不同波长的光照射对视网膜色素上皮细胞生长及其分泌生长因子的影响

背景近视的发病机制是眼科研究的一个热点,近年来发现,由神经视网膜细胞及视网膜色素上皮（RPE）细胞分泌的细胞因子可能参与近视的发病,RPE细胞因子的分泌功能受光照射的影响,而RPE细胞对不同波长光的吸光度（A）值是不一样的。目的研究不同波长的光照射对人胚RPE细胞增生及其分泌肝细胞生长因子（HGF）、碱性成纤维细胞生长因子（bVGF）和转化生长因子-β（TGF—β）的影响,从细胞水平和分子生物学水平探讨近视的发病机制。方法第4～5代人胚RPE细胞置于白光、波长为775nm的红光及波长为480nm的蓝光下照射和培养48h,MTT比色法检测各组人RPE细胞的增生情况,并用透射电子显微镜观察各组传代细胞的超微结构。分别于光照射后12、24、48、72h收集培养液,采用酶联免疫吸附实验（ELISA）测定培养基中HGF、bFGF和TGF—β的质量浓度。用逆转录聚合酶链反应（RT—PCR）检测不同波长光照射24h后RPE细胞中HGFmRNA的表达水平,分析蓝光、红光、白光照射对体外培养RPE细胞的影响。结果蓝光组、红光组、白光组和对照组RPE细胞的A490值分别为0．0218±0．0014、0．0353±0．0025、0．0371±0．0024和0．0445-0．0046。4个组中RPE细胞的增生速度明显不同,差异有统计学意义（F=12．579,P〈0．05）,蓝光组和红光组A490值均明显低于对照组,差异均有统计学意义（t=2．043、t=2．024,P〈0．05）。ELISA结果显示人胚RPE细胞可以分泌HGF、bFGF和TGF-β,在受到不同波长的光照射后,不同时间点HGF、bFGF和TGF—β的分泌量不同,随着时间的变化,4个组HGF、TGF—β的质量浓度均逐渐升高,二者在72h和48h均高于12h（P〈0．05）,红光组与蓝光组更为明显,与对照组比较差异均有统计学意义（P〈0．05）。各波长组bFGF的质量浓度随着光照时间的延长在RPE细胞中的表达均逐渐降低,72h与12h时相比差异均有统计学意义（P〈0．05）。RT—PCR结果显示,不同波长光照射后RPE细胞中HGFmRNA的表达水平不同,蓝光下培养的RPE细胞HGFmRNA表达量最少,白光组、红光组和蓝光组HGFmRNA的表达量（A490）与对照组比较差异均有统计学意义（P〈0．05）。透射电子显微镜下红光组、白光组人胚RPE细胞与对照组相比超微结构均无明显变化,但蓝光组RPE细胞核染色质稀疏变淡,细胞器减少,细胞界膜不清或消失。结论不同波长的光照射可影响人RPE细胞的增生及其分泌HGF、bFGF和TGF—β的功能,提示近视的形成可能与不同波长的光相互作用有关。     

肝细胞生长因子对人视网膜色素上皮细胞表型的影响

目的 探讨肝细胞生长因子(HGF)对人视网膜色素上皮(RPE)细胞形态及细胞表面抗原的影响.方法 体外培养人RPE细胞,分别采用0.4%小牛血清和重组人HGF因子刺激人RPE细胞,应用相差显微镜观察细胞形态变化;免疫组织化学方法 检测细胞表面抗原细胞角蛋白、波形蛋白、成纤维细胞特异性蛋白-1(Fsp-1)的表达变化;采集经HGF(20 ng/mL)刺激后0、12、24、48 h的RPE细胞应用RT-PCR方法 观察Fsp-1mRNA的表达变化.结果 体外培养的人RPE细胞,在含0.4%小牛血清培养液中呈多角形,贴壁生长融合后呈铺路石样;细胞角蛋白的表达阳性率为89.7%,波形蛋白阳性率为100%,Fsp-1阳性率为45.3%.HGF(20 ng/mL)刺激24 h后,细胞呈长梭形,具有成纤维细胞形态特征;细胞角蛋白阳性率为50.1%(χ2=38.1,P＜0.01),Fsp-1阳性率为91.2%(χ2=48.62,P＜0.01),而波形蛋白表达无明显变化.HGF作用后,Fsp-1mRNA表达升高(F=13.761,P=0.002). 结论 HGF促进人RPE细胞向成纤维细胞的表型转化,提示HGF在RPE细胞上皮-间质转化过程中起重要作用.     

表皮生长因子、碱性成纤维细胞生长因子对人视网膜色素上皮细胞DNA合成的影响

目的探索表皮生长因子(epidermal growth factor,EGF)、碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor,bFGF)对培养的人视网膜色素上皮(retinal pigment epithelium,RPE)细胞促进DNA合成的最佳刺激浓度，并对两种因子的协同作用进行探讨。方法培养的人RPE细胞第6代用于本实验。应用氚标胸腺嘧啶核苷(³H-thymidine, ³H-TdR)掺入试验及放射自显影检测EGF、bFGF对RPE细胞的促DNA合成作用。结果EGF、bFGF均可引起剂量依赖的促有丝分裂作用。在含2%血清的培养液中,EGE、bFGF作用最佳浓度为1ng/ml,明显低于无血清培养液中EGF、bFGF作用的最佳浓度(10ng/ml)。联合应用10ng/mlEGF、10ng/mlbFGF约提高RPE细胞合成DNA能力2.96倍。结论EGF、bFGF对培养的人RPE细胞具有促进DNA合成作用，且两者可产生协同效应。(中华眼底病杂志,1998,14:98-100)     

细胞因子对视网膜色素上皮细胞Cadherin表达的影响

目的探讨细胞因子对视网膜色素上皮（RPE）细胞钙黏附素（Cadherin）表达的影响及可能的调节机制。方法取体外培养的第2代兔眼RPE细胞，加入不同浓度的碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）、肿瘤坏死凶子“（TNFα）、血小板源生长因子（PDGF）、肝细胞生长因子（HGF）共同培养12h后，用流式细胞技术定性、定量观察这4种细胞因子对RPE细胞膜上Cadherin表达的影响。结果正常兔RPE细胞可表达Cadherin，经各种细胞因子诱导后的RPE细胞Cadherin表达均明显下调，尤以4种细胞因子联合作用时表达下调最明显，其表达水平与细胞因子浓度呈剂量递减关系。不同浓度各组细胞因子与空白对照组比较，Cadherin表达具有显著统计学差异（P〈0．05）。同浓度不同细胞因子组间Cadherin表达具有显著统计学差异（P〈0．05）。结论正常兔RPE细胞可表达Cadherin，细胞因子bFGF、TNFα，PDGF、HGF能诱导RPE细胞Cadherin表达减弱，减弱的程度与剂量有关。     

生长因子诱导视网膜色素上皮细胞增殖的协同作用研究

目的从细胞水平探讨生长因子:肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor,TNF-α)、白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)和碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor,bFGF)对视网膜色素上皮(retinal pigment epithelium,RPE)细胞增殖的协同调控作用。方法通过PPE细胞培养，采用氚标胸腺嘧啶核苷(3 H-thymidine,3 H-TdR)掺入测定三种生长因子单用和分别联用诱导RPE细胞DNA合成改变，细胞计数观察RPE细胞生长变化。结果三种生长因子单用均可明显促进RPE细胞DNA合成及细胞数目增加,TNF-α、IL-β和bFGF的3 H-TdR掺入每分钟计数值(counts per minute,cpm)分别是对照组的2.74、2.66和1.69倍(P<0.05)。两种生长因子联用较单用cpm明显提高,其中TNF-α+IL-βcpm是对照组的3.14倍(P<0.05)。三种生长因子联用时cpm是对照组的3.74倍(P<0.05)。结论三种生长因子间存在促RPE细胞增殖的协同作用,这可能是生长因子对RPE细胞增殖的重要调控机制之一。(中华眼底病杂志,1998,14:95-97)     

碱性成纤维细胞生长因子和转化生长因子-β对人巩膜成纤维细胞的生长调控研究

目的 研究碱性成纤维细胞生长因子(basic fibrob-last growth factor,bFGF)和转化生长因子-β(transforming growth factor-β,TGF-β)对人巩膜成纤维细胞的生长调控,进一步明确bFGF和TGF-B影响近视的作用部位及可能机制.方法 取角膜移植后的3只健康供体眼球,分离培养巩膜成纤维细胞并建立细胞系.取第3～5代生长良好的细胞,在培养液中分别加入1 ng/ml、3 ng/ml、10 ng/ml、30 ng/ml、100ns/ml、300 ng/ml的bF     

碱性成纤维细胞生长因子和转化生长因子-β对人巩膜成纤维细胞的生长调控研究

目的 研究碱性成纤维细胞生长因子(basic fibrob-last growth factor,bFGF)和转化生长因子-β(transforming growth factor-β,TGF-β)对人巩膜成纤维细胞的生长调控,进一步明确bFGF和TGF-B影响近视的作用部位及可能机制.方法 取角膜移植后的3只健康供体眼球,分离培养巩膜成纤维细胞并建立细胞系.取第3～5代生长良好的细胞,在培养液中分别加入1 ng/ml、3 ng/ml、10 ng/ml、30 ng/ml、100ns/ml、300 ng/ml的bFGF以及0.1 ng/ml、0.3 ng/ml、1ng/ml、3 ng/ml、10 ng/ml、30 ns/mJ的TGF-β,两组均设空白对照.6 d后进行细胞计数.选用t-test进行统计分析.每株细胞重复3次,共重复3株细胞,观察bFGF和TGF-β对巩膜成纤维细胞的生长调控作用.结果 bFGF能明显促进人巩膜成纤维细胞的生长,随浓度增加呈明显剂量效应关系.bFGF大于10 ng/ml时(包括10 ng/ml),和无bFGF的正常培养液比较,差异具有显著性(P<0.05).TGF-β能明显抑制人巩膜成纤维细胞的生长,抑制细胞生长的作用亦呈明显的剂量效应关系.TGF-β大于0.3 ng/ml时(包括0.3 ng/ml),和无TGF-β的正常培养液比较,差异具有显著性(P<0.05).结论 本实验结果显示,bFGF对人巩膜成纤维细胞生长具有明显促进作用,而TGF-β则表现为明显抑制作用.进一步证实外源性bFGF和TGF-β可能作用于巩膜组织,并通过调控巩膜成纤维细胞的生长及巩膜细胞外基质合成代谢单独或协同作用参与巩膜重塑过程.     

TGF-β对体外培养人胚视网膜色素上皮细胞的影响

目的 研究转化生长因子-β（TGF-β）对体外培养人胚视网膜色素上皮（RPE）细胞的影响，从细胞生物学水平和分子生物学水平探讨近视眼的发病机制。方法 外源性TGF-β刺激人RPE细胞后，通过绘制生长曲线、MTT法检测细胞活性及观察透射电镜研究其细胞自身的生长情况；采用酶联免疫吸附实验（ELISA）测定其分泌HGF、bFGF和TGF-β的量；采用RT-PCR法检测其细胞表达HGF的情况，从而分析外源性TGF-β对体外培养的RPE细胞的影响。结果不同质量浓度的TGF-β均可抑制人胚RPE细胞的生长，随时间的延长作用更加明显；TGF-β可使RPE细胞超微结构发生变化；ELISA结果显示TGF-β对其他两种因子的分泌均有抑制作用，但对自身有促进作用，为正反馈调节；同时可明显抑制RPE细胞内HGF的表达。结论 TGF-β可影响RPE细胞增生、改变超微结构及抑制HGF的表达。     

白细胞介素-1β促人视网膜色素上皮细胞分泌血管内皮生长因子和碱性成纤维细胞生长因子的研究

目的 观察炎前因子白细胞介素-1β(IL-1β)对培养的人视网膜色素上皮(RPE)细胞分泌血管内皮生长因子(VEGF)和碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)的影响.方法 采用酶联免疫吸附测定法(ELISA)测定IL-β浓度为0、1、10、20 ng/ml和时间为24、36、48 h作用下RPE细胞的VEGF和bFGF分泌量变化;采用半定量逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)测定10 ng/ml IL-1β作用48 h后RPE细胞的VEGF和bFGFmRNA变化;噻唑蓝(MTT)比色法测定IL-1β刺激后RPE细胞的增生状态.结果 相同刺激时间即36 h作用下,终浓度为1、10 ng/ml的IL-1β促进RPE细胞VEGF的分泌(q=32.79,42.56;P<0.01);10 ng/ml的IL-1β促进bFGF的分泌(q=7.514,P<0.01);与浓度为10 ng/ml的IL-1β刺激相比,增加IL-1β刺激浓度至20 ng/ml使RPE细胞VEGF和bFGF分泌量下降(q=9.35,6.92;P<0.01).相同浓度即10 ng/ml的IL-1β作用下,IL-1β作用时间与RPE细胞VEGF和bFGF分泌量具有正性时间-效应关系;浓度为10 ng/ml的IL-1β作用48 h可促进RPE细胞的VEGF和bFGF mRNA水平;MTT结果 证明IL-1β未明显影响RPE细胞的增生状态(F=0.317,P>0.05).结论炎前因子IL-1β可影响人RPE细胞VEGF和bFGF的分泌量,在一定的作用浓度和作用时间范围内具有显著的促进效应.     

翼状胬肉细胞之间的相互作用

目的探讨翼状胬肉中血管内皮细胞和成纤维细胞之间的相互作用。方法收集翼状胬肉标本,采用血管内皮细胞和成纤维细胞单独培养、条件培养和共同培养的方法构建培养体系,采用ELISA和RT—PCR法检测3种体系培养上清液和细胞中血管内皮细胞生长因子（VEGF）、碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）蛋白及mRNA含量的变化。结果单独培养、条件培养和共同培养各组培养上清液中VEGF和bFGF的质量浓度增加,差异均有统计学意义（P〈0．05）;细胞单独培养、条件培养和共同培养三者相比,VEGF和bFGF的mRNA表达升高,差异均有统计学意义（P〈0．05）。结论内皮细胞和成纤维细胞有相互上调作用,2种细胞在翼状胬肉的发生发展过程中相互促进。     

先天性与后天性眼球震颤的眼震电流描记术表现

应用眼震电流描记术,对16例先天性和10例后天性眼球震颤患者进行了多项试验检查。结果表明,两者在凝视性眼球震颤、扫视和视跟踪反应,以及视动性眼球震颤等方面,都有很大的差异。认为,此项技术可对两类眼球震颤作出较为客观的鉴别诊断。     

合并近视的原发性开角型青光眼视盘形态和视网膜神经纤维层改变

目的 探讨合并近视的原发性开角型青光眼(primary open-angle glaucoma with myopia,M-POAG)视盘形态和视网膜神经纤维层(retinal nerve fiber layer,RNFL)改变的特点及其临床意义。 方法 对38例63只合并近视[(－6.92±3.79)D]、高眼压性[(32.00±9.36) mm　Hg(1 mmHg=0.133 kPa)原发性开角型青光眼(primary open-angle glaucoma,POAG)作眼底彩色照相,利用计算机图像分析设备分析视盘形态及RNFL 缺损的变化,并与单纯原发性开角型青光眼(simple primary open-angle glaucoma,S-POAG)的相应临床检查资料进行比较。 结果 M-POAG视盘形态和RNFL萎缩除具有与S-POAG相同的一般表现外,尚有其特征性改变：视盘呈椭圆形(垂直或水平)、斜入及部分缺损形,色泽苍白;视杯形态各异,呈碟形(28.6%)、垂直形(25.4%)、倾斜形(23.8%)、锅形(9.5%)及局限与同心圆形等;盘沿面积及杯/盘横径比值显著低于S-POAG组(P<0.05,P＜0.001)。视盘凹陷偏心 多向下方。RNFL局限性萎缩主要出现在下方视网膜;弥漫性RNFL萎缩与合并高度近视的中后期POAG视野缺损密切相关(P<0.005)。 结论 M-POAG的视盘形态特征以及RNFL改变特点有助于在合并高度近视的POAG中的临床诊断。(中华眼底病杂志,2000,16:81-84)     

基本型间歇性外斜视患者的斜视控制能力与融合性辐辏和分开运动的关系

背景 间歇性外斜视是介于外隐斜和恒定性外斜视之间的一种斜视类型.间歇性外斜视患者融合性辐辏和分开运动的评估对了解患者控制隐斜或间歇性偏斜的能力是非常重要的. 目的 分析基本型间歇性外斜视患儿融合性辐辏运动和分开运动与外斜视控制之间的关系. 方法 采用系列病例观察研究方法,纳入2013年7月至2014年2月在北京同仁医院就诊的基本型间歇性外斜视患儿63例.采用三棱镜加交替遮盖法测定患儿双眼偏斜角度;采用修正纽卡斯尔控制分数(RNCS)方法评估外斜视的控制能力并进行评分;采用1 Δ～40Δ的水平三棱镜排镜及调节性视标检测融合性辐辏和分开运动的破裂点、恢复点和恢复易度检测.采用Spearman秩相关分析法评估融合性辐辏和分开运动的测量参数与间歇性外斜视控制分数之间的关系.结果 患儿右眼和左眼的平均屈光度分别为(-1.95±1.63)D和(-2.01±1.73)D,受检眼视远和视近时斜视度分别为(36.67±15.69)Δ和(38.25±14.83)Δ,差异均无统计学意义(t =-0.13、-0.57,均P＞0.05).患儿视远及视近时融合性辐辏运动的破裂点与外斜视控制分数之间均呈明显负相关(rs=-0.41,P=0.03;rs=-0.56,P＜0.01);而视远及视近融合性分开运动的破裂点与外斜视控制分数之间均无明显相关性(rs =0.05,P=0.78;rs=0.04,P=0.75).无论辐辏融合还是分开融合,融合恢复易度与外斜视控制分数之间均无明显相关性(均P＞0.05).结论 融合性辐辏运动破裂点的检测能较好地提示间歇性外斜视的严重程度,有可能作为间歇性外斜视的手术治疗指征之一.     

恶性青光眼十年临床回顾分析

对1979年12月至1989年12月10年间我院临床确诊的91例恶性青光眼病例进行了回顾性研究。重点对它的危险因素及发病机制中新的临床发现进行了分析和讨论。对恶性青光眼处理方面10年的进展进行了总结,提出了诊断及治疗原则,基于资料分析结果,对恶性青光眼的命名及分类提出了新的建议。     

HSP70在STZ-糖尿病性白内障发病机制中的作用

目的：探讨HSP70在链脲佐菌素－糖尿病性白内障发生、发展中的作用。方法：将60只SD大鼠随机分为两组，正常对照组与白内障组。用链脲佐菌素（STZ）诱发糖性白内障，每周观察晶状体的变化，在实验开始后2w末、4w末、8w末，分别摘取眼球，检测热休克蛋白－70（HSP70）在晶状体上皮细胞（LECs）中的表达情况。结果：对照组晶状体一直保持透明，白内障组晶状在2w末出现空泡，8w末全部混浊。HSP70在对照组中未见表达，在白内障组中表达明显，并随着白内障的发展而增加，结论：HSP70可能通过调节LECs的生产在糖性白内障的发生，发展中起重要作用。     

正常眼压性青光眼与高眼压性青光眼视神经图像分析的对比研究

目的 探讨正常眼压性青光眼 (normal-tension glaucoma, NTG)与高眼压性青光眼(high-tension glaucoma, HTG)视盘和视神经纤维层(retinal nerve fiber layer, RNFL)损害的差异。 方法 选择具有青光眼性视神经损害或RNFL缺损、相应的视野缺损的青光眼患者,NTG至少2次24 h眼压曲线和多次眼压测量均≤21 mm Hg(1 mm Hg =0.133 kPa)，HTG的眼压至少2次测量≥25 mm Hg。患者进行详细的眼科检查，同时用扫描激光偏振仪(scanning laser polarimetry, SLP)、光学相干断层扫描（optical coherence tomography, OCT）和海德堡视网膜成像仪(Heidelberg retinal tomography, HRT)定量测定视盘形态和RNFL厚度。比较两组视盘总体和相同象限测量参数。 结果 30例 NTG和 19例 HTG (共49只眼)患者的平均年龄分别为(59.6±8.6)岁(39～71岁)和(59.2±12.3)岁(36～75岁)。两组间视野缺损的平均偏差(mean deviation, MD)差异不显著(P＞0.05)。HRT测量的视盘 C/D面积比，除鼻侧象限外,NTG者视盘总体和上、下、颞侧3个象限均显著大于HTG者(P＜0.05 ),而盘缘面积小于HTG者(P＜0.05)；两组间其他视盘参数差异不显著。3种激光扫描技术所测定的总体和象限RNFL厚度，两组间差异不显著。 结论 NTG趋向大 C/D面积比和窄盘缘面积。RNFL缺损的形态分布须更精细和节段性分析。 (中华眼底病杂志, 2002, 18: 109-112)     

细胞周期相关基因在葡萄膜黑色素瘤中的 表达与意义

目的探讨细胞周期相关基因与葡萄膜黑色素瘤病理分型及浸润能力的关系。方法采用免疫组化法定量检测96例葡萄膜黑色素瘤 标本中cyclinD1和Bcl-2蛋白的表达。结果Bcl-2在所有葡萄膜黑色素瘤中均有较高表达,与病理学分型及巩膜外浸润无关;cyclinD1的表达依梭型 、混合型、上皮型逐渐增高,与肿瘤的浸润能力呈正相关。结论bcl-2的表达对于葡萄膜黑色素瘤细胞的存活具有重要作用,cyclinD1可作为其恶性程度的评估指标。(中华眼底病杂志,2001,17:44-46)     

热休克蛋白-70在人类糖尿病性白内障晶状体上皮细胞中的表达及意义

目的 :探讨热休克蛋白 70在人类糖性白内障晶状体上皮细胞中的表达及意义。方法 :采用链霉菌抗生物素蛋白碱性磷酸酶 (streptavidin alkalinephosphatase ,S P)免疫组化技术检测热休克蛋白 70 (heatshockprotin 70 ,HSP 70 )在人类糖性白内障 (2 5例 )和正常晶状体 (7例 )上皮细胞中的表达情况。结果 :热休克蛋白 70在人类糖性白内障晶状体上皮中全部为阳性表达 ,而在正常晶状体上皮细胞中全部为阴性表达 ,二者差异有显著性 (χ2 =2 6 .4 2 ,P <0 .0 1)。结论 :热休克蛋白 70在人类糖尿病性白内障发生、发展中起重要作用。     

葡萄膜炎致盲目特点及原因探讨

目的 探讨我国常见类型葡萄膜炎的致盲特点与主要致盲原因。 方法 回顾分析1 214例各种类型葡萄膜炎患者的临床资料，着重分析各种葡萄膜炎中常见的致盲类型及致盲原因。 结果 1214例患者1892只患眼中，355只患眼致盲，占18.76%。致盲时平均年龄34.38岁，男女比例为1.52∶1。全葡萄膜炎致盲248只眼，占此类患眼的26.27%，其中，Behcet病和Vogt-小柳原田(VKH)综合征致盲者分别占51.61%和29.44%。全葡萄膜炎致盲者中，主要原因为并发性白内障，共89只眼，占35.89%；玻璃体混浊53只眼，占21.37%；继发性青光眼30只眼，占12.10%。前葡萄膜炎致盲79只眼，占此类患眼的10.73%，主要致盲原因为并发性白内障，共56只眼，占70.89%；继发性青光眼16只眼，占20.25%。后葡萄膜炎致盲15只眼，占此类患眼的15.63%，主要致盲原因为玻璃体混浊，共9只眼，占此类患眼的60.00%；黄斑病变3只眼，占此类患眼的20.00%。中间葡萄膜炎致盲13只眼，占此类患眼的11.21%，主要致盲原因为玻璃体混浊，共8只眼，占61.54%；并发性白内障5只眼，占38.46%。 结论 葡萄膜炎具有致盲率高及盲目主要发生于青壮年等特点；全葡萄膜炎，特别是Behcet病和VKH综合征是我国葡萄膜炎中最重要的致盲类型；并发性白内障、继发性青光眼等并发症是葡萄膜炎致盲的主要原因。 (中华眼底病杂志, 2005, 21: 350-352)     

高糖对体外培养的视网膜Müller细胞表达蛋白转录活化因子4的影响

目的 观察高糖对体外培养的视网膜Müller细胞表达蛋白转录活化因子4(ATF4)的影响.方法 组织块悬浮法体外原代培养Sprague-Dawley(SD)大鼠视网膜Müller细胞,用链酶亲和素生物素过氧化物酶复合物(SABC)法对Müller细胞进行神经胶质纤维酸性蛋白(GFAP)及谷氨酰胺合成酶(GS)的鉴定.将培养的视网膜Müller细胞分为正常对照组和A、B、C组,正常对照组使用5.5 mmol/L葡萄糖培养液,A、B、C组分别使用20.0、30.0、40.0 mmol/L葡萄糖培养液进行.培养4d后,蛋白免疫印迹(Western blot)法检测各组视网膜Müller细胞上ATF4蛋白的表达.结果 体外培养的细胞均为视网膜Müller细胞,95％以上细胞染色呈GFAP及GS阳性.A、B、C组视网膜95％的Müller细胞呈阳性.Western blot检测显示,4d后A、B、C组Müller细胞表达ATF4蛋白的量均较正常对照组升高,组间比较,差异有统计学意义(q＝0.293、0.754、0.484,P＜0.05).结论 高糖能促使体外培养下的视网膜Müller细胞表达内质网应激蛋白ATF4增加,高糖培养下的视网膜Müller细胞可发生内质网应激反应.