FK506对糖尿病大鼠早期肾脏肥大的抑制作用及机制

目的 探讨FK506对糖尿病大鼠早期肾脏肥大的抑制作用及机制。 方法 应用链脲菌素(65 mg/kg)腹腔注射建立大鼠糖尿病模型。每日分别给予FK506 0.5、1.0 mg/kg 灌胃，共4周。观察大鼠肾质量/体质量、尿白蛋白排泄率（AER）、Ccr及肾组织病理形态学变化。应用Western印迹和免疫组化方法检测肾组织钙神经蛋白(calcineurin，CaN)、1αⅣ型胶原、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)及转化生长因子β1(TGF-β1)蛋白表达。 结果 FK506 1.0组大鼠相对肾质量明显低于模型组(P < 0.05)。FK506 0.5与1.0组大鼠AER水平与肾小球平均体积明显低于模型组(P < 0.05、0.01)。FK506 1.0组肾小管间质?鄄损伤指数也明显低于模型组(P < 0.01)。Western印迹显示，模型组肾组织CaN蛋白表达较对照组增加2.4倍；FK506 0.5与1.0 组肾组织CaN蛋白表达比模型组下降38.0%与73.2%。模型组肾组织1αⅣ型胶原、α-SMA及TGF?鄄β1蛋白表达明显高于对照组；FK506组肾组织上述蛋白表达明显低于模型组(P < 0.05、0.01)。 结论 FK506对糖尿病大鼠早期肾脏肥大有明显抑制作用，其机制与下调肾组织增高的CaN表达有关。     

骨形成蛋白7在糖尿病大鼠肾组织中的表达及意义

目的 观察糖尿病大鼠肾组织中骨形成蛋白7(BMP-7)的表达及探讨其在糖尿病肾病中的可能作用。方法 将大鼠分为糖尿病组及正常对照组，分别在第30、60、90、120、150及180 d测定各组的血糖、Scr、24 h尿白蛋白、尿肌酐(Ucr)水平。以HE、PASM染色及Col Ⅳ蛋白表达衡量肾脏病理改变。用免疫组化及RT-PCR方法检测肾组织中BMP-7、TGF-β1的蛋白及mRNA表达水平。 结果 糖尿病组各时间点血糖、尿白蛋白量(24 h)均明显高于对照组(P < 0.01)。糖尿病组伴随病理改变的加重和Col Ⅳ表达的逐渐增强，BMP-7蛋白及mRNA水平(A%，30 d 95.87±1.19；180 d 26.43±1.26)逐渐降低，与对照组(A%，30 d 98.64±0.80；180 d 98.80±0.49)相比，差异有统计学意义(P < 0.01或P < 0.05)；相反，肾组织中TGF-β1的mRNA(A%，30 d 40.26±0.98； 180 d 102.12±6.45)及蛋白水平较对照组显著增加(P < 0.01)。BMP-7与TGF-β1的蛋白及mRNA表达水平均呈显著负相关(P < 0.01)。结论 BMP-7可能是维持肾脏功能稳定的一个重要因子。BMP-7在糖尿病肾病中具有与TGF-β1相反的作用，其水平下降可能参与了糖尿病肾病早期小管间质的损伤。     

组织型转谷氨酰胺酶在局灶节段性肾小球硬化大鼠肾脏中的表达和意义

目的探讨组织型转谷氨酰胺酶(tTG)在局灶节段性肾小球硬化(FSGS)模型大鼠肾脏中的表达及其意义。方法FSGS大鼠模型采用左颈静脉插管单次注射嘌呤霉素氨基核苷(PAN)方法建立,对照组大鼠注射等量生理盐水,20周后处死各组大鼠。肾组织切片用PAS染色,光镜下观察病理变化;用免疫组织化学、底物掺入免疫荧光法、Western印迹法分别观察肾内tTG蛋白分布、原位活性和蛋白水平变化;用免疫组化半定量方法分析细胞外基质纤连蛋白(FN)表达。结果模型组肾组织病理呈典型局灶节段肾小球硬化病变,伴大量蛋白尿。对照组肾组织tTG蛋白表达较弱,分布于肾小球内;模型组肾组织tTG蛋白分布于肾小球硬化部位。Western印迹结果显示模型组肾组织tTG蛋白水平比对照组增加2.61倍(P<0.05)。对照组肾组织tTG原位活性微弱;模型组肾小球tTG活性明显增强。模型组FN主要分布在肾小球,表达水平明显高于对照组(3.73±0.57比2.50±1.00,P<0.05):并且LTG蛋白水平与FN水平呈显著正相关(r=0.73,P<0.05)。结论tTG可能通过交联细胞外基质蛋白,抵抗降解,参与FSGS发生发展。     

氧化应激介导糖尿病大鼠肾小管上皮细胞转分化及普罗布考的干预作用

目的 研究氧化应激在糖尿病肾病（DN）大鼠肾小管上皮细胞转分化中的作用,探讨抗氧化剂普罗布考对大鼠DN的肾脏保护作用。 方法 30只雄性SD大鼠随机分为正常对照组、DN组和普罗布考干预组（1％普罗布考饮食）,每组10只。分别于第3周、第8周及第12周检测24 h尿蛋白（UTP）;12周末检测各组大鼠血糖、血脂（胆固醇、三酰甘油）、Scr、肌酐清除率（Ccr）、肾脏组织匀浆液丙二醛（MDA）含量及谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）活性。肾组织病理切片行 HE和Masson染色;采用免疫组化和Western印迹检测肾组织核转录因子Sp1、α平滑肌肌动蛋白（α-SMA）及E钙黏蛋白（E-cadherin）表达。 结果 与正常对照组比较,DN组血糖、Scr、肾组织匀浆MDA和24 h UTP水平显著增高（均P < 0.01）,Ccr显著降低（P < 0.01）;肾组织肾小管损伤分数、α-SMA和 Sp1蛋白表达水平明显增高（均P < 0.01）;肾组织E-cadherin蛋白表达明显下调。肾组织MDA含量分别与α-SMA及Sp1蛋白表达呈正相关（r ＝ 0.896,P < 0.01;r ＝ 0.862,P < 0.01）,与E-cadherin蛋白表达呈负相关（r = -0.673, P < 0.01）。普罗布考干预组Scr、24 h UTP、肾组织MDA、肾小管损伤分数及肾组织α-SMA、 Sp1蛋白表达水平较DN组均明显降低（均P < 0.01）;Ccr和肾组织E-cadherin蛋白表达水平较DN组均明显增加（均P < 0.01）。 结论 氧化应激在DN大鼠肾小管上皮细胞转分化中起重要作用。普罗布考可能通过抗氧化、下调肾组织Sp1蛋白表达及抑制肾小管上皮细胞转分化延缓DN大鼠肾脏病变进展。     

乙酰肝素酶在糖尿病肾病大鼠蛋白尿发生中的作用

目的 观察糖尿病肾病大鼠肾组织乙酰肝素酶（HPA）的表达，探讨其在糖尿病肾病大鼠蛋白尿发生中的作用。 方法 SD健康大鼠被随机分为健康对照组（n = 6）、糖尿病6周组(DM6w, n = 10)和糖尿病12周组(DM12w, n = 10)，采用一次性腹腔注射链脲菌素（STZ）的方法建立糖尿病大鼠模型。分别于造模后6周和12周末测定各组大鼠相对肾质量、血糖、尿素氮、血肌酐、24 h尿量及尿蛋白量(24 h)等指标，并观察肾脏病理改变。RT-PCR和免疫组织化学法检测各组大鼠肾组织HPA mRNA和蛋白表达变化，并分析其与蛋白尿发生的相关性。 结果 （1）DM6w和DM12w组大鼠的相对肾质量、血糖、尿素氮、24 h尿量及尿蛋白量(24 h)与健康对照组相比明显升高, 差异均有统计学意义(P < 0.05或P < 0.01)。（2）DM6w和DM12w组大鼠HPA mRNA和蛋白表达比健康对照组均显著增高(P < 0.01)。（3）大鼠肾组织HPA mRNA和蛋白表达与尿蛋白量(24 h)之间均呈正相关 (r = 0.783，P < 0.01；r = 0.793，P < 0.01)。 结论 HPA在糖尿病肾病中的表达升高可能参与了糖尿病肾病蛋白尿的发生。     

维甲酸受体介导全反式维甲酸对糖尿病肾病大鼠肾组织细胞增殖与凋亡的影响

目的 探讨维甲酸受体( RAR-α、RAR-β、RAR-γ)介导的全反式维甲酸(ATRA)对糖尿病肾病大鼠肾组织细胞增殖与凋亡的影响及机制.方法 健康雄性SD大鼠30只,随机选10只为空白对照组;链脲佐菌素(STZ)诱导糖尿病模型,造模成功后随机分为糖尿病模型组(n=10)和ATRA组(n=10).于造模成功第2天起ATRA组大鼠给予ATRA 10 mg·kg-1·d-1灌胃,对照组与糖尿病组均予等体积蒸馏水灌胃.于第8周及第12周观察生化指标及处死各组大鼠,取肾组织行HE染色观察肾脏病理变化;原位末端标记法(TUNEL法)检测各组肾组织细胞凋亡率;间接免疫荧光法检测各组肾组织中维甲酸受体RAR-α、β、γ的表达情况;免疫组化法检测各组肾组织中增殖指标I型胶原(CdI),层粘连蛋白(LN)及凋亡相关因子Smac、caspase-3的蛋白表达.实时定量PCR法检测各组肾组织中Smac、caspase-3 mRNA的表达.结果 与对照组比较,糖尿病组大鼠24h尿蛋白、Scr、BUN、肾质量/体质量比值均显著增加(均P＜0.05),而ATRA组上述指标较糖尿病组减少(均P＜0.05).ATRA组病理改变较糖尿病组减轻.12周时,与对照组比较,糖尿病组细胞凋亡率显著增加(P＜0.01),ATRA组较糖尿病组减少(P＜0.01).间接免疫荧光结果显示,12周时糖尿病组肾组织RAR-α、RAR-β阳性细胞数显著少于对照组(均P＜0.05),而ATRA组较糖尿病组显著增加(均P＜0.01);各组肾组织中均未见RAR-γ表达变化.免疫组化结果显示,12周时糖尿病组肾组织肾小球系膜区中Col Ⅰ、LN、Smac、caspase-3蛋白的表达显著高于对照组(均P＜0.01),ATRA组较糖尿病组显著减少(均P＜0.01).实时定量PCR结果显示,与对照组比较,糖尿病组Smac、caspase-3 mRNA的表达均显著增多(均P＜0.01),并随时间延长表达增强;ATRA组较糖尿病组显著减少(P＜0.01).结论 全反式维甲酸可能通过其受体介导途径抑制糖尿病肾病肾组织细胞增殖及凋亡,对糖尿病肾病有保护作用.     

芡实对糖尿病肾病大鼠肾组织MMP-9、TIMP-1及Collagen Ⅳ表达的影响

目的:探讨芡实对糖尿病肾病大鼠肾组织MMP-9、TIMP-1及CollagenⅣ表达的影响。方法:健康雄性Wistar大鼠65只,随机选取10只为正常对照组(N组);其余一次性腹腔注射链脲佐菌素(STZ)制作DN模型,造模成功后,随机分为DN组、芡实低、中、高剂量组及氯沙坦钾组,均采用灌胃给药,N组和DN组给予等体积蒸馏水。12周后检测大鼠生化指标;HE、Masson、PAS染色观察肾脏病理变化;免疫组化法测定MMP-9、TIMP-1及CollagenⅣ在肾组织表达情况;采用实时荧光定量PCR技术检测肾组织中MMP-9、TIMP-1及CollagenⅣ基因的表达。结果:实验12周末,与N组比较,DN组大鼠肾小球肥大,细胞外基质积聚,血糖、24 h尿蛋白定量、血尿素氮(BUN)、肌酐(Scr)、尿白蛋白排泄率(UAER)、尿蛋白/尿肌酐(Up/Ucr)比值显著升高(P0.05),肾组织MMP-9蛋白和mRNA表达降低(P0.05),TIMP-1、CollagenⅣ蛋白和mRNA表达升高(P0.05);与DN组比较,EM组、EH组及LP组大鼠病理改变减轻,24 h尿蛋白定量、Scr、BUN、UAER、Up/Ucr显著降低(P0.05),肾组织MMP-9蛋白和mRNA表达显著升高(P0.05),TIMP-1、CollagenⅣ蛋白和mRNA表达显著减少(P0.05)。结论:芡实可能通过调节DN大鼠肾脏MMP-9、TIMP-1的表达,减少细胞外基质积聚,从而减轻肾小球硬化,减少蛋白尿,保护肾功能,延缓DN病变的进展。     

厄贝沙坦对糖尿病大鼠肾组织MCP-1表达的影响

目的：观察厄贝沙坦对糖尿病大鼠肾组织中单核细胞趋化蛋白-1（MCP-1）表达的影响,并探讨其对肾组织的保护作用。方法：高糖高脂饮食联合小剂量腹腔注射链脲佐菌素（streptozotocin STZ,30mg/kg）建立2型糖尿病大鼠模型。Wistar大鼠30只,随机分为正常对照组（A组）、糖尿病组（B组）与厄贝沙坦治疗组（C组）。于实验第12周和16周末检测大鼠血糖（BG）、胆固醇（TC）、三酰甘油（TG）、血尿素氮（BUN）、血肌酐（Scr）、24h蛋白定量（24U-pro）。第16周处死各组大鼠,测肾重指数（肾重KW/体重BW）。光镜观察肾组织的形态结构,实时荧光定量PCR和免疫组化法检测肾组织中MCP-1mRNA及蛋白的表达。结果：（1）糖尿病组大鼠的BG、TC、TG、BUN、Scr、24U-pro、KW/BW均明显高于正常对照组（P〈0.01）;肾组织MCP-1mRNA及蛋白的表达明显高于正常对照组（P〈0.01）。（2）与糖尿病组相比,厄贝沙坦治疗组大鼠的BG、TC、TG、BUN、Scr、24U-pro、KW/BW在第16周均被显著抑制（P〈0.05,P〈0.01）,肾组织MCP-1mRNA及蛋白的表达明显低于糖尿病组（P〈0.01）。结论：厄贝沙坦可以通过抑制肾脏MCP-1的表达来延缓糖尿病肾脏疾病的进展。     

祛毒颗粒对单侧输尿管梗阻大鼠肾间质纤维化的干预作用

目的：观察祛毒颗粒对单侧输尿管梗阻（unilateral ureteral obstruction,UUO）大鼠肾间质纤维化的干预作用,并探讨其作用机制。方法：将90只雄性Wistar大鼠随机分为5组：假手术组、模型组、尿毒清组（对照组）、祛毒颗粒低剂量组（低剂量组）、祛毒颗粒高剂量组（高剂量组）,每组18只,除假手术组,其余各组用单侧输尿管梗阻法（UUO）建立肾间质纤维化动物模型,术前1天起各组给予相应浓度和剂量的药物,分别在术后第3天、7天、14天分批处死大鼠,检测大鼠尿N-已酰-β-氨基葡萄糖苷（NAG）酶、血肌酐（Scr）和尿素氮（BUN）变化,梗阻侧肾组织行HE染色和Masson染色,HE染色观察肾组织病理变化并半定量计算肾小管损伤指数（tubulointerstitial injuryindex,TII）,Masson染色测定肾间质胶原面积,免疫组化法检测结缔组织生长因子（CTGF）、Ⅰ型胶原（ColⅠ）、肝细胞生长因子（HGF）、骨形成蛋白（BMP）-7在肾组织的表达。结果：与模型组及对照组相比,祛毒颗粒能明显降低UUO大鼠术后14d的尿NAG酶、Scr、BUN（P〈0.05）;对梗阻侧肾组织HE染色进行TII评分发现,不同时间点,2个试验组大鼠肾小管损伤指数低于模型组和对照组（P〈0.05～0.01）;Masson染色测定肾间质胶原面积,2个实验组大鼠肾间质胶原面积少于模型组和对照组（P〈0.05～0.01）;免疫组化法染色发现,与模型组和对照组相比,2个试验组大鼠CTGF、ColⅠ在肾组织的表达下调（P〈0.05）,HGF、BMP-7在肾脏组织的表达上调（P〈0.05）。结论：祛毒颗粒具有改善肾间质纤维化的作用,其机制可能与下调UUO大鼠致纤维化因子CTGF、ColⅠ在肾脏的表达,上调抗纤维化因子HGF、BMP-7在肾脏的表达有关。     

缺血再灌注损伤后大鼠肾小管上皮细胞有机阴离子转运蛋白的表达及其功能

目的 探讨大鼠肾脏缺血再灌注损伤（IRI）后肾小管上皮细胞有机阴离子转运蛋白(OAT)1和3表达及功能变化。 方法 建立大鼠IRI模型，于术后第1、2、4、6天取血及肾组织标本。常规测定Scr浓度及观察肾脏组织形态。分别用免疫组织化学和Western印迹检测肾脏组织OAT1和3蛋白表达。毛细血管电泳仪检测肾脏对氨基马尿酸（PAH）排泄率。钼蓝分光光度法测定基侧膜钠-钾-ATP酶（Na＋-K＋-ATP酶）活性。另设假手术组作对照。 结果 模型组大鼠术后第1天肾小管上皮细胞坏死脱落，管腔内可见大量管型，刷状缘消失，基底膜裸露；Scr显著升高。与假手术组比较，模型组大鼠肾组织匀浆及肾小管上皮细胞OAT1和OAT3表达增强；PAH排泄率降低[(0.53±0.15)比(4.00 ± 0.67) ml/min, P < 0.01]；肾小管上皮细胞基侧膜Na＋-K＋-ATP酶活性降低[(9.33±1.37)比(15.07±0.15) μmol Pi&#8226;(mg蛋白)-1&#8226;h-1, P < 0.01]。损伤后第2天及第4天，损伤的肾小管逐渐修复，OAT1和3表达逐渐降低，PAH排泄率和Na＋-K＋-ATP酶活性逐渐增加；至第6天时肾小管基本恢复正常。 结论 急性肾缺血再灌注导致大鼠肾小管上皮细胞可逆性损伤，损伤初期肾小管OAT1和OAT3 表达增强，转运有机阴离子功能下降，PAH排泄减少。Na＋-K＋-ATP酶活性低下是OAT功能降低的主要机制之一。     

12-脂氧合酶抑制剂黄芩素对2型糖尿病大鼠肾脏细胞外基质的影响及机制

目的：探讨12-脂氧合酶（12-lipoxygenase,12-LO）特异性抑制剂黄芩素（baicalein,BAI）对2型糖尿病大鼠肾脏细胞外基质（ECM）的影响及机制。方法：将链脲佐菌素（streptozotocin,STZ）诱导的2型糖尿病大鼠随机分为：对照组、模型组、黄芩素低剂量治疗组（80mg·kg^-1·d^-1）和高剂量治疗组（160mg·kg^-1·d^-1）。治疗12周后检测各组大鼠尿白蛋白排泄率（UAER）、血糖（BG）、血肌酐（Scr）、血尿素氮（BUN）、内生肌酐清除率（Ccr）等变化;应用免疫组化技术检测各组肾组织中胶原Ⅳ（ColⅣ）、纤维连接蛋白（FN）、层黏连蛋白（LN）的表达;应用RT—PCR方法检测12-LOmRNA的表达。结果：治疗组较模型组明显改善尿白蛋白、BUN水平和肾脏肥大指数等。与对照组比较,模型组大鼠肾脏ColⅣ、FN、LN的表达明显增加;治疗组可明显降低糖尿病大鼠肾脏ColⅣ、FN、LN的表达。12-LOmRNA的相对含量模型组明显高于对照组（P＜0．01）;低、高剂量治疗组较模型组显著降低（P＜0．01）。两治疗组之间各指标无统计学差异。结论：BAI对2型糖尿病大鼠肾脏具有明显的保护作用,其机制可能是通过抑制12-LOmRNA的表达,从而下调肾脏ColⅣ、FN、LN的表迭,减少ECM沉积,延缓糖尿病肾病的发生、发展。     

金雀异黄素对糖尿病大鼠肾皮质SMemb表达及细胞外基质的作用

目的探讨金雀异黄素(Gen,5,7,4’-三羟异黄酮,又称染料木黄酮)对糖尿病 (DM)大鼠肾组织系膜细胞(MC)表型和细胞外基质的作用。方法雄性SD大鼠45只,分为(1) 正常对照组:10只,普通鼠饲料自由饮食;(2)DM组:再分为4周组9只,8周组8只,普通鼠饲料自由饮食;(3)DM+Gen灌胃组:同样再分为4周组10只,8周组8只,普通鼠饲料自由饮食及 Gen 30 mg．kg-1·d-1。于实验4周、8周末禁食12 h,检测空腹血糖(FBG)、BUN、Scr,肾组织非肌肉型肌球蛋白重链(SMemb)mRNA表达、纤连蛋白(Fn)／肾重及基质金属蛋白酶(MMP)-2／组织基质金属蛋白酶抑制剂(TIMP)-I沉积结果。结果 DM大鼠FBG、BUN、Scr、Fn／肾重均高于正常对照组,以8周时最为显著(P<0．01);MMP-2／TIMP-1免疫组化半定量比值显著降低(P< O．01);SMemb mRNA／GAPDH mRNA半定量比值高于正常对照组,于4周达高峰,8周时下降 (0．794±0．037比0．708±0．029)。Gen干预后与同期DM组相比,肾功能部分恢复,SMemb mRNA／ GAPDH mRNA比值明显缩小(P<0．01);Fn／肾重也显著低于DM组(P<0．01);MMP-2／TIMP-1 比值与同期DM组相比也有显著增加(分别P<0．01或<0．05)。结论金雀异黄素可以减轻链脲佐菌素所诱导DM大鼠的肾皮质SMemb的表达,提高MMP-2／TIMP-1比值,改善糖尿病模型大鼠肾功能,可能有延缓糖尿病肾病(DN)进展的作用。     

重楼对膜性肾病大鼠肾脏核转录因子-κB活化及Ⅳ型胶原表达的影响

目的：探讨重楼对膜性肾病（membranous nephropathy,MN）大鼠肾脏核转录因子-κB（nuclear factor-kappa B,NF-κB）活性及Ⅳ型胶原表达的影响。方法：采用阳离子化牛血清白蛋白（C-BSA）复制大鼠MN模型。随机分为模型对照组、重楼治疗组、雷公藤多苷治疗组（阳性对照组）及正常对照组。应用免疫组织化学法检测各组大鼠肾组织内NF-κBp65及Ⅳ型胶原（ColⅣ）的表达水平;应用RT-PCR法检测各组大鼠肾组织NF-κB mRNA水平。结果：与模型组相比,重楼能明显抑制肾小球NF-κB活化（P〈0.05）及ColⅣ分泌（P〈0.01）;两治疗组的NF-κB的mRNA表达明显低于模型组（P〈0.05）。以上指标两治疗组间无统计学差异。结论：NF-κB的活化参与了MN的肾小球的病理损害过程,重楼对MN大鼠肾脏的保护作用可能与其抑制NF-κB活化有关。     

Decreased expression of pigment epithelium-derived factor is involved in the pathogenesis of diabetic nephropathy

Pigment epithelium-derived factor (PEDF) is a potent angiogenic inhibitor. Previous studies have shown that decreased ocular levels of PEDF are associated with diabetic retinopathy. However, the implication of PEDF expression in diabetic nephropathy has not been revealed. In the present study, we demonstrated for the first time that the expression of PEDF was decreased at both the mRNA and protein levels in the kidney of diabetic rats, whereas transforming growth factor-beta (TGF-beta) and fibronectin levels were increased in the same diabetic kidneys. As shown by immunohistochemistry, the decrease of PEDF expression occurs primarily in the glomeruli. In vitro studies showed that high concentrations of glucose significantly decreased PEDF secretion in primary human glomerular mesangial cells (HMCs), suggesting that hyperglycemia is a direct cause of the PEDF decrease in the kidney. Toward the function of PEDF, we showed that PEDF blocked the high-glucose-induced overexpression of TGF-beta, a major pathogenic factor in diabetic nephropathy, and fibronectin in primary HMCs, suggesting that PEDF may function as an endogenous inhibitor of TGF-beta expression and fibronectin production in glomeruli. Therefore, decreased expression of PEDF in diabetic kidneys may contribute to extracellular matrix overproduction and the development of diabetic nephropathy.     

肿瘤坏死因子相关的凋亡诱导配体系统和核因子κB在糖尿病大鼠肾脏中的表达

目的探讨肿瘤坏死因子相关的凋亡诱导配体（TRAIL）系统在糖尿病肾病发生发展中的作用。方法观察TRAIL及其死亡受体4（DR4）、诱骗受体2（DcR2）和核因子KB（NF-KB）在糖尿病大鼠不同时期肾脏中的表达及分析其与肾功能的关系。将80只Wistar大鼠随机分为对照组（NC组）和糖尿病组（DM组），一侧肾切除后，腹腔注射链脲佐菌素（STZ，55mg／kg）建立糖尿病大鼠模型。在第4、8、12、16周末，随机处死各组8只大鼠，收集血液、尿液和肾组织，检测血生化指标、尿蛋白量（24h）和肥大指数等。应用荧光实时定量RT-PCR和免疫组织化学的方法检测肾皮质TRAIL及其受体DR4、DcR2和NF-KB的mRNA和蛋白的表达情况。结果各时间点DM组大鼠尿蛋白量（24h）和肥大指数（肾质量，体质量）均显著高于NC组（P〈0．05）；血白蛋白在第8周末开始显著低于NC组（P〈0．01）；Scr、BUN于第16周末显著高于NC组（P〈0．01）。DM组大鼠TRAIL及其受体DR4mRNA在第4、8及12周末时表达均显著低于NC组（P〈0．01）；第16周末时表达显著高于NC组（P〈0．01）。DM组大鼠DcR2mRNA在第4、8及12周末时表达均显著高于NC组（P〈0．01）；NF-KB的基因表达均显著高于NC组（P〈0．05）。免疫组化结果显示TRAIL及其受体DR4、DcR2主要在肾小管表达，而在肾小球和脉管系统未见表达；NF-KB在肾小球和肾小管均有表达；TRAIL及其受体和NF-KB在各组表达趋势与PCR结果一致。结论TRAIL系统作为调节细胞凋亡的一组重要因子，参与了糖尿病肾病的发生发展。     

血管紧张素Ⅱ1A型受体基因对糖尿病嵌合体小鼠肾脏细胞外基质重塑的影响

目的 探讨血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）IA型（AT1A）受体基因对糖尿病嵌合体（chimeric）小鼠肾脏细胞外基质的影响。方法 嵌合体小鼠全身组织包括肾脏由AngⅡ1A型受体（ATl．）野生型细胞（ATl^＋／＋）和AngⅡ受体AT1A基因敲除细胞（AT1A-／-）两组不同克隆来源的细胞组成。在AT1A嵌合体小鼠腹腔内注射链尿佐菌素（STZ，300mg／kg），诱导糖尿病模型12周后，取肾脏组织作连续冰冻切片。β半乳糖苷酶（LacZ）染色区分不同基因型的肾小球。PAS染色检测其细胞外基质的表达。免疫组化方法检测转化生长因子（TGF）β1、纤溶酶原激活物抑制物（PAI）1、终末糖基化产物（AGE）、硝基酪氨酸（nitrotyrosine）的表达。比较两种基因型肾小球细胞外基质和各细胞因子的表达变化。结果 在糖尿病状态下，AT1A＋／＋和AT1A-／-小鼠肾小球细胞外基质均较对照组明显增多（P〈0．05）。两种基因型相比，AT1A-／-基因型肾小球的表达绝对值显著高于AT1A＋／＋基因型肾小球（P〈0．05）。但从正常状态到糖尿病形成过程中，其升高幅度却显著低于AT1A＋／＋基因型肾小球（P〈0．01）。各种细胞因子在糖尿病状态下的表达均显著增加（P〈0．05），AT1A-／-基因型肾小球的绝对数值显著高于AT1A＋／＋基因型肾小球（P〈0．05），但AT1A-／-基因型肾小球细胞因子表达的变化幅度低于AT1A＋／＋基因型肾小球（P〈0．01）。结论 AT1A基因缺失使得部分肾小球代偿性上调TGF-β1、PAI-1、AGE和nitrotyrosine的表达。AT1A受体在一定程度上影响了TGF-β1、PAI-1、AGE和nitrotyrosine的表达而参与了糖尿病小鼠肾脏细胞外基质的重塑，但并非独立决定因素。     

益肾胶囊对糖尿病肾病大鼠肾小管间质sFRP-1表达的影响

目的:观察益肾胶囊对糖尿病肾病大鼠肾小管间质Wnt通路抑制因子-分泌型卷曲相关蛋白-1(sFRP-1)表达的影响。方法:采用一次性腹腔注射链脲佐菌素(STZ)法诱导建立糖尿病肾病(DN)模型,实验分组为:正常对照组(对照组)、DN模型对照组(模型组)、益肾胶囊组、氯沙坦组,每组8只。益肾胶囊组每只大鼠灌胃益肾胶囊625 mg.kg-1.d-1,氯沙坦组每只灌胃氯沙坦20 mg.kg-1.d-1,正常组和模型组每日给予等量生理盐水灌胃,于2、4、8、12周末测定24 h尿蛋白定量,于治疗12周后测定各组血糖、血尿素氮(BUN)、肌酐(Scr),同时观察肾小管病理损伤,并采用免疫组化和实时荧光定量PCR方法观察大鼠肾小管间质中sFRP-1、Wnt通路关键调节因子β-catenin表达情况及肾组织中sFRP-1、β-catenin mRNA的表达。结果:12周末,与对照组相比,模型组大鼠血糖、24 h尿蛋白定量、肾小管损伤指数均显著上升,免疫组化示:肾小管间质中sFRP-1表达增加,β-catenin出现胞浆或(和)核表达,实时荧光定量PCR结果显示二者mRNA表达上调(P<0.05);益肾胶囊治疗后,与模型组相比,肾小管间质中sFRP-1表达进一步增加,肾组织中sFRP-1 mRNA进一步上调,β-catenin胞浆或(和)核表达减少,β-catenin mRNA表达下调(P<0.05)。结论:益肾胶囊可能通过上调sFRP-1在DN大鼠肾小管间质的表达,发挥对DN大鼠肾脏的保护作用。     

法安明对糖尿病大鼠血清及肾组织中P-selectin的作用

目的：探讨P-selectin在糖尿病肾病发病中的作用以及低分子肝素法安明对肾脏保护作用的机制。方法：用链脲佐菌素（STZ60mg/kg体重）构建糖尿病大鼠模型后随机分为糖尿病组（DN组）和法安明治疗组（T组）,并设正常对照组（N组）。于应用法安明前、后第4、8、12周分别测定3组大鼠的体重、24h尿蛋白总量、24h尿白蛋白、Scr,12周测血脂、凝血功能;应用ELISA方法检测各组大鼠血P-selectin水平,用免疫组化方法检测肾组织P-selectin,用real-time PCR法测P-selectin mRNA表达;并观察各组大鼠肾脏组织病理学改变。结果：与N组比较,DN组大鼠肾重/体重指数以及24h尿白蛋白、蛋白定量、Scr均显著上升（P〈0.05）;肾组织P-selectin mRNA和蛋白表达增强（P〈0.01或P〈0.05）。与DN组比较,T组大鼠、肾重/体重指数下降（P〈0.05）、24h尿白蛋白、24h尿蛋白量和Scr均显著下降（P〈0.01）;P-selectin mRNA表达水平显著下降（P〈0.01）。结论：P-selectin可能参与了DN的发病过程,法安明可能通过影响P-selectin的表达从而对肾脏有保护作用。     

The role of adrenomedullin and receptors in glomerular hyperfiltration in streptozotocin-induced diabetic rats

BACKGROUND: Since adrenomedullin (AM) elicits vasodilatation by binding to specific AM receptors consisted of calcitonin-receptor-like receptor (CRLR)/receptor-activity-modifying protein 2 (RAMP2) or CRLR/receptor-activity-modifying protein 3 (RAMP3) on endothelial cells and stimulating nitric oxide production, AM possibly involves in glomerular capillary dilatation in early phase of diabetic nephropathy. METHODS: Streptozotocin (STZ)-induced diabetic Sprague-Dawley rats at 4 weeks after the injection were employed for expression studies of AM, RAPM2, and RAMP3. The measurement of AM peptide levels in kidney tissue, plasma, and urine was performed. Human aortic endothelial cells (HAEC) were used to investigate functional link between glucose-induced AM production and nitric oxide release. RESULTS: STZ rats showed glomerular hypertrophy and increased urinary NO2- and NO3- excretion. By Northern blot analyses, AM and RAPM2 mRNAs significantly increased in the kidneys of STZ rats, while RAMP3 mRNA was not altered. In STZ rats, AM peptide was actively secreted into urine (1280 +/- 360 fmol/day vs. control 110 +/- 36 fmol/day). AM peptide was mainly detected on cortical and medullary collecting duct cells in control rat kidneys and AM peptide and mRNA were up-regulated on afferent arterioles and glomeruli of STZ rats. RAMP2 expression was detected on afferent arterioles and not in glomeruli in control rats and it was up-regulated on glomerular endothelial cells in STZ rats. In HAEC culture, d-glucose stimulated AM and nitric oxide production and they were suppressed by addition of AM antisense oligodeoxynucleotides. CONCLUSION: Up-regulated expression of AM and RAMP2 in afferent arterioles and glomeruli may be related to selective dilatation of glomerular capillary in acute phase of type 1 diabetes.