美洲大蠊提取物对小鼠真皮成纤维细胞迁移影响的初步研究

目的:考察美洲大蠊提取物对小鼠真皮成纤维细胞迁移的影响,探讨其在创面修复中的作用机制。方法:采用酶消化法体外分离培养小鼠真皮成纤维细胞,建立体外细胞划痕创伤模型,加入0,1,5,20mg生药.mL-1提取物,培养24,48h,观察细胞迁移。结果:培养24h后,0,1,5,20mg生药.mL-1提取物各组细胞迁移率分别为:42.31%±4.41%、87.29±9.23%、72.22±6.59%、32.18±3.45%,1,5mg生药.mL-1提取物可明显促进细胞迁移(P0.01)。结论:美洲大蠊提取物可促进创面的愈合,其机制与促进参与创面修复的成纤维细胞迁移有关。     

人正常腹膜及粘连腹膜成纤维细胞的体外培养与鉴定

目的 探索人正常腹膜及粘连腹膜组织成纤维细胞培养及鉴定的技术方法.方法 采用组织块贴壁培养法进行成纤维细胞培养,待细胞从组织块中长出并融合成致密单层后,用胰蛋白酶消化,以13传代.本实验所用细胞为第3～8代.倒置相差显微镜和苏木素伊红染色,观察成纤维细胞形态,并对培养细胞进行波形蛋白免疫组化鉴定.结果 正常腹膜及粘连腹膜成纤维细胞在体外培养情况下均较易贴壁生长,粘连腹膜成纤维细胞比正常腹膜成纤维细胞生长速度更快.波形蛋白免疫组化染色为阳性.结论 该方法所获得的成纤维细胞可在体外稳定培养,为在细胞水平上研究肠粘连预防的作用机制提供了充足、可靠的靶细胞.     

黄藤乙醇提取物对人增生性瘢痕成纤维细胞抑制作用的研究

目的:研究黄藤乙醇提取物对人增生性瘢痕成纤维细胞的抑制作用.方法:体外培养烧伤后的人增生性瘢痕成纤维细胞,加入不同浓度的黄藤提取物,24 h后观察细胞形态学,以乳酸脱氢酶(LDH)为指标观察细胞毒性,用MTT法检测其增殖活性.结果:不同浓度的黄藤醇提取物均能改变成纤维细胞形态,抑制细胞增殖,浓度在300μg/mL以下无明显的细胞毒作用.结论:黄藤醇提取物对人增生性瘢痕成纤维细胞具有抑制作用,并呈剂量依赖关系.     

脂多糖对人皮肤成纤维细胞表型变化的影响及意义

目的 探讨被细菌脂多糖(lipopolysaccharide, LPS)刺激后的人正常皮肤成纤维细胞的表型改变与增生性瘢痕形成的关系.方法 体外培养增生性瘢痕患者瘢痕组织和人正常皮肤成纤维细胞,正常成纤维细胞分别经不同浓度(0、0.005、0.010、0.050、0.100、0.500、1.000 μg/ml)LPS刺激,并对刺激后细胞进行传代,通过病理学、免疫组化染色、电镜观察等方法,观察成纤维细胞表达增殖细胞核抗原(PCNA)、α1(Ⅰ)前胶原蛋白、α平滑肌肌动蛋白的规律及透射电镜下超微结构的变化,并以相同代数的瘢痕组织成纤维细胞作对照.结果 经LPS刺激后,正常皮肤成纤维细胞被激活,随着刺激浓度的增加,光镜下核浆比例逐渐增大;免疫组化染色显示PCNA表达阳性细胞逐渐减少,α1(I)前胶原蛋白和α平滑肌肌动蛋白阳性细胞逐渐增多;电镜下显示细胞形态多样化,核浆比例增加,核膜变得不规则,胞浆内粗面内质网和高尔基复合体进一步增多,微丝微管增加,肌微丝出现.上述变化在LPS浓度为0.100 μg/ml时最明显,接近瘢痕组织成纤维细胞,表明成纤维细胞逐渐向增殖表型、合成表型或收缩表型变化.此后,随着LPS浓度继续升高,上述表型标志的表达和细胞形态均趋向于正常成纤维细胞.结论 一定浓度的LPS可能与增生性瘢痕形成有关.     

人正常腹膜及粘连腹膜成纤维细胞的体外培养与鉴定

目的探索人正常腹膜及粘连腹膜组织成纤维细胞培养及鉴定的技术方法。方法采用组织块贴壁培养法进行成纤维细胞培养,待细胞从组织块中长出并融合成致密单层后,用胰蛋白酶消化,以1∶3传代。本实验所用细胞为第3～8代。倒置相差显微镜和苏木素伊红染色,观察成纤维细胞形态,并对培养细胞进行波形蛋白免疫组化鉴定。结果正常腹膜及粘连腹膜成纤维细胞在体外培养情况下均较易贴壁生长,粘连腹膜成纤维细胞比正常腹膜成纤维细胞生长速度更快。波形蛋白免疫组化染色为阳性。结论该方法所获得的成纤维细胞可在体外稳定培养,为在细胞水平上研究肠粘连预防的作用机制提供了充足、可靠的靶细胞。     

人皮肤成纤维细胞库的构建

目的建立成纤维细胞系及细胞库。方法采用体外细胞培养技术进行皮肤成纤维细胞的分离、培养、传代、冻存、复苏及鉴定。结果人皮肤成纤维细胞传代至23代以上,此时的细胞数是原代培养的细胞数的数十万倍,经冻存、复苏后,人皮肤成纤维细胞仍具有增殖能力,生长状态与原代培养的人皮肤成纤维细胞相类似。结论酶消化法是培养人皮肤成纤维细胞简便、快捷的方法。     

不同葡萄糖浓度对体外培养人牙龈成纤维细胞增殖的影响

目的探讨不同葡萄糖浓度下人牙龈成纤维细胞的生长情况。方法采用体外模型,观察在不同葡萄糖浓度(5.5,7,8.8,10,15及20 mmol/L)细胞培养液中人牙龈成纤维细胞在24 h、3 d、7 d时细胞形态及生长增殖情况。结果当葡萄糖浓度低于8.8 mmol/L时,细胞形态规则,对照组、A组、B组及C组间细胞增殖无明显差异;当浓度高于10 mmol/L时,D组、E组及F组细胞形态呈现不规则,各组增殖能力明显受到抑制。结论高浓度的葡萄糖能够影响人牙龈成纤维细胞的形态,并可抑制其增殖。     

人牙周膜成纤维细胞的原代培养及鉴定

目的体外分离培养人牙周膜成纤维细胞,进一步研究细胞因子对牙周膜细胞功能的调控作用。方法利用组织块法原代培养牙周膜成纤维细胞并传代,通过形态学及免疫细胞化学方法对其进行鉴定。结果牙周膜成纤维细胞培养成功传代,5代后细胞生长旺盛,表现为长梭形细胞,免疫细胞化学鉴定细胞抗波形丝蛋白阳性,抗角蛋白阴性,为中胚层来源的成纤维细胞。结论组织块法培养出的细胞符合牙周膜成纤维细胞的形态学及免疫学特征,生长状态良好,可作为体外的细胞模型为研究细胞因子对其功能的调控作用奠定基础。     

旋复花提取物对人增生性瘢痕成纤维细胞抑制作用的研究

目的:观察旋复花提取物对人增生性瘢痕成纤维细胞的抑制作用,为烧伤后增生性瘢痕的治疗提供实验依据。方法:体外培养烧伤后的人增生性瘢痕成纤维细胞,加入不同浓度的旋复花提取物,24h后观察细胞形态学,以LDH为指标观察细胞毒性,用MTT法检测其增殖活性。结果:不同浓度的旋复花提取物均能改变成纤维细胞形态,抑制细胞增殖,浓度在500μg/mL以下无明显的细胞毒作用。结论:旋复花提取物对人增生性瘢痕成纤维细胞具有抑制作用,并呈剂量依赖关系,具有防治增生性瘢痕的应用前景。     

猫眼草提取物对人增生性瘢痕成纤维细胞抑制作用的研究

目的:观察猫眼草提取物对人增生性瘢痕成纤维细胞的抑制作用,为烧伤后增生性瘢痕的治疗提供实验依据。方法:体外培养烧伤后的人增生性瘢痕成纤维细胞,加入不同浓度的猫眼草提取物,24h后观察细胞形态学,以LDH为指标,观察细胞毒性,用MTT法检测其增殖活性。结果:不同浓度的猫眼草提取物均能改变成纤维细胞形态,抑制细胞增殖,浓度在500μg/mL以下无明显的细胞毒作用。结论:猫眼草提取物对人增生性瘢痕成纤维细胞具有抑制作用,并呈剂量依赖关系,具有防治增生性瘢痕的应用前景。     

双黄补牙周缓释药条体外释放度的测定

目的:建立双黄补牙周缓释药条的质量控制标准,并测定其体外释放度.方法:采用高效液相色谱法(HPLC)作为黄芩苷及盐酸小檗碱的含量测定方法,转篮法测定该药条的体外释放度.结果:双黄补牙周缓释药条中黄芩苷含量为1.63%,盐酸小檗碱含量为0.564%.该缓释药条的释放分为速释和缓释两个阶段.结论:所定的含量测定方法简便、准确可行.双黄补牙周缓释药条具有速释和缓释两个释药系统,符合缓释制剂的设计要求.     

造血生长因子联合应用对骨髓粒-单系造血祖细胞体外增殖的影响

目的：研究不同造血生长因子联合应用对骨髓粒－单系造血祖细胞体外增殖的调节作用。方法：应用甲基纤维素体外半固体培养法，检测各种生长因子联合应用组，ＣＦＵ－ＧＭ集落的生长情况。结果：造血生长因子的联合应用不仅可增加ＣＦＵ－ＧＭ集落数，促进ＣＦＵ－ＧＭ集落的体外形成，而且，也能明显地增加ＣＦＵ－ＧＭ集落的体积，大型ＣＦＵ－ＧＭ集落数的比例在各联合应用组增加显著，其中以ＩＬ－３＋ＩＬ－６＋Ｇ－ＣＳＦ＋ＧＭ－ＣＳＦ联合应用组作用最强。同时，结果还显示，造血生长因子的联合应用可加速ＣＦＵ－ＧＭ集落的形成。结论：造血生长因子的联合应用能够协同地促进骨髓粒－单系造血祖细胞的体外增殖，从而为联合应用造血生长因子来扩增少量骨髓，外周血或脐血中造血干／祖细胞进行移植治疗白血病或实体瘤提供了实验依据。     

In vitro study of the effects of plaunotol on oral cell proliferation and wound healing

Plaunotol is an acyclic diterpene alcohol extracted from a medicinal plant called plau-noi, Croton stellatopilosus Ohba, and has been widely used for the treatment of gastric ulcers in Japan. The aim of this study was to examine the effects of plaunotol on human gingival fibroblasts (HGFs) and human oral keratinocytes (HOKs). To assess the cytotoxic effect, HGFs and HOKs were treated with plaunotol. Subsequently, the morphology of cells was recorded and cells were subjected to MTT assay. To investigate cell proliferation effect, cells were treated with plaunotol and counted with a haemocytometer. To determine wound healing effect, the number of cells repopulated into the wounded areas in monolayer culture and in fibroblast-populated collagen lattice (FPCL) was measured. The results showed that 10 and 1?μg/ml (33 and 3.3?μmol/l) plaunotol induced toxicity in HGFs and HOKs, respectively. However, 0.1?μg/ml (0.33?μmol/l) plaunotol promoted HGF proliferation and wound healing in monolayer and FPCL models. In contrast, 0.1?μg/ml plaunotol could not induce HOK proliferation nor in vitro wound healing using monolayer culture, but it induced wound healing in a modified FPCL model. Our data suggested that plaunotol could promote oral cell proliferation and wound healing in vitro and may have an implication on oral wound healing.     

人牙龈成纤维细胞和牙周膜韧带细胞多向分化潜能的比较

目的 体外培养人牙周膜韧带细胞 （HPDLCs） 和人牙龈成纤维细胞 （HGFs）, 对比两者成骨、 成软骨以及成脂的多向分化潜能的差异。方法 运用酶消化结合组织块法体外培养 HPDLCs 和 HGFs, 选择生长状态良好的 3~4 代 HPDLCs 和 HGFs, 进行成骨、 成软骨、 成脂诱导, 未分化诱导的细胞作为对照组。分别用茜素红染色、 油红 O 染色以及阿利新蓝染色分别检测两种细胞的成骨、 成软骨及成脂分化能力。半定量逆转录聚合酶链反应 （RT-PCR） 检测 HPDLCs 和 HGFs 中相关标志基因骨钙素(OCN)、 Ⅰ型胶原蛋白 （Col 1）、 runt 相关转录因子 2 （RUNX2）、 过氧化物酶体增殖物激活受体γ2 （PPARγ2）、 X 型胶原蛋白 （Col 10） mRNA 的表达。结果 成骨诱导两种细胞培养至 28 d 时, 细胞周围均有红染钙结节形成, HPDLCs 形成的钙结节明显多于 HGFs; 成软骨诱导两种细胞 14 d 时均可见胞质蓝染的细胞, HGFs 较 HPDLCs 明显; 成脂诱导两种细胞 21 d 时, 可见红色脂肪滴形成, HPDLCs 形成的脂肪颗粒明显少于 HGFs。HGFs 和 HPDLCs 分化培养 7 d 和 14 d 后, 均有 OCN、 Col 1、 RUNX2、 PPARγ2 和 Col 10 的表达, 在 14 d 时的表达均高于 7 d; HPDLCs 中 OCN、 Col 1、 RUNX2 的表达高于 HGFs, PPARγ2、 Col 10 的表达低于 HGFs（均 P＜ 0.05）。结论 HPDLCs 的成骨能力较 HGFs 强, 成软骨和成脂能力较 HGFs 弱。     

低分子肝素对原代培养神经细胞缺血性损伤的保护作用

目的观察低分子肝素(LMWH)对原代培养低糖和谷氨酸损伤大鼠大脑皮层神经细胞的作用。方法将血清药理学方法与神经细胞体外培养技术结合在一起,制备低糖和谷氨酸损伤模型,以细胞形态学、培养液吸光度(A)值以及乳酸脱氢酶(LDH)活性作为观察指标,研究LMWH所产生的保护作用。结果LMWH可改善损伤神经细胞的形态、升高培养液A值、降低培养液中LDH活性。结论LMWH可提高低糖和谷氨酸损伤状态下神经细胞的活性,对损伤神经细胞有保护作用。     

灵芝总甙对神经细胞损伤保护机制的研究

目的 :探讨灵芝总甙对小鼠神经细胞脑缺血样损伤模型的保护作用及其机制。方法 :采用组织培养法 ,以小鼠大脑皮层神经细胞为材料 ,制备缺血损伤模型。结果 :形态学检验发现灵芝总甙对脑缺血样损伤模型中的小鼠神经细胞具有明显保护作用 ,结晶紫染色也提示可显著提高损伤模型中神经细胞的存活数。结论 :灵芝总甙对小鼠神经细胞缺血损伤均有显著的保护作用。     

黄蜀葵花总黄酮保护离体大鼠心肌缺血再灌注损伤的研究

目的　观察黄蜀葵花总黄酮 (totalflavoneofAbel moschlManihotLmedic ,TFA)对离体大鼠缺血再灌注心肌的保护作用。方法　采用Langendorff创建的离体心脏灌流法建立的离体大鼠心肌缺血缺氧再灌模型 ,观察TFA对心肌组织匀浆中脂质过氧化物质、酶学指标等的影响。结果　经研究发现 :TFA( 10 0、5 0、2 5mg·L-1)可明显增加缺血再灌后离体大鼠心肌组织匀浆中的SOD活性 ,降低MDA生成量 ,减少心肌细胞内CPK、LDH的漏出 ,并使NO含量及NOS活性得到提高。结论　TFA对离体大鼠缺血再灌损伤的心肌具有保护作用 ,此作用可能与抑制心肌脂质过氧化、增强抗氧化能力及舒张冠脉改善低灌流等有关     

小鼠脑片Formazan定量测量方法评价缺血性损伤及神经保护作用

目的　建立一种定量测量 2 ,3,5 三苯基四氮唑(TTC)红色还原产物formazan的方法 ,用于评估离体脑片缺血性损伤以及依达拉奉和ONO 10 78的神经保护作用。方法　以TTC为底物在小鼠脑片生物合成formazan标准品 ,并进行分离、纯化和鉴定。小鼠脑片以缺氧缺糖 (OGD)方法诱导损伤 ,用分光光度法在 4 90nm处测量皮质和纹状体formazan合成量。依达拉奉和ONO 10 78加入培养液 ,观察其神经保护作用。结果　合成并纯化了formazan标准品 ,其纯度为 0 993,线性测量范围在 0 0 5～ 1g·L-1。OGD减少formazan合成 ,与处理时间有依赖性。依达拉奉 (0 0 1～ 1μmol·L-1)抑制OGD诱导的formazan合成减少 ,而ONO 10 78无作用。结论　定量测量formazan是一种评价离体脑片损伤及药物神经保护作用的有用方法。     

尿苷三磷酸对大鼠脑缺血再灌注损伤保护作用的机制初探

目的观察验证尿苷三磷酸（UTP）对在体大鼠脑缺血再灌注损伤是否具有保护作用。方法线栓法制备大鼠中脑缺血再灌注（MCAO）损伤模型。UTP试剂在大鼠大脑中动脉（MCA）缺血30 min后以微量输注泵通过大鼠尾静脉持续给药,输注速度为5 ml/（kg.min）。再灌注24 h后测量大鼠脑含水量以及神经损伤行为学评分（NDS）。通过离体大鼠颈动脉环张力法测定UTP对去氧肾上腺素（PE）预收缩颈动脉环张力的影响。结果比较10、30、90μg/kg UTP组,发现UTP对大鼠脑缺血再灌注损伤的保护作用具有剂量依赖效应,90μg/kgUTP组的保护作用最明显。离体血管张力测定结果表明,UTP可以显著降低PE诱发的血管张力。结论UTP对大鼠脑缺血再灌注损伤具有保护作用,这种作用可能与梗塞部位的血管扩张有关。