microRNA-34a的表达对膀胱癌细胞系J82生物学行为的影响

目的:探讨microRNA-34a(miR-34a)的外源性表达对人膀胱癌J82细胞生物学行为的影响。方法:将miR-34a表达质粒或对照质粒转染J82细胞,实时定量逆转录聚合酶链反应(qRT-PCR)检测miR-34a在转染细胞中的表达水平,细胞计数法、流式细胞术、Transwell侵袭实验分别检测外源性miR-34a表达后J82细胞增殖、凋亡、周期和侵袭能力的变化情况。结果:miR-34a表达质粒组与对照组比较,其miR-34a表达诱导性升高(P=0.002 6),细胞增殖受到抑制(P=0.000 1),细胞凋亡率增加(1.237%±0.116%vs 5.497%±0.293%;P<0.000 1),细胞周期阻滞于G0～G1期(54.510%±1.501%vs 62.200%±0.754%;P=0.001 5);细胞侵袭能力降低,(65.01±11.79)vs(34.33±9.71),P=0.025 4。结论:在膀胱癌J82细胞中增加miR-34a的表达,可抑制细胞增殖和侵袭,促进细胞凋亡和周期阻滞,并通过影响上述细胞生物学行为降低肿瘤细胞恶性度,miR-34a在膀胱癌细胞系中发挥潜在的抑癌基因作用。     

microRNA-155对于人膀胱癌细胞um-uc-3的迁移和侵袭能力影响的研究

【摘要】〓目的〓前期研究发现miR-155在多种实体瘤中具有促肿瘤细胞增殖的作用,本研究探讨miR-155对人膀胱癌细胞um-uc-3转移相关的生物学行为的影响。方法 (1)通过组织RNA研究,来讨论miR-155在膀胱癌组织中的表达差异;(2)将人工合成miR-155-mimics转入人膀胱癌细胞um-uc-3,并设立对照组;(3)通过qRT-PCR检测miR-155的转染效率;(4)划痕试验研究过表达miR-155的um-uc-3细胞迁移能力变化;(5)Transwell试验检测miR-155对um-uc-3细胞迁移、侵袭的影响;(6)Western-blot及qPCR检测肿瘤转移相关基因的表达情况。结果〓(1)组织中,qRT-PCR证实miR-155的表达量在膀胱癌组织中较癌旁组织增高;(2)qRT-PCR检测miR-155转染效率,实验组表达量明显增高(P<0.01);(3)划痕实验证实miR-155过表达的um-uc-3细胞有更强的迁移能力;(4)Transwell试验发现miR-155可以促进um-uc-3细胞迁移、侵袭,与对照组差异显著(P<0.01);(5)过表达miR-155的um-uc-3细胞中,β-catenin、vimentin、snail的表达量在RNA水平和蛋白水平都比对照组显著增高,但不涉及claudin-1。结论〓miR-155可以促进人膀胱癌细胞um-uc-3的迁移和侵袭。     

环氧合酶-2反义核酸对膀胱癌细胞恶性表型的抑制作用

目的探讨环氧合酶-2(COX-2)反义核酸对膀胱癌细胞恶性表型的抑制作用。方法采用脂质体介导方法,分别构建转染COX-2反义真核表达载体和空载体的膀胱癌细胞系5637-AS细胞和5637-P细胞,RT-PCR及W estern b lot分析转染细胞COX-2 mRNA及蛋白表达水平。MTT比色实验、Boyden侵袭小室法和裸鼠成瘤实验分别检测转染细胞体外增殖速度、体外侵袭力和体内成瘤性。结果RT-PCR结果显示,5637-AS细胞COX-2/磷酸甘油醛脱氢酶(GAPDH)mRNA比值(0.65)明显低于5637(0.92)和5637-P细胞(0.90);W estern b lot提示5637-AS细胞COX-2/β-actin比值(0.29)明显低于5637细胞(0.46)和5637-P细胞(0.44)。MTT比色实验显示5637-AS细胞较5637-P、5637细胞生长速度减慢,三者倍增时间分别为3.6 d、2.9 d和2.9 d。体外侵袭实验结果表明,5637-AS侵袭细胞数显著低于5637细胞及5637-P细胞(18.20±5.97比45.40±8.12,18.20±5.97比44.10±6.47,P<0.01)。裸鼠成瘤实验中,5637-P、5637细胞接种裸鼠后第5天肿瘤长出,而5637-AS细胞第7天肿瘤长出;30 d后5637-AS细胞接种组瘤体重量(392.15 mg±33.58 mg)明显小于5637细胞(738.26 mg±66.32 mg),和5637-P细胞接种组(698.53 mg±88.76 mg),P<0.01。结论膀胱癌细胞中COX-2过表达与细胞的恶性表型相关,反义技术抑制COX-2表达可以逆转膀胱癌细胞的恶性表型。     

趋化素样因子超家族成员5对前列腺癌侵袭行为的影响

目的 探讨趋化素样因子超家族成员5(CMTM5)对前列腺癌细胞的作用及机制.方法 利用划痕实验观察CMTM5对前列腺癌、DU145细胞迁移的影响;蛋白质印迹法检测PI3 K-AKT信号通路相关蛋白的表达;建立18只裸鼠皮下前列腺癌移植瘤模型,实验组肿瘤局部注射CMTM5腺病毒,检测CMTM5过表达对裸鼠前列腺肿瘤生长的影响,应用免疫组织化学方法检测裸鼠肿瘤组织中Ki-67的表达. 结果 过表达CMTM5抑制前列腺癌DU145细胞迁移,减少了PI3K-AKT信号通路中的关键分子pAKT 、NF-kB等蛋白的表达.裸鼠体内实验结果显示,CMTM5组肿瘤体积及质量分别为(573.39±175.24)mm3及(0.55±0.11)g,对照组分别为(1482.50±327.86) mm3及(1.31±0.29)g,2组比较差异均有统计学意义(P＜0.05).CMTM5组肿瘤组织Ki-67表达明显低于对照组. 结论 过表达CMTM5抑制前列腺肿瘤的增殖及迁移能力,其机制与PI3K-AKT信号通路有关.     

lncRNA ZFP36-AS1通过miR-221调控膀胱癌细胞增殖和免疫逃逸

目的探讨长链非编码RNA(lncRNA) ZFP36-AS1在膀胱癌中的表达及ZFP36-AS1/miR-221轴对膀胱癌细胞增殖和免疫逃逸的影响。方法通过cBioPortal数据库分析ZFP36-AS1在膀胱癌组织中的表达差异。采用实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)分析ZFP36-AS1在膀胱癌细胞系(J82、RT-4、MGH-U3、5637)中的表达差异。MGH-U3细胞随机分为阴性对照(NC)组和ZFP36-AS1组, 分别转染pcDNA3.1-NC质粒和pcDNA3.1-ZFP36-AS1质粒。集落形成实验、流式细胞术分别分析MGH-U3细胞增殖活力和细胞周期。T淋巴细胞与各组MGH-U3细胞共培养, 酶联免疫吸附试验(ELISA)检测各组上清液中白细胞介素-10(IL-10)、γ-干扰素(IFN-γ)、白细胞介素-4(IL-4)水平。双荧光素酶报告基因实验验证ZFP36-AS1与miR-221的靶向关系。RT-qPCR检测ZFP36-AS1对MGH-U3细胞miR-221表达的影响。Western blotting法检测ZFP36-AS1/miR-221轴对MGH-U...     

长链非编码RNA PTENP1在膀胱癌中的表达调控及功能研究

目的:探索长链非编码RNA PTENP1在膀胱癌中的表达调控及其对膀胱癌细胞的生长及转移的影响。方法:在膀胱癌细胞系及组织中应用逆转录实时定量PCR检测长链非编码RNA PTENP1的基础表达。通过甲基化抑制剂5-Aza.dc处理膀胱细胞系后甲基化特异性PCR分析PTENP1基因启动子的甲基化状态。应用逆转录实时定量PCR检测细胞转染效率,细胞增殖实验及迁移侵袭实验检测PTENP1对膀胱癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响。结果:膀胱癌细胞系SCABER、HT-1376、J82、EJ、T24及5637细胞以及膀胱癌临床标本里长链非编码RNA PTENP1与其对照组细胞系和临床标本相比表达减低。并通过在膀胱癌若干细胞系和一定量的临床标本中行MSP检测验证了PTENP1基因存在启动子的甲基化,5-Aza.dc处理细胞系后可以回复或者部分回复PTENP1的表达。增殖及转移实验提示PTENP1能够抑制膀胱癌细胞的增殖细胞迁移和侵袭。结论:膀胱癌中PTENP1基因DNA甲基化参与了PTENP1低表达的调节;PTENP1在膀胱癌起抑癌基因样作用,参与膀胱癌的发生发展。     

FEZF1-AS1靶向miR-610对膀胱癌细胞生长、迁移和侵袭的调节作用

目的:探讨长链非编码RNA FEZF1-AS1对膀胱癌细胞生长、迁移和侵袭的调节作用及其机制。方法:通过实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测FEZF1-AS1和miR-610在膀胱癌组织中的相对表达量;通过在膀胱癌细胞中干扰FEZF1-AS1后,采用CCK-8实验检测膀胱癌细胞增殖能力的变化;采用Transwell迁移和侵袭实验检测膀胱癌细胞迁移和侵袭能力的变化,通过蛋白免疫沉淀(RIP)实验检测FEZF1-AS1与miR-610的靶向结合,通过荧光素酶实验验证FEZF1-AS1和miR-610的靶向关系;通过细胞周期实验验证FEZF1-AS1对细胞周期的影响;通过细胞凋亡实验验证FEZF1-AS1对细胞凋亡的影响;通过裸鼠荷瘤实验验证FEZF1-AS1在体内对肿瘤细胞增殖的影响;通过以上实验推测FEZF1-AS1在膀胱癌中的作用。结果:FEZF1-AS1在膀胱癌组织中高表达(P0.01),miR-610在膀胱癌组织中低表达(P 0.01),二者呈负相关(r=-0.572 6,P=0.000 3);shFEZF1-AS1能显著抑制FEZF1-AS1表达并促进miR-610表达(P0.05),miR-610inhibitor可减弱sh-FEZF1-AS1对miR-610表达的促进作用(P0.05),FEZF1-AS1能明显抑制miR-610表达(P0.05),miR-610mimic可减弱FEZF1-AS1对miR-610表达的抑制作用(P0.05)。RIP实验显示FEZF1-AS1能够靶向结合miR-610;荧光素酶报告实验表明FEZF1-AS1序列上有miR-610的结合位点。sh-FEZF1-AS1能显著抑制T24细胞增殖、侵袭和迁移、抑制细胞分化、促进细胞凋亡(均P0.05);miR-610 inhibitor能显著减弱sh-FEZF1-AS1对T24细胞的增殖、侵袭、迁移、促进细胞分化、抑制细胞凋亡(P0.05)。结论:FEZF1-AS1可通过靶向miR-610促进膀胱癌细胞T24的增殖、侵袭和迁移,其作用机制与FEZF1-AS1对miR-610的吸附有关。     

Survivin启动子驱动LRIG1基因表达的重组腺病毒对人膀胱癌细胞T24侵袭能力的影响

目的以Survivin启动子驱动LRIG1基因表达的重组腺病毒Ad-Surp-LRIG1转染人膀胱癌细胞系T24细胞,观察其对T24细胞侵袭能力的影响。方法 Ad-Surp-LRIG1转染T24细胞,用RT-PCR和Westernblot检测细胞中LRIG1的表达水平,并采用Transwell小室测定转染后细胞侵袭能力的变化。结果 Ad-Surp-LRIG1转染人膀胱癌T24细胞后,与对照组和空白对照组相比,体外侵袭实验显示实验组细胞的侵袭能力明显下降。LRIG1的mRNA和蛋白表达水平明显升高,而EGFR的mRNA和蛋白表达水平则显著降低(P<0.01)。结论 Survivin启动子驱动LRIG1基因表达的重组腺病毒Ad-Surp-LRIG1能够在T24细胞中有效表达,并显著抑制T24细胞的侵袭能力。     

长链非编码RNA SLC26A4反义RNA 1通过Notch信号抑制乳腺癌细胞增殖与转移

目的 探讨长链非编码RNA(lncRNA)SLC26A4反义RNA 1(SLC26A4-AS1)在乳腺癌细胞增殖、迁移和侵袭中的作用及潜在生物学机制。方法 2017年6月～2020年12月乳腺癌组织及对应癌旁组织(距离癌组织边缘5 cm以上)40例，采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)技术检测SLC26A4-AS1在乳腺癌组织和细胞系的表达。选择乳腺癌细胞MCF7作为研究对象，将细胞分为control组、pcDNA3.1组、pcDNA3.1-SLC26A4-AS1组和pcDNA3.1-SLC26A4-AS1+Notch激动剂组。qRT-PCR检测SLC26A4-AS1对Notch信号通路中关键因子Notch1和Hes1表达的影响。MTT比色法、划痕实验和Transwell小室实验分别检测细胞增殖、迁移和侵袭能力。结果 SLC26A4-AS1在乳腺癌组织和细胞表达降低。pcDNA3.1-SLC26A4-AS1组Notch1和Hes1的表达量低于pcDNA3.1组，差异有统计学意义(P<0.01)。pcDNA3.1-SLC26A4-AS1组MCF7细胞活力、伤口愈合率和穿膜细胞数...     

新的肿瘤转移抑制基因LASS2在不同侵袭潜能的膀胱癌细胞中表达的体外研究

目的探讨新发现的肿瘤转移抑制基因人源性长寿保障基因Ⅱ型(homo sapiens longevity assurance homologue2,LASS2)与人膀胱癌细胞侵袭潜能的关系。方法通过细胞生长曲线和体外侵袭实验,确定膀胱癌BIU-87、EJ、T24和EJ-M3细胞的增殖和侵袭能力;运用实时定量PCR法和Western blot法检测4株细胞中LASS2基因的表达。结果 4株膀胱癌细胞中,EJ-M3的增殖和侵袭能力最强;增殖和侵袭能力高的细胞系EJ-M3和BIU-87的LASS2mRNA表达降低(P<0.001),而在低转移能力的人膀胱癌细胞株T24和EJ细胞中则相对较高表达。结论 LASS2基因表达的降低,可能与膀胱癌细胞的增殖和侵袭有关。     

DLG1在膀胱癌中的表达及其与临床病理特征和预后的关系

目的探讨DLGI在膀胱癌中的表达及其与临床病理特征和预后的关系。方法选取2009年2月至2014年9月在本院收治的膀胱癌患者138例,采用实时荧光逆转录法及免疫组化法测定DLG1在膀胱癌组织和正常膀胱组织中的表达水平,分析其与临宋病理参数和预后的关系。结果膀胱癌组织中DLCI mRNA和DLC1蛋白表达水平高于正常膀胱组织,差异有统计学意义(P<0.01);膀胱癌组织的DLCI蛋白表达阳性率高于正常膀胱组织,差异有统计学意义(P<0.01);DLG1蛋白表达与年龄无相关性(P>0.05),与TMN分期、病理分级.复发.浸润深度.血管间隙浸润、肿瘤最大径、淋巴结转移有明显相关性(P均<0.01),且TMN分期越高、病理分级越高、有复发、浸润深度越深、有血管间隙浸润、肿瘤最大径≥2 cm,有转移,而DLGI蛋白阳性表达率越高(P<0.01);DLC1阴性患者3年生存率及生存期均明显高于DLC1阳性患者,差异有统计学意义(P<0.01)。结论膀胱癌患者中DLCI表达升高,DLCI在膀胱癌的发生发展过程中起促进作用,DLGI低表达的膀胱癌患者能获得较好的预后。     

Fas、FasL和Bcl-2在膀胱癌组织的表达及意义

目的　研究Fas蛋白 (CD95 /Apol 1,Fas)、Fas配体 (Fasligand ,FasL)及Bcl 2在膀胱癌组织中的表达 ,并探讨其临床意义。方法　采用免疫组化LSAB法检测 5 0例膀胱癌组织及 6例正常膀胱黏膜中Fas、FasL和Bcl 2的表达。结果　Fas、FasL及Bcl 2在膀胱癌组织中的阳性表达率分别为 5 0 %、38%、4 2 %。膀胱癌组织FasL和Bcl 2的阳性表达率明显高于正常组织 (P <0 .0 5 ) ,Fas明显低于正常组织 (P <0 .0 5 )。Fas的表达与膀胱癌病理分级、复发有关 (P <0 .0 5 ) ;FasL、Bcl 2表达与各项病理指标均无关 (P >0 .0 5 )。结论　Fas的表达降低与膀胱肿瘤的恶性化程度有关。     

膀胱癌组织及血清中内皮抑素表达的意义

目的　探讨原发性膀胱癌患者血清内皮抑素水平和组织表达与肿瘤分级、分期的关系。　方法　采用免疫组织化学方法检测 4 5例膀胱癌组织及 12例正常膀胱组织中内皮抑素表达情况。ELISA法检测 5 8例膀胱癌患者术前血清内皮抑素水平 ,4 3例健康者血清作对照。　结果　浅表性膀胱癌组内皮抑素表达率 6 1.5 % ,浸润性癌组为 90 .6 % ,正常膀胱组织为 33.3%。膀胱癌患者血清内皮抑素 4 6 .3ng/ml,显著高于对照组的 2 9.8ng/ml(P <0 .0 1)。局部浸润性膀胱癌患者血清内皮抑素 4 8.6ng/ml,显著高于浅表性癌组的 31.1ng/ml(P <0 .0 1) ;远处转移组血清内皮抑素 6 9.8ng/ml,显著高于局部浸润组 (P <0 .0 1) ;浅表性癌组与对照组血清内皮抑素水平差异无显著性意义。G3级肿瘤患者血清内皮抑素水平显著高于G1和G2 级 (P <0 .0 1)。　结论　膀胱癌患者血清内皮抑素水平和组织表达显著增高 ,并与肿瘤分级、分期相关 ,检测内皮抑素表达及血清水平有助于判断膀胱癌的恶性程度。     

长链非编码RNA肿瘤蛋白翻译控制反义RNA 1对结肠癌细胞增殖和侵袭能力的影响

目的探讨长链非编码RNA(lncRNA)肿瘤蛋白翻译控制反义RNA 1(TPT1-AS1)在结肠癌组织中的表达和临床意义,及其对结肠癌细胞增殖、细胞周期、迁移和侵袭的影响。方法收集2016年7月至2017年9月于天津医科大学总医院胃肠外科进行结肠癌根治术的72例结肠癌患者的癌组织标本及相应的癌旁组织,采用实时定量反转录聚合酶链反应(RT-qPCR)检测lncRNA TPT1-AS1在结肠癌组织的相对表达量,并分析其表达与结肠癌临床病理特征的相关性。构建lncRNA TPT1-AS1敲低和对照载体(si-TPT1-AS1、si-NC),分别设为敲低组和对照组,采用细胞计数试剂盒(CCK-8)细胞增殖实验、细胞周期分析实验、Transwell迁移侵袭实验检测结肠癌细胞SW620的增殖、细胞周期阻滞、迁移和侵袭能力。计量资料组间比较采用t检验,计数资料采用χ²检验。结果LncRNATPT1-AS1在结肠癌组织中的相对表达量显著高于对应的癌旁组织(3.99±0.21比1.78±0.09,t=35.433,P<0.05),且其表达与TNM分期(χ²=9.000,P<0.05)和远处转移(χ²=4.600,P<0.05)呈正相关,差异均有统计学意义。CCK-8实验结果显示,敲低TPT1-AS148 h(0.47±0.02比0.83±0.05,t=10.543,P<0.05)、72 h后(0.69±0.02比1.23±0.09,t=10.145,P<0.05),SW620细胞的增殖能力均显著低于对照组,差异均有统计学意义。细胞周期分析显示,敲低TPT1-AS1可使G0/G1期细胞比例高于对照组[(68.47±2.79)%比(44.69±1.26)%,t=14.672,P<0.05],S期细胞比例低于对照组[(22.87±1.96)%比(37.48±1.57)%,t=17.246,P<0.05],G2/M期细胞比例低于对照组[(8.22±0.87)%比(20.78±0.45)%,t=18.772,P<0.05],差异均有统计学意义。Transwell迁移侵袭实验结果表明,敲低TPT1-AS1可使SW620细胞的迁移能力显著低于对照组[[(87±8)个比(177±10)个,t=15.237,P<0.05],侵袭能力显著低于对照组[(47±5)个比(122±8)个,t=19.578,P<0.05],差异均有统计学意义。结论lncRNA TPT1-AS1在结肠癌组织中表达升高,敲低TPT1-AS1可抑制结肠癌细胞增殖、细胞周期G1/S期转换、迁移和侵袭。     

极低密度脂蛋白受体基因促进膀胱癌细胞迁移的作用及机制

目的:探讨极低密度脂蛋白受体(VLDLR)对人膀胱癌细胞迁移活性的影响及机制。方法:采用实时荧光定量反转录-聚合酶链反应(RT-qPCR)检测人源膀胱癌细胞(J82、UMUC3与T24)与正常尿路上皮细胞(SV-HUC-1)VLDLR的表达水平;采用小干扰RNA(siRNA)建立VLDLR敲低T24细胞模型,通过划痕实...     

Expression and significance of vascular endothelial growth factor receptor 2 in bladder cancer

PURPOSE: Vascular endothelial growth factor has a critical role in maintaining tumor microvasculature and, as such, is an attractive target for anti-angiogenic therapy. Aberrant expression of VEGF receptors, especially VEGFR2, on epithelial tumor cells allows VEGF to stimulate growth and migration of tumor cells in an autocrine and/or paracrine manner. Therefore, we studied the expression of VEGF and VEGFR2 in bladder cancer, and the relationship to disease characteristics. MATERIALS AND METHODS: Expression of VEGF and VEGFR2 was studied in a cohort of 72 patients with transitional cell cancer of the bladder. Tumor tissues from all patients were analyzed by immunohistochemistry and examined by a pathologist blinded to patient outcome. Patient demographics and disease outcome were correlated with expression of these markers. Bladder cancer cell lines that express VEGFR2 were studied in vitro and in vivo to establish the significance of VEGF/VEGFR2 signaling. RESULTS: Expression of VEGF and VEGFR2 was observed in 58% and 50% of urothelial tumor cells, respectively. VEGF expression failed to correlate with clinical variables. However, VEGFR2 expression correlated with disease stage (coefficient 0.23, p = 0.05). In addition, VEGFR2 expression increased with tumor invasion into the muscle (p <0.01). Experiments with VEGFR2 positive bladder cancer cell lines in vitro demonstrated increased invasion in response to VEGF. In addition, VEGF inhibition augmented the effect of docetaxel in a murine xenograft model of bladder cancer with a significant inhibition in proliferative index and microvascular density, and induction of apoptosis. CONCLUSIONS: Increased VEGFR2 expression correlates with several features that predict progression of urothelial cancer, including disease stage and invasive phenotype. VEGF targeted therapy may enhance the efficacy of standard therapy for bladder cancer.     

MMP-2和MMP-9在膀胱移行细胞癌组织中的表达及临床意义

目的：探讨膀胱肿瘤组织巾MMP-2及MMP-9表达与膀胱移行细胞癌（TCCB）临床病理分期分级的关系。方法：选择同济医院2004年1～12月间手术治疗的TCCB患者38例作为实验组，以16例附带癌旁正常黏膜或膀胱镜下活检正常膀胱黏膜作为对照组。运用免疫组织化学SP法检测MMP-2及MMP-9在膀胱组织中的表达。结果：MMP-2和MMP-9在实验组的表达显著高于对照组（P〈0．01）,且与肿瘤临床分期呈显著正相关（r=0．51361，P〈0．01），与肿瘤病理分级也呈正相关（r=0．59818，P〈0.05）。结论：TCCB患者膀胱组织中高表达的MMP-2及MMP-9与肿瘤细胞侵袭和转移密切相关，联合检测MMP-2及MMP-9，对TCCB的早期诊断及判断预后有参考价值。     

长链非编码RNA CBR3-AS1在乳腺癌中的表达及其功能

目的：探讨长链非编码RNA CBR3-AS1（CBR3-AS1）在乳腺癌中表达及作用。 方法：用qRT-PCR检测70例乳腺癌组织与癌旁组织,以及不同乳腺癌细胞系（MCF-7、MDA-MB-453、SKBR3）与正常乳腺上皮细胞系（HS578Bst）中CBR3-AS1的表达,分析CBR3-AS1表达与乳腺癌患者临床病理参数及预后的关系。将乳腺癌细胞SKBR3分别转染CBR3-AS1干扰序列（干扰组）、CBR3-AS1过表达序列（过表达组）及阴性对照序列（阴性对照组）,用MTT法和流式细胞术分别检测各组细胞转染后增殖活力与凋亡的变化。 结果：CBR3-AS1的相对表达量在乳腺癌组织中明显高于癌旁组织,在不同乳腺癌细胞系中均明显高于正常乳腺上皮细胞（均P<0.01）。乳腺癌组织中CBR3-AS1表达与TNM分期（P=0.003）、淋巴结转移（P=0.047）和远处转移（P=0.024）明显有关。CBR3-AS1高表达患者3年无瘤生存率和总生存率均明显低于CBR3-AS1低表达患者（53.3% vs. 70.7%,P=0.003 2;62.8% vs. 78.4%,P=0.005 7）。与阴性对照组比较,干扰组细胞增殖活力明显降低、凋亡率明显升高,过表达组细胞增殖活力明显升高、凋亡率明显降低（均P<0.01）。 结论：CBR3-AS1在乳腺癌中上调表达,并与不良临床病理特征及预后密切相关,机制可能与其过表达可促进乳腺癌细胞增殖,并抑制凋亡有关。         

长链非编码RNA氧化应激反应丝氨酸丰富1反义RNA 1对肾癌细胞增殖、迁移及侵袭的影响

目的探讨长链非编码RNA氧化应激反应丝氨酸丰富1反义RNA 1(lncRNA OSER1-AS1)对肾癌ACHN细胞的增殖、迁移、侵袭的影响及其对微小RNA(microRNA,miR)-612的调控作用。方法2017年1月至2020年3月,采用实时定量反转录聚合酶链反应(RT-qPCR)法检测肾癌组织、癌旁组织中OSER1-AS1、miR-612的表达量;体外培养肾癌细胞ACHN,分别将OSER1-AS1小分子干扰RNA(si-OSER1-AS1)及其阴性对照(si-NC)、miR-612寡核苷酸模拟物(miR-612 mimics)及阴性对照mimic NC序列(miR-NC)、si-OSER1-AS1与miR-612特异性寡核苷酸抑制剂的阴性对照(anti-miR-NC)、si-OSER1-AS1与miR-612特异性寡核苷酸抑制剂(anti-miR-612)转染至ACHN细胞;采用RT-qPCR法检测细胞中OSER1-AS1、miR-612的表达量;采用噻唑蓝(MTT)、Transwell小室实验分别检测细胞增殖、迁移及侵袭能力;双荧光素酶报告实验检测OSER1-AS1、miR-612的靶向关系;蛋白质印迹法(Western blot)检测细胞周期蛋白1(Cyclin D1)、基质金属蛋白酶(MMP)-2、MMP-9、p21蛋白表达量。两组间比较采用独立样本t检验,多组间比较采用单因素方差分析。结果肾癌组织OSER1-AS1的表达水平(1.00±0.08比3.37±0.28)高于癌旁组织(t=52.113,P<0.05),miR-612的表达水平(1.00±0.06比0.47±0.04)低于癌旁组织(t=47.062,P<0.05);si-OSER1-AS1组细胞活力(0.66±0.05比0.31±0.03)与Cyclin D1(0.63±0.05比0.25±0.02)、MMP-2(0.82±0.07比0.35±0.03)、MMP-9(0.76±0.06比0.28±0.03)蛋白水平低于si-NC组(t=18.007、21.169、18.514、21.466,P<0.05),si-OSER1-AS1组迁移细胞数[(115.56±9.52)个比(55.99±5.59)个]、侵袭细胞数[(93.41±6.09)个比(46.05±4.35)个]低于si-NC组(t=16.188、18.984,P<0.05),si-OSER1-AS1组p21蛋白水平(0.15±0.02比0.57±0.05)高于si-NC组(t=23.398,P<0.05);miR-612组细胞活力(0.68±0.05比0.39±0.03)与Cyclin D1(0.66±0.05比0.28±0.03)、MMP-2(0.85±0.06比0.46±0.03)、MMP-9(0.78±0.05比0.34±0.02)蛋白水平低于miR-NC组(t=14.920、19.551、17.441、24.512,P<0.05),miR-612组迁移细胞数[(118.76±9.87)个比(64.39±4.65)个]、侵袭细胞数[(99.65±9.12)个比(53.57±3.67)个]低于miR-NC组(t=14.950、14.062,P<0.05),miR-612组p21蛋白水平(0.14±0.02比0.51±0.04)高于miR-NC组(t=24.820,P<0.05);双荧光素酶报告实验证实OSER1-AS1可靶向结合miR-612;抑制miR-612表达可明显逆转干扰OSER1-AS1对细胞增殖、迁移及侵袭的作用。结论干扰OSER1-AS1可通过上调miR-612的表达从而抑制肾癌ACHN细胞增殖、迁移及侵袭。     

FOXN2在前列腺癌组织的表达及对前列腺癌细胞生物学的影响

探讨双头框蛋白N2（FOXN2）在前列腺癌（PCa）组织中的表达以及对PCa细胞生物学的影响。方法 选取宜宾市第二人民医院50例接受手术治疗的PCa患者的标本及癌旁组织,通过RT-qPCR实验和Western blot实验分别检测PCa组织和癌旁组织中的FOXN2 mRNA及蛋白的表达水平,并分析PCa组织中FOXN2与患者临床病理特征的相关性。通过RT-qPCR实验检测正常前列腺细胞RWPE-1、PCa细胞PC-3、DU145、LNCaP中FOXN2 mRNA的表达水平。选取PC-3细胞为研究对象,分为FOXN2过表达组、空载体对照组以及对照组,分别通过MTT实验、流式细胞实验、Transwell实验以及Western blot实验检测各组细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭情况以及相关蛋白Bax、CyclinD1、MMP-2的表达量。结果 与癌旁组织相比,FOXN2的mRNA和蛋白表达水平显著降低（P<0.05）,与TCGA数据库中结果一致。FOXN2低表达与PCa患者淋巴转移、TNM分期以及Gleason评分有关（P=0.003、0.005、0.002）。与人正常前列腺细胞RWPE-1相比,FOXN2在PCa细胞PC-3、DU145、LNCaP中均呈现低表达（P<0.05）,其中PC-3细胞中表达量最低。与对照组和空载体对照组相比,FOXN2过表达组的PC-3细胞在作用24 、48 、72 h后增殖能力显著下降（F=290.400、57.735、113.014,P<0.05）,CyclinD1蛋白表达水平显著下降（P<0.05）;PC-3细胞的凋亡率显著升高（P<0.05）,Bax蛋白表达水平显著升高（P<0.05）;PC-3细胞的迁移和侵袭能力显著下降（P<0.05）,MMP-2蛋白表达水平显著下降（P<0.05）。结论 FOXN2在PCa组织及细胞中低表达,过表达FOXN2可抑制PCa细胞的增殖、迁移和侵袭,并促进细胞凋亡。