KBV200细胞多药耐药与蛋白激酶C表达上调的关系

目的 研究KBV200多药耐药细胞蛋白激酶C（PKC）的表达，探讨PKC的表达上调与肿瘤多药耐药的关系。方法KBV200细胞分对照组和佛波酯（PMA）组，PMA组应用200nmol/L的PMA预孵育细胞．而对照组不用。^32P掺入法测定多药耐药KBV200细胞株的PKC活性，通过Western blotting检测PKC各亚型表达和亚细胞分布。用MTT法检测细胞耐药性。结果PMA预孵育可提高KBV200细胞的PKC总活性和膜组分PKC活性，降低浆组分PKC活性（P〈0．01）。PMA预孵育使膜组分PKCa表达增加，浆组分PKCa表达降低，膜组分PKCβ无明显变化，浆组分PKCB的表达稍增强。PMA可升高长春新碱、阿霉素对KBV200细胞的IC50值（P〈0．01）。结论PMA使KBV200细胞耐药性增加，可能与PKC表达上调有关。     

KBV200细胞多药耐药与蛋白激酶C表达上调的关系

目的 研究KBV200多药耐药细胞蛋白激酶C(PKC)的表达,探讨PKC的表达上调与肿瘤多药耐药的关系。方法 KBV200细胞分对照组和佛波酯(PMA)组,PMA组应用200nmol/L的PMA预孵育细胞,而对照组不用。³²P掺入法测定多药耐药KBV200细胞株的PKC活性,通过Westernblotting检测PKC各亚型表达和亚细胞分布。用MTT法检测细胞耐药性。结果 PMA预孵育可提高KBV200细胞的PKC总活性和膜组分PKC活性,降低浆组分PKC活性(P<0.01)。PMA预孵育使膜组分PKCα表达增加,浆组分PKCα表达降低,膜组分PKCβ无明显变化,浆组分PKCβ的表达稍增强。PMA可升高长春新碱、阿霉素对KBV200细胞的IC₅₀值(P<0.01)。结论 PMA使KBV200细胞耐药性增加,可能与PKC表达上调有关。     

蛋白激酶C活性、亚细胞分布与KBV200细胞多药耐药性的相关研究

目的探讨蛋白激酶C(PKC)活性、亚细胞分布与KBV200细胞株多药耐药(MDR)的关系。方法MTT法检测KB和KBV200细胞对细胞毒药物的耐药性,32P掺入法检测两株细胞的PKC活性。结果长春新碱(VCR)、阿霉素(ADR)对KBV200细胞的半数抑制浓度(IC50)值分别是KB细胞的65.03和19.8倍;KBV200细胞的膜组分、胞质组分的PKC活性均高于KB细胞(P<0.01),KBV200细胞PKC总活性是KB细胞的2.12倍;佛波酯可升高KBV200细胞总或膜组分PKC活性,VCR、ADR的IC50值升高(P<0.01);十字孢碱可降低KBV200细胞两种组分PKC活性,VCR、ADR的IC50值降低(P<0.01),对VCR、ADR的逆转倍数分别是5.46和1.96倍。结论PKC与KBV200细胞株的MDR表型关系密切,PKC可能介导了KBV200细胞的MDR。     

KBV2000细胞多药耐药蛋白激酶C亚型表达的关系

目的 探讨蛋白激酶C(protein kinaseC，PKC）亚型与KBV200肿瘤细胞多药耐药（multidrug resistance，MDR）的关系。方法 （1）用Western blotting法检测PKC亚型在耐药株KBV200及敏感株KB的表达及亚细胞分布；（2）流式细胞仪检测PKC亚型的荧光强度并对数据进行统计分析。结果 （1）PKCα亚型的表达在KBV200中选择性升高，而PKCβ、ε无显著变化，PKCγ、ζ则未测出表达；（2）流式细胞仪检测发现KBV200细胞的PKCα的荧光强度较KB细胞显著升高，PKCβ、ε则无显著差别。结论 PKC与KBV200MDR细胞株的MDR表型关系密切。在PKC亚型中，PKCα可能在KBV200细胞的MDR表型中起重要作用。     

KBV200细胞多药耐药与蛋白激酶C亚型表达的关系

目的探讨蛋白激酶C(proteinkinaseC,PKC)亚型与KBV200肿瘤细胞多药耐药(multidrugresistance,MDR)的关系。方法(1)用Westernblotting法检测PKC亚型在耐药株KBV200及敏感株KB的表达及亚细胞分布;(2)流式细胞仪检测PKC亚型的荧光强度并对数据进行统计分析。结果(1)PKCα亚型的表达在KBV200中选择性升高,而PKCβ、ε无显著变化,PKCγ、ζ则未测出表达;(2)流式细胞仪检测发现KBV200细胞的PKCα的荧光强度较KB细胞显著升高,PKCβ、ε则无显著差别。结论PKC与KBV200MDR细胞株的MDR表型关系密切。在PKC亚型中,PKCα可能在KBV200细胞的MDR表型中起重要作用。     

肿胀激活状态下蛋白激酶C同工酶亚型在胃癌耐药细胞系的亚细胞分布变化及其意义

目的 探讨肿胀激活状态下，传统型蛋白激酶C（cPKC)同工酶亚型在胃癌SGC7901及其耐药细胞系SGC7901/VCR的表达，亚细胞分布变化及其意义。方法 采用免疫荧光及免疫印迹方法，观察正常状态及持续低渗灌流不同时间cPKC同工酶亚型的亚细胞分布变化，利用免疫荧光双标记及共聚焦显微镜技术观察PKCα与-P-糖蛋白（Pgp)的共表达。结果 在正常状态下，cPKC的4种同工酶亚型在胃癌SGC7901及其耐药细胞SCG7901/VCR细胞质及细胞膜均有表达：PKCα在耐药细胞表达呈强阳恬药敏细胞表达呈强阳性，PKCγ在耐药细胞及药敏细胞表达均呈强阳性。持续低渗灌流，在耐药系10min已发现有PKCα、PKCγ的移位及细胞体积的增大；30minPKCα几乎全部移位至细胞膜上，PKCγ部分移位至细胞核内，细胞体积较前增大1-2倍；60min时PKCα及PKCγ基本恢复至正常位置。细胞体积也恢复正常；在药敏细胞系10-20minPKCα及PKCγ几乎全部一笔勾销 位至细胞膜上，PKCγ部分移位至细胞核内，细胞体积也恢复正常；在药敏细胞系10-20minPKCα几乎全部移位至细胞膜上，PKCγ部分移位至细胞核内，细胞体积较前增大1-2倍；40minPKCα及PKCγ基本恢复至正常位置，细胞体积也恢复正常，而PKCβ1及PKCβα在耐药细胞及药敏细胞的亚细胞分布无明显变化。共聚焦显微镜提示PKCα及PKCγ同工酶亚型参与了Pgp与低渗刺激下细胞共表达，以耐药细胞表达明显。结论 只有PKCα及Pgp表达量有关，而PKCβ1及PKCβⅡ可能与这一过程无关。βββ     

肿胀激活状态下蛋白激酶C同工酶亚型在胃癌耐药细胞系的亚细胞分布变化

目的　探讨肿胀激活状态下,传统型蛋白激酶C(cPKC)同工酶亚型在胃癌SGC7901及其耐药细胞系SGC7901/VCR的表达、亚细胞分布变化及其意义。方法　采用免疫荧光及免疫印迹方法,观察正常状态及持续低渗灌流不同时间cPKC同工酶亚型的亚细胞分布变化。利用免疫荧光双标记及共聚焦显微镜技术观察PKCα与P-糖蛋白（Pgp）的共表达。结果　在正常状态下,cPKC的4种同工酶亚型在胃癌SGC7901及其耐药细胞SGC7901/VCR细胞质及细胞膜均有表达PKCα在耐药细胞表达呈强阳性,在药敏细胞表达呈阳性,PKCβ     

佛波酯慢性处理对大鼠血管平滑肌细胞各亚型蛋白激酶C表达的影响

目的观察佛波酯（PMA）慢性处理大鼠血管平滑肌细胞各亚型蛋白激酶C（PKCs）表达的影响。方法原代培养大鼠m管平滑肌细胞,①按照PMA处理浓度将细胞随机分为空白组、0．25％eDMSO组和PMAI、5、10μmol／L组,各组细胞均处理4h;②按照PMA处理时间将细胞随机分为空白组、0．25％eDMSO组和PMA1、4和24h组,PMA组的药物浓度均为10μmol／L。采用Western blotting技术榆测各亚型PKCs蛋白的表达。结果PMA浓度〈10μmol／L处理细胞时间〈4h不影响PKC—α的表达（P〉0．05）,10pmlol／LPMA处理24h能抑制PKC—α的表达（P〈0．05）;PMA浓度〉5μmol／L处理细胞时间〉4h可明显抑制PKC-δ的表达（P〈0．01）,PMA浓度〈5μmlol／L处理细胞时间〈4h对PKC-δ的表达无显著影响（P〉0．05）,10μmol／LPMA处理细胞1h即可明显抑制PKC-δ的表达（P〈0．01）;PMA浓度〉5pμmol／L处理细胞时间〉4h可以明显抑制PKC-θ的表达（P〈0．01）;10μmol／L的PMA处理细胞24h对PKC．∈的表达无明显影响（P〉0．05）。结论PMA慢性处理大鼠血管平滑肌细胞可抑制传统型PKC—α和新型PKC-δ、ε、θ的表达,对非典型PKC-ζ的表达没有影响。     

Bcl-2基因在口腔上皮癌多药耐药细胞的表达

[目的]通过检测Bcl-2基因在口腔上皮癌敏感细胞株（KB）与多药耐药细胞株（KBV）的表达差异,探讨Bcl-2基因在口腔上皮癌细胞多药耐药性发生中的作用。[方法]体外培养口腔上皮癌多药耐药株及敏感株,通过RT-PCR法及免疫荧光法检测Bcl-2基因在KB及KBV细胞中转录及翻译水平的差异,通过MTT法及流式细胞检测技术检测KB及KBV细胞对长春新碱（VCR）敏感度的差异。[结果]免疫荧光图像显示Bcl-2蛋白在KB细胞中弱表达,而在KBV细胞中强表达;RT-PCR检测结果显示,KB细胞Bcl-2/β-actin比值是25.0%,KBV组Bcl-2/β-actin比值为36.1%,两组细胞间差异具有统计学意义（P〈0.01）;MTT法检测结果显示KBV组细胞对长春新碱的耐药性为KB组的16.5倍,流式细胞仪检测结果显示KB细胞凋亡率达（98.8±1.2）%;KBV细胞凋亡率达（23.5±2.1）%,两组间差异具有统计学意义（P〈0.01）。[结论]Bcl-2基因与口腔上皮癌耐药性的发生密切相关。     

胃癌耐药细胞系传统型蛋白激酶C的表达及活性

目的 观察传统型蛋白激酶C（cPKCs）在胃癌耐药细胞系SGC7901／VCR1.0、耐药亚系SGC7901／VCR0.3,7901/0.7及药敏细胞系SGC7901表达及活性的变化,以及对细胞内药物浓度的影响。方法 用免疫荧光化学及蛋白印迹方法观察传统型蛋白激酶C在胃癌耐药细胞系及药敏细胞系的表达;竞争蛋白结合法测定PKC的活性;应用流式细胞仪观察细胞内药物浓度的变化。结果 PKCα,PKCβⅠ,PKCβⅡ及PKCγ在胃癌耐药细胞系及药敏细胞系均有表达,PKCα在耐药细胞表达呈强阳性,在药敏细胞表达呈阳性;PCKβⅠ及PKCβⅡ在耐药细胞及药敏细胞表达均为阳性;PKCγ在耐药细胞及药敏细胞表达均为强阳性。免疫蛋白印迹实验证实,随耐药指数的增加,PKCα表达呈逐渐增高的趋势,薄层扫描蛋白印迹带的吸光度（A）分别为9584.17,9421.06,8534.64,8088.79,而PKCβⅠ、PKCβⅡ及PKCγ在耐药细胞系、耐药亚系及其药敏细胞系表达无明显变化。PKC活性检测结果提示,随耐药指数的增加,PKC活性呈逐渐增高的趋势,以细胞质及细胞核的PKC活性增高为主。结论 传统型蛋白激酶C在维持胃癌耐药细胞系SGC7901／VCR的多药耐药中起重要作用且具有同工酶特异性。     

蛋白激酶C活性、亚细胞分布与KBV200细胞多药耐药性的相关研究

OBJECTIVE: To investigate the relationship between protein kinase C (PKC) and multidrug resistance (MDR) in cancer cell line KBV200. METHODS: MTT assay was used to evaluate the IC50 of vincristine (VCR) and adriamycin (ADR) in KB cell line and its VCR-resistant derivative KBV200 cells. PKC activities in the 2 cell lines were assayed by measuring the incorporation of (32)P from [gamma-(32)P] ATP into the peptide substrates. RESULTS: The IC50 values of VCR and ADR in KBV200 cells was 64.03 and 18.8 folds greater than those in KB cells. PKC activities of the membrane and cytosol fraction in KBV200 cells were increased compared with that in KB cells, with the total PKC activity 1.12-fold higher. Phorbol-12-myristate-13 -acetate increased PKC activity of the membrane fraction and IC50 values of KBV200 cells, while staurosporine worked to the opposite effects. CONCLUSION: PKC may contribute to MDR mechanism in KBV200 cells.     

Correlation of protein kinase C isoform expression with multidrug resistance in KBV200 cells.]

OBJECTIVE: To investigate the association of protein kinase C (PKC) isoforms and multidrug resistance (MDR) mechanism in KBV200 cells. METHODS: Western blotting was utilized to examine the expression and subcellular distribution of PKC isoforms were measured in KBV200 cells with MDR and drug-sensitive KB cells, and the fluorescence intensity of PKC isoforms was detected by flow cytometry (FCM). RESULTS: KBV200 cells possessed higher PKC activities, with increased percentage of membrane fraction. As compared with parental KB cells, the expression of PKCalpha was significantly increased in KBV200 cells, while PKCbeta and epsilon expressions remained unchanged, and PKCgamma and zeta failed to be detected. Fluorescence intensity of PKCalpha in KBV200 cells was increased. CONCLUSION: PKC might contribute to MDR phenotype in KBV200 cells, and of the isoforms so far detected, PKCalpha might play an important role in MDR phenotype.     

NK／LAK细胞对人口腔癌耐细胞药株杀伤活性的观察

OBJECTIVE: To understand the relation between cytotoxic activity of immunologic effector cells and multidrug resistance of the tumor cells. METHODS: Continuous observation of the morphological changes and MTT colorimetry were employed to evaluate the cytotoxic activity of lymphokine-activated killer (LAK) cells and natural killer (NK) cells against multidrug-resistant (MDR) human oral carcinoma cell line-KBV200 (before and after reversal of MDR) and parental drug-sensitive cell line KB. The morphologic changes of LAK cells and the 3 target cell lines were observed continuously under inverted microscope 3 h after co-culture of LAK cells with one of three target cell lines respectively. The lysis rates of three tumor cell lines in response to co-culture with LAK or NK cells were determined using MTT colorimetry. RESULTS: In comparison with the parental drug-sensitive cell line KB, both KBV200 and its reserved cell line by verapamil (KBVV) showed earlier adherence and greater number of cells lysed by LAK. In MTT colorimetry assay, the cytotoxicity of both LAK and NK cells against the 3 cell lines was associated with the effector-to-target (E/T) cell ratio; the lysis rates of KBV200 and reversed KBV200 cells by verapamil in response to LAK and NK cells were higher than that of KB cells (P<0.05), but KBV200 and KBVV did not significantly differ (P>0.05). At the same E/T ratio, LAK cells possessed stronger cytotoxicity than NK cells against all the tumor cell lines (P<0.05). CONCLUSIONS: Immunologic effector cells possess strong cytotoxic activity against multidrug-resistant cell line KBV200. Modulation of MDR does not decrease the cytotoxic activity of the immunologic effector cells. The results of this study suggest that adoptive cell immunotherapy with immunologic effector cells may be of value in controlling the progress of MDR tumors.     

EGCG对裸鼠移植瘤中人口腔表皮样癌耐药细胞凋亡的影响

目的:探讨表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)增敏长春新碱(VCR)对人口腔表皮样癌多药耐药细胞株KBV200裸鼠移植瘤的抑瘤作用及与瘤细胞凋亡的关系.方法:采用KBV200接种于裸鼠皮下,建立耐药肿瘤模型;2周后,EGCG和VCR腹腔注射,联合处理2周;免疫组化法检测瘤组织Bcl-2,Bax的表达;TUNEL法检测细胞凋亡; 流式细胞仪进行细胞周期分析;透射电镜观察瘤组织细胞超微结构的改变.结果:EGCG联合VCR处理治疗后瘤重、肿瘤相对体积明显低于对照组和VCR组(P<0.05),且与EGCG的剂量呈正相关;低、中、高EGCG联合 VCR组Bcl-2的表达明显低于VCR组(P<0.01);低、中、高EGCG联合 VCR组Bax蛋白的表达明显高于VCR组(P<0.01);TUNEL法低、中、高EGCG联合 VCR组凋亡指数明显高于VCR组,与EGCG呈剂量依赖关系; 流式细胞技术显示低、中、高EGCG联合 VCR组G2/M期细胞高于VCR组(P<0.01); 电镜下三个联合用药组瘤组织中可见较多典型的细胞凋亡的形态学表现.结论:EGCG在体内具有增敏VCR对KBV200移植瘤的杀伤作用.机制可能是通过下调Bcl-2蛋白,上调Bax蛋白的表达,从而促进肿瘤细胞的凋亡.     

苦参碱与6种抗肿瘤药联用对KBV200耐药细胞株P-糖蛋白表达的研究

目的探讨6种常用抗肿瘤药物长春新碱、阿霉素、平阳霉素、顺铂、5-Fu、环磷酰胺等与苦参碱联合对KBV200耐药细胞株P-糖蛋白（P-gp）表达的影响。方法以喉癌KBV200耐药细胞株为研究对象，通过流式细胞仪（FCM）检测6种抗肿瘤药物作用于KBV200耐药细胞株后p-Pg表达以及分别联合苦参碱后对p-Pg表达的影响。结果苦参碱分别联合长春新碱、阿霉素作用后，KBV200耐药细胞株P—Pg表达水平下降。结论苦参碱分别与长春新碱和阿霉素联合作用后，可使KBV200耐药细胞株P-pg的表达水平下降，从而逆转其耐药性。