淫羊藿甙对HL－60细胞诱导分化作用的研究

淫羊藿甙对ＨＬ－６０细胞诱导分化作用的研究赵勇崔正言张玲李淑贞淫羊藿甙（ＩＣＡ）是从淫羊藿中提取的主要单体成分，具有免疫调节作用。有关ＩＣＡ诱导白血病细胞分化的研究，尚未见报道。我们以ＨＬ－６０细胞为实验模型，研究了ＩＣＡ的增殖抑制及诱导分化作用。材...     

重组人白细胞介素4对白血病细胞HL-60/VCR的多药耐药逆转研究

人白细胞介素 4具有抑制白血病细胞增殖、诱导分化、激发机体抗肿瘤免疫反应等作用 ,在辅助治疗白血病中具有良好的应用前景[1]。本研究中我们通过建立人白血病细胞ＨＬ 60多药耐药 (ＭＤＲ)模型 ,初步探讨重组人白细胞介素 4(ｒｈＩＬ 4 )是否逆转多药耐药及其可能的机制 ,为ｒｈＩＬ 4临床上辅助治疗白血病提供理论依据。材料和方法1　细胞　ＨＬ 60细胞本室常规传代培养于含体积分数为1 0 %的新生小牛血清 (Ｇｉｂｃｏ公司 )的ＲＰＭＩ 1 64 0培养液中。2　药物　ｒｈＩＬ 4 (纯度 >98% ,产地美国 ,ＥＤ5 0 >2× 1 0 6 Ｕ/ｍｌ)由北京邦…     

丹参酮ⅡA诱导MR2细胞株细胞分化及凋亡的体外研究

近来有人研究发现 ,0 .5 μｇ ｍｌ丹参酮ⅡＡ(ＴａｎⅡＡ)在体外能诱导人急性早幼粒细胞白血病 (ＡＰＬ)细胞株ＮＢ4和原代培养人ＡＰＬ细胞向终末细胞分化 ,使细胞生长受抑及诱导细胞凋亡[1 3 ] 。我们以对维甲酸耐药的ＡＰＬ细胞株ＭＲ2为体外模型 ,研究ＴａｎⅡＡ对ＭＲ2细胞的诱导分化及促凋亡作用。材料和方法1　细胞培养　将ＭＲ2细胞 (由上海第二医科大学附属瑞金医院血液学研究所惠赠 )及ＮＢ4细胞 (引自中国医学科学院药物研究所 )分别接种于含 10 %小牛血清、青霉素 10 0Ｕ ｍｌ及链霉素 10 0 μｇ ｍｌ的ＲＰＭＩ 16 40培养液…     

腺苷诱导白血病细胞发生凋亡

腺苷诱导白血病细胞发生凋亡张群洲周克元凌光鑫我们曾对腺苷的药理作用机制作了系列研究，在此基础上我们用体外培养的方法进一步观察了它对ＨＬ－６０细胞凋亡的诱导作用，并在方法上进行了适当的探索。材料和方法１腺苷处理ＨＬ－６０细胞腺苷溶于ＲＰＭＩ１６４０中，...     

环孢霉素A对威猛诱导HL—60细胞凋亡的增强作用

我们在拓扑异构酶Ⅱ抑制剂威猛（Ｖｍ２６）体外诱导ＨＬ６０细胞凋亡的实验中加环孢霉素Ａ（ＣｓＡ），观察ＣｓＡ对Ｖｍ２６诱导ＨＬ６０细胞凋亡的调节作用。材料和方法１细胞培养ＨＬ６０细胞用含体积分数为１０％的小牛血清的ＲＰＭＩ１６４０培养基，在３７℃...     

1,25-二羟基维生素D3与小剂量阿糖胞苷联用对HL-60细胞诱导分化作用的实验研究

我们以 1,2 5 二羟基维生素Ｄ3 (Ｄ3 )与小剂量阿糖胞苷(Ａｒａ Ｃ)联合作用于ＨＬ 6 0细胞 ,通过形态学、细胞功能及癌基因表达的检测 ,研究二者的联合效应 ,以及时间、剂量依赖关系。材料和方法1　细胞培养　ＨＬ 6 0细胞系由北京大学人民医院流式细胞室提供 ,用含体积分数为 2 0 %小牛血清的ＲＰＭＩ 16 4 0培养基(含青霉素、链霉素、卡那霉素各 1.0× 10 5Ｕ/Ｌ)在体积分数为5 %的ＣＯ2 、37℃、饱和湿度下培养 ,每 2～ 3ｄ传代 1次 ,细胞悬浮生长。2　药物和试剂　Ｄ3 由上海罗氏制药有限公司提供 ,用无水乙醇溶解至 10 -3 ｍｏｌ/Ｌ…     

三氧化二砷对K562及其多药耐药细胞系K562/A02细胞的诱导凋亡研究

Ｐ170表达阳性的白血病细胞往往对多种不同化学结构和作用靶点的药物同时发生耐药。我们观察了三氧化二砷(Ａｓ2 Ｏ3 )对体外培养的人急性红白血病细胞系Ｋ5 6 2及其多药耐药细胞系Ｋ5 6 2 /Ａ0 2细胞的凋亡诱导作用 ,以探讨Ａｓ2 Ｏ3 对多药耐药白血病细胞的作用。材料和方法1　药品　Ａｓ2 Ｏ3 (Ｓｉｇｍａ公司 )溶于Ｈａｎｋｓ缓冲液中 ,配制成 1ｍｍｏｌ/Ｌ ,保存于 4℃。2　细胞株及细胞培养　Ｋ5 6 2及其多药耐药细胞系Ｋ5 6 2 /Ａ0 2细胞 (中国医学科学院、中国协和医科大学血液学研究所提供 )置于含体积分数为 10 %小牛血清的ＲＰＭ…     

淫羊藿素对KG-1a细胞增殖和凋亡的影响及其相关作用机制

目的:分析淫羊藿素抑制Wnt/β-catenin信号通路干预急性髓系白血病KG-1a细胞增殖的可能机制,为开发治疗急性髓系白血病药物提供实验依据。方法:50只c57BL/6小鼠编号后随机分为空白对照、模型对照和淫羊藿素高、中、低剂量共5组(n=10只),除空白对照组外均采用腹腔注射人急性髓系白血病细胞KG-1a的方法建模。淫羊藿素高、中、低剂量组分别按80、40和20 mg/kg剂量肌肉注射淫羊藿素治疗3周,模型对照组和空白对照组肌肉注射生理盐水。采用蛋白免疫印迹法(Western blot)检测S期激酶相关蛋白2(SKP2)、β-连环蛋白(β-catenin)、E-钙黏蛋白(E-cadherin)及多聚腺素二磷酸核糖多聚酶[poly(ADP-ribose)polymerase;PARP]蛋白表达;采用分光光度法检测细胞中半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)和天冬酶-3酶原(Procaspase-3)活性;流式细胞术分别检测经淫羊藿素处理后的细胞周期时相分布和细胞凋亡率情况。结果:淫羊藿素可增强Caspase-3活性,降低Procaspase-3的水平,还可上调E-cadherin蛋白的表达,下调SKP2和β-catenin蛋白的表达,呈剂量依赖性增加PARP蛋白表达,经淫羊藿素处理后细胞凋亡明显,KG-1a细胞被阻滞于G_0/G_1期,KG-1a细胞生长明显受到抑制。结论:淫羊藿素能够剂量依赖性地裂解PARP,以诱导人急性髓系白血病细胞株KG-1a细胞凋亡,其作用机制可能与抑制Wnt/β-catenin信号通路及其下游相关基因表达有关。     

限制性显示技术分离差异表达基因--Mac30

为了进一步从基因水平上阐明Ａｓ2 Ｏ3 治疗白血病的作用机制 ,以更好地预防和治疗白血病 ,我们应用限制性显示ＰＣＲ(ＲＤ ＰＣＲ)技术收集Ａｓ2 Ｏ3 处理前后Ｋ5 6 2细胞的ｃＤＮＡ片段 ,用聚丙烯酰胺凝胶电泳分离 ,并进一步筛选、分析了细胞内基因表达的变化情况。材料和方法1　主要试剂　精制小牛血清和ＲＰＭＩ 16 4 0培养基购自Ｈｙ ｃｌｏｎｅ公司 ,Ａｓ2 Ｏ3 购自Ｓｉｇｍａ公司 ,用 12 0ｍｍｏｌ/Ｌ的ＮａＯＨ溶液配成 1ｍｍｏｌ/Ｌ的贮备液 ,4℃贮存。总ＲＮＡ提取试剂(ＴＲＩｚｏｌ)购自上海生工生物工程公司。ｍＲＮＡ纯化试剂…     

氧化砷对白血病细胞内 PML/PML-RARα 蛋白的影响

目的：探讨急性早幼粒细胞白血病细胞的分子标志ＰＭＬ－ＲＡＲα在氧化砷（Ａｓ２Ｏ３）诱导的细胞凋亡中的可能作用。方法：观察Ａｓ２Ｏ３对ＰＭＬ－ＲＡＲα蛋白在亚细胞定位的影响。结果：①在１μｍｏｌ／Ｌ的Ａｓ２Ｏ３作用下，ＨＬ－６０细胞核内ＰＭＬ抗血清染色明显减少，而在胞浆的近核膜区出现弥散分布的荧光染色；②Ａｓ２Ｏ３诱导ＮＢ４细胞内散在分布的ＰＭＬ抗血清染色颗粒明显减少；③通常情况下，少数ＮＢ４细胞的胞浆中存在ＰＭＬ抗血清染色颗粒的聚集，这类细胞在Ａｓ２Ｏ３作用后明显增多，凋亡细胞中ＰＭＬ抗血清染色聚集现象也存在；④全反式维甲酸（ＡＴＲＡ）预处理２４或４８小时并不改变Ａｓ２Ｏ３对ＮＢ４细胞的凋亡诱导效应。结论：Ａｓ２Ｏ３诱导细胞凋亡的过程不依赖维甲酸信号途径，可能通过ＰＭＬ／ＰＭＬ－ＲＡＲα及其它相关基因或蛋白的调控来实现。     

维甲酸受体α与急性早幼粒细胞白血病PML—RARα融合受体特性研究

作者通过受体的放射配基结合分析方法，研究了ＨＬ－６０细胞中维甲酸受体α（ＲＡＲα）与急性早幼粒细胞白血病（ＡＰＬ）细胞中ＰＭＬ－ＲＡＲα融合受体的一些特性。结果显示：ＲＮＡα在细胞中以单体形式存在，ＰＭＬ－ＲＡＲα则以复合体形式存在；ＰＭＬ－ＲＡＲα与全反式维甲酸（ＡＴＲＡ）的亲和力比ＲＡＲα与ＡＴＲＡ的亲和力低。提示：ＲＡＲα与ＰＭＬ－ＲＡＲα这些特性的差异可能与ＡＰＬ发病及ＡＴＲＡ治疗作用有关     

HL-60及COC1细胞亲代及耐药细胞系中细胞外调节蛋白激酶与端粒酶活性变化

我们研究了急性早幼粒细胞白血病细胞系ＨＬ 6 0及其耐药细胞系ＨＬ 6 0 Ｅ6、卵巢癌细胞系ＣＯＣ1及其耐药细胞ＣＯＣ1 ＤＤＰ中细胞外调节蛋白激酶 (ＥＲＫ)及端粒酶活性的改变 ,以了解ＥＲＫ信号传导途径和端粒酶在白血病和卵巢癌耐药形成中的意义。材料和方法1　细胞培养　ＨＬ 6 0、ＣＯＣ1和ＣＯＣ1 ＤＤＰ细胞引自武汉大学中国典型培养物保藏中心。ＨＬ 6 0 Ｅ6细胞系是采用周期间歇小剂量表阿霉素作用于ＨＬ 6 0细胞建立的多药耐药细胞系[1 ] 。上述细胞培养采用含 10 %胎牛血清、10 0Ｕ ｍｌ青霉素、10 0 μｇ ｍｌ链霉素的ＲＰ…     

维甲酸受体α与急性早幼粒细胞白血病PML－RARα融合受体特性研究

作者通过受体的放射配基结合分析方法，研究了ＨＬ－６０细胞中维甲酸受体α（ＲＡＲα）与急性早幼粒细胞白血病（ＡＰＬ）细胞中ＰＭＬ－ＲＡＲα融合受体的一些特性。结果显示：ＲＡＲα在细胞中以单体形式存在，而ＰＭＬ－ＲＡＲα则以复合体形式存在；ＰＭＬ－ＲＡＲα与全反式维甲酸（ＡＴＲＡ）的亲和力比ＲＡＲα与ＡＴＲＡ的亲和力低。提示：ＲＡＲα与ＰＭＬ－ＲＡＲα这些特性的差异可能与ＡＰＬ发病及ＡＴＲＡ治疗作用有关。     

端粒酶活性在白血病细胞凋亡中的变化及凋控机制研究

端粒酶是一种核糖核蛋白酶 ,具有维持端粒长度 ,防止染色体端 端融合、重组、丢失或降解 ,延长细胞生存时间的功能。白血病细胞内的高端粒酶活性是保持其永生化的关键。细胞外调节蛋白激酶 (ＥＲＫ)通路与细胞凋亡及细胞恶性表型转变等多种细胞生物学效应有关。我们观察了几种常用化疗药物诱导白血病细胞凋亡时 ,端粒酶活性和ＥＲＫ表达的变化 ,探讨了ＥＲＫ和端粒酶之间的相互关系及其在化疗药物诱导白血病细胞凋亡中的作用。材料和方法1　细胞培养　ＨＬ 6 0和Ｋ5 6 2细胞系均引自中国典型培养物保藏中心。采用含体积分数为 10 %的胎牛血…     

淫羊藿苷抑制钛颗粒诱导的炎症反应

背景：体外实验表明,淫羊藿苷可抑制脂多糖诱导的急性肺炎,其抗炎作用在磨损颗粒存在的条件下是否依然有效？目的：通过体内外实验相结合的方法探讨淫羊藿苷对磨损颗粒诱导炎症反应的调控作用。方法：①体内实验：将80只雄性C57BL/6小鼠随机分为4组,钛组和钛＋淫羊藿苷组采用钛诱导小鼠颅骨无菌炎症模型,对照组、淫羊藿苷组也进行相同手术过程,但不植入钛,淫羊藿苷组、钛＋淫羊藿苷组建模当天灌胃给予淫羊藿苷200 mg/（kg·d）,对照组、钛组灌胃给予等量的安慰剂,2周后酶联免疫吸附实验、定量RT-PCR检测肿瘤坏死因子α,白细胞介素1β蛋白或mRNA的表达量。②体外实验：将小鼠单核/巨噬细胞RAW264.7分别与核因子кB受体配体、核因子кB受体配体＋淫羊藿苷、核因子кB受体配体＋钛颗粒及核因子кB受体配体＋钛颗粒＋淫羊藿苷共培养72 h,ELISA检测培养基上清中肿瘤坏死因子α,白细胞介素1β水平,RT-PCR分析肿瘤坏死因子α,白细胞介素1β基因mRNA表达。结果与结论：①体内实验：在钛颗粒存在的条件下,口服淫羊藿苷可明显减少颗粒诱导的炎症细胞浸润,使炎性增厚的骨膜变薄,抑制颅骨标本中肿瘤坏死因子α,白细胞介素1β的表达。②体外实验：经钛颗粒刺激后,细胞培养基中肿瘤坏死因子α,白细胞介素1β质量浓度显著增加,细胞中相应mRNA表达量上调,而经淫羊藿苷干预后这两种炎性因子在蛋白和基因水平的表达量显著下调。结果表明淫羊藿苷在体内外均可显著抑制钛颗粒诱导的炎症反应。     

一种分离提取非实体瘤凋亡细胞的方法

分离提取凋亡细胞对许多研究有重要意义 ,我们参考Ｍａｒｔｉｎ等[1] 的方法 ,建立了一种简便易行的非实体瘤凋亡细胞分离提取方法。1　材料和方法1 1　细胞培养　ＨＬ 6 0细胞株 (本院血液病研究室提供 ) ,常规ＲＰＭＩ 16 40培养基 (Ｇｂｉｃｏ产品 )培养 ,隔天换液 ,所有用于实验的细胞均处于对数生长期。1 2　凋亡细胞诱导　调整细胞浓度至 10 6/ｍｌ,加入以二甲基亚砜 (ＤＭＳＯ)溶解的抗癌药物ＶＰ 16 (Ｅｔｏｐｏｓｉｄｅ ,Ｓｉｇｍａ产品 )至所需浓度 (0、5、10、2 0、40 μｇ/ｍｌ)作用 3 5ｈ ,ＰＢＳ(ｐＨ 7 2 ,不含Ｃａ+ 、Ｍｇ2…     

CD3AK细胞对耐药白血病细胞的体外杀伤作用

肿瘤生物治疗是近年来肿瘤治疗中的重要进展之一 ,其中采用免疫效应细胞 ,如ＬＡＫ细胞、ＴＩＬ、ＣＤ3 ＡＫ、ＣＩＫ、ＣＴＬ等进行的过继免疫治疗在某些肿瘤的治疗中取得了一定疗效。ＣＤ3 ＡＫ细胞是由抗ＣＤ3 单抗联合小剂量ＩＬ 2激活的Ｔ细胞 ,增殖能力和杀伤力较强。我们在实验中观察了ＣＤ3 ＡＫ细胞对耐药的白血病细胞株及慢性髓系白血病 (ＣＭＬ)急变患者原代肿瘤细胞的体外杀伤作用。材料和方法1　材料　正常人外周血由健康男性提供 ;ＣＭＬ急变患者骨髓由附属医院血液科提供。Ｋ5 6 2、ＨＬ 6 0、Ｋ5 6 2 ＶＣＲ细胞系由上海血…     

OKT3与骁悉联合治疗Ⅳ度移植物抗宿主病成功一例

患者 ,女 ,46岁 ,原发病为急性髓系白血病 (ＡＭＬ)Ｍ4 型 ,ＣＲ1持续 1年进行异基因外周血干细胞移植 (ａｌｌｏ ＰＢＳＣＴ)。ＨＬＡ位点完全相合 ,刺激指数 (ＳＩ)为 0 .90 ,混合淋巴细胞培养 (ＭＬＣ) :Ｒ12 (患者刺激细胞与供者反应细胞 ) =0 .0 0 % ,Ｒ2 1(供者刺激细胞与患者反应细胞 ) =0 .78%。预防移植物抗宿主病 (ＧＶＨＤ)用环孢菌素Ａ(ＣｓＡ) 10 0ｍｇ/ｄ 短程甲氨蝶呤(ＭＴＸ) ( 1天 15ｍｇ/ｍ2 , 3天、 6天均给予 10ｍｇ/ｍ2 )。移植后白细胞 >1.0× 10 9/Ｌ ,血小板 >5 0× 10 9/Ｌ的时间分别为 2 0天和 2 9天。 2 4天…     

硫化砷诱导NB4细胞凋亡及细胞周期阻滞的研究

硫化砷(ａｒｓｅｎｉｃｓｕｌｆｉｄｅ,ＡＳ)包括三硫化二砷(Ａｓ2Ｓ3)及四硫化四砷(Ａｓ4Ｓ4)。Ａｓ2Ｓ3是雌黄的主要成分,Ａｓ4Ｓ4是雄黄的主要成分。我所近年应用硫化砷治疗急性早幼粒细胞白血病(ＡＰＬ),取得满意效果[1]。为研究ＡＳ治疗ＡＰＬ的机制,我们以ＮＢ4细胞为体外模型,探讨了ＡＳ对ＡＰＬ的作用,发现ＡＳ能够在体外诱导细胞凋亡及细胞周期阻滞,而二巯基丙醇能够部分抵消ＡＳ对细胞凋亡及细胞周期阻滞的诱导作用。提示ＡＳ是治疗ＡＰＬ的有效药物。材料和方法1　试剂　Ａｓ2Ｓ3购自美国Ａｃｒｏｓ公司,纯度99.99%,溶于ＲＰＭＩ…     

氧化砷对白血病细胞内PML／PML—RARa蛋白的影响

探讨急性早幼粒细胞白血病的分子标志ＰＭＬ－ＲＡＲａ在氧化砷诱导的细胞凋亡中的可能作用。观察Ａｓ２Ｏ３对ＰＭＬ－ＲＡＲａ蛋白在亚细胞定位的影响。结论Ａｓ２Ｏ３诱导细胞凋亡的过程不依赖维甲酸信号途径，可能通过ＰＭＬ／ＰＭＬ－ＲＡＲａ及其它相关基因或蛋白的主财控来实现。