半乳糖受体介导的c-myc反义核酸联合三氧化二砷对人肝癌细胞的增殖抑制作用

目的　探讨Gal-PEI-c -mycASODN与三氧化二砷 (As2 O3 )联合应用对人肝癌Bel- 74 0 2细胞增殖的影响。方法　As2 O3 分别或联合Gal-PEI-c -mycASODN与人肝癌Bel- 74 0 2细胞共孵育 4 8h ,台盼蓝染色法检测细胞增殖的变化 ,流式细胞仪分析细胞亚二倍体百分率。结果　 0 5 μmol/LAs2 O3 和Gal-PEI-ASODN(含A SODN 0 12 5 μmol/L)均不能抑制Bel- 74 0 2细胞增殖 ,0 5 μmol/L的As2 O3 联合Gal-PEI-ASODN(含ASODN 0 12 5μmol/L)对Bel- 74 0 2细胞增殖有明显抑制作用 (P <0 0 5 ) ,与 4 μmol/LAs2 O3 产生的抑制作用相当 ;1 0 μmol/LAs2 O3 不引起Bel- 74 0 2细胞凋亡 ,但联合Gal-PEI-ASODN(含ASODN 0 2 5 μmol/L)即导致Bel - 74 0 2细胞凋亡。结论　Gal-PEI-ASODN联合As2 O3 能明显提高肝Bel- 74 0 2细胞对As2 O3 的敏感性 ,抑制Bel- 74 0 2细胞增殖 ,促进细胞凋亡。     

三氯化二砷联合Gal-PEI-ASODN对Bel-7402细胞增殖的影响

目的　探讨以半乳糖受体为靶向的投递系统对肝癌化疗药物敏感性的影响。方法　用半乳糖 (Gal)-聚乙烯亚胺 (PEI)交联物与c -myc反义核酸 (ASODN)形成Gal-PEI-c -mycASODN复合物 ,与三氧化二砷(As2 O3 )联合应用 ,观察其对人肝癌Bel- 74 0 2细胞增殖的作用。结果　As2 O3 联合Gal-PEI-c -mycASODN复合物对Bel- 74 0 2细胞增殖的IC50 比单用As2 O3 或As2 O3 联合单纯c-mycASODN的IC50 明显下降。结论　半乳糖受体为靶向的投递系统可提高肝癌对化疗药物的敏感性。     

三氧化二砷联合Gal-PEI-ASODN对Bel-7402细胞增殖的影响

目的 探讨以半乳糖受体为靶向的投递系统对肝癌化疗药物敏感性的影响。方法 用半乳糖(Gal)-聚乙烯亚胺(PEI)交联物与c-myc反义核酸(ASODN)形成Gal-PEI-c-myc ASODN复合物,与三氧化二砷(As2O3)联合应用,观察其对人肝癌Bel-7402细胞增殖的作用。结果 AsO3联合Gal-PEI-c-myc ASODN复合物对Bel-7402细胞增殖的IC50比单用As2O3或As2O3联合单纯c-myc ASODN的IC50明显下降。结论 半乳糖受体为靶向的投递系统可提高肝癌对化疗药物的敏感性。     

羟基喜树碱的鼻咽癌治疗方案实验性探讨

[目的]探讨以拓扑异构酶Ⅰ抑制剂羟基喜树碱(HCPT)为基础的治鼻咽癌联合方案.[方法]实验采用人鼻咽癌(NPC)细胞株SUNE1,体外细胞毒测定用MTT法,体内实验采用SUNE1裸鼠移植瘤模型,研究HCPT与顺铂(DDP)或(和)5-氟尿嘧啶(5-FU)联合用药方案的抗瘤效果.[结果]在体外实验中,HCPT、DDP和5-FU单用对SUNE1的IC50分别为3.3、2.8、8.6μmol/L;HCPT、DDP和5-FU在1∶1∶2的剂量比例合用的条件下,HCPT与DDP或(和)5-FU合用均具有明显的协同抗NPC作用.体内实验也表明HCPT与DDP合用具有协同抗NPC作用(P＜0.01),HPC与5-FU合用未见明显的相加或协同作用,HCPT与DDP及5-FU合用抗NPC效果较单药和两药合用为优.[结论]HCPT+DDP和HCPT+DDP+5-FU具有协同抗NPC作用.     

Survivin反义寡核苷酸对5-FU诱导人红白血病细胞系K562凋亡的影响

【目的】探讨survivin反义寡核苷酸(Antisense Oligodeoxy-nucleotid,ASODN)对5-FU(5-氟尿嘧啶)诱导人红白血病细胞系K562细胞凋亡的影响。【方法】体外培养K562细胞,合成survivin ASODN并经脂质体转染至K562细胞内,MTT法观察survivin ASODN组、5-FU组及5-FU联合survivin ASODN的细胞毒作用,Hoechst33342/PI双荧光染色观察各组细胞核形态,镜下计算各组细胞凋亡率。【结果】400、600、800、1000nmol/L survivin ASODN处理K562细胞44 h后,IC50为800 nmol/L;与单独使用survivin ASODN或5-FU相比,5-FU联合800 nmol/L survivin ASODN后细胞生长明显受到抑制(P<0.01);Hoechest33342/PI双荧光染色可观察到survivin ASODN组、5-FU组及5-FU联合survivin ASODN组均出现明显核固缩、凝集等细胞凋亡表现。镜下细胞计数,survivin ASODN组、5-FU组及5-FU联合survivin ASODN组细胞凋亡率分别为54.55%、53.85%、86.70%。【结论】Survivin ASODN可增强K562细胞对5-FU的敏感性。     

β1整合素表达下调对人结肠癌细胞增殖和化疗敏感性影响

目的 观察β1整合素表达下调对人结肠癌HT-29细胞增殖和化疗敏感性的影响.方法 采用反义寡核苷酸(ASODN)技术转染HT-29细胞,逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测β1整合素表达下调情况.MTT法检测HT-29细胞相对存活率.给予梯度浓度氟尿嘧啶(5-FU),计算IC50.结果 实验组β1整合素条带吸光度积分(IAD)值/β-actin条带IAD值的比值及HT-29细胞的存活率与对照组相比显著降低(F=1 630.08,q=72.40,P<0.01;t=4.37,P<0.05).5-FU+ASODN组HT-29细胞对5-FU的IC50与5-FU组比较显著下降(t′=37.71,P<0.05).结论 β1整合素表达下调可抑制结肠癌细胞增殖,增强结肠癌细胞对化疗药物敏感性.     

bcl-2反义寡核苷酸对白血病细胞药物敏感性的影响

目的 探讨bcl-2基因反义寡核苷酸(ASODN)对白血病细胞药物敏感性的影响。方法 MTT法测bcl-2 ASODN对U937细胞足叶乙甙(VPl6)敏感性，计算细胞存活率，绘制剂量-效应曲线，直线回归求半数致死量IC50；DNA电泳、AO／EB荧光染色测定细胞凋亡率。结果 VP16与bcl-2 ASODN联合作用比单独用VP16或VP16与SODN细胞存活率显著减少。bcl-2 ASODN作用后VP16对U937细胞的IC50由7．93μoml／L降至2．67μoml／L。与单独VP16作用组相比，bcl-2 ASODN与VP16联合作用后梯状DNA片段明显增加，细胞凋亡率增高。结论 bcl-2 ASODN能促进VP16诱导的白血病细胞凋亡，提高白血病细胞对VP16的敏感性。bcl-2反义寡核苷酸在克服化疗药物耐药性方面，具有良好的应用前景。     

替尼泊甙联合其他抗肿瘤药对BGC-823细胞体外增殖的影响

目的:比较替尼泊甙(VM-26)与紫杉醇(TAX)、顺铂(DDP)、5-氟尿嘧啶(5-FU)联合用药对胃癌细胞BGC-823体外生长的抑制作用。方法:MTT法测定VM-26单药及分别与TAX、DDP、5-FU联合用药对胃癌细胞BGC-823的细胞生长抑制率,计算联合用药指数。结果:单药作用下BGC-823细胞生长抑制率随药物剂量的增加而增大,TAX、VM-26、DDP、5-FU的IC50依次增大。VM-26分别和TAX、DDP、5-FU联合应用时,BGC-823细胞生长抑制率较相同剂量单药应用时增大,IC50降低;联合用药指数分别为1.22,0.43,1.04。结论:VM-26可抑制胃癌细胞的生长,VM-26与DDP联合有协同作用,与5-FU联合有相加作用,与TAX联合有拮抗作用。     

Survivin反义寡核苷酸对K562细胞耐药性的影响

目的 探讨Survivin反义寡核苷酸(antisense oligodeoxg nucleotide,ASODN)与传统化疗药物对白血病K562细胞耐药性的影响.方法 实验分为反义核苷酸组(ASODN)、无义核苷酸组(SODN)、脂质体组(Lip)、空白对照组,以脂质体转染Survivin ASODN,用RT-PCR检验SurvivinmRNA表达;用MTT法检测K562细胞对阿霉素(driacin,ADM)、柔红霉索(daunorubicin.DAM)及联合用ASODN耐药性;用流式细胞仪检测单独用ADM、DAM和联合用ASODN时K562细胞内ADM和DAM的浓度.结果 ASODN组Survivin mRNA表达较对照组降低(P<0.05);ADM和ASODN ADM对K562细胞的半数抑制细胞(IC50)分别为0.5457 mg/L和0.1933 mg/L,DAM和ASODN DAM对K562细胞的IC5.分别为0.5408 mg/L和0.2027 mg/L,联合用药组ICso低于单用药组(P<0.05);用ADM和ASODN ADM时K562细胞内药物的荧光强度分别为51.64、89.92,DAM和ASODN DAM时K562细胞内药物的荧光强度分别为63.71、88.47,联合用药组细胞内药物浓度高于单用药组(P<0.05).结论 Survivin反义寡核苷酸可下调K562细胞Survivin mRNA的表达;Survivin反义寡核苷酸与阿霉素和柔红霉索联合作用可提高K562细胞内药物浓度,降低细胞生存率,降低细胞耐药性.     

人肝癌顺铂耐药细胞株HepG2的建立

目的体外建立顺铂(DDP)诱导的人肝癌耐药细胞株(HepG2/DDP),研究其生物学特性。方法以采用药物大剂量冲击结合低剂量持续诱导方法诱导HepG2细胞株,建立人肝癌顺铂耐药细胞株HepG2/DDP;MTT法检测顺铂对HepG2和HepG2/DDP的半数抑制浓度(IC50)和耐药系数(RI),绘制细胞生长曲线及计算细胞倍增时间,并用流式细胞仪(FCM)检测细胞周期。结果历时5个月成功建成HepG2/DDP细胞株,MTT法检测DDP对HepG2的IC50为1.35μg/ml,HepG2/DDP的IC50为23.35μg/ml,RI达17生长曲线表明其增殖速度明显低于亲本HepG2人肝癌细胞,且倍增时间增加;细胞周期分析发现相对于亲本HepG2细胞,G0/G1期细胞减少、S期与G2/M期细胞增多。结论成功建立稳定耐药细胞株HepG2/DDP。