微流控毛细管电泳系统用于Duffy血型基因分型研究

目的:探索快捷筛选分析Duffy血型基因型的方法 ,建立稀有血型献血者信息档案。方法:2014年12月-2018年9月本中心采用微流控毛细管电泳系统和PCR-SSP法检测3 936名无血缘关系O型献血者标本Duffy基因型,对Fy~a阴性标本进行血清学确认及其他血型系统表型分型, Fy(a-b-)标本做基因测序。结果:Fy~a阴性标本血清学表型与微流控毛细管电泳系统基因分型结果一致。3 936例样本中Duffy表型结果为Fy(a+b-)3 564例(90.54%), Fy(a+b+)353例(8.97%), Fy(a-b+)18例(0.46%), Fy(a-b-)1例(0.03%)。基因频率:FY*A为95.03%, FY*B为4.94%, FY*Null为0.03%。19个Fy~a阴性标本信息已登记在册。结论:微流控毛细管电泳系统适用于Duffy血型基因分型筛选,可用于建立稀有血型库,解决稀有血型患者紧急输血问题,提高输血安全。     

Duffy血型多态性与HIV感染相关性研究

目的探讨Duffy血型表型及基因多态性与HIV感染之间的关系。方法收集HIV阳性感染者EDTAK2抗凝外周血血样,采用抗-Fya及抗-Fyb试剂进行Duffy血型血清学分型;同时提取DNA,采用PCR-SSP方法进行Duffy血型FYA、FYB等位基因分型;将基因分型结果与本地区正常人群Duffy基因频率进行比较。结果在334例HIV有反应者标本中,检出Fy(a+b-)301例(90.120%),Fy(a+b+)32例(9.581%),Fy(a-b+)1例(0.299%),未发现Fy(a-b-)表型;基因分型结果与血清学结果一致;FYA基因频率为0.949,FYB基因频率为0.051。已报道正常人群中,FYA及FYB基因频率分别为0.953 8和0.046 2;2组人群Duffy血型分型比较差异无统计学意义(P0.05)。结论本研究结果初步提示,中国汉族人群中Duffy血型不同的表型分布在HIV阳性感染者及正常人群中并无显著性差异;Duffy血型多态性与HIV感染相关性有待进一步研究。     

洛阳地区汉族人群Duffy血型基因型分布

目的调查洛阳地区汉族人群Duffy血型的分布情况。方法收集洛阳本地汉族献血者样本571份,应用血清学方法进行Duffy血型表型鉴定,使用PCR-SSP技术进行基因分型。结果 571份样本中,Duffy血型各种表型分布为:Fy(a+b-)表型523例(91.59%),Fy(a+b+)表型42例(7.36%),Fy(a-b+)表型6例(1.05%),未发现Fy(a-b-)表型。基因频率为:Fya(0.952 7),Fyb(0.047 3)。结论洛阳地区汉族人群Duffy血型分布情况与国内其他地区汉族人群相似,与白种人和黑种人有明显的差别。     

广西壮族人群Duffy血型基因多态性研究

目的研究广西地区壮族人群Duffy红细胞血型基因的多态性。方法采用PCR-SSP方法对1025名广西9个不同地区壮族Duffy红细胞血型系统Fy~a和Fy~b血型抗原的基因分型研究。结果 1 025名广西地区壮族人的Duffy血型Fy(a+b-)949例(92.59%),Fy(a+b+)76例(7.41%),Fy(a-b+)0例,基因频率为FYA=0.9629,FYB=0.037 1。结论获得了广西壮族人群Duffy血型FYA/FYB基因频率,丰富了本地稀有血型数据库,为临床输注配合性血液提供了宝贵资料。     

深圳献血人群Duffy血型基因多态性的研究

目的建立Duffy血型的分子生物学检测方法,研究深圳献血人群Duffy血型基因多态性。方法在2011年8～11月本中心900名无血源关系献血者标本中,用卡式微柱凝胶抗球蛋白方法鉴定Duffy血型表现型,建立Duffy血型的基因分型方法 PCR-SSP法及PCR产物直接测序法,对900例标本DNA进行PCR-SSP法检测,其中50例做Duffy血型基因编码区域序列测定。结果血清学结果为Fy(a+b-)855例,Fy(a+b+)43例,Fy(a-b+)2例,Fy(a-b-)0例。900例Duffy血型PCR-SSP法基因分型结果与血清学表现型完全一致。50例FY基因编码序列部分测序结果与血清学、PCR-SSP法吻合,表现型FY(a+b-)标本测序结果可见FY基因第2外显子第125位核苷酸碱基为纯合子G;表现型FY(a-b+)标本测序结果为第125位核苷酸碱基为纯合子A。结论 Duffy血型PCR-SSP基因分型方法及PCR产物直接测序法可以正确地鉴定Duffy基因型,适用于Duffy血型基因多态性的研究。深圳地区Fya的基因频率为0.973 9,Fyb的基因频率为0.026 1。     

新疆北疆地区哈萨克族人群Duffy血型抗原分布及基因频率分析

目的了解新疆北疆地区哈萨克族人群Duffy血型表型血清学的多态性,建立哈萨克族人群稀有血型抗原的资料,为临床科学、安全输血提供参考依据。方法随机整群抽取新疆北疆地区不同部落哈萨克族人群的无关个体2 170人,采用卡式微柱凝胶抗球蛋白法,进行Fya、Fyb抗原检测。结果在2 170份标本中Fy(a+b+)823例,Fy(a+b-)1 193例,Fy(a-b+)154例,未检测出Fy(a-b-)标本。Fya基因频率为0.729 3,Fyb基因频率为0.260 7。结论新疆北疆地区哈萨克族人群Duffy血型系统抗原分布,具有本民族独特的特征。哈萨克族具有白种人和东方人渗透、融合的特征。     

四川省汉族人群Duffy血型基因分型研究

目的研究四川地区Duffy血型基因型分布,为建立红细胞库奠定基础。方法对150名汉族健康献血者采用PCR-SSP方法进行Duffy血型系统进行基因分型检测。结果四川地区汉族人群Duffy基因分型检测结果,Fya基因频率为:0.929.Fyb:0.071;检出3例Fy(a-b-)个体。结论 PCR-SSP法检测Duffy血型简单、快捷、准确,为建立红细胞库奠定了基础。     

岳阳地区无偿献血者RhCE、MNS、Kidd、Duffy血型系统调查及稀有血型库的建立

目的探讨岳阳地区献血者RhCcEe、MNS(M/N/S/s)、Duffy(Fya/Fyb)、Kidd(Jka/Jkb)4个红细胞血型系统的基因频率和多态性特点,建立稀有血型库。方法采用聚合酶链式反应-序列特异性引物法(PCR-SSP)方法对303例献血者血样4个红细胞血型系统进行基因分型。结果岳阳汉族人群RhCE血型系统基因频率为C=0.6865,c=0.3135,E=0.2492,e=0.7508;MNS血型基因频率为M=0.4983,N=0.5017,S=0.0478,s=0.9521;Duffy血型的基因频率为Fya=0.9472,Fyb=0.0528;Kidd血型基因频率为Jka=0.4802,Jkb=0.5198。发现1例罕见RhCCEE型献血者和1例Fyb/Fyb稀有血型。结论岳阳汉族人群RhCE、MNS、Kidd、Duffy血型系统基因分布具有多态性,有必要建立稀有血型库,为临床安全、有效输血提供保障。     

多重PCR筛选新疆少数民族Fy(a-)、s-稀有血型

目的通过分子生物学方法,筛选新疆少数民族献血者样本中Fy(a-)、s-表型,了解这2种稀有血型抗原的分布情况,以解决Fy(a-)、s-稀有血型患者用血问题。方法采用多重PCR体系,以每5份标本混合检测方式,对1 020份无血缘关系健康少数民族献血者的血液DNA标本进行Fyb和S血型抗原基因分型。通过PCR-SSP验证方法,分别检测多重PCR中含有Fy(a-b+)/Fy(a+b+)或S+s-/S+s+阳性标本的高频等位基因Fya或s,从而获得稀有血型Fy(a-b+)或S+s-。结果在1 020例献血者中筛选出稀有血型Fy(a-)89例,s-46例。结论新疆少数民族献血人群中Fyb和S等位基因频率分别为29.66%和21.32%,通过筛选获得的稀有血型数据,为临床输注配合性血液提供了参考资料,并进一步丰富了中国稀有血型库。     

温州地区人群Duffy血型基因频率分布及供受者Duffy血型不相合情况调查

目的了解本地人群Duffy血型基因频率的分布以及输血供受者Duffy血型不相合的情况。方法 2018年3月—2018年5月随机收集416(人)份温州献血者的血液标本(5 mL/份,EDTA-K_2抗凝),采用间接抗球蛋白法测定其Duffy血型抗原;计算Duffy基因型及基因频率,根据基因频率计算本地供受(血)人群Duffy抗原不相合的机率。结果本组温州地区献血人群的FYA和FYB基因频率分别为0.942 3和0.057 7,观察值与期望值符合Hardy-Weinberg遗传平衡定律并与国内其他地区献血者人群相近(P>0.05),Duffy血型Fy~a和Fy~b抗原供受者不相合机率分别为0.003 3和0.099 6,总不相合几率0.102 9。结论温州地区献血人群Duffy血型基因频率符合中国汉族人群该基因频率的分布特征;供受者Fy~a和Fy~b抗原不配合机率为建立本地献血者Duffy血型资料库、进一步保障临床用血安全提供依据。     

南京汉族人群Duffy血型等位基因FYES及FYX调查研究

目的研究南京地区汉族人群中Duffy血型等位基因FYES及FYX的表达情况。方法随机提取200例无偿献血者EDTA-K2抗凝外周血血样DNA,采用PCR-SSP方法进行Duffy血型FYA、FYB等位基因分型;采用Sanger双脱氧链末端终止测序法分析Duffy血型FYES及FYX等位基因序列特点。结果PCR基因分型结果与测序结果一致,200例标本中,检出FYA/FYA 180例,FYA/FYB 20例;测序结果表明,200例标本中未发现FYES及FYX等位基因表达。结论 FYES及FYX等位基因在中国南京地区汉族人群中表达频率极低,与其他人种相比具有显著性差异。     

Duffy血型的基因分型

目的建立Duffy血型基因分型方法。方法根据Duffy血型cDNA结构,合成分型引物,建立聚合酶链反应-序列特异性引物(PCR-SSP)分型方法,对102例浙江省汉族无血缘关系的献血者进行基因分型。结果PCR-SSP分型方法与血清学分型方法结果完全一致,102例浙江省汉族人,Fya纯合子91例(89.22%),FyaFyb杂合子10例(9.80%),Fyb纯合子1例(0.98%)。Fya基因频率0.9412,Fyb基因频率0.0588。结论PCR-SSP对Duffy血型基因分型,具有方法可靠、稳定,试剂来源广泛等优点,适合于临床常规应用。浙江省汉族Duffy血型基因以Fya为主。     

PCR-SSP法检测Rh阴性无偿献血者Duffy血型的基因分型研究

目的调查Rh阴性无偿献血者Duffy血型的基因分型情况。方法用分子生物学技术(PCR-SSP)进行DNA水平的检测,并以Rh阳性无偿献血者作为对照。结果Rh阴性无偿献血者Duffy血型的基因频率为Fya=0.9252,Fyb=0.0747;而Rh阳性无偿献血者的基因频率为Fya=0.95,Fyb=0.05。无Fy(a-b-)个体。结论Rh阴性无偿献血者Duffy血型的基因分型结果显示和Rh阳性无偿献血者无明显差异。     

应用血清学和分子生物学方法筛选浙江汉族人群中部分稀有血型

本研究探讨浙江汉族人群部分红细胞血型系统稀有表型的分布情况。利用血清学技术或分子生物学方法分别筛选H系统H-、MNS系统GPA-和s-、Rh系统Rhnull、Rhmod、D--、CCDEE和CCdEE、Gerbich系统GPC-、I系统i+、Lutheran系统Lub-、Kell系统k-和Jsb-、Duffy系统Fya-、Ok系统Oka-、Diego系统Dib-。利用尿素溶血试验筛选Kidd系统Jk(a-b-)表型。结果表明:1 618例献血者中检出1例Di(a+b-),1 007例献血者检出3例Fy(a-b+),633例Rh阴性献血者检出1例CCdEE。大规模筛选中未发现Jk(a-b-)、H-、GPA-、s-、GPC-、成人i+、Lub-、k-、Jsb-、Lub-和Oka-稀有血型。结论:在献血人群中发现Di(a+b-)、Fy(a-b+)、CCdEE稀有表型,提供了浙江汉族人群部分红细胞稀有血型的分布数据。     

一例抗-Fya抗体的鉴定和输血策略

正Duffy抗原是位于细胞膜表面的糖蛋白,其相对分子质量为35 000～50 000,是一种趋化因子受体[1],基因位于1号染色体上,该血型系统主要包含Fya、Fyb、Fy3、Fy4、Fy5、Fy6,这6种抗原。在人群中产生的表现型主要有Fy(a+b+)、Fy(a+b-)、Fy(a-b+)、Fy(a-b-),在我国Fya属于高频抗原,因此Fya(a-b+)属于稀有血型。抗-Fya大多数由于输血而产生,天然产生的抗-Fya抗体非常罕见。     

上海地区稀有血型Duffy系统Fy~a阴性献血者筛查和临床应用

目的了解上海地区献血者中Fya阴性的红细胞表型情况,以解决临床Fya抗原阴性患者急救用血的问题。方法利用间接抗球蛋白试验从上海地区献血者中筛查稀有血型Duffy系统Fya抗原阴性献血者;用盐水和抗球蛋白法对1名白种人疑难输血患者的血清做抗体筛选和鉴定,并使用乙醚放散结合抗球蛋白方法检测放散液中抗体,同时对其Duffy血型进行检测。配血用盐水、polybrene和抗球蛋白介质3种方法。结果从9479名献血者中筛查到Fy(a-)14例;从该名白种人患者血清中未检出不规则抗体,直接抗球蛋白试验阳性,红细胞放散液中检出抗-Fya,输注配合型的红细胞后,其血红蛋白明显升高。结论上海地区献血者中Fya阴性的红细胞表型极低。对于大量输血后临床症状未有改善患者,如果血清中未能检出红细胞抗体,应考虑检测患者红细胞上可能存在血型同种抗体。     

上海地区人群中部分稀有血型筛选

目的了解上海地区人群中部分稀有血型的频率和分布情况,用于解决临床上稀有血型的用血问题。方法利用稀有单克隆、多克隆抗血清,对Kell血型系统的K0,Miltenberger血型系统的Mur ,Duffy血型系统的Fya-,高频率抗原中的Lan-、Vel-进行筛选;用2 mol/L尿素进行Kidd血型系统的Jk(a-b-)表型筛选。筛选方法包括试管法间接抗人球蛋白试验(IAT),U型96孔微量板IAT和U型96孔微量板盐水直接离心法试验。结果从24 093名献血者中发现1例K0表型;在2 970名献血者中检出15例Mur ;从200名献血中,检出1例Fya-;从6 153名献血者中发现2例Vel-;在300名献血者中发现了1例Lan-;在102 760名献血者中,成功检出4例Jk(a-b-)。结论Mur 、Lan-、Jk(a-b-)表型频率明显高于白种人;Fya-表型频率低于白种人。     

PCR-SSP法检测华南地区汉族人群Duffy血型的基因分型研究

目的 填补Duffy血型基因型分布在国内的空白。方法 采用分子生物学技术(PCR-SSP)进行DNA水平的检测。结果 华南地区汉族人群Duffy基因型的基因频率分别为Fy^a=0．95．Fy^b=0．05；检出2例Fy(a-b-)个体。结论 PCR-SSP法检测Duffy基因型准确且成本降低；进一步的凋查对Fy基因可望有新的认识。     

采用熔解曲线分析法检测红细胞Duffy血型抗原Fy-a/b基因型

本研究建立用于红细胞Duffy血型抗原Fy-a/b基因分型的熔解曲线分析方法。根据β-actin和Fy-a/bmRNA序列设计并合成引物,建立实时荧光多重PCR-熔解曲线分析法,并用该方法与常规PCR-SSP法同时检测中国成都地区198名献血者Duffy血型抗原Fy-a/b的基因型。结果表明,熔解曲线分析法和常规PCR-SSP法的基因分型结果完全一致。198名中国成都地区献血者中Fya(+)178例(89.9%),Fya(+)Fyb(+)杂合子19例(9.6%),Fyb(+)1例(0.5%),Fya基因频率0.947,Fyb基因频率0.053,符合中国人Duffy血型分布特点。结论:本研究成功建立了红细胞Duffy血型抗原Fy-a/b基因分型的熔解曲线分析方法,该方法适用于大规模Duffy血型基因分型。中国成都地区的献血者Duffy血型基因以Fya为主。     

陕西省稀有血型血液信息化供应平台的建立

目的 建立陕西省稀有血型血液信息化供应平台。方法 稀有血型信息化供应平台由标本接收、结果登记、供者档案和库存血液组成。首先在标本接收模块录入待检测血型的无偿献血者献血码，再登记无偿献血者每个血型系统抗原鉴定结果，保存后导入稀有血型信息化供应平台数据库。当收到非常见血型血液或稀有血型血液(缺失多个常规抗原或缺失某个高频抗原)申请时，在供者档案模块通过数据库查询相应抗原阴性的献血者及其血液状态(有无库存)并动态监测稀有血型血液库存状态。结果 建立的稀有血型血液信息化供应平台数据库中录入稀有Rh表型献血者5.060%(273/5 398),缺失多种常规抗原献血者1.540‰(51/33 010),缺失高频抗原的O型献血者病例共13例，其中Jk(a-b-)表型0.019‰(3/158 484),Di(a+b-)表型0.436‰(2/4 586),Fy(a-b+)表型4.030‰(8/1 983)保存于稀有血型实体库。结论 稀有血型血液信息化供应平台可解决临床上对稀有血型血液的迫切需求，保障输血安全。