急性痛风性关节炎患者治疗前后外周血单核细胞NLRP3炎性体mRNA表达及血清IL-1β水平的研究

目的:检测急性痛风性关节炎(acute gouty arthritis,AGA)患者治疗前后外周血单核细胞(peripheral blood monocytes,PBMCs)中NLRP3炎性体[NLRP3、凋亡相关斑点样蛋白(ASC)、半胱天冬酶-1(caspase-1)]mRNA表达水平及血清白介素-1β(IL-1β)水平的变化,探讨该炎性体及IL-1β在AGA发病中可能的作用机制。方法:用RT-PCR法检测100名健康查体者(对照组)和100例AGA患者(观察组)治疗前(D0)及应用药物治疗后第3天(D3)、第7天(D7)、第14天(D14)NLRP3炎性体mRNA表达水平,同时用ELISA法测定相应IL-1β水平。比较两组患者生理指标和血生化指标的差异。结果:观察组NLRP3 mRNA表达水平D0、D3及D7与对照组比较均降低,差异均有统计学意义(P0.01);观察组各阶段ASC mRNA表达水平与对照组比较均升高,差异均有统计学意义(P0.05);观察组caspase-1 mRNA表达水平,D0和D3与对照组比较均降低,差异均有统计学意义(P0.01)。观察组血清IL-1β水平在D0、D3、D7与对照组比较均升高,差异均有统计学意义(P0.01)。结论:NLRP3炎性体及IL-1β在AGA患者治疗过程中水平异常,提示其在AGA发病中参与了炎症反应过程,在炎症机制中可能发挥了重要作用。     

血清IL-1β、IL-6、IL-18及TNF-α水平在急性痛风性关节炎镇痛治疗不同时间动态变化的研究

目的:检测急性痛风性关节炎(acute gouty arthritis,AGA)患者镇痛治疗不同时间血清白细胞介素(interleukin,IL)-1β、IL-6、IL-18及肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor,TNF)-α水平的变化,探讨其在AGA发病中可能的作用机制。方法:根据美国风湿病协会(ACR)1997年制定的诊断标准,随机选取来自本院2014年8月-2016年2月的门诊AGA患者100例(观察组,T),同时随机选取相同时间段青岛本地居民健康查体者100例(对照组,C)。用ELISA法检测对照组和观察组治疗前(D0)及应用药物治疗后第3天(D3)、第7天(D7)、第14天(D14)IL-1β、IL-6、IL-18及TNF-α表达水平。结果:组间比较:观察组D0、D3、D7与对照组比较,IL-1β、IL-6、IL-18、TNF-α表达水平均明显升高(P0.05)。D14与对照组比较,IL-6、IL-18表达水平均明显升高(P0.05)。观察组内比较:D0与D3相比,IL-1β、IL-18表达水平均明显升高,差异均有统计学意义(P0.01)。D0与D7相比,IL-1β、IL-18、TNF-α表达水平均明显升高,差异均有统计学意义(P0.01)。D0与D14相比,IL-1β、IL-6、IL-18、TNF-α表达水平均明显升高,差异均有统计学意义(P0.01)。D3与D7相比,IL-1β、IL-18、TNF-α表达水平均明显升高,差异均有统计学意义(P0.01),IL-6表达水平明显升高,差异有统计学意义(P0.05)。D3与D14、D7与D14相比,IL-1β、IL-6、IL-18、TNF-α表达水平均明显升高,差异均有统计学意义(P0.01)。结论:血清IL-1β、IL-6、IL-18及TNF-α水平在AGA患者镇痛治疗过程中表达异常,提示其在AGA发病中参与了炎症反应过程,在炎症机制中可能发挥了重要作用。     

NLRP3炎症小体信号通路在抗磷脂综合征中的作用

目的观察核苷酸结合寡聚化结构域样受体3(NLRP3)炎性小体信号通路相关分子在抗磷脂综合症(APS)中的表达水平,并初步探讨其临床意义。方法选取50例APS患者作为研究对象,选取同期健康体检者50例为对照组,收集两组的血液样本,分离外周血单个核细胞,用实时荧光定量PCR方法检测NLRP3炎症小体的mRNA表达情况,用ELISA方法检测抗心磷脂抗体(aCL)、抗β2糖蛋白I抗体、白细胞介素-18(IL-18)和IL-1β的血清水平,同时检测两组血清中的补体、D二聚体及狼疮抗凝物(LA),并分析抗体滴度与NLRP3、下游炎症因子表达水平的相关性。结果 APS组患者C3、C4水平低于对照组,D二聚体水平高于对照组,差异有统计学意义(P0.05)。APS患者PBMC中的NLRP3 mRNA表达水平显著高于对照组,差异有统计学意义(P0.05),ELISA法中NLRP3、半胱天冬酶1(caspase-1)、IL-18、IL-1β表达水平也高于对照组,差异有统计学意义(P0.05)。APS患者NLRP3 mRNA的表达水平与caspase-1呈正相关关系(r=0.921,P0.05);抗心磷脂抗体滴度与NLRP3炎症小体、IL-18、IL-1β呈正相关关系(r=0.598、0.521、0.428,P0.05)。结论 NLRP3炎症小体信号通路相关分子参与APS的发病过程且表达水平与APS严重程度密切相关。     

NLRP3炎性体相关分子表达与老年2型糖尿病的关系

目的研究核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3（NLRP3）炎性体相关分子表达与老年2型糖尿病（T2DM）的关系。方法采用ELISA法测定30例老年T2DM患者、30例健康体检者（对照组）血浆中IL-1β、IL-18和IL-37水平,分别采用定量聚合酶链反应（PCR）技术和ELISA技术检测糖尿病患者单核细胞来源的巨噬细胞（MDM）表达NLPR3、凋亡相关斑点样蛋白（ASC）和IL-1βmRNA水平及葡萄糖诱导MDM分泌IL-1β和TNF-琢的水平。结果老年T2DM患者血浆中的IL-1β和IL-18水平均显著高于对照组,差异均有统计学意义（均P＜0.05）;而IL-37无统计学差异;T2DM患者MDM中NLPR3、ASC和IL-1βmRNA表达水平均显著高于对照组,差异均有统计学意义（均P＜0.05）;且经葡萄糖刺激后IL-1β、TNF-琢水平显著高于对照组,差异有统计学意义（均P＜0.05）。结论NLRP3炎性体相关分子的表达与炎性体活化可能参与老年T2DM的炎症反应过程。     

阿托伐他汀抑制动脉粥样硬化患者NLRP3炎性体途径的研究

目的研究治疗动脉粥样硬化（AS）药物阿托伐他汀对含热蛋白结构域3的核苷酸结合寡聚化样受体（NLRP3）炎性体的调节作用。方法采用ELISA法测定30例AS患者经阿托伐他汀治疗前后IL-1β和IL-18在血浆和单核细胞来源巨噬细胞（MDM）中的表达水平;采用实时荧光定量PCR法检测炎性体相关分子如NLRP3、凋亡相关的点状蛋白（ASC）、IL-1βmRNA的表达水平;在体外用不同浓度和时间的阿托伐他汀处理单核巨噬细胞株（THP-1）,观察其对尼日利亚菌素激活NLRP3炎性体的调节作用。结果AS患者经阿托伐他汀治疗后血浆和MDM中的IL-1β和IL-18的表达水平均低于治疗前,差异均有统计学意义（均P＜0.05）;MDM中NLPR3、ASC和IL-1βmRNA表达均低于治疗前,差异均有统计学意义（均P＜0.05）;与对照组比较,低、中、高浓度组的阿托伐他汀以及用阿托伐他汀处理12、24、48h后IL-1β和IL-18的表达水平均下降,差异均有统计学意义（均P＜0.05）,且随着阿托伐他汀浓度越大、处理时间越长,下降越明显（均P＜0.01）。结论阿托伐他汀可能通过抑制AS患者NLRP3炎性体活化发挥其治疗作用。     

NLRP3-ASC-Caspase-1-IL-18/IL-1β-TGF信号通路与Ⅱ型糖尿病临床相关性研究

目的 探讨NLRP3-ASC-Caspase-1-IL-18/IL-1β-TGF 信号通路与初诊Ⅱ型糖尿病（T2DM）的临床相关性。方法 入选符合纳入标准的健康对照组30例及T2DM组40例,收集所有研究对象的一般临床资料,采用RT qPCR检测各组患者外周单个核细胞（PBMCs）中核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3 (NLRP3)炎性小体各组分mRNA 的表达水平,Western blot法检测其蛋白表达水平,并采用ELISA法测定各组患者空腹血浆白介素-1β（IL-1β）、白介素-18（IL-18）、转化生长因子(TGF)水平。结果 PBMCs中NLRP3、凋亡相关微粒蛋白(ASC)、半胱氨酸蛋白酶-1（caspase-1）mRNA表达水平在T2DM组和对照组之间无显著性差异（P＞0.05）,但ASCmRNA在T2DM组与总胆固醇（TC）呈正相关(P＜0.05);Caspase 1mRNA在T2DM组与体重指数（BMI）呈正相关(P＜0.05)。PBMCs中NLRP3、ASC、Caspase-1表达水平及血浆IL-1β、IL-18、TGF水平在T2DM组和对照组之间有显著性差异(P＜0.05),且ASC在T2DM组与平均动脉压（MAP）、空腹血糖(FPG)、TC、IL-1β、IL 18呈正相关(P＜0.05);Caspase-1在T2DM组与吸烟、FPG、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、IL-1β呈正相关(P＜0.05);IL-1β在T2DM组与TGF 呈正相关(P＜0.05)。结论 以NLRP3炎性小体为中心的NLRP3-ASC-Caspase-1=IL-18/IL-1β-TGF信号通路可能在初诊T2DM的发生发展过程中发挥重要作用。     

动脉粥样硬化患者NLRP3炎性体分子表达及临床意义

目的研究动脉粥样硬化患者含热蛋白结构域3的核苷酸结合寡聚化样受体（NLRP3）炎性体相关分子表达与疾病之间的关系。方法采用酶联免疫吸附（ELISA）法测定40例动脉粥样硬化患者（实验组）和40例健康志愿者（对照组）血浆中IL-1β、IL-18和IL-37的含量,采用定量聚合酶链反应（PCR）检测两组单核细胞来源的巨噬细胞（MDM）表达NLPR3、凋亡相关斑点样蛋白（ASC）和IL-1βmRNA水平,采用ELISA技术检测胆固醇结晶诱导MDM分泌IL-1β和TNF-琢的水平。结果动脉粥样硬化患者血浆中的IL-1β和IL-18含量均显著高于对照组,差异均有统计学意义（均P＜0.05）;IL-37高于对照组,但无统计学差异（P＞0.05）;动脉粥样硬化患者MDM中NLPR3、ASC和IL-1βmRNA表达均显著高于对照组,差异均有统计学意义（均P＜0.05）;且经胆固醇结晶刺激后IL-1β、TNF-琢的分泌水平显著高于对照组,差异均有统计学意义（均P＜0.05）。结论NLRP3炎性体活化可能参与动脉粥样硬化的炎症反应过程。     

柚皮素预处理通过抑制NLRP3炎症小体通路减轻小鼠机械通气相关性肺损伤

目的 探讨柚皮素(NAR)对机械通气相关性肺损伤(VILI)的改善作用及其可能作用机制.方法 将60只C57BL/6小鼠随机分成假手术组(sham组)、机械通气模型组(Model 组)、NAR 低剂量组(L-NAR 组,15 mg/kg)和 NAR高剂量组(H-NAR组,60 mg/kg),每组15只.于造模前7 d开始灌胃给药,每天1次,连续7 d,随后采用机械大潮气量通气法建立VILI模型.于插管即刻和机械通气4 h时颈内动脉采血,测定氧合指数(OI).机械通气4 h后处死小鼠,收集支气管肺泡灌洗液(BALF),ELISA法测定BALF中TNF-α、IL-1β和IL-18含量;取肺组织,测定肺组织湿重/干重比(W/D);HE染色观察肺组织病理学改变并评分;RT-PCR和Western blot分别检测肺组织中NOD样受体蛋白3(NLRP3)、凋亡相关斑点样蛋白(ASC)和半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶-1(Caspase-1)mRNA及蛋白表达水平.结果 与sham组比较,Model组小鼠肺组织损伤严重,肺组织病理评分、W/D值、BALF中TNF-α、IL-1β和IL-18含量以及肺组织中NLRP3、ASC和Caspase-1 mRNA和蛋白表达水平均增加(P＜0.01),而OI 值降低(P＜0.01);与 Model 组比较,H-NAR组小鼠肺组织损伤程度得到明显改善,肺组织病理评分、W/D值、BALF中TNF-α、IL-1β和IL-18含量以及肺组织中NLRP3、ASC和Caspase-1 mRNA和蛋白表达水平均降低(P＜0.01),OI 值升高(P＜0.01),而 L-NAR 组与 Model 组比较,相关指标差异无统计学意义.结论 NAR预处理能减轻小鼠VILI,其机制可能与抑制NLRP3炎症小体活化有关.     

阿奇霉素联合孟鲁司特钠对肺炎支原体肺炎儿童NOD样受体蛋白-3炎症小体通路的影响

目的观察阿奇霉素联合孟鲁司特钠对肺炎支原体肺炎儿童NOD样受体蛋白-3 (NLRP3)炎症小体通路的影响。方法 108例肺炎支原体肺炎儿童随机分成两组,对照组给予阿奇霉素治疗,观察组给予阿奇霉素联合孟鲁司特钠治疗。观察临床疗效,酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测血清中白细胞介素-1β(IL-1β)、IL-18水平。实时定量聚合酶链式反应测定NLRP3、凋亡相关斑点样蛋白(ASC)、Caspase-1 mRNA的水平,记录不良反应。结果观察组临床疗效明显优于对照组(P0.05),IL-1β、IL-18水平以及NLRP3、ASC、Caspase-1 mRNA水平均明显低于对照组(P0.05),无严重的不良反应。结论阿奇霉素联合孟鲁司特钠治疗儿童肺炎支原体肺炎临床效果明显,其机制与其调节患者NLRP3、ASC、Caspase-1的表达水平有关。     

NLRP3炎性体在2型糖尿病合并糖尿病足患者中的作用

目的 探讨NLRP3炎性体在2型糖尿病合并糖尿病足患者中的作用。 方法 自2016年6月-2017年6月,前瞻性收集丽水市第二人民医院收治的2型糖尿病合并糖尿病足患者100例作为观察组,同期收集2型糖尿病患者50例(无糖尿病足)作为对照组。观察2组患者NLRP3炎性体表达情况。另外收集观察组患者主要临床特征,分析NLRP3炎性体与2型糖尿病足患者临床特征的相关性。 结果 与对照组比较,观察组患者NLRP3炎性小体mRNA相对表达量显著增高(4.12±0.88 vs. 2.73±0.92,P<0.001);NLRP3炎性小体蛋白质相对表达量显著增高(12.48±2.81 vs. 9.89±2.65,P<0.001)。糖尿病严重程度分级为0~1、2~3和4~5级的患者NLRP3炎性小体mRNA相对表达量分别为3.27±0.78、3.87±0.83、4.83±0.92,差异有统计意义(P=0.002);NLRP3炎性小体蛋白质相对表达量分别为9.65±2.12、11.32±2.54、15.49±2.98,差异有统计学意义(P<0.001)。Pearson线性相关性分析显示NLRP3炎性小体mRNA相对表达量、NLRP3炎性小体蛋白质相对表达量均与糖尿病足严重程度评分、糖化血红蛋白浓度成正相关(P<0.05)。 结论 2型糖尿病合并糖尿病足患者NLRP3炎性体激活,与糖尿病足的发生发展过程有关。      

胆固醇敏感器SCAP功能失调通过上调P2X7受体表达促进THP-1源性巨噬细胞炎症小体活化

目的 探讨胆固醇调节原件结合蛋白裂解激活蛋白(sterol regulatory element binding proteins cleavage-activating protein,SCAP)功能失调促进THP-1源性巨噬细胞炎症小体活化及IL-1β成熟的分子机制.方法 采用基因转染方法在THP-1源性巨噬细胞中过表达SCAP,结合使用P2X7受体(P2X7 receptor,P2X7R)激动剂ATP(5 mmol/L)或抑制剂A438079(100 μmol/L)处理THP-1源性巨噬细胞,将细胞分为:①对照组、②ATP处理组、③A438079处理组、④ATP+A438079组、⑤过表达SCAP组、⑥过表达SCAP+ATP组、⑦过表达SCAP+ A438079组、⑧过表达SCAP+ATP+A438079组.RT-PCR检测过表达SCAP以及激动或抑制P2X7R对P2X7R、pro-IL-1β、NLRP3、pro-caspase-1基因表达水平的影响.流式细胞术检测细胞表面P2X7R的表达.Western blot检测SCAP、pro-IL-1β、NLRP3、caspase-1(p20)以及培养上清中IL-1β的蛋白水平.同一实验在细胞水平重复4次.结果 ①过表达SCAP组与对照组比较,其pro-IL-1β、P2X7R基因表达水平显著升高(P＜0.01),细胞表面P2X7R表达明显上调.②P2X7R激动剂ATP与抑制剂A438079对THP-1源性巨噬细胞SCAP及P2X7R mRNA表达无影响(P＞0.05).P2X7R激动剂ATP能够显著促进THP-1源性巨噬细胞pro-IL-1β mRNA表达(P＜0.05),在过表达SCAP基础上激动P2X7R能够进一步激活pro-IL-1β基因转录(P＜0.01),同时显著促进细胞内pro-IL-1β剪切成熟并向细胞外分泌(P＜0.01),抑制P2X7R活性并不影响过表达SCAP致pro-IL-1β表达上调的作用,但将减少上清中成熟IL-1β的含量.过表达SCAP并不影响NLRP3及caspase-1表达(P＞0.05),但在过表达SCAP基础上充分激动P2X7R将显著上调NLRP3及caspase-1基因及蛋白水平(P＜0.01),上述变化能够被P2X7R抑制剂A438079抵消.结论 胆固醇敏感器SCAP功能失调能够促进THP-1源性巨噬细胞内pro-IL-1 β表达,同时通过上调细胞表面P2X7R表达激活NLRP3炎症小体,促进pro-IL-1β成熟及其向细胞外分泌.     

雷公藤甲素对IgA肾病大鼠的肾保护作用及对NLRP3炎症小体的影响

目的探讨雷公藤甲素对IgA肾病（IgAN）大鼠的肾保护作用及其与NLRP3炎症小体的关系。方法40只SPF级SD雄性大鼠随机分为对照组、模型组和雷公藤甲素低、高剂量组。采用口服牛γ-球蛋白（BGG）8周及尾静脉注射BGG方法建立IgAN大鼠模型。于造模完成后灌胃给予低、高剂量雷公藤甲素治疗8周。观察大鼠血清中肌酐（Scr）、尿素氮（BUN）、总蛋白（TP）、丙氨酸氨基转移酶（ALT）、天门冬氨酸氨基转移酶（AST）及24 h尿蛋白（24 h TUP）水平;血清中肿瘤坏死因子α（TNF-α）、白细胞介素（IL）-17A、γ干扰素（IFN-γ）及IL-4水平;肾组织中IgA沉积情况;肾脏中IL-1β、Caspase-1、IL-18及NLRP3的表达情况。结果与模型组相比,雷公藤甲素组血清Scr、BUN及尿液中24 h TUP含量明显降低（P < 0.05~P < 0.01）;雷公藤甲素能降低血清中TNF-α、IL-17A、IFN-γ和L-4水平（P < 0.05~P < 0.01）,减轻IgA的沉积（P < 0.01）,抑制IL-1β、Caspase-1、IL-18及NLRP3的表达（P < 0.05~P < 0.01）。结论雷公藤甲素对IgA肾病大鼠肾脏具有保护作用,其作用机制可能是通过抑制NLRP3炎症小体的激活,进而抑制炎症反应。     

NLRP3炎性小体在胃癌细胞中的表达及对其焦亡、增殖、侵袭、迁移的影响

目的 研究胃癌细胞中NLRP3炎性小体的表达及其对增殖、侵袭和迁移的影响。并初步探讨NLRP3介导caspase-1依赖的焦亡信号通路在胃癌发展中的作用。 方法qRT-PCR和Western blotting法分别检测人胃黏膜上皮细胞(GES-1)和人胃癌细胞(MKN45及MGC803)中NLRP3、caspase-1表达;随后下调NLRP3,检测胃癌细胞NLRP3、caspase-1 mRNA和蛋白的表达;Western blotting检测GSDMD、白细胞介素(IL)-18、IL-1β蛋白表达;ELISA法检测细胞培养液上清液中IL-1β、IL-18含量;乳酸脱氢酶(LDH)实验、流式细胞术检测细胞焦亡;CCK-8法及细胞周期试剂盒检测细胞增殖情况;Transwell和划痕实验检测胃癌细胞侵袭和迁移能力。 结果NLRP3、caspase-1在胃癌细胞中较GES-1表达增高(P < 0.01)。下调NLRP3后,胃癌细胞LDH释放率及焦亡率显著降低(P < 0.01);GSDMD、IL-1β、IL-18表达降低(P < 0.01);细胞增殖阻滞在G₁期(P < 0.01);细胞增殖以及侵袭迁移能力显著减弱。 结论NLRP3在胃癌中高表达,其表达影响胃癌细胞的增殖、侵袭和迁移以及其介导的caspase-1依赖焦亡信号通路关键蛋白的表达。     

大黄酚通过激活NLRP3炎症小体诱导胃癌细胞焦亡的机制研究

目的探索大黄酚诱导人胃癌细胞焦亡的作用及其可能的作用机制。方法不同浓度大黄酚（0、5、10 μmol/L）和NLRP3抑制剂、caspase-1抑制剂先后处理人胃癌MKN28细胞,CCK-8法、克隆形成实验、流式细胞术检测细胞焦亡;实时荧光定量PCR检测焦亡、NLRP3炎症小体相关蛋白的mRNA水平;Western blotting检测焦亡、NLRP3炎症小体的蛋白表达水平。结果不同浓度的大黄酚（0、5、10 μmol/L）作用于MKN28细胞后,均降低了细胞存活率（P < 0.01）,并促进了细胞焦亡的发生（P < 0.01）。大黄酚呈剂量依赖性地上调胃癌MKN28细胞中NLRP3、caspase-1和白细胞介素-1β的mRNA以及蛋白表达水平（P < 0.01）。采用caspase-1抑制剂VX-765、NLPR3抑制剂MCC950抑制NLPR3炎症小体表达,可削弱大黄酚对细胞焦亡的诱导作用（P < 0.01）。结论大黄酚抑制人胃癌MKN28细胞增殖、促进LDH释放和caspase-1活性升高,诱导胃癌细胞焦亡,其作用机制与NLRP3/caspase-1通路密切相关。     

NLRP3炎症小体在高糖诱导小鼠肾小管上皮细胞EMT中的作用

目的:观察NLRP3炎症小体在高糖诱导小鼠肾小管上皮细胞上皮间质转化(EMT)中的作用.方法:以小鼠肾小管上皮细胞为研究对象,高糖处理24 h后,采用real-time PCR法检测细胞表型标志分子(E钙粘素和α-SMA)和NLRP3炎症小体mRNA的表达,ELISA法检测细胞上清液中IL-1β含量.采用NLRP3炎症小体特异性抑制剂MCC950探讨NLRP3炎症小体在高糖诱导小鼠肾小管上皮细胞ETM中的作用.结果:高糖处理24 h可降低小鼠肾小管上皮细胞E钙粘素mRNA表达,上调α-SMA mRNA表达;同时上调NLRP3、pro-IL-1β和pro-caspase-1 mRNA表达,以及IL-1β分泌;抑制NLRP3炎症小体可部分逆转高糖诱导的小鼠肾小管上皮细胞EMT.结论:高糖应激可能通过激活NLRP3炎症小体促进IL-1β分泌诱导肾小管上皮细胞发生EMT.     

黄芪丹参配伍调控ASIC1a/CaMKⅡδ信号抑制酸性微环境中心肌细胞焦亡

目的 探讨黄芪丹参配伍对乳酸诱导的酸性微环境中心肌细胞焦亡损伤的保护作用及基于酸敏感离子通道1a(ASIC1a)/钙离子-钙调蛋白依赖性激酶Ⅱδ(CaMKⅡδ)信号通路的调控机制。方法 采用Lactate刺激H9C2心肌细胞建立pH 6.5酸性微环境细胞损伤模型。分为正常对照组、模型组、黄芪丹参提取物(HQ)组、HQ+ASIC激动剂Nocistatin组和ASIC抑制剂NS383阳性药对照组。采用CCK-8法测定心肌细胞活力,流式细胞术检测心肌细胞凋亡,免疫荧光检测ASIC1a表达,qPCR分析NLRP3、Caspase-1、IL-1β及GSDMD mRNA表达,Western blot检测ASIC1a、CaMKⅡδ、NLRP3、Caspase-1、Cleaved Caspase-1、GSDMD及GSDME-N蛋白的表达。结果 在pH 6.5酸性环境中,心肌细胞活力显著降低(P<0.01),细胞凋亡明显增加(P<0.01),NLRP3、Caspase-1、IL-1β及GSDMD mRNA表达明显增加(P<0.01),ASIC1a、CaMKⅡδ、NLRP3、Caspas...     

基于miR-223-3p/NLRP3轴研究右美托咪定对机械通气肺损伤大鼠炎性反应的影响

目的 本研究通过建立机械通气性肺损伤(ventilator-induced lung injury,VILI)大鼠模型,探究右美托咪定(dexmedetomidine,DEX)对其炎性反应及微小RNA-223-3p/核苷酸结合寡聚化结构域样蛋白3(NLRP3)轴的影响。 方法 将60只成年健康6周龄SPF级雄性SD大鼠采用随机数字表法随机分为5组:对照组(NC组)、模型组(M组)、低(L-DEX组)、中(M-DEX组)、高(H-DEX组)剂量DEX组,每组12只;L-DEX组、M-DEX组、H-DEX组在机械通气中分别以静脉滴注0.5、2.5、5.0μg/(kg·h)DEX。4 h末处死,检测各组大鼠肺通透指数(lung permeability index,LPI)、肺组织湿重/干重(wet weight/dry weight,W/D)比值、肺组织miR-223-3p、NLRP3 mRNA及蛋白、caspase-1蛋白表达水平及肺组织匀浆中白细胞介素-1β(IL-1β)、IL-18水平。 结果 与M组比较,L-DEX组、M-DEX组、H-DEX组大鼠LPI、W/D比值、NLRP3 mRNA(4.04±0.38、2.12±0.32、1.98±0.25)及NLRP3蛋白(0.92±0.11、0.58±0.06、0.39±0.02)、caspase-1蛋白、IL-1β、IL-18水平依次降低(M组NLRP3 mRNA为5.47±0.62,NLRP3为1.31±0.27),miR-223-3p水平依次升高(均P<0.05)。 结论 DEX可能通过上调miR-223-3p表达,下调NLRP3、caspase-1蛋白及下游炎症因子表达,与miR-223-3p/NLRP3轴密切相关,减轻大鼠VILI及炎症反应。      

终止香烟烟雾暴露后大鼠Th1/Tc1介导气道炎症及调节性T细胞的变化

目的 观察香烟烟雾暴露和终止香烟烟雾暴露后大鼠Th1/Tc1介导气道炎症及支气管肺泡灌洗液(BALF)中调节性T细胞(Treg)的变化.方法 将50只健康清洁级雄性Wistar大鼠随机分为5组:12周正常对照组(简称12周对照组)、24周正常对照组(简称24周对照组)、12周香烟烟雾暴露组(简称12周暴露组)、24周香烟烟雾暴露组(简称24周暴露组)、终止香烟烟雾暴露组(简称终止暴露组).烟熏法复制大鼠气道炎症的动物模型.12周后,12周对照组、12周暴露组处置取材,24周暴露组继续烟熏12周,终止暴露组终止烟雾暴露12周,将后2组及24周对照组处置取材.HE染色观察小气道病理改变,进行气道评分;收集BALF进行细胞学计数和分类计数;酶联免疫吸附法(ELISA)法测BALF中4种细胞因子:Th1/Th2型细胞因子干扰素(IFN)γ、白细胞介素(IL)4及促炎因子IL-8、肿瘤坏死因子(TNF)α的浓度;流式细胞术检测各组大鼠BALF中Treg细胞的比例,RT-PCR检测各组大鼠BALF中Foxp3 mRNA的表达.结果 (1)12周暴露组、24周暴露组、终止暴露组气道炎症评分较12周对照组、24周对照组明显高(均P＜0.01).24周暴露组、终止暴露组气道炎症评分均较12周暴露组高(均P＜0.01).(2)与12周对照组、24周对照组相比,12周暴露组、24周暴露组、终止暴露组BALF中IFN-γ、TNF-α和IL-8高,IL-4低(均P＜0.01).与12周暴露组相比,终止暴露组IFN-γ、IL-4、TNF-α差异均无统计学意义(均P＞0.05),IL-8较高(P＜0.01),24周暴露组IFN-γ、TNF-α和IL-8明显高(均P＜0.01).(3)BALF中Treg细胞比例,12周暴露组(7.4%±0.8%)、24周暴露组(7.8%±1.7%)、终止暴露组(7.0%±1.4%)较12周对照组(4.8%±1.2%)、24周对照组(4.7%±1.2%)高(均P＜0.01),前3组之间BALF中Treg细胞比例差异均无统计学意义(均P＞0.05).(4)12周暴露组(0.22±0.02)、24周暴露组(0.23±0.03)、终止暴露组(0.20±0.04)BALF中Foxp3 mRNA表达较12周暴露组(0.13±0.01)、24周暴露组(0.11±0.02)高(均P＜0.01).前3者之间BALF中Foxp3 mRNA表达差异均无统计学意义(均P＞0.05).结论 香烟暴露致大鼠气道Th1/Tc1介导炎症伴Treg细胞表达增高,终止香烟烟雾暴露后其炎症及Treg细胞高表达仍持续存在,提示该免疫失衡可能是导致终止香烟暴露后Th1/Tc1气道炎症仍持续进展的原因之一.