反向遗传学技术在病毒RNA聚合酶研究中的应用

病毒的依赖RNA的RNA聚合酶（RdRp）在RNA病毒的基因组的复制中是绝对必需的，曾一度被称为“RNA复制酶”。实际上，它也可以作为“RNA转录酶”转录mRNA从而进行基因的表达。在40年前，RNA噬菌体发现后不久，关于依赖RNA的RNA聚合酶的生化特性的研究就开始了。尽管付出了巨大的努力，也仅成功地纯化出少数几种细菌病毒、动物病毒和植物病毒的RNA聚合酶。病毒的RNA聚合酶的表达水平低、活性不稳定、结构和功能复杂，所以对其分子生物学的研究非常困难。     

RNA干扰技术分子机制的研究新进展

RNA干扰是一种基因沉默技术。目前,它在基因功能研究、肿瘤的基因治疗及新药的研究与开发等方面已显示出广阔前景。与此同时,RNA干扰分子机制的研究也取得了飞速发展,包括对转录水平、转录后水平、翻译水平、基因甲基化等层次的研究。清晰阐述RNA干扰的作用机制将为大规模基因系统筛查、新基因的发现、人类肿瘤及难治性疾病的基因治疗提供重要理论依据和有力工具。     

金欣口服液有效单体对呼吸道合胞病毒RNA聚合酶转录活性的影响

目的：探讨金欣口服液有效单体对呼吸道合胞病毒（RSV）RNA聚合酶转录活性的影响。方法：通过RSV感染体外培养的细胞并用药物干预、提取病毒核糖核蛋白复合体（RNP）,体外转录,同位素检测RSV的mRNA全长转录本,检测金欣口服液及其主要有效成分对RSV的RNA依赖的RNA聚合酶（RdRp）活性的影响。结果：与正常细胞组比较,病毒感染细胞模型组（病毒组）放射性核苷酸辐射强度明显增加;与病毒组比较,单体联合（黄芩苷＋白藜芦醇）组辐射强度显著降低;而各血清组差异不显著。结论：金欣口服液有效单体黄芩苷＋白藜芦醇联合作用能够降低RSV的RNA依赖的RNA聚合酶的活性,其可能是金欣口服液治疗呼吸道合胞病毒性肺炎的机制之一。     

黄芩苷对RSV转录、复制及融合效应的影响

目的研究黄芩苷对呼吸道合胞病毒(RSV)复制、转录及融合效应的影响,探讨临床验方金欣口服液的药效物质基础。方法构建RSV感染的Hep-2细胞模型,黄芩苷干预后采用体外转录法、实时荧光定量PCR法及免疫荧光显微法分别检测黄芩苷对RSV的RNA聚合酶活性、核酸复制及RSV介导的细胞融合作用。结果在50μmol/L的最大无毒浓度下,黄芩苷对RSV的RNA依赖的RNA聚合酶活性、核酸复制、F融合蛋白表达及其介导的细胞融合效应无显著作用。结论黄芩苷不能抑制RSV的转录、复制及融合。金欣口服液治疗RSV肺炎的主要药效成分可能非黄芩苷而为其他含量较低成分或黄芩苷代谢产物,有待进一步确定。     

微小RNA在心肌重塑中的作用及研究现状

<正>miRNA是一类由18～25个核苷酸(nt)组成的小分子非编码RNA(non-coding RNAs),miRNAs前体由RNA聚合酶Ⅱ转录合成,有数千个碱基对。miRNAs前体在细胞核内经RNase Drosha加工成70-100nt的发卡状前体,之后被运输至胞浆经RNase Dicer剪切加工成成熟miRNA。miRNA多通过与靶基因mRNA特定序列互补结合抑制靶基因转录后翻译和修饰[1]。     

RNA干涉技术在基础医学中的研究进展

RNA干涉(RNA interference,RNAi)是由双链RNA(double strand RNA,ds RNA)引起的转录后基因沉默机制,具有序列特异性和高效性,RNAi作为一门新的基因阻断技术,在基础医学研究及基因治疗中具有广阔的应用前景。对RNAi作用机制及其在疾病发病机制及治疗方面的研究进展进行了概述。     

RNA干扰抗人免疫缺陷病毒感染的作用靶点

 目的综述了近年来RNA干扰技术在抗人免疫缺陷病毒(HIV)感染中的作用靶点。方法以近几年具有代表性的文献为依据,进行分析、归纳和整理。结果与结论目前RNA干扰技术已广泛应用于HIV复制周期中的多个环节。RNAi不但可以靶向HIV基因组,而且可以通过降低多个与HIV复制密切相关且宿主非必需性的细胞因子的表达达到抑制HIV的目的。RNAi在抗HIV领域的广泛应用,必将成为解决病毒耐药性的问题、进而攻克艾滋病的有力武器。     

MicroRNA调控药用植物萜类生物合成研究进展

萜类化合物是药用植物中一类重要的次生代谢产物,对癌症、心血管疾病、疟疾和阿尔茨海默病等多种疾病有效。微RNA (microRNA,miRNA)是一种非编码单链小分子RNA,在转录后水平通过降解目标mRNA或阻断翻译发挥作用。miRNA可以通过作用于萜类生物合成途径的结构基因或转录因子调控药用植物萜类的生物合成。目前,萜类生物合成途径的上游部分研究比较清楚,很多关键酶的编码基因已经被克隆,有的酶分子的空间结构也已被解析,针对参与基因表达调控的转录因子也有一些研究,但对非编码RNA,特别是miRNA参与萜类生物合成的研究较少。对国内外近10年有关miRNA参与萜类生物合成的研究进行综述,以期为高效获取萜类活性成分和阐明萜类药效物质的生物合成提供参考。     

RNA干扰及其在药用植物代谢工程中的应用

RNA干扰(RNA interference,RNAi)是把双链RNA(double-stranded RNA,dsRNA)导入某些生物和细胞而引起同源mRNA降解的现象,是一种转录后基因沉默机制。dsRNA在体内被Dicer二聚体切割成21～25bp的小干涉RNA(smallinterfering RNA,siRNA),然后在siRNA引导下,由RNA诱导沉默复合体(RN Ainduced silencing complex,RISC)降解靶mRNA。RNA干扰作为一种新型反义技术可以有效的抑制特异基因的表达,因此可用于对药用植物次生代谢产物的生物合成途径进行调控,达到调控天然产物生物合成的目的。现将RNAi机制研究的最新进展及RNAi在药用植物代谢工程方面的应用进行综述。     

以RNA依赖的RNA聚合酶为靶点的抗新型冠状病毒抑制剂筛选

目的从理论上筛选出新型冠状病毒(SARS-CoV-2)的RNA依赖的RNA聚合酶(RdRp)抑制剂。方法依据SARS-CoV-2的RNA聚合酶与SARS聚合酶结构(6NUR)具有高度的同源性,以SARS的RNA聚合酶为模板构建SARS-CoV-2的RNA聚合酶的三维结构,利用分子对接软件Autodock Vina研究选中15个化合物与模型靶酶的相互作用,评估化合物对SARS-CoV-2的RNA聚合酶的抑制活性。结果研究发现,所选化合物均与靶酶的活性位点有一定相互作用,其中瑞德西韦活性形式、法匹拉韦活性形式、黄酮及异黄酮类化合物与靶酶的相互作用较强,以瑞德西韦活性形式与靶酶的结合能最低(为-7.9kal/mol),化合物1、2、8、13、14与酶的结合作用相对弱,提示对靶酶的抑制活性弱于瑞德西韦等,而化合物15没有酶抑制活性。结论通过虚拟筛选,得到了SARS-CoV-2 RNA聚合酶的一些抑制剂,其中的某些中药"活性成分"与目前临床上应用方剂的疗效具有较大的相关性,与清肺排毒汤等中医药治疗方案相互佐证。本研究为开发实施有效的抗新型冠状病毒治疗方案提供一定的理论参考,具体作用机制可进行进一步深入的研究验证。     

RPS20RNA干扰慢病毒的构建及其对CT26细胞生长的影响

目的 研究脾虚证差异表达基因——核糖体蛋白S20 (RPS20)RNA干扰慢病毒转染对小鼠结肠癌细胞(CT26)细胞指数的影响,验证前期筛选的RNA干扰序列的有效性,为后续在小鼠体内以RNA干扰进行RPS20的功能鉴定提供参考.方法 根据前期筛选的RPS20 RNA干扰有效序列,进行质粒载体的重组,包装RPS20干扰慢病毒并转染CT26细胞,采用xCELLigence细胞动态分析仪实时监测转染后细胞的细胞指数以反映细胞的生长情况.结果 测序图谱和Blast比对结果表明重组慢病毒包装载体构建成功,慢病毒滴度为1.2×105 TU/mL,RNA干扰慢病毒转染后CT26细胞指数的增长受到明显抑制,转染后30 h细胞指数抑制率达到82.24％.结论 前期筛选的RPS20 RNA干扰序列可成功构建包装干扰慢病毒,转染后能有效抑制CT26细胞的生长,可为后续研究提供参考.     

中医药调控非编码RNA治疗心力衰竭的研究进展

心力衰竭是由心血管内稳态失衡所致,而心血管内稳态依赖于基因表达的严格调控,并受到多种类型的RNA分子控制。非编码基因组在遗传编程和发育过程中的基因调控以及健康和心血管疾病中起着关键作用,其中一些缺乏蛋白质编码能力的RNA,称为非编码RNA。非编码RNA在RNA水平发挥调控相关基因表达的生物学功能,在多种心血管疾病(包括心力衰竭)中发挥着越来越重要的作用。本文综述了非编码RNA调控心力衰竭的分子机制,归纳总结了中医药通过干预非编码RNA防治心力衰竭的作用机制,旨在为中医药治疗心力衰竭相关研究提供新的思路。     

沉默人p38MAPK基因表达的RNA干扰的逆转录病毒载体的构建

目的构建沉默人p38MAPK基因表达的RNA干扰的逆转录病毒表达载体。方法查找人p38MAPK cDNA序列,利用软件设计并合成能够形成互补双链并能转录出靶向人p38MAPK基因的短发夹状RNA的两条寡核苷酸序列,退火后连接至线性化载体pSIREN上,获得重组质粒pSIREN-p38MAPK,酶切和测序进行鉴定。结果双酶切重组质粒获得特定的酶切图谱,证实所合成核酸片段的正确重组;测序结果显示重组核酸片段序列与设计的序列完全相同。结论成功构建了沉默人p38MAPK基因的重组质粒pSIREN-p38MAPK。     

长链非编码RNA对脑缺血后的调控机制及中医药干预的研究进展

目前,缺血性脑卒中仍然是全世界病死率、致残率最高的疾病之一^[1]。尽管临床上溶栓、神经保护的治疗有一定的疗效,但仍难以令人满意。长链非编码RNA(lncRNA)是一类不能编码翻译蛋白质,但是却能通过在转录和转录后水平上调控基因的表达,积极参与许多重要生物过程的RNA。近年来研究表明,lncRNA参与了脑缺血的损伤、血管新生与神经再生等病理生理反应^[2]。同时,以lncRNA为靶点的中药抗脑损伤研究也成为研究领域的热点。本文就lncRNA与脑缺血的相关性及中药对其的干预作用进行综述,希望为脑缺血的诊疗提供新的突破点。     

RNA干扰技术在肝癌治疗领域的应用新进展

在全球范围内,肝癌是第5大常见的恶性肿瘤,也是导致人类死亡的主要因素之一。目前,几乎没有针对肝癌的有效治疗手段。因此,发展一种新手段意义重大。RNA干扰技术(RNA interference,RNAi)作为一种基因沉默技术,能高效且特异地抑制相关基因的表达,为肝癌的基因治疗提供了新的手段和希望。对近几年RNAi技术在肝癌领域的应用进行综述。     

RNAi技术的应用

RNA干扰（RNA interference, 缩写为RNAi）是指一种分子生物学上由双链RNA 诱发的基因沉默现象,其机制是通过分子生物学上由双链RNA 诱发的基因沉默现象,其机制是通过阴碍行定基因的翻译或转录来抑制基因表达.     

微RNA与中医药抗肿瘤研究

微RNA(MicroRNA,miRNA)是一类含量丰富的非编码蛋白(non-protein-coding)小RNA,其功能为负调控基因的表达,进而调节细胞的代谢、增殖、分化和凋亡等基本的生理过程.研究表明,miRNA的表达水平在肿瘤中发生异常改变,参与肿瘤的发生发展,具有抑癌基因或癌基因作用.miRNAs可用于某些肿瘤的诊断、分期、判断预后及治疗.在中医药抗肿瘤研究中,miRNA的调控机制能够用于中医基本理论的诠释,而且它在证候基因组研究、中药作用的靶标或阐明中药抗肿瘤的作用机制研究等方面都有重要的应用前景.     

杜鹃花叶片总RNA的改良CTAB法提取

目的 研究杜鹃花叶片总RNA的提取方法.方法 一种适合富含次生代谢产物的杜鹃花叶片总RNA的提取方法--改良CTAB法.采用CTAB作为去污剂,分别用氯仿和水饱和酚反复抽提以及高浓度NaCl沉淀,以去除蛋白质、多糖和次生代谢物等杂质,最后用无水乙醇沉淀获得总RNA.结果 该方法不仅使所获得的总RNA完整性好,纯度高,而且操作简单、快速、成本低廉.结论 该方法对杜鹃花等富含次生代谢产物的植物特别是富含多酚、多糖的材料的总RNA提取具有借鉴意义.     

RNA作为抗感染药物筛选的靶标

 目的介绍以RNA为靶标筛选抗感染药物的进展。方法综述近期国外相关文献。结果以RNA为靶标的抗生素筛选模型已越来越受到重视,RNA作为药物筛选靶标具有比蛋白质和基因组更大的优越性,rRNA、mRNA和病毒RNA都可作为靶标来筛选药物,但筛选需要有别于传统药物筛选的新技术。结论以RNA为靶标筛选药物将是今后药物开发的方向。     

RNA干扰bcl-2基因质粒载体的构建

目的:构建bcl-2基因的RNA干扰(RNAi)表达载体。方法:根据人bcl-2的基因序列设计短双链3条,人工合成后,连接到带增强型绿色荧光蛋白基因的pGenesil-1载体中,构成3个靶向bcl-2的重组质粒,经酶切、DNA序列测定鉴定,转人HepG-2细胞,观察绿色荧光蛋白表达情况,以确定靶向bcl-2重组质粒进行下一步研究。结果:成功构建了3个靶向bcl-2的shRNA表达载体,为下一步研究奠定基础。结论:靶向shRNA表达载体较其它形式的干扰RNA具更强烈的抑制同源基因表达的作用。