单核细胞增生性李斯特菌PCR快速检测方法的建立及在朝阳区大中型宾馆食品卫生监测中的应用

目的:通过扩增iap基因PCR法建立快速检测单核细胞增生性李斯特菌(Lm)方法.方法:用PCR法扩增iap基因来检测Lm标准菌株,并应用于朝阳区大中型宾馆的食品监测中.结果:将Lm、英诺克李斯特及其他13株非李斯特标准菌株同时进行PCR,仅Lm出现特异性条带,而其他菌株均未出现特异性片段,表明所扩增的iap基因约700 bp的DNA片段对Lm具有较高的特异性.PCR法对Lm纯培养物的检测限达106cfu/ml.采用该法对朝阳区大中型宾馆160件食品样品检测,5份样品呈阳性且均来源于B级餐厅,该结果与传统的生化鉴定方法完全一致.结论:扩增iap基因的PCR法对Lm的鉴定具有特异性强、灵敏度高、速度快和易操作等优点,可用于食品Lm分离.朝阳区部分大中型宾馆的食品卫生监督仍有待加强.     

PCR与mini-VIDAS相结合快速检测食品中单增李斯特菌

目的:建立一种快速检测食品中单增李斯特菌的方法,提高检测的准确率,为有效地预防和控制李斯特菌病提供依据。方法:从超市和集贸市场上随机采集生畜肉、生禽肉、熟卤制品、生食蔬菜、水产品和乳制品共125份,先进行增菌培养,然后对样品的二次增菌液进行PCR扩增,扩增阳性的样品再进行mini-VIDAS LMO分析,最后通过ISO11290-1的标准方法来进行验证。结果:125份样品中有2份鉴定为Lm阳性,排除1个PCR扩增假阳性和2个mini-VIDASLMO分析假阳性结果。结论:PCR与mini-VIDAS相结合检测食品中Lm准确率高,可在48h内完成,是快速检测李斯特菌的有效方法。     

李斯特菌选择性增菌培养分离比较研究

近20年，单核细胞增多性李斯特菌(L．monocytogenes，Lm)被认为是危害公共卫生和食品行业一种重要的人畜均可感染的致病菌。目前Lm的快速检测方法有PCR、ELISA、核酸探针等。但当样品中的Lm数量低手10^2cfu／g，或由于受生产、包装、贮运等条件影响。导致Lm的毒力缺失或变异、核糖体退化、酶活性减弱等，均可限制快速检测食品中Lm。因此要准确检出Lm.就要有效地将样品中少量或受损的李斯特菌进行增菌复苏。本文对欧洲通用的荷兰食品监察局(NGFIS)的PALCAM肉汤方法进行改良，并与美国食品药品管理局(FDA)方法和国标法进行比较，以便于食品和环境样品中李斯特菌的增菌分离。     

食品中产单核李斯特菌PCR检测灵敏度的研究

目的:研究PCR检测不同食品中产单核李斯特菌(Lm)的灵敏度。方法:从市场采集牛奶和火腿,向其中以及作为对照的生理盐水中添加不同量的Lm,直接检测或经过高温处理后检测Lm。结果:添加Lm的牛奶、火腿和生理盐水样品,未经高温、经100℃10 m in、经121℃15 m in处理后,PCR检测灵敏度分别为未经高温26.5、265、2.65×103cfu/m l;265、2.65×104、2.65×104cfu/m l;2.65×105、2.65×108、2.65×108cfu/m l。结论:不同食品中Lm PCR检测灵敏度不同,高温处理影响检测灵敏度。     

单核细胞增生李斯特氏菌快速检测方法建立

[目的]建立单核细胞增生性李斯特氏菌(Lm)快速检测(PCR)方法.[方法]用PCR特异性检测方法,根据Lm的inlA、 plcA、 plcB、 hlyA基因设计4对相应的引物,检测不同浓度Lm纯培养物、金黄色葡萄球菌和乙型副伤寒沙门氏菌标准菌株的纯培养物以及Lm模拟污染的牛奶样品.[结果]Lm扩增出4个相应的产物(分别为255bp、 129bp、 260bp、 234bp),金黄色葡萄球菌和乙型副伤寒沙门氏菌菌株均未扩增出特异性的片段,其中inlA基因最低检出限为25.5μg/ml,其他3对引物最低检测限达2.55μg/ml.对模拟污染的牛奶TSBYE增菌培养液用PCR检测,只扩增出3个相应基因的产物(plcA、 plcB、 hlyA).[结论]扩增plcA、 plcB、 hlyA基因的PCR法对Lm的鉴定具有特异性强、灵敏度高、速度快和易操作等优点,可用于食品的Lm的分离.     

生鸡肉中单核细胞增生李斯特菌的污染监测

目的：了解绍兴市部分农贸市场及超市的生鸡肉中单核细胞增生李斯特菌的污染状况。方法：监测农贸市场及超市的生鸡肉食品。结果：82份样品中检出Lm26株，总污染率为31．71％。其中农贸市场52份中检出Lm10株，总污染率为19．23％；超市30份中检出Lm16株，总污染率为53．33％。结论：大型超市生鸡肉中Lm检出率明显高于农贸市场。     

8类食品单核细胞增生李斯特菌流行特征及耐药性状研究

目的：了解扬州市8类食品中Lm污染状况、流行特征及耐药状况，为制定HACCP提供依据，以有效控制Lm的生物性危害。方法：从市场及宾馆饭店采集957份熟食、生肉制品、水产品等8类食品检测Lm，检出菌株以生化及PCR方法鉴定并做药物敏感试验。结果：共检出加43株，检出率为4．49％。其中熟肉制品检出率为9．62％，生肉制品为3．83％，蔬菜、牛奶、鲜鸡蛋及冰淇淋中未检出。17种抗生素中有9种抗生素出现了不同程度的耐药。结论：本市8种食品中存在一定程度Lm污染，以熟食污染率最高。生肉制品为食品链中Lm的主要来源，熟食是实施HACCP控制Lm的关键环节。Lm耐药现象在一定程度上存在。加强食品卫生管理尤其是熟肉制品的管理，控制动物饲料亚治疗抗生素的使用并严格遵守休药期对防止耐药菌株、控制食源性疾病很有必要。     

PCR法鉴定单核细胞增生李斯特菌

单核细胞增生李斯特菌(Listeria monocytogenes，Lm)是一种人畜共患病的病原菌。Lm是最重要的食源性病原体之一，主要污染肉类、乳制品和蔬菜等。Lm鉴定方法包括传统的分离鉴定法、免疫学鉴定方法等。分离培养鉴定法比较简单，但是操作烦琐、耗时长，不适合日常对于食品的检测。Lm免疫学检测操作简便，可在同一时间内检测大量样品，但由于菌体及鞭毛抗原交叉反应的存在，难以进行李斯特菌种间特异性鉴别。PCR法具有特异性强、灵敏度高和速度快等优点。     

2004～2005年北京市食品中单核细胞增生性李斯特菌的污染状况调查

目的：为了解北京市食品受单核细胞增生性李斯特菌（Lm）污染状况，以评价与预警北京市食品污染状况和制定相关食品卫生政策提供可靠的基础数据进行了本次调查。方法：2004～2005年间从北京市几个市场及宾馆饭店共采集了270份熟食、生肉制品、水产品等8类食品进行检测Lm。样品经单核细胞增生性李斯特菌增菌液（LB1，LB2）增菌后，采用科玛嘉（CHROMagar）单核细胞增生李斯特菌显色平板分离，做相应的生化试验及经VITEK32全自动微生物鉴定系统进行鉴定。结果：共检出Lm58株，检出率为21．5％。其中熟肉制品采集50件，检出率最高为48％，生肉制品共采集115件，检出率为18．3％，生食蔬菜采集35件，检出率为20％，水产品采集25件，检出率为16％，冰淇淋采集45件中检出率为2．2％。结论：本次实验结果阳性率非常高，本市8种食品中都存在一定程度Lm污染，以熟肉制品污染率最高。生肉制品为食品链中Lm的主要来源，直接人口的食品如熟肉及生食蔬菜是控制Lm感染的关键环节。因而这也需要有关部门引起重视，加强食品卫生管理，减少食源性疾病的发生。     

石家庄市食品中李斯特菌污染状况调查

单核细胞增生李斯特菌（Listeria monocytogenes,Lm）是一种人畜共患致病菌,可引起人类多种疾病并引起食源性疾病的暴发和流行,病死率高达35%～70%.WHO报道,4%～8%的水产品、5%～10%的奶及奶制品、30%以上的肉制品被Lm污染.为全面了解石家庄市居民主要消费食品中Lm污染的本底情况,我们于2005年8-10月对市场上销售的5类250份食品进行了监测.     

单增李斯特菌选择性增菌培养分离的初步探讨

目的：寻找一种良好的增菌培养分离法,提高食品中单增李斯特菌（Lm）的检出率。方法：对Fraser肉汤增菌法进行改良,在自行配制的第一液Half-Fraser肉汤中添加氯霉素,观察其对Lm及蜡样芽孢杆菌（B.cereus）的影响,确定加入氯霉素的最佳适宜量。160份样品同时采用改良Fraser肉汤法、FDA法、国标法增菌培养后,用传统生化鉴定Lm,比较检出率。结果：在Half-Fraser肉汤中添加3.0μg/ml氯霉素不会对样品中的Lm产生明显的影响,但可有效抑制B.cereus的生长。3种增菌培养法以Fraser肉汤增菌法总检出率最高,尤其对速冻食品的检出率达100%,FDA法对灭菌食品的检出率达100%。结论：Half-Fraser肉汤氯霉素的最佳添加量为3.0μg/ml。不同样品类型要用不同的增菌法,必要时用2种以上方法相结合,提高食品中Lm的检出率。     

两家调理食品生产厂家单核细胞增多性李斯特菌污染调查报告

自上世纪80年代以来,单核细胞增多性李斯特菌(L .monocytogenes -Lm)就被认为是危害公共卫生和食品行业的一种重要人畜共患致病菌,90年代WHO将其列为食源性四大致病菌之一。随着人们生活水平的提高和工作节奏的加快,动物源性食品和速食食品由于其营养丰富、储藏和食用方便越来越受到人们的青睐。这些食品大多是经过一定的杀菌措施并真空包装以延长其货架期。但是这些措施不一定能完全杀灭食品中污染的Lm ,若其储存温度不能保持在4℃以下(实际的货架温度往往是4℃～8℃甚至更高) ,由于不存在竞争菌群,反使得其中的Lm有足够的时间和空间生…     

湖北省36株单增李斯特菌脉冲场凝胶电泳分型

目的:了解湖北省各类食品中分离到的单核细胞增生李斯特菌各菌株之间的遗传相关性,了解湖北省Lm基因型的分布情况和分子流行特点。方法:按照标准化的Lm-PGFE方法对所分离到的36株Lm菌株进行脉冲场凝胶电泳分型。结果:36株Lm菌株通过PGFE分成了12个型别,各型别之间不紧密相关。结论:湖北省食品中Lm的污染来源于不同的克隆株,菌型分散,未发现单个基因型菌株流行的迹象。     

承德市学校食堂单核细胞增生李斯特菌污染情况

单核细胞增生李斯特菌（Listeria monocytogenes，Lm）是一种人畜共患病的病原菌。进食被污染的食物后，一般8～24h出现恶心、呕吐、腹泻等症状，严重的可表现为败血症、脑膜炎等，也可引起心内膜炎。近年来，由食物传播的Lm在人群和动物中已引起多次爆发流行，也引起世界各国食品卫生界的高度重视，20世纪90年代WHO将其列为食源性四大致病菌之一。学校是容易造成群体性发病的场所。2006年8月笔者对承德市部分学校食堂加工用生食品、熟食、加工场所物体表面及用具涂抹物进行了Lm检测，以便了解学校食堂Lm污染状况，为切实预防食物中毒和食源性疾病的发生，确保学生的身体健康提供依据。     

单核细胞增生李斯特菌研究进展

单核细胞增生李斯特菌(Lm)是一种重要的食源性致病菌,全国各地都对Lm在食品中的污染情况进行调查,建立简单快速、具有良好的稳定性和重复性、灵敏度高、特异性强的检测方法显得非常重要。本文就Lm的病原学、流行病学及检测方法等的研究进展进行介绍。     

广东省食品中单核细胞增多性李斯特菌脉冲场凝胶电泳技术分子分型的研究

目的应用脉冲场凝胶电泳技术（PFGE）对广东省食品中分离的单核细胞增多性李斯特菌（Lm）进行分子分型,并建立PFGE数据库。方法参照美国PulseNet的Lm PFGE分子分型标准方法进行检测。应用BioNumerics软件对不同食物种类、时间和地点的分离株进行比对,分析菌株之间的相关性。结果107株Lm分成41个PFGE型,型别较为分散;从鸡肉中分离的菌株数最多（37株）,PFGE分型也最多（19个）;冷藏和冷冻食品的分离率较高,其中有26株菌仅存在1-2个电泳条带的差异,相似度极高;韶关和惠州地区分离的Lm存在着地区特异性;随时间变迁,部分菌株仍存在不同程度的相关性。结论广东省食品中分离的Lm在整体上表现出较大的遗传多样性,但部分菌株有不同程度的相关性。     

武汉市2006年食品中沙门菌污染状况监测

目的:了解武汉市2006年食品中沙门菌的污染状况,为国家食品安全监测网提供数据。方法:随机从武汉超市和集贸市场采取生畜肉、生禽肉、熟肉制品、水产品、生食蔬菜、蔬菜沙拉样品共172份,经过两步增菌后,用HE和科玛嘉沙门菌选择性平板分离,可疑菌株再进行API生化条和血清学鉴定。结果:从31份样品中分离出沙门菌,检出率18.02%,其中以生牲畜肉最高(37.14%),熟肉制品次之(21.21%)。结论:武汉市2006年食品沙门菌污染严重,应加强食品安全监督。     

武汉市市售食品中铅污染物摄入量评估

目的了解武汉市各类食品中铅污染水平,根据每标准人日各类食物的摄入量数据,评估武汉市民膳食铅暴露水平。方法采用中国食品污染物监测研究方法 ,制定武汉市食品污染物监测工作方案,用石墨炉原子吸收光谱法检测食品中铅含量,对武汉市2003-2009年食品监测数据进行食品中铅污染的暴露量评估,并根据武汉市居民膳食营养调查中数据进行摄入量评估。结果武汉市食品中铅的平均含量为0.089mg/kg,合格率为94.5%。铅含量较高的前三类食品分别是猪内脏、茶叶和干菌,武汉市城乡居民每标准人重金属铅的日平均摄入量为80.6μg。结论武汉市市售主要食品均存在铅轻微污染,长期食用相对安全。     

单核细胞增生李斯特菌快速检测的靶基因及其生物学特性

单核细胞增生李斯特菌(Listeria m onocytogene,s Lm)是一种重要的人畜共患病原菌,该菌在自然界分布广泛,极易通过各类污染食品进行传播,感染人和动物引起食源性李斯特菌病。Lm可使孕妇、婴儿以及免疫力低下的易染人群产生腹泻发热等症状,严重的会导致孕妇流产、脑膜炎和败血症     

1例孕妇感染李斯特菌病例的病原学分析及分子特征研究

目的对北京市1名孕妇感染单核细胞增生李斯特菌(listeria monocytogenes,Lm)病例进行病因食品溯源、病原学检测、血清学分型、耐药及分子特征研究。方法对流行病学相关的1株孕妇病例Lm分离株和1株可疑食品Lm分离株进行血清型分型及脉冲场凝胶电泳(pulsed-field gel electrophoresis,PFGE)分子分型,并采用CLSI和EUCAST推荐的微量肉汤稀释法检测菌株对12种抗生素的敏感性。结果 2株Lm分离株均为1/2a血清型,药敏结果一致,对有国际标准的青霉素、氨苄西林、复方新诺明及红霉素敏感,其他8种抗生素的MIC值均较小,经AscⅠ酶切后具有100%同源的PFGE指纹图谱带型。结论结合流行病学调查、实验室病原学检测、药敏和PFGE分子分型结果,高度怀疑本例孕妇感染李斯特菌病例是由进食受1/2a血清型单核细胞增生李斯特菌污染的牛肉三明治所致。