纳米材料PEG-PEI介导双基因促体外拟神经细胞凋亡的作用

目的 探讨新型纳米材料PEG-PEI介导的双基因pIRES2-EGFP/CD-5-FC和pIRES2-EGFP/TRAIL在体外对拟神经细胞模型(神经母细胞瘤株SH-SY5Y细胞)的联合杀伤作用.方法 将PEG-PEI介导的联合基因pIRES2-EGFP/CD-5-FC和pIRES2-EGFP/TRAIL转染SH-SY5Y细胞后,采用MTT法观察其对SH-SY5Y细胞的杀伤作用,荧光显微镜下观测以及流式细胞仪检测SH-SY5Y细胞凋亡率及FPEG-PEI的转染效率.结果 N/P=15时PEG-PEI转染两种目的基因中单一基因的细胞凋亡作用最强(P＜0.01);两种基因联合转染SH-SY5Y细胞时的细胞凋亡率为77％,较单一基因转染的细胞凋亡率提高了27％ (P ＜0.01).结论 CD-5 -FC和TRAIL基因在体外联合转染对SH-SY5Y细胞的杀伤作用较单一基因更强;PEG-PEI可以作为神经细胞基因靶向传输的载体行神经系统疾病基因治疗的体内实验研究.     

超抗原葡萄球菌肠毒素A对肝癌细胞免疫原性影响的研究

目的给肝癌细胞转入超抗原分子葡萄球菌肠毒素A(staphylococcal enterotoxin A,SEA)的编码基因,使其表达这种毒素分子,以增强肝癌细胞的免疫原性,达到增强肝癌细胞诱导免疫排斥反应的目的.方法构建SEA编码基因的逆转录真核表达载体,转染病毒包装细胞系PA317后,行滴度测定.以高滴度克隆培养上清转导肝癌细胞株HHCC,筛选获得阳性表达株.然后利用外周血混合淋巴细胞进行杀伤实验.结果成功的构建了SEA的逆转录真核表达载体pLXSN-SEA,转导肝癌细胞后,获得表达SEA分子的阳性克隆HHCC-SEA.培养上清中SEA含量在pg的水平.外周血混合淋巴细胞杀伤实验结果显示,T淋巴细胞对转导后肝癌细胞的杀伤率可达45.6%.高于对HHCC 20.7%的杀伤率,T细胞对转导后肝癌细胞杀伤反应的Km值为5.18×104,而HHCC组的Km值为2.92 × 105,与前者的差别有统计学意义.结论肝癌细胞在转入SEA分子的编码基因后,表达出微量的SEA蛋白,却具有较强的免疫激活能力.即表达SEA的肝癌细胞在很低的浓度下,激活的T细胞即可对其达到最大杀伤反应速度,对T细胞的激活能力远远高于HHCC.     

HBV抗原基因修饰树突状细胞疫苗体外抗HBV的作用

目的：探讨腺病毒载体介导HBV抗原基因修饰的树突状细胞(DCs)诱导抗HBV特异性CTL反应方法：制备携带HBsAg、HBeAg和HBcAg基因的3种重组腺病毒Ad-HBs,Ad-HBe,Ad- HBc,分别转染自脐带血体外诱导培养的DCs,观察腺病毒转染DCs效率和DCs中HBV抗原的表达；混合淋巴细胞反应(MLR)测定HBV抗原基因修饰DCs刺激同种异体T淋巴细胞增殖能力；乳酸脱氢酶释放法检测特异性CTL细胞对HepG_222．1．5靶细胞的杀伤能力．结果：腺病毒载体能够高效介导HBV三个抗原基因在DCs中表达,90%以上DCs表达示踪基因EGFP,且DCs细胞形态完整：感染后72 h HBsAg和HBeAg含量分别为0．919和0．328(吸光度A值)．MLR实验显示,HBV抗原基因修饰DCs仍然具有刺激同种异体T细胞的增殖能力,Ad-HBs转染DCs组、Ad-HBe转染DCs组、Ad-HBc转染DCs组和未转染DCs组之间刺激T细胞的增殖水平无明显差异(F=1．194,P=0．389)；在E：T比例为2：1,10：1和25：1时,Ad-HBs转染DC组、Ad-HBe转染DCs组和Ad-HBc转染DCs组对HepG_222．1．5细胞的杀伤率均明显高于未转染DCs组(P＜0．001)；以Ad- HBc转染DC组对HepG_222．1．5细胞杀伤率最高．结论：HBV抗原基因修饰DCs疫苗具有刺激同种异体T细胞增殖能力,同时能增强抗HBV特异性CTL反应的能力,可能发展为一种新型抗病毒疫苗．     

华支睾吸虫CsSCCRO基因的表达和鉴定

目的将目的基因CsSCCRO转染Hela细胞,检测转染效率和表达水平,为进一步在细胞学水平研究编码蛋白的功能提供依据。方法将目的基因CsSCCRO克隆到真核表达载体pEGFP-N1上,通过脂质体方法转入Hela细胞,RT-PCR和荧光观察来鉴定转录和表达水平。结果真核重组质粒pEGFP-N1-CsSCCRO转入Hela细胞后稳定表达荧光蛋白;RT-PCR鉴定转染的Hela细胞,扩增产物约为780bp,与预期值相符。结论CsSCCRO基因能够转染到Hela细胞中,并且能与GFP高效转录和翻译成融合蛋白。     

Ad-Gax转染对缺氧性大鼠肺动脉平滑肌细胞凋亡及其相关基因表达的影响

目的观察Gax基因转染对缺氧性肺动脉平滑肌细胞（PASMCs）凋亡及其相关基因表达的影响。方法腺病毒介导Gax转染体外原代培养的PASMCs。透射电镜观察细胞凋亡形态;原位细胞凋亡检测法观察Ad-Gax转染前后在常氧和缺氧处理2h,6h、12h、24h、48h大鼠PASMCs凋亡情况;免疫细胞化学法测PASMCsBcl-2、Bax蛋白表达。结果透射电镜观察到Ad-Gax转染后PASMCs产生凋亡现象。未转染缺氧刺激前后,均无或可见极少量的阳性细胞;Ad-Gax转染后,如无缺氧刺激,也无或仅可见少量的阳性细胞,予缺氧刺激后,阳性细胞显著增多,尤其在转染后24～48h更明显。转染组常氧、缺氧2h,6h、12h、24h、48h细胞凋亡百分率均显著高于未转染组（P〈0．01）。Ad-Gax转染前,与常氧时比较,缺氧刺激PASMCs后,Bax蛋白表达略为升高但无统计学意义;而Bcl-2蛋白表达显著升高,差异有统计学意义（P〈0．05）。Ad-Gax转染PASMCs后,缺氧刺激使Bcl-2蛋白表达显著降低（P〈0．01）,Bax蛋白表达显著增高（P〈0．01）。转染组细胞凋亡率与Bcl-2／Bax比值呈负相关（r=-0．53,P〈0．01）。结论Ad-Gax转染可诱导缺氧性PASMCs凋亡,其机制可能是通过上调Bax蛋白和下调Bcl-2蛋白的表达,尤其是通过降低Bcl-2／Bax比值实现的。     

共表达HIV-1的gag-gp120与IL-2的pGPIL-2诱导小鼠产生细胞毒性T细胞的研究

目的 研究HIV-1CN融合基因与IL-2基因共表达基因质粒pGPIL-2诱导产生细胞毒性T细胞（CTL）。方法 脂质体介导共表达中国流行株HIV-1gag-gp120基因与IL-2基因的基因疫苗质粒pGPIL-2转染BHK-21细胞,以间接免疫荧光法鉴定其表达。取pGPIL-2免疫鼠脾细胞,检测pGPIL-2诱导的细胞毒性T细胞杀伤活性。结果 杀伤实验结果证明,经基因免疫获得的 CTL效应细胞,可杀伤 HIV-1CN 融合基因转染的靶细胞。结论 pGPIL-2可有效地诱导 CTL的产生,该研究结果为进一步设计中国流行株HIV-1基因疫苗提供了重要实验依据。     

TFPI基因转染对血管平滑肌细胞中细胞凋亡抑制蛋白的调控

目的研究组织因子途径抑制物(TFPI)基因转染对大鼠血管平滑肌细胞中细胞凋亡抑制蛋白(IAP)表达的影响,探讨TFPI诱导细胞凋亡的可能机制。方法将含有人TFPI基因的重组腺病毒或含β-半乳糖苷酶(LacZ)基因的重组腺病毒或DMEM在体外分别转染大鼠血管平滑肌细胞,用ELISA方法测定转染后细胞中TFPI蛋白的表达水平,用RT-PCR方法测定基因转染后不同时间点细胞中c-IAP1mRNA的表达,用Western-blot方法检测基因转染后不同时间点细胞中survivin的表达。结果基因转染后1天在血管平滑肌细胞中即可检测到TFPI蛋白表达,峰值出现在转染后第3天;基因转染后3天和7天,TFPI组c-IAP1 mRNA的表达与对照组相比明显减少(P0.05);基因转染后3、5、7天,TFPI组survivin的表达与对照组相比明显减少(P0.05),且具有明显的时间依赖性。结论 TFPI可能通过抑制IAP的表达来发挥诱导平滑肌细胞凋亡的作用,从而抑制冠状动脉介入治疗后再狭窄发生。     

共表达HIV—1的gag—gp120与IL—2的pGPIL—2诱导小鼠产生细胞毒性T细胞的研究

目的：研究HIV－1CN融合基因与IL－2基因共表达基因质粒pGPIL-2诱导产生细胞毒性T细胞（CTL）。方法：脂质体介导共表达中国流行株HIV－1gag-gp120基因与IL－2基因的基因疫苗质粒pGPIL-2转染BHK－21细胞，以间接免疫荧光法鉴定其表达。取pGPIL-2免疫鼠脾细胞，检测pGPIL-2诱导的细胞毒性T细胞杀伤活性。结果：杀伤实验结果证明，经基因免疫获得的CTL效应细胞，可杀伤HIV－1CN融合基因转染的靶细胞。结果：pGPIL-2可有效地诱导CTL的产生，该研究结果为进一步设计中国流行株HIV-1基因疫苗提供了重要实验依据。     

慢病毒载体介导绿色荧光蛋白基因转染血管内皮祖细胞的实验研究

目的探讨HIV-1来源的慢病毒载体介导绿色荧光蛋白（GFP）基因转染血管内皮祖细胞（EPCs）的可行性和方法。方法用梯度密度离心法分离人脐带血内皮祖细胞,在EGM-2培养基中培养。用细胞免疫荧光染色和流式细胞仪检测其表达情况。以HIV-1来源的慢病毒为载体、以GFP基因为目的基因转染EPCs,MTT法检测不同病毒滴度（MOI）时细胞增殖情况并观察转染率。结果单个核细胞经EGM-2培养基培养1周后即分化成EPCs。GFP转染后48 h细胞即发出绿色荧光。MOI 1∶10转染组细胞转染率低于MOI 1∶50组（P〈0.05）。MOI 1∶50转染后的细胞与未转染GFP组比较,生长曲线无明显差异（P〉0.05）。MOI 1∶100组转染后细胞的增殖处于停滞状态。结论采用HIV-1来源的慢病毒载体介导GFP基因转染标记EPCs是可行的。以MOI 1∶50进行转染对细胞生长影响小,转染效率高。     

丙型肝炎病毒核心区蛋白对 HepG2细胞周期、细胞凋亡和细胞端粒酶活性的影响

目的　研究丙型肝炎病毒核心区 (HCV C)蛋白对肝癌细胞HepG2细胞周期、细胞凋亡和细胞端粒酶活性的影响。方法　首先运用基因重组技术构建含有HCV C基因的真核表达质粒pcDNA3.1( ) ,然后利用脂质体介导将重组真核表达质粒转染HepG2 ,经G4 18筛选获得稳定转染HepG2细胞 (HCV C转染HepG2细胞 ) ,经逆转录 聚合酶链反应技术 (RT PCR)和间接免疫荧光法证实其中有HCV C蛋白表达。然后进行如下实验 :( 1)利用四甲基偶氮唑蓝比色 (MTT)法检测HCV C转染HepG2细胞、空白质粒转染HepG2细胞和未转染HepG2细胞的生长增殖率 ;经流式细胞术(FACS)检测 3组细胞的细胞周期 ;( 2 )经流式细胞术检测细胞凋亡率 ;( 3)经端粒重复扩增 酶联免疫吸附试验 (TRAP ELISA)法检测上述 3组细胞端粒酶活性表达情况。结果　 ( 1)HCV C转染HepG2细胞增殖率显著高于空白质粒转染HepG2和未转染HepG2细胞增殖率 ;HCV C转染HepG2细胞S期所占百分率高于未转染HepG2细胞S期所占百分率 ;( 2 )HCV C转染HepG2细胞凋亡率显著低于无HCV C转染细胞凋亡率 ;( 3)上述 3组细胞端粒酶活性之间差异无显著性。结论　 ( 1)HCV C蛋白具有抑制细胞凋亡的作用 ;( 2 )HCV C蛋白促进HepG2从G0 /1期进入S期 ,从而可能促进细胞生长增殖 ,抑制细胞凋亡 ;( 3)HCV     

抗增殖蛋白过表达对HepG2细胞增殖和凋亡的影响*

目的 探讨抗增殖蛋白（PHB）过表达对人肝癌细胞系HepG₂细胞增殖和凋亡的影响。方法 在已构建的PHB真核表达质粒pEGFP-N1-PHB瞬时转染HepG₂细胞,采用四甲基偶氮唑盐比色法（MTT法）检测HepG₂细胞增殖;使用流式细胞仪检测HepG₂细胞周期和凋亡。结果 转染pEGFP-N1-PHB细胞增殖明显低于pEGFP-N1空载转染细胞或未转染细胞（P<0.05）;在转染后48 h,转染组G2/M期细胞比例为（27.84±0.47）%,显著高于空载转染组的（17.21±0.64）%或未转染组的（22.67±0.33）%（P<0.001）;转染组细胞凋亡率为（31.72±0.35）%,显著高于空载转染组的（18.66±0.56）%或未转染组的（13.47±0.94）%（P<0.001）。结论 PHB过表达可抑制人肝癌HepG₂细胞增殖,诱导细胞进入G2/M期后被阻滞,并诱导细胞凋亡。     

人胆固醇酯水解酶真核表达载体的构建及U937细胞系的转染

目的构建人胆固醇酯水解酶（hCEH）绿色荧光蛋白真核表达载体pEGFP-N1-hCEH,并观察其转染单核巨噬细胞株U937后,细胞中hCEH的表达情况。方法以人肝细胞L-O2总RNA为模板,采用RT-PCR技术扩增hCEH编码区序列,将扩增片段插入到pMD19-T载体中,回收、纯化目的片段后亚克隆到pEGFP-N1真核表达载体上,经双酶切、测序鉴定后,转染U937,观察U937中绿色荧光蛋白的表达情况。结果 RT-PCR扩增hCEH基因的编码区序列获得1条约1.7 kb的片段,与预期片段大小相符;以pEGFP-N1为载体,成功构建重组表达质粒pEGFP-N1-hCEH,该质粒可以在U937中表达。结论成功构建pEGFP-N1-hCEH,用其转染U937后,细胞中pEGFP-N1-hCEH大量表达。     

间隙连接蛋白43对胰腺癌细胞株BxPC3凋亡的作用及其机制研究

目的研究间隙连接蛋白43（Cx43）在胰腺癌细胞凋亡中的作用,并探讨其机制。方法采用脂质体2000法将pcDNA—Cx43、pcDNA—Cx43N、空质粒pcDNA3．0、siRNA—Cx43和对照siRNA-NC分别转染BxPC3细胞。Western blotting检测细胞Cx43蛋白表达、细胞色素C（Cyt C）含量;流式细胞仪检测细胞凋亡、线粒体膜电位;荧光分光光度计检测细胞Caspase-9和Caspase-3活性;染料传递法测定细胞间间隙连接（GJ）。结果Cx43转染BxPC3细胞后,Cx43蛋白表达明显上调,细胞凋亡从空质粒转染组的（6．35±0．43）％增加到（14．29±1．24）％,经H2O2处理后,从（20．34±2．47）％增加到（31．27±2．56）％（P〈0．05）,同时线粒体膜电位下降,CytC从线粒体释放增多,Caspase蛋白酶活性增加;而siRNA43干扰细胞后,细胞凋亡从（7．42±0．47）％减少到（5．19±1．37）％,经H2O2处理后,从（19．43±1．71）％减少到（11．67±1．97）％（P〈0．05）,线粒体膜电位去极化,CytC从线粒体释放减少,Caspase酶活性下调。细胞间间隙连接指数在无GJ抑制剂B—GA情况下从对照组的14．52±0．57增加到pcDNA—Cx43转染组的23．05±3．84,在存在β—GA情况下从1．70±0．24增加到3．84±0．45（P〈0．05）,但细胞凋亡率改变无显著差异。结论Cx43可通过线粒体凋亡途径促进BxPC3细胞凋亡,Cx43调节细胞凋亡存在间隙连接以外的机制。     

Superantigen-SEA gene modified tumor vaccine for hepatocellular carcinoma： An in vitro study

AIM: To construct an eukaryotic superantigen gene expression vector containing the recombinant gene of SEA and CD80 molecule transmembrane region (CD80TM), and to express staphylococcus enterotoxin A (SEA) on the membrane of hepatocellular carcinoma (HCC) cell to form a superantigen gene modified tumor vaccine for HCC. METHODS: SEA and linker-CD80TM gene were amplified through PCR from plasmid containing cDNA of SEA and CD80. Gene fragments were then subcloned into the multiple cloning sites of retroviral vector pLXSN. Recombinant plasmid was transferred into HepG2 cells mediated with lipofectamine, positive clones were selected in culture medium containing G418. RT-PCR and indirect immunofluorescence studies confirmed that SEA was expressed specifically on HCC cell membrane. INFgamma-ELISPOT study demonstrated that SEA protein was expressed on the membrane of HCC cells. Cytotoxicity of HepG2-SEA primed CTLs (SEA-T) was analyzed by (51)Cr release assay. T cells cultured with rhIL-2 (IL-2-T) were used as control. RESULTS: Restriction digestion and sequence analyses confirmed the correctness of length, position and orientation of inserted fusion genes. SEA was expressed on the surface of HepG2 cells, HepG2-SEA had strong stimulating effect on production of HepG2 specific CTL (P<0.001). SEA-T had enhanced cytotoxicity to HepG2 cells (P<0.05). CONCLUSION: Tumor cell membrane expressed superantigen can be used to reinforce the immune effect of tumor cell vaccine for HCC, which provides a new method of the enhanced active immunotherapy for HCC.     

胰腺癌Capan-2细胞总RNA转染树突细胞诱导特异性抗肿瘤免疫反应的体外研究

目的 观察人胰腺癌Capan-2细胞总RNA转染的树突细胞（DCs）所诱导的抗肿瘤免疫反应.方法 从6例胰腺癌患者外周血单核细胞中分离、培养DCs.使用电穿孔法将Capan-2细胞总RNA及MUC4 mRNA分别转染DCs.应用四甲基偶氮唑蓝（MTT）法检测转染后DCs的存活率.采用蛋白质印迹法检测DCs中MUC4 mRNA的表达.使用IFN-γ酶联免疫法检测DCs诱导的细胞毒T淋巴细胞（CTLs）的活化反应.采用51Cr标准细胞毒实验检测DCs诱导的抗原特异性CTLs对体外胰腺癌细胞的杀伤效应.结果 Capan-2细胞总RNA转染的DCs（DC-Capan-2-total RNA）的存活率呈时间依赖性下降,转染后96 h的存活率降低至60.8％,而转染MUC4 mRNA的DCs（DC-MUC4 mRNA）的存活率稳定在80.0％左右,两转染组DCs的差异具有统计学意义（P＜0.05）.DC-Capan-2-total RNA的MUC4蛋白表达量亦显著低于DC-MUC4 mRNA（P＜0.05）.DC-Capan-2-total RNA诱导的CTLs 24 h IFN-γ释放量为（89.34±3.85） U/ml,DC-MUC4 mRNA为（21.77±2.14） U/ml,两转染组的差异有统计学意义（P＜0.05）.DC-Capan-2-total RNA诱导的特异性CTLs能够有效识别和杀伤HLA-A2 ＋/MUC4＋的Capan-2细胞及HLA-A2 ＋/MUC4-的PANC1细胞,而不能有效识别和杀伤HLA-A2-/MUC4-的MiaPaCa-2细胞和HLA-A2-/MUC4＋的AsPC-1细胞.结论 胰腺癌细胞总RNA转染的DCs较单个胰腺癌相关抗原转染的DCs能诱导出更加显著的CTLs抗肿瘤免疫反应,但受到MHC Ⅰ类抗原递呈的限制.     

p15^INK4B基因对人胰腺癌细胞系BxPC3增殖的影响

目的探讨p15^INK4B（p15）基因转染对人胰腺癌细胞系BxPC3细胞增殖的影响。方法采用脂质体将pCDNA3．1（＋）-p15质粒及阴性对照pCDNA3．1（＋）-neo质粒转染BxPC3细胞,以亲本细胞作为对照组。应用RT—PCR检测细胞p15^INK4B表达;Western blotting检测细胞p15蛋白表达;MTF法检测细胞增殖;透射电镜观察细胞超微结构变化;流式细胞仪检测细胞周期和凋亡率。结果p15转染组细胞恢复p15^INK4B和蛋白表达。培养第2天生长被抑制,至第7天,生长抑制率达47．9％。G0／G1期细胞占（61．56±3．96）％,显著高于空质粒转染组的（47．44±6．35）％和对照组的（49．22±7．23）％（P〈0．05）。出现明显的G1凋亡峰,细胞凋亡率为（5．27±1．04）％,显著高于空质粒转染组的（0．11±0．06）％和对照组的（0．09±0．07）％（P〈0．05）。透射电镜观察到p15转染组发生细胞凋亡。结论体外p15基因转染可以抑制人胰腺癌细胞系BxPC3细胞增殖,并能诱导其凋亡。     

Monoclonal antibody-superantigen fusion proteins: tumor-specific agents for T-cell-based tumor therapy.

The bacterial superantigen staphylococcal enterotoxin A (SEA) is an extremely potent activator of T lymphocytes when presented on major histocompatibility complex (MHC) class II molecules. To develop a tumor-specific superantigen for cancer therapy, we have made a recombinant fusion protein of SEA and the Fab region of the C215 monoclonal antibody specific for human colon carcinoma cells. SEA as part of a fusion protein showed a > 10-fold reduction in MHC class II binding compared to native SEA, and accordingly, the affinity of the FabC215-SEA fusion protein for the C215 tumor antigen was approximately 100-fold stronger than to MHC class II molecules. The FabC215-SEA fusion protein efficiently targeted T cells to lyse C215+ MHC class II- human colon carcinoma cells, which demonstrates functional substitution of the MHC class II-dependent presentation of SEA with tumor specificity. Treatment of mice carrying B16 melanoma cells expressing a transfected C215 antigen resulted in 85-99% inhibition of tumor growth and allowed long-term survival of animals. The therapeutic effect was dependent on antigen-specific targeting of the FabC215-SEA fusion protein, since native SEA and an antigen-irrelevant FabC242-SEA fusion protein did not influence tumor growth. The results suggest that Fab-SEA fusion proteins convey superantigenicity on tumor cells, which evokes T cells to suppress tumor growth.     

抗日本血吸虫可溶性虫卵抗原IgY的制备及初步应用

目的 目的 制备抗日本血吸虫可溶性虫卵抗原 （Soluble egg antigen, SEA） 鸡卵黄免疫球蛋白 （Egg yolk immunoglobu? lin, IgY）, 探讨其应用于血吸虫病流行区查病的可行性。 方法 方法 在血吸虫病流行区采集间接红细胞凝集试验 （IHA） 阳性 者尿液, 在非流行区采集健康人尿液。以SEA经皮下注射免疫莱杭母鸡获得anti?SEA IgY, 以十二烷基磺酸钠?聚丙烯酰 胺凝胶电泳 （SDS?PAGE） 测定其相对分子量; 并以anti?SEA IgY作为捕捉抗体, 采用双抗体夹心法ELISA检测IHA阳性者 和健康人尿液中的血吸虫循环可溶性虫卵抗原 （Circulating soluble egg antigen, CSEA）。 结果 结果 成功制备并纯化anti? SEA IgY。共检测IHA阳性者尿液48份, 在尿液中检出CSEA阳性26例, 检出率为54.17%; 检测健康人尿液10份, 均为阴 性。 结论 结论 基于IgY的免疫诊断技术可有效检出人尿液中CSEA, 其作为一种便捷、 无创伤的新方法可应用于血吸虫病 查病工作中。     

胃腺癌BGC-823细胞总RNA转染人树突状细胞分泌exosomes的抗肿瘤效应研究

目的研究人外周血树突状细胞（DC）体外经人胃腺癌BGC-823细胞系总RNA转染后,提取培养上清液中DC分泌的外泌体（exosomes）,诱导出特异性抗胃癌效应。方法分离外周血单核细胞,经GM-CSF、IL-4培养5d后,获得未成熟DC（imDC）;体外以脂质体转染BGC-823细胞总RNA。第7天收集上清,利用超速离心法提取exosomes。分别将DC以及exosomes与T淋巴细胞共培养3d,获得细胞毒T淋巴细胞（CTL）,检测CTL对BGC-823细胞的杀伤作用。结果与未转染组相比,转染BGC-823总RNADC来源的exosomes明显促进T细胞对BGC-823的杀伤活性（P〈0．05）。结论应用BGC-823总RNA转染DC分泌exosomes能够诱导出强烈的抗肿瘤免疫反应。