMC DNA及胶原蛋白的合成 ,并呈现明显的浓度依赖关系 ,在 40 μg/ L 的浓度时 DNA及胶原蛋白的合成达到高峰 ,DNA及胶原蛋白分别处于 36 h和 48h合成最为显著。结论 :PDGF- BB可明显促进培养的 VSMC增殖及胶原蛋白的合成。     

小鼠胚胎生殖细胞体外培养

目的：研究胚胎生殖细胞的体外生长条件和分化潜能，探索从胚胎生殖细胞获得皮肤细胞的可能性。方法：在解剖显微镜下分离取出10天龄的胎鼠生殖嵴，消化法得到原生殖细胞，接种在胎鼠的成纤维细胞饲养层上，培养基使用α-MEM添加药用级的bFGF，或者添加成纤维细胞的上清液，配制成条件培养基。培养的细胞用形态学观察法，碱性磷酸酶染色法和诱导分化的方法来鉴定。结果：初步摸索出胚胎生殖细胞体外培养的简单方法，验证了它的分化潜力，观察到了神经细胞、心肌细胞、和表此样细胞。结论：本试验为简易条件下的胚胎生殖细胞的研究做出了有益的探索，为大规模获得表皮细胞提供了一个新的思路。     

胰岛素对烫伤大鼠肝脏氧自由基损伤的保护作用

目的 了解大鼠严重烫伤后早期应用胰岛素对肝脏氧自由基损伤的保护作用.方法 雄性SD大鼠84只,随机分为正常组、盐水组、胰岛素组,每组各28只.后2组大鼠在背部造成30%TBSAⅢ度烫伤,伤后立即腹腔注射等渗盐水40 ml/kg或皮下注射胰岛素3 U/kg.伤后6、12、24、48 h,检测盐水组和胰岛素组大鼠肝脏总抗氧化能力(T-AOC)、超氧化物歧化酶(SOD)、活性氧(ROS)及血清丙氨酸转氨酶(ALT)含量,同时检测肝脏胞间黏附分子1(ICAM-1),光学显微镜下观察肝细胞形态学改变.正常组大鼠亦作相应检测.结果 与正常组比较,盐水组大鼠伤后6 h肝脏T-AOC、SOD明显降低,ROS明显升高(P＜0.05或P＜0.01);伤后12～48 h血清ALT及ICAM-1均高于正常组(P＜0.01).伤后24 h,胰岛素组大鼠肝脏T-AOC、SOD分别为(386±75)、(210±39)U/g,较盐水组(124±18)、(111±9)U/g明显升高(P＜0.01);ROS为(154±29)U/g,较盐水组(351±41)U/g明显降低(P＜0.01).伤后48 h,胰岛素组大鼠血清ALT及肝脏ICAM-1与盐水组比较呈下降趋势(P＜0.01).组织病理学结果显示,胰岛素可减轻烫伤后肝细胞损伤程度.结论 严重烫伤后早期用胰岛素干预,可增强大鼠肝脏抗氧化损伤能力,对肝脏有保护作用.     

一种有效抑制复合皮挛缩、抗爬行替代的方法

复合皮是指培养的自体角朊细胞与异体(种)真皮或人工真皮组成的复合物。术后常因创面收缩而无法长期观察;或因创周正常皮肤爬行替代而无法确定创面皮肤的来源。为此我们制做了环状空心 X 线片缝合于大鼠创缘,使之具有克服上述情况的作用。1.制做和使用方法消除 X 线片表面的银粉,修剪成内外径各为3cm 和3.5cm 的环状空心,在内外缘的中间沿圆周等距离打8个小圆孔,消毒后缝合于 SD大鼠创缘,内侧移植复合皮并与 X 线片缝合。2.实验步骤取20只雌性成年 SD 大鼠做受体,     

复合皮研究中去除真皮中上皮成分的方法和意义

为探讨用胰酶消化异体真皮来消除其再长出表皮的可能性。通过直接镜检、培养和移植后外观和组织学等方法观察真皮中的毛囊数，以及能否长出表皮。结果表明：用胰酶消化异体真皮８０分钟，真皮仍较完整，毛囊数少，培养和移植后不能长出表皮。提示：①用胰酶消化异体真皮能减少带抗原性的上皮成分，消除其长出表皮的可能性。②胰酶消化异体真皮的时间，需要严格控制。