siRNA沉默HIF-1α在缺氧状态下对鼻咽癌细胞VEGF表达的影响

目的观察体外乏氧培养条件下鼻咽癌细胞系CNE-Ⅱ中缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)和血管内皮生长因子(VEGF)的表达,探讨HIF-1α在低氧条件下对鼻咽癌血管生成的调控作用。方法CoCI2化学缺氧法模拟肿瘤缺氧环境,RT-PCR、免疫印迹法(Western blot)分别检测缺氧状态下HIF-1α和VEGF在mRNA和蛋白水平的表达。采用化学合成小干扰RNA(siRNA)介导的RNA干扰技术(RNAi)转染CNE-Ⅱ细胞。观察转染后HIF-1α沉默效果。结果低氧条件下,CNE-Ⅱ细胞HIF-1αmRNA水平稳定,蛋白表达显著升高,而VEGF mRNA和蛋白的表达均显著升高。siRNA转染CNE-Ⅱ后能够显著下调HIF-1α的基因表达,同时VEGF基因的表达也受到明显抑制。结论缺氧促使CNE-Ⅱ细胞HIF-1α在蛋白水平表达升高,并通过转录激活VEGF的机制调控鼻咽癌血管生成。     

抗纤灵药物血清对人肝癌细胞（HepG2）的体外生长抑制作用

目的研究抗纤灵的抑癌作用及分子机制.方法运用血清药理学及免疫组织化学等方法,观察抗纤灵药物血清对人肝癌细胞(HepG2)的体外生长抑制作用及对P21WAF1/CIP1蛋白表达的影响.结果含抗纤灵血清18,9,3g/kg对体外培养的HepG2细胞的细胞生长抑制率(%)分别为63.63±5.08,55.09士4.09,48.08士4.08,细胞毒活性(%)分别为48.06士4.08,38.09士5.01,25.00±4.13,其细胞毒活性均高于空白血清(P＜0.01).含抗纤灵血清各组细胞生长抑制率和细胞毒活性与环磷酰胺血清组比较,差异有显著性或无显著性.含抗纤灵血清18,9,3 g/kg各组HepG2p21WAF1/CIP1蛋白表达高于环磷酰胺血清组及空白血清组(P＜0.01).结论抗纤灵具有抑制人肝癌细胞体外生长的作用,其分子机制与该方提高HepG2p21WAF1/CIP1蛋白表达有关.     

莪术醇抑制人肝癌细胞HepG2增殖的机制

目的:探讨莪术醇在体外对人肝癌HepG2细胞的增殖和细胞周期的影响及其分子机制.方法:体外培养HepG2细胞,采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法观察莪术醇对HepG2细胞增殖的抑制作用,流式细胞术分析莪术醇处理后HepG2细胞的周期分布,TaqMan探针实时荧光定量PCR法及Western印迹检测细胞周期调控相关基因的表达水平.结果:莪术醇对HepG2细胞的增殖具有明显抑制作用,且在一定范围内(2.5～10mg·L-1)呈浓度和时间依赖性;莪术醇诱导HepG2细胞发生G1期阻滞,伴随cyclin D1,CDK2,CDK8,pRB1,p27KIPl mRNA表达水平增高,而cyclin A1的水平则下调,cyclin E1和CDK4的表达不受影响,p53及其下游调控蛋白p21WAF1和Wip1表达水平增高.结论:莪术醇诱导人肝癌HepG2细胞G1期阻滞、抑制细胞增殖,其作用可能通过激活p53与pRB通路,抑制cyclin A1基因的表达和上调p21 WAF1,p27KIP1以及CDK8基因的表达而实现的.     

姜黄素对缺氧诱导的人原发性肝癌细胞HepG2上皮细胞间充质转化的影响

目的 探讨姜黄素对缺氧诱导下人原发性肝癌细胞HepG2上皮细胞间充质转化的影响及其可能机制。方法 将HepG2细胞分3组：正常对照组、氯化钴（CoCl2）组和CoCl2加10 μmol/L姜黄素组。采用MTT法检测细胞增殖能力,划痕实验检测细胞迁移能力,Real-time RT-PCR检测缺氧诱导因子－1α（hypoxia-inducible factor-1α,HIF-1α） mRNA表达,Western blot检测HIF-1α蛋白、E-钙黏蛋白（epithelial-cadherin,E-cadherin）、波形蛋白（Vimentin）表达。结果 HepG2细胞被CoCl2诱导缺氧后,细胞增殖及迁移能力增强,HIF-1α蛋白表达上调,上皮标志蛋白E-cadherin表达下降而间质标志蛋白Vimentin表达上调,与正常对照组比较,差异均有统计学意义（P<0.05）。姜黄素干预缺氧HepG2细胞后,其增殖与迁移能力被明显抑制,同时HIF-1α蛋白表达下降,E-cadherin蛋白表达上调,Vimentin蛋白表达下降,与CoCl2组比较,差异均有统计学意义（P<0.05）。3组HIF-1α mRNA表达比较,差异无统计学意义（P>0.05）。结论 缺氧诱导肝癌细胞HepG2增殖和迁移能力的增强可被姜黄素逆转,可能与姜黄素抑制缺氧诱导的HIF-1α蛋白上调和上皮细胞间充质转化有关。     

姜黄素抑制HepG2细胞HDAC1活性及促进P21WAF1/CIP1表达的研究

目的:研究姜黄素(curcumin,Cur)对HepG2细胞组蛋白去乙酰化酶HDAC1的作用及细胞周期依赖激酶抑制剂P21WAF1/CIP1表达的影响,探讨Cur抗肿瘤的作用机制.方法:培养人肝癌细胞株HepG2,用Cur在不同浓度(6.25,12.5,25,50,100 μmol·L-1)和不同时间(4,8,16,24,48 h)点处理细胞,提取细胞总蛋白和mRNA,Western blot蛋白质印迹技术检测HDAC1和P21WAF1/CIP1蛋白表达,RT-PCR技术检测P21WAF1/CIP1 mRNA的表达水平.结果:Cur对HepG2细胞的半数抑制率(IC50)为25 μmol·L-1.IC50浓度作用4 h,HDAC1表达开始降低,降低作用呈时间依赖性;12.5 μmol·L-1,24 h可引起HDAC1水平降低,但在50～100 μmol·L-1时HDAC1的降低未见明显差别.Cur作用8 h时可见到P21WAF1/CIP1蛋白和mRNA均增加;作用效应呈明显时间和剂量依赖性.结论:Cur明显抑制HDAC1活性和表达,促进P21WAF1/CIP1蛋白和mRNA水平升高.抑制HDAC1活性和促进P21WAF1/CIP1增加可能是Cur抗肿瘤的机制之一.     

解毒消癥饮调控肝癌细胞HIF-1的表达抑制肝癌血管生成的机制研究

目的:解毒消癥饮(JXY)是应用于围手术期消化道肿瘤的临床验方。前期工作表明,其可抑制肝癌血管的生成,可能与下调缺氧诱导因子-1(HIF-1)及血管内皮生长因子(VEGF)的表达有关。但该方如何下调HIF-1及VEGF的表达进而抗肿瘤血管生成的机制尚不清楚。为探讨JXY抑制肝癌血管新生的作用机制,本文从表观遗传学角度出发,考察JXY对组蛋白乙酰基转移酶p300和CBP的表达情况,从分子水平研究该方调控VEGF表达的作用机制。方法:制备JXY乙酸乙酯提取物,体外建立常氧和乏氧条件下HepG2肝癌细胞的培养,MTT法检测不同乏氧时间下HepG2肝癌细胞的存活率,RT-PCR法检测HepG2肝癌细胞VEGF和HIF-1α mRNA水平,用以确定乏氧模型构建成功。MTT法检测不同浓度JXY对乏氧条件下HepG2肝癌细胞存活率的影响,RT-PCR法检测不同浓度JXY对乏氧条件下HepG2肝癌细胞VEGF和HIF-1α mRNA表达水平的影响,Western blot法检测不同浓度JXY对乏氧条件下HepG2肝癌细胞VEGF、HIF-1α、CBP和P300蛋白表达的影响。在体建立HepG2肝癌细胞裸小鼠皮下移植瘤动物模型,随机分为模型组和JXY组,模型组给予生理盐水,JXY组给予0.06 g/kg/d JXY。Western blot法和免疫组织化学法检测瘤体VEGF、VEGFR、HIF-1α蛋白表达的影响。结果:与常氧组比较,随着乏氧时间的延长,HepG2肝癌细胞存活率先降低后升高,在乏氧7h时达到波谷(P0.01)。此时间点HepG2肝癌细胞VEGF和HIF-1α mRNA的表达水平也明显升高。随着JXY浓度的升高,乏氧条件下HepG2肝癌细胞存活率逐渐降低,VEGF和HIF-1α mRNA和蛋白表达水平也受到抑制,呈现剂量依赖性(P0.05或P0.01)。在乏氧条件下HepG2肝癌细胞p300和CBP的蛋白表达水平明显高于常氧组,给予不同浓度JXY后, CBP、P300蛋白的表达量逐渐减弱,有剂量依赖性(P0.05或P0.01)。在体实验也观察到JXY对裸小鼠皮下移植瘤VEGF、VEGFR和HIF-1α蛋白表达水平呈现明显的抑制作用。结论:JXY可能通过抑制组蛋白乙酰基转移酶p300和CBP的表达水平,抑制其与HIF-1α结合形成HIF-1α/p300(CBP)低氧诱导复合物,进而抑制VEGF的转录,最终抑制肿瘤新生血管的生成。     

红景天对低氧条件下内皮细胞HIF-1α、HIF-1β和VEGF表达的影响

目的:观察红景天对低氧条件下人脐静脉内皮细胞表达低氧诱导因子-1α(HIF-1α)、低氧诱导因子-1β(HIF-1β)和血管内皮生长因子(VEGF)的影响。方法:采用XTT比色法检测红景天不同干预时间、浓度对细胞增殖的影响,以确定最佳干预条件;采用SYBRGreenI荧光染料实时定量PCR法检测mRNA表达水平;WesternBlot法检测蛋白表达水平。细胞分3组:正常氧对照组,低氧对照组,红景天干预组。结果:红景天干预的最佳条件为24h、10μg/mL。与正常氧相比,低氧条件下内皮细胞HIF-1α、HIF-1β和VEGF蛋白表达均升高(P<0.01);红景天促进了低氧条件下内皮细胞HIF-1α和VEGF的基因和蛋白表达(P<0.01),而对HIF-1β的基因和蛋白表达没有影响。结论:红景天促进低氧条件下内皮细胞HIF-1α及VEGF的表达可能是红景天抗缺氧和促血管新生作用的机制之一。     

丹参酮ⅡA抑制人宫颈鳞癌细胞SiHa侵袭与诱导凋亡的研究

目的观察丹参酮ⅡA(TanⅡA)对宫颈癌鳞癌细胞SiHa细胞侵袭的抑制作用及诱发细胞发生凋亡情况,探讨其可能作用机制。方法常规体外培养人宫颈鳞癌癌细胞系SiHa,加入0.5、1.0、2.0、5.0 mg/L浓度的TanⅡA,继续培养24 h。通过倒置显微镜观察细胞形态学变化,采用MTT试验检测细胞增殖情况,细胞划痕实验检测TanⅡA对细胞迁移能力的影响,用Transwell小室法检测TanⅡA对SiHa细胞侵袭的抑制作用,激光共聚焦显微镜观察SiHa细胞凋亡变化。Western blotting法检测MMP-2、NF-κB p65蛋白的表达。结果细胞形态学观察显示,不同浓度TanⅡA均可导致细胞形态学发生改变;MTT试验表明,TanⅡA对SiHa细胞的生长有明显抑制作用,且抑制作用随药物浓度的增加而增强(P0.05,P0.01);划痕实验结果显示,随TanⅡA药物浓度的增加,SiHa细胞迁移能力下降(P0.01);Transwell小室实验显示,TanⅡA对SiHa细胞体外的侵袭力具有很强的抑制作用;Western blotting结果表明,TanⅡA给药能够抑制SiHa细胞MMP-2蛋白的表达与NF-κB p65的激活(P0.01)。结论 TanⅡA能够抑制人宫颈鳞癌细胞SiHa细胞侵袭与诱导凋亡,其机制可能与抑制NF-κB蛋白的激活下调MMP-2的表达有关。     

比较红景天水提剂与红景天苷对细胞表达HIF-1α和VEGF的不同影响

目的:比较大花红景天(Radix et Rhizoma Rhodiolae crenulatae)水提剂与红景天苷(Salidroside)对低氧条件下ECV304细胞表达HIF-1α和VEGF的不同影响。方法:细胞分4组:正常氧对照组,低氧对照组,红景天水提剂组,红景天苷组。采用TaqMan探针实时定量聚合酶链式反应(PCR)方法检测mRNA表达水平;Western Blot法检测蛋白表达水平。结果:与正常氧对照相比,低氧促进ECV304细胞HIF-1α和VEGF基因和蛋白表达(P<0.05);同在低氧条件下,红景天水提剂显著促进了ECV304细胞HIF-1α和VEGF的基因和蛋白表达(P<0.01),而红景天苷的促进作用较弱,没有提高低氧时HIF-1α和VEGF的蛋白水平。结论:红景天促进HIF-1α、VEGF表达时,红景天苷不是主要有效成分。     

姜黄素抑制HepG2细胞HDAC1活性及促进P21WAF1/CIP1表达的研究

目的：研究姜黄素(curcumin,Cur)对HepG2细胞组蛋白去乙酰化酶HDAC1的作用及细胞周期依赖激酶抑制剂P21^WAF1/CIP1表达的影响,探讨Cur抗肿瘤的作用机制。方法：培养人肝癌细胞株HepG2,用Cur在不同浓度(6.25,12.5,25,50,100 μmol·L^-1)和不同时间(4,8,16,24,48 h)点处理细胞,提取细胞总蛋白和mRNA,Western blot蛋白质印迹技术检测HDAC1和P21^WAF1/CIP1蛋白表达,RT-PCR技术检测P21WAF1/CIP1 mRNA的表达水平。结果：Cur对HepG2细胞的半数抑制率(IC50)为25 μmol·L^-1。IC50浓度作用4 h,HDAC1表达开始降低,降低作用呈时间依赖性；12.5 μmol·L^-1,24 h可引起HDAC1水平降低,但在50～100 μmol·L^-1时HDAC1的降低未见明显差别。Cur作用8 h时可见到P21WAF1/CIP1蛋白和mRNA均增加；作用效应呈明显时间和剂量依赖性。结论：Cur明显抑制HDAC1活性和表达,促进P21^WAF1/CIP1蛋白和mRNA水平升高。抑制HDAC1活性和促进P21^WAF1/CIP1增加可能是Cur抗肿瘤的机制之一。     

基于STAT3通路探讨沉默星形胶质上调基因-1对人胆囊癌GBC-SD细胞增殖及凋亡的影响

目的探讨沉默星形胶质细胞上调基因-1(AEG-1)对人胆囊癌GBC-SD细胞增殖、凋亡及STAT3信号通路的影响。方法实验分为空白对照组(仅有空质粒,无任何阴性或阳性干扰序列)、阴性对照组(携带AEG-1阴性序列)、RNA干扰组(携带AEG-1基因干扰序列),将人GBC-SD细胞接种于培养板内,按要求进行质粒载体转染细胞操作,采用qPCR法检测各组AEG-1 mRNA表达水平,采用Western blot法检测STAT3、p-STAT3和AEG-1蛋白表达水平,采用MTT法检测各组GBC-SD细胞增殖情况,采用Hoechst 33342染色法检测各组GBC-SD细胞凋亡情况,采用ELISA法检测各组GBC-SD细胞分泌基质金属蛋白酶-2(MMP-2)和基质金属蛋白酶-9(MMP-9)水平。结果与空白对照组和阴性对照组比较,RNA干扰组AEG-1 mRNA及蛋白表达水平和p-STAT3蛋白表达水平均明显降低,GBC-SD细胞增殖明显下降,凋亡率明显增高,MMP-2和MMP-9水平明显降低,差异均有统计学意义(P均0.05)。结论沉默AEG-1可以通过STAT3信号通路抑制人GBC-SD细胞的增殖和诱导其凋亡。     

低氧条件下原代培养人脑胶质瘤细胞中COX-2表达与放射敏感性的关系研究

目的探讨低氧条件下体外培养原代人脑胶质瘤细胞中环氧合酶-2(COX-2)表达与放射敏感性的关系。方法取新鲜人脑胶质瘤组织进行原代细胞培养,待细胞稳定传代后,移入低氧环境中继续培养24 h,然后将实验细胞分为3组,未转染组常规培养,转染空载体组采用含空载体培养液培养,转染COX-2-siRNA组利用基因干扰技术,沉默人脑胶质瘤细胞内COX-2基因的表达,制备COX-2靶向siRNA转染至人脑胶质瘤细胞。转染COX-2-siRNA组确定转染成功后,3组人脑胶质瘤细胞在低氧条件下培养24 h后,均给予5 Gy的~(60)Co γ射线照射。照射后换新培养基低氧条件下继续培养24 h后,Western blot法检测各组人脑胶质瘤细胞COX-2蛋白表达情况,RT-PCR法检测各组人脑胶质瘤细胞COX-2mRNA表达情况,流式细胞仪(FCM)检测各组人脑胶质瘤细胞凋亡率。结果未转染组人脑胶质瘤细胞中COX-2蛋白及mRNA表达情况与转染空载体组比较差异均无统计学意义(P>0.05),转染COX-2-siRNA组人脑胶质瘤细胞COX-2蛋白及mRNA表达水平均明显低于未转染组(P均<0.05),细胞凋亡率明显高于未转染组(P<0.05)。结论低氧条件下,COX-2蛋白及mRNA表达增强是引起人脑胶质瘤细胞产生放疗抵抗的一个独立因素。     

N-马来酰-L-缬氨酸酯姜黄素对胃癌MGC-803细胞周期的影响

目的:研究N-马来酰-L-缬氨酸酯姜黄素(MVC)对胃癌MGC-803细胞周期的作用机制。方法:采用MTT法检测MVC对肿瘤细胞的生长抑制作用;采用流式细胞术检测MVC对MGC-803细胞周期的影响;采用Western blot印迹法检测MVC对MGC-803细胞周期相关基因蛋白p21WAF1/CIP1,Cdc 2和Cyclin B1表达的影响。结果:20μmol.L-1 MVC可明显抑制MGC-803细胞生长,可明显诱导MGC-803细胞S,G/M期阻滞。20μmol.L-1MCV作用MGC-803细胞24 h,p21WAF1/CIP1蛋白表达增高,Cdc 2蛋白表达减少。结论:MVC可通过增加细胞周期相关基因p21WAF1/CIP1蛋白的表达和下调Cdc 2蛋白表达,使MGC-803细胞的周期阻断在S,G2/M期,从而抑制MGC-803细胞的生长。     

补肾活血方冻干粉对低氧诱导HTR-8/SVneo滋养细胞HIF-1α及VEGFA表达的影响

目的:探讨补肾活血方冻干粉对HTR-8/SVneo滋养细胞小管形成、缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)和血管内皮生长因子A(VEGFA)表达的影响及其作用机制。方法:体外常规培养HTR-8/SVneo滋养细胞,采用CoCl2法诱导低氧环境,实验分为空白组、低氧模型组和补肾活血方冻干粉低、中、高剂量组。Tube formation法检测各组细胞小管形成能力,实时定量PCR及Western blotting检测各组细胞HIF-1αmRNA、VEGFA mRNA及其蛋白的表达。结果:小管形成实验结果显示,空白组、低氧模型组和补肾活血方冻干粉低、中、高剂量组形成的小管分支点数分别为12.35±1.25、27.76±1.79、31.61±0.82、33.24±1.22和38.84±1.68。Real-time PCR和Western blotting结果显示,与空白组比较,低氧模型组和补肾活血方冻干粉低、中、高剂量组VEGFA mRNA,以及补肾活血方冻干粉高剂量组HIF-1αmRNA表达均升高(P<0.05);与低氧模型组比较,补肾活血方冻干粉中、高剂量组VEGFA mRNA和补肾活血方冻干粉高剂量组HIF-1αmRNA表达均升高(P<0.05)。与空白组、低氧模型组比较,补肾活血方冻干粉低、中、高剂量组的HIF-1α、VEGFA蛋白表达均升高(P<0.05);与补肾活血方冻干粉低剂量组比较,补肾活血方冻干粉高剂量组HIF-1αmRNA、VEGFA mRNA和蛋白表达均升高(P<0.05);与补肾活血方冻干粉中剂量组比较,补肾活血方冻干粉高剂量组HIF-1α蛋白表达升高(P<0.05)。结论:补肾活血方冻干粉可以提高滋养细胞HTR-8/SVneo小管形成能力,其治疗复发性流产的机制可能与上调HIF-1αmRNA、VEGFA mRNA和蛋白表达相关。     

芹菜素对人肝癌HepG2细胞糖酵解的影响及体内实验研究

目的:探究芹菜素对人肝癌细胞(HepG2)体内、外糖酵解的影响及其作用机制。方法:体外采用溴脱氧尿苷(BrdU)掺入免疫荧光实验检测芹菜素对HepG2细胞增殖的影响;检测芹菜素对肿瘤细胞葡糖糖摄取和乳酸生成的影响;Western blot检测芹菜素对糖酵解相关蛋白-丙酮酸脱氢酶激酶1(PDHK1)、己糖激酶II(HKII)和乳酸脱氢酶A(LDHA)表达的影响;EMSA检测芹菜素对HepG2细胞缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)与DNA结合活性的影响;体内利用HepG2细胞裸鼠模型研究芹菜素对瘤体积、瘤重及瘤组织内糖酵解相关蛋白的影响。结果:在体外,芹菜素在20～80μmol/L可以浓度依赖性地抑制HepG2BrdU阳性细胞的比例(P0.01),抑制HepG2细胞葡糖糖摄取和乳酸生成(P0.01),同时降低糖酵解相关蛋白(PDHK1,HKII,LDHA)的表达(P0.01),并抑制HIF-1α与DNA结合活性(P0.01)。在体内,芹菜素在100、200、400 mg/kg可以抑制裸小鼠移植瘤的生长,抑瘤率分别为22.33%、37.32%和53.67%;芹菜素还可以降低瘤组织内糖酵解相关蛋白的表达。结论:芹菜素在体内外均可以抑制肝癌细胞的增殖和糖酵解,其机制可能是通过抑制HIF-1α与DNA结合活性而起作用的。     

抗纤灵药物血清对人肝癌细胞体外生长的抑制及机理研究

目的研究抗纤灵的抑癌作用及分子机理.方法采用人肝癌细胞(HepG2)体外培养,血清药理学及免疫组织化学等方法.结果含抗纤灵血清18、9、3g/kg对体外培养的HepG2细胞的细胞生长抑制率分别为63.09%±5.08%,55.09%±4.09%,48.08%±4.08%,细胞毒活性分别为48.06%±4.08%,38.09%±5.01%,25.00%±4.1 3%,其细胞毒活性均高于空白血清(P＜0.01).含抗纤灵血清各组细胞生长抑制率和细胞毒活性与环磷酰胺血清比较,差异有显著性或无显著性(P＜0.05或P＞0.05).含抗纤灵血清1 8、9、3g/kg体重各组HepG 2 P 21WAF1/CIP1蛋白表达高于环磷酰胺血清组及空白血清组((P均＜0.01).结论抗纤灵具有抑制人肝癌细胞体外生长的作用,其分子机理与该方提高HepG 2 P 21WAF1/CIP1蛋白表达有关.     

丹参酮ⅡA对血管紧张素Ⅱ诱导的大鼠心肌间质成纤维细胞α-平滑肌动蛋白表达的影响

目的研究丹参酮ⅡA(TanⅡA)对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导的大鼠心肌间质成纤维细胞α-平滑肌动蛋白(SMA)表达的影响。方法体外培养大鼠心肌间质成纤维细胞,分为正常对照组、AngⅡ刺激组和TanⅡA干预组。免疫荧光法和Western免疫印迹法检测各组转分化肌成纤维细胞中标志蛋白α-平滑肌动蛋白(α-SMA)的表达。结果免疫荧光检测显示,细胞培养24 h后对照组胞浆中仅有少量α-SMA表达,而经AngⅡ作用后,α-SMA表达量明显增多。AngⅡ干预心肌间质成纤维细胞不同时间点,Western免疫印迹法显示α-SMA表达量逐渐增加。AngⅡ的这种诱导心肌间质成纤维细胞发生肌成纤维细胞转分化作用可被含TanⅡA的培养液所抑制,且呈剂量和时间依赖性。结论 TanⅡA能有效地抑制大鼠心肌间质成纤维细胞的转分化,此作用可能与其能下调AngⅡ诱导的α-SMA过表达有关。     

人参皂苷Rg3在低氧条件下诱导人喉鳞癌细胞(Hep-2)凋亡及对HIF-1α表达的影响

目的:研究在低氧条件下人参皂苷Rg3对人喉鳞癌细胞(Hep-2)生长的抑制作用以及可能的机制.方法:体外低氧培养Hep-2人喉鳞癌细胞株,同时设立阴性对照组与阳性对照组(顺铂),采用MTT法检测常氧和低氧条件下,人参皂苷Rg3对Hep-2生长的抑制作用;流式细胞术测定各组细胞周期分布及细胞凋亡情况;应用免疫细胞化学技术和流式细胞技术检测Hep-2细胞在人参皂苷Rg3作用下HIF-1α蛋白表达的变化;应用RT-PCR技术检测HIF-1α mRNA表达的变化.结果:不同浓度的Rg3对Hep-2细胞的生长均有抑制作用,且呈剂量依赖关系.常氧和低氧条件下Rg3处理后细胞均阻滞于G0/G1期,低氧Rg3组凋亡率增加.Rg3不同氧供条件下均能下调因缺氧增加的HIF-1α的蛋白表达,同时下调HIF-1α mRNA水平.结论:人参皂苷Rg3对人喉鳞癌细胞Hep-2生长有抑制作用,其抑制作用可能是通过抑制细胞周期进程,诱导细胞凋亡实现的.缺氧条件下Rg3抑制HIF-1α的表达,可能是Rg3抗肿瘤作用的机制之一.     

大黄素对低氧环境下SGC7901细胞HIF-1α和E-cadherin的影响

目的:探讨大黄素对低氧环境下胃癌SGC7901细胞增殖及缺氧诱导因子-1α(hypoxia-inducible factor,HIF-1α)和E-钙黏蛋白(E-cadherin)表达的影响。方法:低氧环境培养胃癌SGC7901细胞,应用不同浓度的大黄素干预12,24,36,48 h,设实验组(10,20,40,80,160μmol/L)和对照组(含DMSO的培养基)。MTT实验检测细胞增殖情况;倒置显微镜下动态观察细胞数量及形态变化;免疫组织化学方法检测癌细胞中HIF-1α和E-cadherin的表达。结果:低氧环境下,大黄素可明显抑制胃癌细胞SGC7901的增殖,且呈现浓度和时间依赖性(P﹤0. 05);细胞数目不断减少;细胞形态由原多边形逐渐变成小圆形;细胞与细胞之间的距离增大,连接消失,但细胞表面的突起逐渐变得粗大、延长;免疫组化结果显示HIF-1α的表达随大黄素浓度增加而降低,而E-cadherin的表达则呈上升趋势,两者呈负相关(r=-0. 646,P=0. 023 0. 05)。结论:低氧环境下,大黄素可通过抑制HIF-1α的表达、促进E-cadherin的表达来阻止肿瘤细胞增殖。     

加减驻景方含药血清对CoCl_2诱导ARPE-19细胞表达VEGF及HIF-1α的影响

目的探讨加减驻景方含药血清对二氯化钴(CoCl_2)诱导后人视网膜色素上皮细胞(ARPE-19细胞系)中血管内皮生长因子(VEGF)及缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)蛋白表达的影响。方法 1.体外培养ARPE-19细胞,取对数生长良好的细胞用于实验,分为正常组,缺氧模型组,阳性对照组、含药血清组,并设立不同时间点。2.酶联免疫吸附试验(ELISA)观察CoCl_2诱导后不同时间、各组细胞上清液中HIF-1α的表达。3.蛋白质印迹法(Western blot)观察CoCl_2诱导后不同时间、各组细胞中VEGF、HIF-1α的表达情况。结果缺氧损伤后可诱导ARPE-19细胞中VEGF、HIF-1α蛋白的表达增加;与正常组比较,缺氧模型组VEGF及HIF-1α的表达高于正常组,差异具有统计学意义(P0.05);含药血清组与模型组比较,VEGF及HIF-1α的表达低于模型组,差异具有统计学意义(P0.05)。结论加减驻景方含药血清对缺氧损伤后ARPE-19细胞中VEGF、HIF-1α蛋白的表达有抑制作用。