缓释bFGF促进缺血再灌注损伤皮瓣成活的实验研究

目的 研究缓释bFGF对缺血再灌注损伤皮瓣的效应.方法 采用酸性明胶水凝胶微球AGHMs为bFGF的载体,于10周龄20只雄性健康的Fisher大鼠背部制备对称性缺血再灌注损伤岛状皮瓣,即每只鼠2例皮瓣,共制备40例皮瓣;以CAM快速热成像仪检测皮瓣的缺血及再灌注;再灌注前注射AGHMs+bFGF的溶液,分组为:对照A组(n=10例)为AGHM+PBS溶液;实验组为bFGF+AGHMs+PBS溶液,其中的bFGF分别为20μg(设为B组,n=10例)、50μg(设为C组,n=10例)和150μg(设为D组,n=10例).手术后第7天对皮瓣成活率、微小血管成像、组织学及免疫组化检查进行评估.结果 A、B、C、D组皮瓣的成活率分别为(52.27±10,20)%、(64.00±8.20)%、(64.30±10.10)%及(78.47±11.90)%.D组皮瓣成活率与其他3组相比,其差异有统计学意义(P<0.01).微小血管成像及组织学检查显示,D组的微小血管多于其他组;电镜检查显示,A、B、C组的组织损伤较重,D组的损伤轻微.免疫组化(VEGF,TGF-β1,TGF-β2,TGF-β3,bFGF)结果相近,即D组的阳性染色表面积与其他组相比,其差异有统计学意义(P<0.01);但A、B、C组之间相比,其筹异无统计学意义(P>0.1).结论 持续释放的bFGF可以上调局部组织VEGF及TGF的释放,促进新生血管的形成,从而提高缺血再灌注损伤皮瓣的成活率.     

缺血后处理和预处理对大鼠骨骼肌缺血-再灌注损伤的作用

目的 探讨缺血后处理( IPost)和缺血预处理(IPC)对大鼠骨骼肌缺血再灌注(IR)损伤的影响.方法 将40只大鼠随机分成缺血再灌注组(A组)、缺血后处理组(B组)、缺血预处理组(C组)、缺血预处理加缺血后处理组(D组)以及对照组(E组),采用切断患肢全部皮肤、肌肉和神经,保留患肢股动、静脉的动物模型,通过夹闭和开放股动、静脉造成骨骼肌缺血再灌注损伤,通过测定骨骼肌缺血4h、再灌注1h后血清丙二醛(MDA)和骨骼肌髓过氧化物酶(MPO),以及再灌注6h后骨骼肌的坏死程度来观察缺血后处理.缺血预处理及缺血预处理加缺血后处理对大鼠骨骼肌缺血再灌注损伤的影响.结果 B组、C组和D组再灌注1 h MDA和MPO水平以及再灌注6h骨骼肌坏死程度均低于A组(P＜ 0.05),但是高于E组(P＜0.05);B组和D组再灌注1 h MDA和MPO水平以及再灌注6h骨骼肌坏死程度基本相同(P＞0.05);B组和D组再灌注1 h MDA和MPO水平低于C组(P＜0.05),但再灌注6h骨骼肌坏死程度基本相同(P＞0.05).结论 应用缺血后处理和缺血预处理对大鼠骨骼肌缺血再灌注损伤有一定的保护效果,联合应用缺血后处理和缺血预处理,对骨骼肌缺血再灌注损伤的保护作用并没有明显增强.     

缺血后处理激活自噬保护皮瓣机制研究

目的:缺血后处理皮瓣在临床上已经运用,开始相关研究探究缺血后处理对皮瓣保护机制。方法:健康成年新西兰大白兔,分为3组。A组为给予缺血后处理;B组为再灌注前5mi n给予自噬阻滞剂3-甲基腺嘌呤10μl+缺血后处理。C组,直接应用微血管夹阻断腹壁浅血管持续缺。6h后再灌。各组分别进行自噬指标Becl i n1、LC3免疫组化和皮瓣存活率检测。结果:新西兰大白兔完全存活。B、C组相比较,自噬Becl i n1、LC3免疫组化染色阳性细胞面积变化未见统计学差别(P>0.005)。实验组皮瓣存活面积比较,B与C相比较,无统计学意义(P>0.005),但是A与B、C相比较,上述指标两两之间都有统计学意义差别(P<0.005)。结论:缺血后处理对皮瓣再灌注损伤有保护作用,该作用可能和自噬激活有关。     

缺血后处理对保护皮瓣的作用机制研究

目的：缺血后处理已经在心、肾等器官上广泛应用,进行相关研究进一步探究缺血后处理对皮瓣有否保护作用。方法：健康成年新西兰大白兔,分为3组。A组为给予缺血后处理;B组为再灌注前5min给予A2A阻滞剂SCH58261＋缺血后处理。C组,直接应用微血管夹阻断腹壁浅血管持续缺血6h后,恢复正常血供。分别进行中性粒细胞浸润,MPO含量和皮瓣存活率检测。结果：新西兰大白兔完全存活。B、C组相比较,中性粒细胞计数以及MPO含量也未见统计学差别（P〉0.005）。实验组皮瓣存活面积比较,B与C相比较,无统计学意义（P〉0.005）,但是A与B、C相比较,上述指标两两之间都有统计学意义差别（P〈0.005）。结论：缺血后处理对皮瓣再灌注损伤有保护作用,该作用可能和A2A受体性质有关。     

地塞米松防治皮瓣缺血-再灌注损伤及其机制

目的研究地塞米松对中性粒细胞凋亡与坏死的调控,阐明地塞米松防治皮瓣缺血-再灌注损伤的机制. 方法 30只Wistar大鼠腹部制备3 cm×6 cm 岛状皮瓣,分成3组(n＝10).A组正常皮瓣组;B组阻断静脉8 h,腹腔注射生理盐水作为对照组;C组阻断静脉8 h,腹腔注射地塞米松5 mg/kg,作为治疗组.术后7 d观察皮瓣成活面积;以Annexin V及Propidium双标记,流式细胞仪检测全血中性粒细胞凋亡、坏死水平;电镜观察凋亡、坏死中性粒细胞的形态.并于术后1 d,从各组大鼠皮瓣中央取材,电镜观察吞噬细胞吞噬凋亡中性粒细胞形态.阻断血管前,再灌注损伤后0、 3、6、12 及 24 h,以双夹心ELISA法测量血浆肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor α,TNF-α)及白细胞介素10(interleukin 10,IL-10)浓度. 结果皮瓣成活面积A、C组大于B组(P<0.05),A、C组差异无统计学意义(P＞0.05).术后1、3 d,B组全血中性粒细胞凋亡含量明显低于A、C组, 6 d高于A、C组.术后1、3、6 d,中性粒细胞坏死水平B组高于A、C组.术后1 d,皮瓣中吞噬细胞吞噬凋亡中性粒细胞的数量C组明显高于B组(P<0.05).B组血浆TNF-α于再灌注1 h达到高峰,IL-10于再灌注3 h达到最低.C组TNF-α峰值明显低于B组,6 h即明显下降;IL-10再灌注1h达最低,3 h时明显上升,其浓度明显高于B组. 结论地塞米松防治皮瓣缺血再灌注损伤的机制在于调理了中性粒细胞的凋亡水平,减少了中性粒细胞的坏死数量,平衡了中性粒细胞分泌细胞因子.     

外源性锌对缺血再灌注损伤皮瓣超微结构的影响

目的:观察外源性锌对缺血再灌注(ischemia-reperfusionIR)损伤皮瓣的保护作用。方法:48只大鼠随机分为对照组(n=16)、缺血再灌注组即IR组(n=16)和补锌缺血再灌注组即补锌-IR组(n=16)。在大鼠以腹壁浅血管为蒂的岛状皮瓣缺血再灌注模型上,用硫代巴比妥法和比色法分别测定皮瓣组织中丙二醛(MDA)含量和髓过氧化物酶(MPO)活性。应用透射电镜观察皮瓣缺血再灌注损伤后超微结构的改变,并观察皮瓣成活率。结果:补锌-IR组在再灌注1h和24h,皮瓣组织中MDA含量分别较IR组降低11.3%、33.2%,MPO活性分别较IR组降低17.9%、21.4%。补锌-IR组皮瓣的超微结构改变较IR组明显减轻,皮瓣成活率较IR组升高27.2%。结论:外源性锌能显著减轻缺血再灌注损伤皮瓣中组织细胞超微结构的病理改变,对皮瓣缺血再灌注损伤产生一定的保护作用。     

抑肽酶预处理对兔脊髓缺血再灌注损伤的影响

目的:观察抑肽酶预处理对兔脊髓缺血再灌注损伤的影响,为临床应用抑肽酶治疗脊髓缺血再灌注损伤提供实验依据.方法:6月龄国产大耳白兔39只,随机分为A组(15只)、B组(15只)和C组(9只).A、B组动物于左肾动脉下用主动脉环扎器环扎腹主动脉,缺血60min后开放,再灌注24h.A组于缺血前10min静脉注射抑肽酶3×107IU/kg,继而用Graseby 3500微量泵持续注入抑肽酶1×107IU/(kg·h)至处死动物时;B组用生理盐水代替A组的抑肽酶,其余同A组;C组只暴露不夹闭腹主动脉,不给药.A、B组缺血前,缺血5、10、20、60min及再灌注后8h、24h,C组相应时间点,测定各组皮层体感诱发电位(CSEP).A、B组缺血前,缺血再灌注后8h、24h,C组相应时间点,处死动物,取L2～L4脊髓行一氧化氮(NO)及一氧化氮合酶(NOS)测定,取L3～L4脊髓灰质切片进行组织学检查,观察神经无形态变化.结果:A、B两组缺血5min时CSEP的P1波和N1波潜伏期较缺血前延长、波幅降低(P<0.05),缺血20min时两波潜伏期及波幅消失,缺血冉灌注后8h两波潜伏期及波幅有所恢复,但较缺血前及缺血后5min、10min时明显延长和降低(P<0.01),缺血再灌注后24h两波潜伏期及波幅较前面各时间点延长和降低(P<0.01);缺血再灌注后8h、24h,A组较B组P1波和N1波潜伏期短、波峰高(P<0.05),而C组较A、B组潜伏期短、波峰高(P<0.01).A、B两组NO、总NOS及诱导型NOS(iNOS)在缺血再灌注后8h明显升高,24h时更高(P<0.05),在缺血再灌注后8h、24h时A组的NO、总NOS及iNOS较B组低(P<0.01).各时间点C组P1波和N1波潜伏期及波幅不变,NO、总NOS及iNOS量均不变(P>0.05).A、B组脊髓缺血再灌注后神经元均有损伤,但在再灌注后8h、24h时A组神经元损伤程度均较B组为轻:C组神经元正常.结论:抑肽酶预处理可以改善脊髓缺血再灌注早期的CSEP,减少NO含量,从而减少缺血再灌注损伤.     

缺血再灌注损伤皮瓣组织中金属硫蛋白含量变化

目的　观察缺血再灌注损伤皮瓣组织中金属硫蛋白 (metallothionein ,MT)的含量变化。方法　 16只大鼠随机分为对照组 (n =8)和缺血再灌注损伤组 (n =8)。在大鼠腹壁浅血管为蒂的岛状皮瓣缺血再灌注损伤模型上 ,用10 9Cd血红蛋白饱和法和硫代巴比妥酸法测定皮瓣组织中MT及丙二醛(MDA)含量 ,比色法测定皮瓣组织过氧化物酶 (MPO )活性。结果　缺血再灌注损伤组在缺血 8h、再灌注 12h、2 4h时皮瓣组织中MDA水平分别较对照组高 41.7%、111.4%、13 5.7% ,MPO水平分别较对照组高 72 .1%、2 18.9%、2 96.0 % ,MT含量分别较对照组高 42 .6%、52 .8%、10 2 .3 % (P <0 .0 5或P<0 .0 1)。结论　皮瓣组织中MT含量增多 ,可能与皮瓣缺血再灌注损伤有关     

皮瓣受区床与缺血-再灌注皮瓣成活的关系

目的 :探讨皮瓣受区床对缺血 -再灌注皮瓣成活的影响 ,重视受区床的营养性作用。　方法 :40只大鼠分成 A组 (皮瓣下不置硅胶膜 )、 B组 (皮瓣下置硅胶膜后再缝合 )。阻断腹壁浅血管 1h、 6 h、 10 h及完全切断腹壁浅血管 ,观测不同时段皮瓣温度及组织病理改变 ,7天时计算皮瓣成活面积。　结果 :皮瓣温度、皮瓣成活面积及组织病理学改变阻断血管1h A、 B组无明显差别 ,阻断 6 h、 10 h及完全切断血管两组间有显著差别。 A组阻断 10 h与完全切断血管两组间皮瓣成活面积很相近。 A组完全切断血管后真皮下组织见白细胞大量聚积。　结论 :皮瓣受区床对缺血 -再灌注皮瓣成活起营养作用。白细胞可损害这种营养性作用。     

大鼠背部对称性岛状皮瓣的一种新型缺血再灌注损伤动物模型

目的 研究一种新型的缺血再灌注损伤皮瓣的动物模型.方法 在解剖研究的基础上,于10周龄雄性Fisher大鼠背部制备对称性皮瓣,形成不同缺血时间的缺血再灌注损伤模型,进行两侧皮瓣存活率、微小血管成像评估及组织学检查.结果缺血6h的大鼠背部对称性皮瓣缺血再灌注损伤模型,其左右两侧皮瓣存活率、平均微小血管数及组织学检查差异均无统计学意义(P>0.1).结论 以旋髂深血管为蒂的大鼠背部对称性岛状皮瓣(缺血6h)是一种较好的缺血再灌注损伤皮瓣模型,适用于药物、细胞及细胞因子等对缺血再灌注损伤的实验研究.     

缺血预处理对肝脏缺血再灌注损伤保护作用的实验研究

在大鼠肝脏缺血再灌注模型基础上建立稳定的缺血预处理模型,观察其保护作用,结果发现预处理与缺血再灌注组相比比清肝酶（ＡＬＴ,ＡＳＴ）,透明质酸水平及肝组织局部ＭＤＡ含量均低,而组织ＡＴＰ含量及能荷值均高,形态学损伤改变轻;同时发现预处理组织腺苷含量明显高于缺血再灌注组。实验表明缺血预处理能有效减轻肝脏的缺血再灌注损伤,腺苷分子参与了这一保护机制。     

缺血预处理对犬心移植供心的保护作用

12只供心犬均分为两组。实验组在心脏摘下前施行缺血预处理(3分钟主动脉钳闭,2分钟低流量灌注,10分钟再灌注),对照组则直接摘下心脏。两组心脏均经4℃Euro-Collins液保存后原位植入受心犬胸内。进行术中、术后心肌观察及心肌酶学、血流动力学、心电改变等项研究。结果提示:缺血预处理对犬心移植中供心具有良好的心肌保护作用,能减轻心肌组织损伤程度,降低心肌收缩力下降幅度,减少室性心律失常的发生率。     

亚低温对肝缺血预处理保护作用的增强效应

目的探讨肝缺血再灌注损伤中亚低温(MH)对缺血预处理(IP)保护作用的增强效应机理.方法观察非缺血对照组、缺血再灌注组、缺血预处理组和亚低温缺血预处理组4组犬肝上下腔静脉血谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、乳酸脱氢酶(LDH)以及丙二醛(MDA)和超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)、谷胱甘肽过氧化酶(GSH-PX)活性及总抗氧化(TAX)能力变化. 结果肝缺血再灌注后ALT、AST、LDH和MDA含量明显上升(P<0.01), SOD、CAT、GSH-PX活性及TAX能力明显下降(P<0.01); 缺血预处理组与缺血再灌注组比较及亚低温缺血预处理组与缺血预处理组比较,ALT、AST、LDH和MDA含量均明显下降(P<0.01,P<0.05),SOD、CAT、GSH-PX活性及TAX能力明显上升(P<0.01,P<0.05).结论缺血预处理能增强肝组织自身抗氧化能力,减轻肝缺血再灌注后氧自由基对肝脏的损伤; 亚低温对缺血预处理的这种保护作用具有增强效应.     

缺血预处理时间对大鼠骨骼肌缺血再灌注损伤保护作用的影响

目的探讨缺血预处理时间与骨骼肌缺血再灌注损伤保护作用之间的关系. 方法 36只大鼠随机分成 6组,制成切断患肢皮肤、肌肉和神经,仅保留股动静脉的动物模型.A组:直接缺血4 h再灌注;B、C、D和E组:分别缺血5、10、15和20 min,再灌注5、10、15和20 min,重复3次后缺血4 h再灌注;F组:制成仅保留股动静脉的左大腿组织块模型,未经过缺血处理.通过测定丙二醛(malondialdehyde, MDA)、骨骼肌水肿和坏死程度,观察不同预缺血时间对骨骼肌缺血再灌注损伤的保护作用. 结果对骨骼肌缺血后再灌注,预缺血5 min对骨骼肌即有保护作用,肌肉存活面积达82.47%;预缺血10和15 min肌肉存活面积增至最高,达89.03%和89.49%;预缺血20 min肌肉存活面积降至78.27%.预缺血5 min即可减轻骨骼肌水肿;预缺血10 min骨骼肌水肿程度最轻;预缺血15 min水肿程度又加重,预缺血20 min水肿程度继续加重.预缺血5、10和15 min MDA水平均降低,预缺血20 min MDA水平与单纯缺血再灌注组相同. 结论预缺血时间对大鼠骨骼肌缺血再灌注损伤的保护作用呈现先增强后减弱的趋势,以预缺血10 min保护作用最强.     

不同方案缺血预处理对大鼠横形腹直肌肌皮瓣再灌注损伤的影响

目的 探讨不同方案缺血预处理（ischemic preconditioning，IPC）对大鼠横形腹直肌肌皮瓣（transverse rectus abdominis musculocutaneous flap，TRAM）移植后再灌注损伤的影响。方法选取雄性Wistar大鼠90只，建立TRAM模型，随机分为对照组和实验组，对照组10只，无需预处理过程，持续缺血4h后，恢复肌皮瓣血供；实验组分为8个亚组，每组10只，以微血管夹阻断腹壁下血管5min，再恢复血流5min，处理1次为sIPC5／5组，处理2次为bIPC5／5组，依次为sIPC5／10组（缺血5min／再灌注10min1次）、bIPC5／10组（缺血5min／再灌注10min2次）、sIPC10／5组（缺血10min／再灌注5min 1次）、bIPC 10／5组（缺血10min／再灌注5min2次）、sIPC10／10组（缺血10min／再灌注10min1次）、bIPC10／10组（缺血10min／再灌注10min2次），其余实验步骤与对照组相同；每组肌皮瓣恢复血供4h后，取3只处死取材，测定肌组织含水量及HE染色镜检观察骨骼肌组织结构，其余动物于术后第7天判断皮瓣成活情况，计算成活面积百分比。结果恢复血供12h后，各实验组肌皮瓣两侧边缘部分肿胀，色泽黯淡，较对照组肿胀范围小，程度轻；光镜下见各实验组肌纤维轻度肿胀，染色均一，肌纤维结构尚完整，胞核呈梭形，无明显肿胀。对照组肿胀明显，部分肌纤维断裂。各实验组与对照组相比肌组织水含量明显减少（P〈0．001），皮瓣成活面积提高了2～3倍（P〈0.001）。两次预处理对肌皮瓣成活面积的影响与相应的单次预处理比较，差异有统计学意义（P〈0．05）。结论IPC可明显减轻大鼠TRAM再灌注损伤程度，其保护效应受缺血／再灌注时间、处理次数等因素的影响。     

ISCHAEMIC PRECONDITIONING OF THE LIVER: A PRELIMINARY STUDY

Background: A phenomenon of ‘preconditioning’ exists for the heart, but has not been described for the liver. This study was undertaken to determine whether a brief episode of ischaemia (3 or 5 min) followed by a short reperfusion time (5 or 10 min) would precondition the liver to reduce subsequent injury from prolonged ischaemia (30 to 90 min). Methods: Male Wistar rats were allocated into five control (no preconditioning) and five preconditioned groups, each having a liver resection. The preconditioning times were 3 rnin ischaemia followed by 5 rnin reperfusion with a prolonged ischaemia of 60 or 90 min for the first two groups, and 5 min ischaemia followed by 10 rnin reperfusion with prolonged ischaemia times of 30 or 45 min for the other three groups. Results: Of rats resected with 3–5–60 rnin time sequence designed to assess survival, 9/10 died. However 9/10 died also in the matching control group with 60 rnin ischaemia. With a 5–10–45 rnin sequence, 9/10 survived more than 24 h in the preconditioned group and 1/10 in the non-preconditioned controls. With a 5–10–30+ sequence designed to measure liver function tests, the prothrombin time was significantly improved; bilirubin, serum alkaline phosphatase and the alanine aminotransferase improved but these did not reach significance. Conclusion: A brief episode of ischaemia followed by an episode of reperfusion before a prolonged period of ischaemia ameliorated the effects of ischaemia-reperfusion injury in a rat liver resection model. If hepatic preconditioning is confirmed in humans, ischaemic preconditioning will have an important role for all liver surgery.     

四肢动脉伤后合并缺血性肌挛缩分析

旨在分析四肢动脉损伤后合并缺血性肌挛缩的原因并讨论其预防措施。１９６０年～１９９５年收治的四肢动脉损伤２６９例，合并缺血性肌挛缩１９例，发生率为７．０６％。上肢５例，下肢１４例。月国动脉伤５１例中９例（１７．６％）发生缺血性肌挛缩。入院前１１例曾在他院手术处理，３例未探查处理血管，１例结扎，７例修复损伤动脉均失败；５例伴行静脉损伤，３例结扎。仅１例作了深筋膜切开术。受伤至来院时间：８～１４小时４例，３４～５７小时８例，１９天～１９个月７例。入院后１７例修复了损伤动脉。８例伴行静脉伤，５例修复，３例结扎。８例作深筋膜切开术。随访３个月～２８年（平均５年），修复的１７例动脉１６例通畅。１１例缺血性肌挛缩肢体作了矫形手术，外观及功能明显改善。证明，早期诊治、正确处理损伤动静脉和深筋膜切开术是预防缺血性肌挛缩的关键。月国动脉损伤是发生缺血性肌挛缩的最常见部位，应予认真处理。