补肾疏肝针药结合对卵巢早衰大鼠卵巢储备力的影响研究

目的:观察补肾疏肝针药结合对卵巢早衰(POF)模型大鼠卵巢储备力的影响。方法:将60只雌性SD大鼠随机分为空白组、模型组、电针组、中药组、针药组、西药组,除空白组外其余各组大鼠采用雷公藤多苷片50mg/kg灌胃联合束缚建立卵巢早衰动物模型。造模成功后,中药组予具有补肾疏肝作用的中药复方灌胃,电针组予电针三阴交、关元、太冲穴,针药组同时予中药灌胃及电针治疗,西药组予戊酸雌二醇溶液灌胃,疗程均为30d。造模前与治疗后称重大鼠计算体质量增量,处死后摘取卵巢称湿重,计算卵巢指数,酶联免疫吸附法测定大鼠血清雌二醇(E2)、卵泡刺激素(FSH)、抗苗勒氏激素(AMH)水平,HE染色观察卵巢组织形态学变化,光镜下计数各级卵泡数目。结果:模型组大鼠体质量增量、卵巢质量和卵巢指数均明显低于空白组(P0.01),西药组、中药组和针药组大鼠治疗后上述指标均明显高于模型组(P0.05,P0.01),电针组大鼠卵巢质量明显高于模型组(P0.05),电针组体质量增量、卵巢质量明显低于针药组(P0.05,P0.01)。模型组大鼠卵巢体积缩小,生长卵泡数减少,还可见大量闭锁卵泡和间质腺,黄体纤维化;各治疗组大鼠卵巢情况明显改善。模型组大鼠卵巢生长卵泡、成熟卵泡、黄体数目均明显低于空白组(P0.01),闭锁卵泡数目明显高于空白组(P0.01);各治疗组上述指标均较模型组有不同程度的改善;针药组较其他治疗组改善程度更有优势,其中生长卵泡、成熟卵泡数目明显高于西药组(P0.05),闭锁卵泡与黄体数目与西药组相当。模型组大鼠血清E2、AMH含量显著低于空白组(P0.01),FSH含量显著高于空白组(P0.01);与模型组相比,各治疗组大鼠性激素水平均有不同程度的改善,针药组FSH、AMH含量与西药组相当。结论:补肾疏肝针药结合治疗POF模型大鼠疗效显著,可改善大鼠低雌激素高促性腺激素状态,促进卵泡生长发育及成熟,抑制卵泡过度闭锁,提高卵巢储备力。     

益经汤对卵巢功能减退模型大鼠卵巢Bcl-2、Bax蛋白的影响

目的研究加减益经汤对卵巢功能减退(decreasing ovarian reserve,DOR)模型大鼠卵巢组织Bcl-2、Bax蛋白表达的影响。方法以环磷酰胺腹腔注射造模DOR模型大鼠,设置模型组、空白组、中药低剂量组、中药中剂量组、中药高剂量组、补佳乐组。采用免疫组化法检测每组大鼠卵巢组织上AMH、Bcl-2、Bax蛋白的表达。结果与空白组比较,模型组大鼠卵巢组织Bcl-2蛋白表达明显降低,Bax蛋白表达明显升高;与模型组比较,中药低、中、高剂量组卵巢组织Bcl-2蛋白表达明显增高,Bax蛋白的表达明显降低,差异有统计学意义(P0.01或P0.05)。结论卵巢卵泡细胞的过快凋亡导致卵巢功能减退,加减益经汤能够增加卵巢组织Bcl-2蛋白的表达,减少Bax蛋白的表达,从而抑制卵泡细胞的凋亡,改善卵巢功能。     

坤泰胶囊对卵巢储备功能下降大鼠卵巢凋亡调控蛋白Bcl-2,Bax表达的影响

目的:探讨坤泰胶囊对去氧乙烯基环己烯(4-vinylcyclohexene diepoxide,VCD)所致卵巢储备功能下降(decreasing ovarian reserve,DOR)大鼠凋亡调控蛋白B细胞淋巴瘤/白血病-2原癌基因(Bcl-2),Bcl-2相关X蛋白(Bax)表达的影响,研究该药的作用机制。方法:SD雌性大鼠连续腹腔注射VCD(80 mg·kg~(-1))15 d,建立与人类相似的生理性卵巢储备功能下降模型。将动物分为正常组,模型组,坤泰胶囊高、中、低剂量组(1.89,0.63,0.21 g·kg-1),补佳乐(戊酸雌二醇,0.13 mg·kg~(-1))组,于造模第1天开始灌胃给药,每天1次,连续45 d。酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测大鼠血清激素卵泡刺激素(FSH),黄体生成素(LH)及雌二醇(E2)水平,苏木素-伊红(HE)染色观察卵巢、子宫的病理组织变化,蛋白质免疫印迹(Western blot)法检测卵巢组织Bcl-2,Bax蛋白的表达。结果:与正常组比较,模型组FSH与LH明显升高,E_2明显降低(P0.05);模型组卵巢、子宫体积明显缩小,原始卵泡与初级卵泡数目明显减少,子宫内膜变薄,腺体数目减少;模型组大鼠卵巢Bcl-2蛋白表达明显减少,Bax蛋白表达明显增加(P0.05),Bcl-2/Bax显著下降(P0.01)。与模型组比较,坤泰胶囊高、中、低剂量组FSH明显降低,E_2明显升高(P0.05);补佳乐组FSH,LH明显降低,E2明显升高(P0.05)。各给药组卵巢、子宫体积增大,原始卵泡与初级卵泡数目增多,子宫内膜变厚,腺体数目增加,改善程度顺序依次为坤泰胶囊低、中、高剂量组、补佳乐组。坤泰胶囊高、中、低剂剂量组及补佳乐组大鼠卵巢Bcl-2蛋白表达明显增加(P0.05,P0.01);坤泰胶囊高、中、低剂量组及补佳乐药组大鼠卵巢Bax蛋白表达减少(P0.05);坤泰胶囊高、中、低剂量组及补佳乐组大鼠卵巢Bcl-2/Bax升高(P0.05,P0.01)。结论:坤泰胶囊可能通过上调卵巢Bcl-2蛋白表达及下调Bax蛋白表达,抑制卵泡的凋亡,从而改善卵巢功能。     

养精种玉汤对卵巢储备功能减退模型大鼠RNA-m6A修饰的影响

目的 观察养精种玉汤对卵巢储备功能减退(DOR)模型大鼠RNA-m⁶A修饰的影响,探讨其改善卵巢储备功能的机制。方法 选取60只动情周期正常的SD雌性大鼠,采用雷公藤甲素诱导DOR模型,将大鼠分为空白组、模型组、脱氢表雄酮(DHEA)组和养精种玉汤低、中、高剂量组(中药低、中、高剂量组),每组10只,给药组分别灌胃相应药液,连续2周。HE染色观察卵巢组织形态,ELISA检测血清雌二醇(E2)、促卵泡激素(FSH)、黄体生成素(LH)、抗米勒管激素(AMH)含量,Western blot、qPCR测定卵巢组织METTL3、FTO、YTHDC2蛋白和基因表达。结果 与空白组比较,模型组大鼠卵巢组织皮质区损伤,颗粒细胞脱落,各级卵泡数量明显减少,闭锁卵泡及黄体数量增加(P<0.05);血清E2、AMH含量减少,FSH、LH含量增加(P<0.05),卵巢组织METTL3、FTO、YTHDC2蛋白及m RNA表达降低(P<0.05)。与模型组比较,中药高剂量组大鼠卵巢组织损伤明显改善,各级卵泡数量增加,闭锁卵泡及黄体数量减少(P<0.05);血清E2...     

七子益肾理冲汤对DOR大鼠卵巢储备的影响

[目的]探讨七子益肾理冲汤对脱氧乙烯基环己烯(VCD)致卵巢储备功能低下(DOR)大鼠卵巢储备功能的影响。[方法]60只雌性SD大鼠随机分为空白组、模型组、中药低、中、高剂量组及脱氢表雄酮(DHEA)组。模型组采用VCD注射制作DOR大鼠模型。观察卵巢指数,HE染色观察卵巢组织形态,放射免疫法检测促卵泡刺激素(FSH)、血清雌二醇(E2)及抗穆勒管激素(AMH)水平。[结果]与空白组比较,模型组卵巢组织萎缩,各级卵泡数目减少,卵巢指数和E2、AMH水平降低,FSH水平升高(P0.05);与模型组比较,中药高剂量组卵巢指数上升,卵巢组织形态明显改善,原始卵泡和黄体增加,闭锁卵泡减少;E2、AMH水平升高,FSH水平降低(P0.05)。[结论]七子益肾理冲汤可修复卵巢储备的损失,促进卵泡生长,抑制卵泡闭锁。     

中药补肾调冲方对卵巢储备功能低下大鼠的影响

目的:观察中药补肾调冲方对环磷酰胺所致卵巢储备功能低下(DOR)大鼠性激素水平和免疫因子TNF-α、IFN-γ含量的影响,探讨补肾调冲方对DOR的预防、改善和调节作用。方法:将SD雌性大鼠40只,随机分为对照组、模型组、补肾调冲方预防组、补肾调冲方治疗组各10只。运用ELISA法检测大鼠血清中雌二醇(E2)、卵泡刺激素(FSH)与黄体生成素(LH)比值、抗苗勒激素(AMH)水平。采用Real Time PCR法检测大鼠卵巢组织相关细胞因子TNF-α、IFN-γmRNA转录水平的变化情况。结果:补肾调冲方可升高DOR大鼠的E2、AMH水平,降低FSH/LH比值和TNF-α、IFN-γmRNA表达,与对照组比较差异具有统计学意义(P0.05)。结论:中药补肾调冲方对卵巢损伤具有一定的预防保护作用,可以预防DOR的发生,其作用机制可能与补肾调冲方中某些中药能够调节卵巢性激素水平,抑制TNF-α、IFN-γ分泌,降低卵泡闭锁的速度,抑制卵泡过度凋亡,进而改善卵巢功能。     

“秩边透水道”针法对早发性卵巢功能不全大鼠HPO轴和Bcl-2、Bax蛋白的影响研究

摘要：目的 探讨“秩边透水道”针法对早发性卵巢功能不全大鼠模型的作用机制研究。方法 筛选60只雌性SD大鼠,随机分为空白组、模型组、秩边组（“秩边透水道”）、普针组（“关元”、“三阴交”、“肾俞”）和西药组（戊酸雌二醇片）,每组12只。除空白组, 其余组连续15日腹腔注射环磷酰胺建立早发性卵巢功能不全大鼠模型。普针组和秩边组分别行隔日针刺,西药组采用戊酸雌二醇灌胃,每天1次,均治疗1个月。治疗结束,采用苏木素-伊红（HE）染色观察卵巢组织病理变化;酶联免疫吸附法（ELISA）检测大鼠血清中卵泡刺激素（FSH）、黄体生成素（LH）、雌二醇（E2）水平;免疫印迹法（Western blotting）检测卵巢组织中Bcl-2和Bax蛋白水平。结果 ① 空白组卵巢组织结构清晰,含有数量丰富的生长卵泡;模型组生长卵泡几不可见,闭锁卵泡数量明显增多;干预组闭锁卵泡数量减少,生长卵泡的数量均有所增加。 ②与空白组相比,模型组FSH、LH水平明显升高（P<0.01）,E2水平显著降低（P<0.01）;与模型组相比,干预组FSH、LH水平明显降低（P<0.01）,E2水平显著升高（P<0.01）;与秩边组相比,普针组FSH水平明显升高（P<0.01）,E2水平明显降低（P<0.01）,LH水平无显著性差异（P>0.05）,西药组FSH、LH、E2水平无显著性差异（均P>0.05）。③较空白组,模型组大鼠卵巢Bcl-2蛋白水平显著降低（P<0.01）,Bax蛋白水平明显增加（P<0.01）,Bcl-2/Bax值明显下降（P<0.01）;较模型组,秩边和西药组Bcl-2水平明显增加（P<0.01）,普针组Bcl-2水平无显著性差异（P>0.05）,秩边、普针、西药组Bax水平均降低（P<0.05）,以及Bcl-2/Bax值均显著升高（P<0.01）;较秩边组,普针组Bcl-2水平明显降低（P<0.01）,Bax水平明显升高（P<0.01）,Bcl-2/Bax值显著降低（P<0.01）,西药组Bcl-2、Bax水平,Bcl-2/Bax值均无显著性差异（P>0.05）。 结论 “秩边透水道” 针法通过降低大鼠血清中FSH、LH水平,增加E2水平,纠正紊乱的下丘脑-垂体-卵巢轴（HPO）,上调Bcl-2蛋白以及下调Bax蛋白水平,延缓细胞凋亡速度,减少闭锁卵泡数量,改善POI大鼠的卵巢功能,效果优于普针组,和西药组相当。     

育肾助孕方对雷公藤多苷致卵巢储备下降大鼠卵巢形态和性激素的影响

目的观察育肾助孕方对雷公藤多苷致卵巢储备功能下降大鼠卵巢组织形态和性激素的影响,探讨其作用机制。方法采用雷公藤多苷药液灌胃制作卵巢储备功能下降大鼠模型。48只雌性SD大鼠随机分为空白组、模型组、阳性药组及育肾助孕方低、中、高剂量组,育肾助孕方各剂组分别给予低、中、高浓度育肾助孕方药液灌胃,阳性药组给予戊酸雌二醇药液灌胃,模型组和空白组给予等量生理盐水灌胃,2次/d,连续14 d。观察大鼠一般情况,取卵巢称重并计算脏器指数,HE染色观察卵巢组织形态,放射免疫法检测血清雌二醇(E2)、促卵泡刺激素(FSH)、睾酮(T)水平,酶联免疫吸附法检测抑制素B(INHB)、抗苗勒管激素(AMH)水平。结果与空白组比较,模型组卵巢组织萎缩,各级卵泡数目减少,卵巢指数和E2、INHB、AMH水平降低,FSH、LH水平升高(P0.01);与模型组比较,育肾助孕方高剂量组卵巢组织形态明显改善,各级卵泡和黄体增加,闭锁卵泡减少;卵巢指数和E2、INHB、AMH水平升高,FSH、LH水平降低(P0.01),且INHB与AMH具有显著相关性(P0.01)。结论育肾助孕方可调节性激素水平,促进卵泡生长和分泌,抑制卵泡闭锁,从而改善卵巢储备功能。     

针刺对雷公藤多苷片所致卵巢功能减退大鼠氧化应激及凋亡的影响

目的:探索针刺是否通过调节大鼠抗氧化应激状态及颗粒细胞凋亡来改善雷公藤多苷片所致的卵巢功能减退(DOR)。方法:将有正常动情周期的SD雌性大鼠随机分为空白组、模型组、激素组、针刺组,每组10只。采用雷公藤多苷片混悬液灌胃(50 mg·kg~(-1)·d~(-1),连续14 d)制备DOR大鼠模型。激素组予雌孕激素序贯疗法干预,针刺组针刺双侧"肾俞"或"关元""中脘"(隔日轮流进行),连续14 d。第9天开始观察各组大鼠的动情周期;实验结束后观察各组大鼠卵巢指数;采用HE染色法观察各组大鼠卵巢形态;ELISA法检测各组大鼠血清雌二醇(E2)、卵泡刺激素(FSH)、黄体生成素(LH)、丙二醛(MDA)及超氧化物歧化酶(SOD)的含量;免疫组织化学法检测各组大鼠卵巢颗粒细胞凋亡蛋白Bax及Bcl-2表达水平;荧光定量PCR法检测各组大鼠卵巢内Bax及Bcl-2 mRNA相对表达量。结果:与空白组比较,模型组卵巢内成熟卵泡减少,闭锁卵泡增多,颗粒细胞形态多出现异常,动情周期紊乱比例升高(P<0. 01),卵巢湿重及卵巢指数明显降低(P<0. 01),血清E2含量显著降低(P<0. 01),FSH、LH、MDA含量明显升高(P<0. 05,P<0. 01),血清SOD含量明显降低(P<0. 01),卵巢组织Bax蛋白及mRNA表达水平显著升高(P<0. 01),卵巢组织Bcl-2蛋白及mRNA表达水平显著降低(P<0. 05,P<0. 01)。与模型组比较,激素组及针刺组卵巢内成熟卵泡增多,闭锁卵泡减少,颗粒细胞形态异常情况明显减少,动情周期紊乱比例显著下降(P<0. 01),卵巢湿重及卵巢指数显著升高(P<0. 01),血清E2含量升高(P<0. 05),FSH、LH、MDA含量降低(P<0. 01,P<0. 05),血清SOD含量明显升高(P<0. 05,P<0. 01),卵巢组织Bax蛋白及mRNA表达水平显著降低(P<0. 01),卵巢组织Bcl-2蛋白及mRNA表达水平显著升高(P<0. 01)。与激素组比较,针刺组SOD含量显著升高(P<0. 01),Bax及Bcl-2蛋白表达水平上升(P<0. 05,P<0. 01),Bcl-2 mRNA表达水平下降(P<0. 01)。结论:针刺可以提高大鼠对抗卵巢氧化应激的能力,降低颗粒细胞的凋亡情况,从而减轻雷公藤多苷片所致的DOR损伤。     

补肾填精中药干预雷公藤多甙致卵巢储备下降大鼠卵巢功能的实验研究

目的:阐释补肾填精中药改善卵巢储备功能的效应机理与靶点。方法:12周龄雌性SD大鼠50只,随机分为5组:空白组、雷公藤模型组、补肾填精中药低、中、高剂量组。观察灌服上述不同药物后大鼠一般情况、卵巢指数、卵巢组织病理形态、血清E2、FSH、P、T水平,卵巢颗粒细胞凋亡因子Bcl-2、Bax、Caspase-3蛋白的表达及血管内皮生长因子VEGF、VEGF受体的表达。结果:补肾填精中药能升高DOR大鼠血清E2水平,降低FSH、P、T水平;上调卵巢颗粒细胞凋亡抑制因子Bcl-2,下调凋亡促进因子Bax、Caspase-3蛋白的表达;对卵巢颗粒细胞VEGF的表达有较弱的促进作用,对VEGF受体的表达无影响。结论:补肾填精中药干预卵巢储备功能低下、保护卵巢的效应机理主要是调节生殖激素、抑制细胞凋亡、促进血管生成,卵巢颗粒细胞是其发挥效应的靶点之一。     

探讨防风通圣散对多囊卵巢综合征大鼠血清激素及卵巢组织学影响

目的探讨防风通圣散对于多囊卵巢综合征(polycystic ovary syndrome,PCOS)大鼠的血清激素及卵巢组织形态的影响及其原理。方法选用36只雌性SD大鼠,随机分为空白组、模型组、中药组,每组12只,对模型组和中药组建立PCOS大鼠模型。造模成功后(每组剩余10只)观察各组大鼠灌胃前后血清激素水平及卵巢组织形态变化。结果中药组黄体生成素(luteinizing hormone,LH)水平、LH/FSH水平、睾酮(testostertone,T)水平低于PCOS模型组(P<0.05),中药组T水平低于空白组(P<0.05),中药组促卵泡激素(follicle-stimulating hormone,FSH)水平、LH水平、LH/FSH水平与空白组差异无统计学意义。中药组大鼠发育中卵泡和黄体数量较模型组略有增加,囊性扩张卵泡明显减少,颗粒细胞层增厚,排列较紧密。结论防风通圣散可明显降低多囊卵巢综合征大鼠的T水平,对改善PCOS大鼠LH水平、FSH水平以及LH/FSH水平有明显的作用,并可有效改善多囊卵巢综合征大鼠的卵巢卵泡生长状态。     

补肾调冲方对卵巢早衰大鼠性激素水平和卵巢Bcl-2/Bax表达的影响

目的:观察补肾调冲方对雷公藤多苷片所致卵巢早衰(premature ovarian failure,POF)雌性大鼠卵巢性激素水平和卵巢中B细胞淋巴瘤/白血病-2(B cell lymphoma/leukemia-2,Bcl-2),促进凋亡蛋白Bcl-2相关X蛋白(Bcl-2 assaciated X protein,Bax)蛋白及mRNA表达的影响,探讨补肾调冲方的预防作用。方法:SD雌性大鼠42只,随机分为正常组,模型组,结合雌激素组,补肾调冲方预防高、中、低剂量组。运用酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测血清中雌二醇(estradiol,E_2),卵泡刺激素(follicule-stimulating hormone,FSH),黄体生成素(luteinizing hormone,LH),孕酮(progesterone,P)水平。蛋白质免疫印迹(Western blot)法和逆转录-聚合酶链式方应(RT-PCR)法检测卵巢组织中Bcl-2,Bax蛋白和mRNA的表达水平。结果:与正常组比较,模型组大鼠FSH,LH含量明显升高,E_2的含量明显降低,卵巢组织中Bcl-2蛋白及mRNA的表达明显降低,Bax蛋白及mRNA的表达明显升高(P0.01);补肾调冲方各给药组和结合雌激素组E_2的含量均高于模型组(P0.01),其中补肾调冲方低、中、高剂量和结合雌激素组E_2含量与正常组比较,差异无统计学意义。补肾调冲方各给药组和结合雌激素组FSH,LH的含量均低于模型组(P0.01);低、中、高剂量组和结合雌激素组FSH,LH含量与正常组比较,差异无统计学意义。各组与正常组P含量比较差异无统计学意义。补肾调冲方预防低、中、高剂量组和结合雌激素组Bcl-2蛋白及mRNA的表达明显高于模型组(P0.01);Bax蛋白及mRNA的表达明显低于模型组(P0.01)。结论:补肾调冲方对卵巢具有一定的保护作用,可以预防卵巢早衰的发生。其作用机制可能与补肾调冲方中某些中药能够调节卵巢性激素水平,维持Bcl-2,Bax的平衡,降低卵泡闭锁的速度,抑制卵泡的过度凋亡,改善卵巢的功能。     

孕康口服液对早发性卵巢功能不全小鼠的影响

目的 观察孕康口服液对早发性卵巢功能不全小鼠的影响.方法 采用正常动情周期ICR小鼠灌胃给予雷公藤多苷溶液40 mg/kg构建早发性卵巢功能不全模型,大鼠随机分为正常组、模型组及孕康口服液高、中、低剂量组(36、18、9 mL/kg),灌胃给药10周.给药期间定期观察小鼠动情周期;ELISA法检测血清中雌二醇(E2)、孕激素(P)、促卵泡生成素(FSH)、促黄体生成素(LH)、催乳素(PRL)、抗苗勒管激素(AMH)、抑制素B(INHB)水平;HE染色观察卵巢组织形态;TUNEL染色检测卵巢颗粒细胞凋亡;免疫组化检测Bax、Bcl-2蛋白表达.结果 与模型组比较,孕康口服液高剂量组能缩短小鼠动情周期(P<0.05),改善卵巢组织形态学并增加窦状卵泡数量(P<0.05);升高血清E2水平(P<0.05);减少卵巢颗粒细胞凋亡数量,并能降低Bax表达以及升高Bcl-2表达.结论 孕康口服液能改善雷公藤多苷致小鼠早发性卵巢功能不全,其机制可能是通过调节凋亡相关蛋白Bcl-2和Bax的表达,减少卵巢颗粒细胞凋亡.     

坤泰胶囊对环磷酰胺致卵巢储备功能低下大鼠卵巢GDF-9、Egr-1的影响

目的:观察预防性应用坤泰胶囊对环磷酰胺致卵巢储备功能低下大鼠血清性激素FSH、LH、E2、AMH水平的影响以及对卵巢GDF-9(生长分化因子9)、Egr-1(早期生长反应基因)基因及蛋白表达的影响,探讨坤泰胶囊对环磷酰胺致卵巢储备功能低下大鼠的治疗作用及作用机制。方法:将60只12周龄SD雌性大鼠随机分为空白组、环磷酰胺模型组(模型组)、坤泰胶囊组(分设高中低剂量)、结合雌激素组。空白组正常喂养;模型组用环磷酰胺腹腔注射法建立卵巢储备功能低下大鼠模型~([1]);各给药组于造模同时分别给予不同剂量的坤泰胶囊及结合雌激素片灌胃。实验期间观察大鼠行为学改变,行阴道涂片观察大鼠动情周期的变化;采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测大鼠血清性激素AMH及FSH、LH、E2水平变化;光镜下观察卵巢形态与卵泡数;实时荧光定量(RT-PCR)检测大鼠卵巢GDF-9、Egr-1m RNA表达水平的变化;免疫组化法检测大鼠卵巢GDF-9、Egr-1蛋白表达水平的变化。结果:坤泰胶囊能够降低模型大鼠体内性激素FSH、LH的水平,升高E2及AMH水平,并且能够增加大鼠卵巢中GDF-9、EGR-1蛋白及m RNA表达,修复大鼠受损的卵巢组织结构,改善卵巢血供,减少卵泡闭锁,提高成熟卵泡存在数量,改善大鼠动情周期及行为学变化。结论:预防性应用坤泰胶囊,可有效提升卵巢敏感性,治疗效果与西药结合雌激素片无明显差异。     

坤泰胶囊对卵巢储备功能下降大鼠的影响

目的探讨坤泰胶囊对卵巢储备功能下降大鼠的影响。方法雌性SD大鼠随机分为正常组、模型组、坤泰胶囊组(0.5 g/kg)、西药组[戊酸雌二醇片(0.12 mg/kg)、黄体酮胶囊(18 mg/kg)]、中西药组,雷公藤多苷片(50 mg/kg)灌胃14 d建立卵巢储备功能下降模型。ELISA法检测抗苗勒氏管激素(AMH)、雌二醇(E2)、促黄体生成素(LH)、促卵泡生成素(FSH)水平,HE染色观察卵巢变化,Western blot、实时荧光定量PCR检测大鼠卵巢组织Smad2、Smad3、Smad7表达。结果与模型组比较,坤泰胶囊组、中西药组、西药组能显著提高E2、AMH水平及Smad2、Smad3表达,且显著降低Smad7表达(P<0.05);中西药组、西药组能显著降低FSH、LH水平(P<0.05)。药物干预后,各级卵泡发育,卵泡结构完整,卵泡外围包绕的颗粒细胞层数、黄体数量多于模型组,排列规则,发育尚可。结论坤泰胶囊可能通过调控卵巢组织Smad2/3/7表达,促进及维持卵泡发育,从而改善卵巢储备功能下降大鼠卵巢功能。     

养阴舒肝颗粒对VCD诱导卵巢功能下降大鼠Bcl-2,Bax及Caspase-3蛋白表达的影响

目的:探讨养阴舒肝颗粒对卵巢功能下降模型大鼠卵巢功能及;B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2),Bcl-2相关X蛋白(Bax),半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)蛋白的影响。方法:选取动情周期规则的雌性SD大鼠,取10只作为正常组,其余大鼠均采用160 mg·kg~(-1)去氧乙烯基环己烯(VCD)腹腔注射诱导卵巢功能下降模型,取造模成功的56只大鼠按体质量随机分为模型组,养阴舒肝颗粒低(2.1 g·kg~(-1)),中(4.2 g·kg~(-1)),高剂量组(8.4 g·kg~(-1))和坤泰胶囊组,每组11只(模型组12只)。采用养阴舒肝颗粒和坤泰胶囊进行灌胃给药,干预治疗4周后进行卵巢称质量,计算各级卵泡的数目,酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测血清性激素水平卵泡刺激素(FSH),雌二醇(E_2),抗缪勒氏管激素(AMH),蛋白免疫印迹法(Western blot)检测卵巢组织Bcl-2,Bax,Caspase-3的表达量。结果:与正常组比较,模型组大鼠的卵巢质量和卵巢指数下降(P0.01),闭锁卵泡数目增多(P0.01),FSH水平升高(P0.01),E_2和AMH水平下降(P0.05),卵巢组织Bcl-2蛋白的表达减少(P0.01),Bax,Caspase-3蛋白的表达(P0.01);与模型组比较,养阴舒肝颗粒可以增加模型大鼠的双侧卵巢质量(P0.05,P0.01);养阴舒肝颗粒和坤泰胶囊可以增加卵巢指数(P0.05,P0.01);养阴舒肝颗粒可以减少闭锁卵泡的数目(P0.05);养阴舒肝颗粒和坤泰胶囊均可以降低FSH水平(P0.05),升高E_2和AMH水平(P0.05),增加卵巢组织Bcl-2的表达(P0.01),同时抑制Bax,Caspase-3的表达(P0.01)。结论:养阴舒肝颗粒可以提高卵巢功能下降模型大鼠的卵巢功能,其机制可能与抗细胞凋亡有关。     

电针预处理对早发性卵巢功能不全模型大鼠卵巢保护作用的实验研究

目的:探讨电针"中髎""天枢"预处理对早发性卵巢功能不全模型大鼠卵巢的保护作用和可能机制。方法:将动情周期规律的32只SD雌性大鼠随机分为空白组、模型组、电针组、捆绑组,每组8只。模型组、电针组和捆绑组采用去氧乙烯基环己烯(VCD)按160 mg/kg体质量连续腹腔注射15 d造模。电针组自造模之日起于"中髎""天枢"穴进行电针预处理,前2周每日1次、5次/周,后2周隔日1次、3次/周。每次20 min,共4周。捆绑组只捆绑固定,时间、频次和总次数同电针组。空白组、模型组不干预。模型组造模成功后处死大鼠,检测各组大鼠性腺湿重和性腺指数;采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测血清性激素抗苗勒激素(AMH)、抑制素B(inhibin B)水平,采用放射免疫分析法检测促卵泡生成素(FSH)、黄体生成素(LH)、雌二醇(E2)、孕酮(P)、睾酮(T)水平,并观察卵巢组织形态和卵泡数量,采用蛋白印迹法检测卵巢组织B淋巴细胞瘤-2基因(Bcl-2)、B淋巴细胞瘤-2相关X蛋白基因(Bax)蛋白表达。结果:与空白组相比,模型组大鼠左、右侧卵巢湿重和卵巢指数均降低,子宫湿重和子宫指数均降低(P0.05,P0.01);血清AMH和inhibin B均降低(均P0.01),血清FSH、LH、T升高(均P0.01),E2、P降低(均P0.01);卵巢组织中原始卵泡、初级卵泡相应降低(均P0.01),闭锁卵泡增多(P0.01);Bax蛋白表达明显升高(P0.01),Bcl-2蛋白表达降低(P0.01)。与模型组相比,电针组大鼠左、右侧卵巢湿重和卵巢指数均升高,子宫湿重升高(P0.05,P0.01);血清AMH和inhibin B均升高,血清FSH、LH降低,E2、P升高(P0.05,P0.01);卵巢原始卵泡、初级卵泡相应升高,闭锁卵泡减少(P0.05,P0.01);卵巢组织Bax蛋白表达降低,Bcl-2蛋白表达升高(P0.05,P0.01)。捆绑组和模型组各指标间比较差异均无统计学意义(均P0.05)。结论:4周的电针"中髎""天枢"预处理对早发性卵巢功能不全模型大鼠的卵巢有一定的保护作用,该保护作用可能是通过上调卵巢颗粒细胞抑制凋亡因子Bcl-2蛋白的表达、下调促凋亡因子Bax蛋白的表达来发挥作用的。     

补肾健脾疏肝法治疗高龄卵巢储备功能低下临床观察

目的:观察补肾健脾疏肝法对高龄卵巢储备功能低下(DOR)患者卵泡刺激素(FSH)、促黄体生成素(LH)、雌二醇(E_2)及抗苗勒氏管激素(AMH)水平的影响。方法:将70例高龄DOR患者按随机数字表法分成中药组和西药组各35例。中药组予补肾健脾疏肝法治疗,西药组予激素替代疗法治疗,2组均治疗6月。观察2组治疗前后FSH、LH、E_2及AMH水平的变化。结果:治疗后,2组FSH、LH及西药组的AMH水平均较治疗前降低(P0.05,P0.01),2组E_2水平均较治疗前升高(P0.05,P0.01);中药组的E_2水平高于西药组(P0.05)。结论:补肾健脾疏肝法能有效降低高龄DOR患者的FSH、LH水平,提高E_2水平及延缓AMH的下降速度。在延缓AMH下降速度方面,效果优于西药组,且无明显不良反应,值得在临床推广。     

护卵汤联合针刺治疗肾虚肝郁型卵巢储备功能不足

目的:研究护卵汤联合针刺治疗肾虚肝郁型卵巢储备功能不足的临床效果。方法:选取2016年5月至2017年5月武汉市第一医院收治的肾虚肝郁型卵巢储备功能不足患者220例,随机分为三组,针药组110例,用针刺联合中药治疗;西药组55例,用西药进行治疗;中药组55例,用护卵汤进行治疗。比较三组患者生存质量和血清学检测评分。结果:针药组治疗后生活质量显著高于西药组和中药组,差异具有统计学意义(P 0.05);针药组患者卵泡刺激素(FSH)以及雌二醇(E2)水平明显低于西药组和中药组,黄体生成素(LH)、抗苗勒氏管激素(AMH)明显高于西药组和中药组,差异均具有统计学意义(P 0.05),抑制素B差异无统计学意义(P 0.05)。结论:护卵汤联合针灸能缩短肾虚肝郁型卵巢储备功能不足患者的治疗疗程,明显减轻卵巢功能低下患者的身心痛苦,降低了血清FSH水平,提高卵巢储备功能。     

针刺联合护卵汤对雷公藤多甙致卵巢储备功能受损大鼠卵巢形态及雌激素受体表达的影响

目的观察针刺联合护卵汤对雷公藤多甙致卵巢储备功能受损大鼠卵巢形态及雌激素受体表达的影响,研究其作用机理。方法 SPF级4~6月龄SD雌性大鼠随机分为正常对照组、模型组、针刺组、中药组、针药组(针刺加中药)以及西药组。除正常对照组不参与造模外,其余各组大鼠均以雷公藤多甙片50mg/kg灌胃,建立与人类相似的生理性卵巢储备功能下降模型。每日9:00时,正常对照组予等量生理盐水灌胃,造模大鼠灌服雷公藤多苷药液;15:00时,中药组、针药组予护卵汤药液灌胃,西药组予克龄蒙药液灌胃,针刺组、模型组和正常对照组予等量生理盐水灌胃,针刺组、针药组灌胃同时予以针刺,连续16d。采用HE染色后观察子宫、卵巢组织形态学变化,免疫组织化学法观察卵巢ER-蛋白的表达。结果与正常组比较,模型组卵巢指数、子宫指数明显缩小,原始卵泡与初级卵泡数目明显减少;卵巢ER-表达明显减少(0.05);各给药组卵巢、子宫指数增大,原始卵泡与初级卵泡数目增多,ER-表达明显增加(0.05,0.01),针药组尤为明显。结论针刺联合护卵汤可能通过上调卵巢ER-蛋白表达,改善卵巢功能。