NDRG2对A549肺癌细胞增殖的抑制作用

目的:探讨NDRG2(N-myc downstream regulated gene 2)对于肺癌细胞系增殖的抑制作用。方法:将NDRG2基因转染进肺癌细胞系A549,采用G418筛选出稳定高表达NDRG2的亚克隆细胞系A549/NDRG2-flag并将仅转染载体的A549/pcDNA3.1(+)作为阴性对照。Western blot检测NDRG2在转染细胞中的表达水平。MTT、平板克隆形成试验检测转染前后细胞增殖作用的差异,流式细胞仪检测转染后细胞的周期分布状态。结果:成功构建高表达NDRG2的亚克隆细胞系A549/NDRG2-flag。证实了NDRG2的高表达能够抑制肺癌细胞系的增殖(P<0.01),使肺癌细胞的细胞周期阻滞在G0/G1期。结论:NDRG2高表达后能够有效抑制肺癌细胞系A549增殖并阻滞细胞周期滞留在G0/G1期。     

DLC-1过表达对非小细胞肺癌细胞增殖和侵袭的影响

目的探讨肝癌缺失基因1(deleted in liver cancer-1,DLC-1)对非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)细胞增殖和侵袭的影响及其作用机制。方法构建pcDNA3.1-DLC-1重组质粒并转染至人非小细胞肺癌A549和Calu-6细胞,采用Western blot检测DLC-1蛋白表达,qRT-PCR检测DLC-1和ROCK1 mRNA表达,平板克隆形成实验检测细胞增殖能力,流式细胞仪检测细胞周期,Transwell实验检测细胞侵袭能力。结果A549和Calu-6细胞转染pcDNA3.1-DLC-1重组质粒后,DLC-1蛋白和mRNA表达量均高于对照组(均P<0.05)。与对照组相比,DLC-1过表达后A549和Calu-6细胞中的ROCK1 mRNA表达量降低(均P<0.05),细胞增殖能力下降(均P<0.05);A549细胞周期被阻滞于G1期,侵袭能力下降(P<0.05)。结论DLC-1过表达可抑制NSCLC细胞增殖和侵袭,其作用机制可能与靶向调控ROCK1有关。     

番茄红素对肺癌A549细胞增殖和凋亡的影响及其机制研究

目的:研究番茄红素(lycopene,LP)对人非小细胞肺癌A549细胞增殖和凋亡的影响并探讨其机制.方法:体外培养并取对数生长期人非小细胞肺癌A549细胞,分别给予不同浓度的LP(2.5、5、10、20 μg/ml)和顺铂(40 μg/ml)进行干预,48 h后采用四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法测定吸光度值并计算细胞增殖抑制率,流式细胞术(FCM)检测细胞周期和细胞凋亡状况,逆转录PCR法(RT-PCR)检测细胞中凋亡相关基因(BaxmRNA、bcl-2 mRNA)表达,免疫印迹法(Western blot)检测凋亡相关蛋白(caspase-3)表达.结果:与空白对照组比较,LP能够剂量依赖性地提高人非小细胞肺癌A549细胞增殖抑制率,延长细胞周期中G0/G1期并缩短G2/M期,提高A549细胞凋亡率(AI),上调Bax mRNA表达、下调bcl-2 mRNA表达,提高Bax/bcl-2比值,上调caspase-3蛋白表达.结论:LP具有抑制人非小细胞肺癌A549细胞增殖并促进其凋亡的作用,其机制可能与LP能够阻滞细胞周期并调节凋亡相关基因蛋白表达有关.     

PARP抑制剂对非小细胞肺癌A549及H460细胞增殖及凋亡的影响

目的:探讨PARP抑制剂PJ34体外对非小细胞肺癌的增殖及凋亡影响。方法:采用MTT法检测PARP抑制剂PJ34对非小细胞肺癌A549、NCI-H460细胞的增殖抑制作用;Hoechst33342荧光染色法观察PJ34诱导的细胞凋亡;流式细胞术检测PJ34作用后细胞周期变化及凋亡情况。结果:在1.25-20μg/ml浓度范围内,PJ34抑制A549、NCI-H460细胞增殖,且具有浓度和时间依赖性。荧光显微镜下观察到PJ34处理后细胞出现凋亡的形态学变化如核固缩、体积缩小等。细胞周期分析PJ34能将细胞阻滞于细胞周期中G0/G1期。Annxin V-FITC/PI双染流式细胞分析发现PJ34作用后细胞凋亡比例明显增加(P<0.01)。结论:PARP抑制剂PJ34能够抑制非小细胞肺癌A549、NCI-H460细胞增殖,引起细胞周期阻滞、诱导细胞凋亡。     

miR-374a对肺腺癌细胞增殖与侵袭迁移的影响

目的探究分析miR-374a对非小细胞肺癌细胞增殖、侵袭、迁移等生物学行为能力的影响。方法采用RT-PCR检测miR-374a在正常肺上皮细胞CCD-8L及非小细胞肺癌细胞A549、H1975中的表达情况。采用miR-374a mimic和miR-374a inhibitor转染非小细胞肺癌细胞A549、H1975,采用RT-PCR检测各组细胞转染效率。分别采用CCK8细胞增殖实验、平板克隆实验、Transwell迁移实验和Transwell侵袭实验检测转染前后非小细胞肺癌细胞株增殖、迁移及侵袭能力变化情况。结果与正常肺上皮细胞CCD-8L比较,非小细胞肺癌细胞A549、H1975中miR-374a呈稳定高表达(P<0.05)。miR-374a mimic、miR-374a inhibitor可分别瞬时过表达、低表达非小细胞肺癌细胞A549、H1975中miR-374a表达情况(P<0.05)。过表达miR-374a可促进非小细胞肺癌细胞A549、H1975的增殖、迁移和侵袭(P<0.05);靶向抑制miR-374a表达可抑制非小细胞肺癌细胞A549、H1975的增殖、迁移和侵袭(P<0.05),组间差异显著,具有统计学意义。结论miR-374a在非小细胞肺癌细胞A549、H1975中呈稳定高表达,过表达miR-374a可明显促进非小细胞肺癌细胞A549、H1975的增殖、迁移和侵袭。     

高表达的miR-301b和miR-769-5p对非小细胞肺癌A549细胞生长的影响

目的:探讨高表达的miR-301b和miR-769-5p对非小细胞肺癌A549细胞生长的影响。方法:采用实对荧光定量聚合酶链反应检测A549细胞中miR-301b和miR-769-5p的表达;使用 qRT-PCR检测增殖相关基因miRNA表达的变化,并将实验组miR-301b和miR-769-5p表达量上调(与阴性对照组比较);采用MTT法检测并对比A549细胞增殖的改变;采用流式细胞仪检测并对比A549细胞周期以及凋亡的改变。结果:qRT-PCR结果表明,浸染了miR-301b和miR-769-5p过表达载体的A549细胞中miR-301b和miR-769-5p水平明显高于阴性对照组,差异有统计学意义（P＜0.01)。miR-301b过表达使G0/G1期的A549细胞增加,S和G2/M期的细胞减少;miR-769-5p过表达使G0/G1和G2/M期细胞增加,S期细胞减少。结论:miR-301b对靶基因FOXF2具有调控作用,miR-769-5p对靶基因ARID1A具有调控作用。miR-301b和miR-769-5p的过表达对肺癌A549细胞的细胞周期产生了明显影响,但没有影响细胞增殖和凋亡,miR-301b和miR-769-5p有可能成为肺癌分子靶向治疗调控效应靶点,可以进一步探索研究。     

转染BAX基因对A549细胞系的凋亡及化疗敏感度的影响

目的 探讨BAX转染是否增强人肺癌A549细胞对顺铂致凋亡的敏感度。方法 通过CCK8法检测顺铂对A549细胞体外增殖的影响。应用脂质体介导重组真核表达载体BAX-pcDNA3.1和空载体pcDNA3.1质粒转染至人肺癌A549细胞中,G418筛选阳性细胞。RT-PCR法检测BAX在A549细胞中的表达。将不同浓度的顺铂分别作用于A549、A549/BAX和A549/pcDNA3.1细胞72 h,CCK8法测定各组细胞的存活率,流式细胞术检测细胞周期及细胞凋亡。结果 顺铂能抑制A549细胞体外生长,BAX和顺铂使A549细胞发生G₁/S期细胞阻滞。RT-PCR显示转染BAX基因的A549细胞中BAX表达显著增加,转染BAX基因及加药组细胞凋亡率明显增加。 结论 稳定转染BAX基因明显增强A549细胞对顺铂致凋亡作用的敏感度。     

索拉非尼抑制人非小细胞肺癌细胞的增殖并诱导其凋亡

目的:观察索拉非尼对人非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)A549和H1299细胞增殖和凋亡的影响,并探讨其可能机制。方法:不同浓度索拉非尼作用A549和H1299细胞后,应用CCK-8(cellcountingkit-8)法检测细胞的增殖抑制率,FCM检测细胞周期和细胞凋亡,蛋白质印迹法检测细胞的磷酸化细胞外信号调节激酶(phosphorylated extracellular signal-regulated kinase,p-ERK)和磷酸化Ak(tphosphorylated Akt,p-Akt)蛋白的表达水平。结果:不同浓度索拉非尼能抑制A549和H1299细胞的增殖,且呈浓度依赖性(P<0.05);索拉非尼能诱导细胞凋亡,与对照组比较,G0/G1期细胞比率明显上升,S期细胞比率相应下降,细胞阻滞于G0/G1期(P<0.05);索拉非尼作用后,A549和H1299细胞中p-ERK蛋白的表达明显低于对照组(P<0.05)。结论:索拉非尼能抑制人NSCLCA549和H1299细胞的增殖并诱导其凋亡,其作用机制可能与阻断ERK信号通路有关。     

CTEN通过TGF-β1促进非小细胞肺癌细胞紫杉醇耐药的作用及机制研究

目的:探讨CTEN通过TGF-β1促进非小细胞肺癌（NSCLC）细胞紫杉醇耐药的作用和分子机制。方法:采用逐步增加剂量间歇作用的方法诱导非小细胞肺癌紫杉醇耐药细胞系并命名为A549/R,采用定量PCR和Western blotting检测耐药细胞和亲本细胞中CTEN和TGF-β1 mRNA及蛋白的表达,应用Lipofectamine 2000分别将CTEN高表达质粒pcmv-CTEN及其对照质粒pcmv转染至非小细胞肺癌A549细胞,分别为高表达组和对照组,分别用定量PCR和Western blotting检测CTEN和TGF-β1 mRNA及蛋白水平的变化;MTT法检测A549细胞对紫杉醇的敏感性及细胞增殖。应用Lipofectamine 2000分别将CTEN干扰质粒siCTEN及其对照siNC转染至紫杉醇耐药细胞系A549/R细胞,分别为干扰组和对照组,分别用定量PCR和Western blotting检测CTEN和TGF-β1 mRNA及蛋白水平的变化;MTT法检测A549/R细胞对紫杉醇的敏感性及细胞增殖。应用Lipofectamine 2000分别将TGF-β1干扰质粒siTGF-β1及其对照质粒siNC转染至非小细胞肺癌A549细胞,分别为干扰组和对照组,分别检测两组细胞中TGF-β1 mRNA及蛋白水平的表达情况,然后再分别用Lipofectamine 2000将CTEN高表达质粒pcmv-CTEN转染入两组细胞,MTT法检测A549细胞对紫杉醇的敏感性及细胞增殖。结果:成功构建在5 μg/mL紫杉醇中稳定生长的非小细胞肺癌耐药细胞系A549/R。定量PCR和Western blotting显示,CTEN和TGF-β1 mRNA及蛋白在紫杉醇耐药细胞系A549/R中的表达明显高于在其亲本细胞系A549中的表达;与对照组相比,高表达CTEN组的A549细胞中TGF-β1表达上升,细胞对紫杉醇的敏感性降低,细胞增殖增强;与对照组相比,低表达CTEN组的A549/R细胞中TGF-β1表达降低,细胞对紫杉醇的敏感性升高,细胞增殖减弱;在A549细胞中低表达TGF-β1后再过表达CTEN,其促进紫杉醇耐药及细胞增殖的作用也明显减弱。结论:CTEN具有促进非小细胞肺癌A549的紫杉醇耐药,促进细胞增殖的作用,其发生机制可能与上调TGF-β1的表达有关。     

靶向SATB1基因的短发夹RNA诱导肺癌A549细胞凋亡

目的:探讨靶向SAT B1(special AT-rich sequence-binding protein-1)基因的短发夹RNA (short hairpinRNA,shRNA)对肺癌A549细胞凋亡的影响及其可能的机制.方法:构建靶向SATB1基因的shRNA重组质粒SATB1-shRNA,采用脂质体法将其转染至A549细胞;分别采用RT-PCR和蛋白质印迹法检测A549细胞中SATB1、Bcl-2、Bax mRNA和SATB1、Bcl-2、Bax、caspase 3蛋白的表达水平FCM检测A549细胞的凋亡率.结果:成功构建了SATB1-shRNA重组质粒;SATB1-shRNA转染A549细胞后,SATB1、Bcl-2 mRNA及其蛋白表达下调,Bax mRNA和Bax、caspase 3蛋白表达上调(p＜0.05).SATB1-shRNA转染组细胞凋亡率[(14.18±1.59)％]较对照组[(1.84±0.57)％]明显增加(P＜ 0.01).结论:SATB1-shRNA可显著下调肺癌A549细胞中SATB1基因的表达水平并诱导细胞凋亡,其机制可能与下调Bcl-2基因表达所引起的级联效应有关.     

构建COX2基因慢病毒载体对肺腺癌A549细胞增殖与凋亡的影响#br#

目的 构建环氧化酶2（COX2）基因慢病毒表达载体并观察其对非小细胞肺癌A549细胞增殖与凋亡的影响。方法 针对COX2基因的不同片段设计3对shRNA的寡核苷酸片段并克隆至慢病毒载体GV248中,构建并筛选最佳抑制效率的靶向COX2基因的慢病毒载体COX2 shRNA。选取对数生长期A549细胞进行慢病毒转染,其中靶向COX2基因的shRNA载体转染A549细胞为shRNA组,以空载体质粒转染作为阴性对照组（NC）及不转染质粒的A549细胞为空白对照组（CON）,采用实时荧光定量PCR和Western blotting测定COX2基因和蛋白的表达。分别采用MTT法和流式细胞仪检测干扰COX2表达对A549细胞增殖、凋亡能力的影响。结果 成功构建靶向COX2基因的慢病毒载体;稳定转染A549细胞后,COX2基因表达下降,其中以COX2 shRNA1干扰效率最为显著;shRNA组中shRNA1转染的A549细胞COX2 mRNA水平为0.17±0.06,低于NC组的081±011和CON组的109±0.07,差异有统计学意义（P＜0.05）。shRNA组细胞增殖活性低于NC组和CON组,shRNA组转染5 d的吸光值为0.976±0.016,低于NC组的1.557±0.015和CON组的1880±0034,差异有统计学意义（P＜0.05）。shRNA组细胞凋亡率为（6.28±0.31）％,高于NC组的（3.08±0.05）％和CON组的（3.01±0.31）％,差异有统计学意义（P＜0.05）。结论 成功构建靶向COX2基因的慢病毒表达载体,干扰COX2表达可抑制人肺腺癌A549细胞的增殖并促进细胞凋亡。     

上调LINC00665对小细胞肺癌H446细胞增殖的影响及其作用机制

目的:探讨长链非编码RNA LINC00665在小细胞肺癌H446细胞中的表达，以及LINC00665高表达后对H446细胞增殖的影响。方法:以小细胞肺癌H446细胞系为实验组，非小细胞肺癌A549细胞系为对照组。应用实时荧光定量PCR方法检测H446和A549细胞中LINC00665的表达水平。通过病毒转染的方式，使H446和A549细胞中LINC00665高表达，分别检测H446和A549细胞中miR-186-5p的表达水平。病毒转染0、24、48和72小时后，采用MTT法检测H446细胞的增殖能力。结果:LINC00665的表达水平在H446细胞略低于A549细胞；给予相同数量的LINC00665高表达病毒分别转染后，miR-186-5p的表达水平在H446细胞略低于A549细胞，差异均没有统计学意义。与空白对照组和NC组相比，LINC00665高表达组H446细胞的增殖能力明显提高。结论:LINC00665可能通过调控miR-186-5p的表达，促进小细胞肺癌细胞的增殖。本研究有助于寻找小细胞肺癌潜在的治疗靶点，对提高小细胞肺癌患者的疗效具有积极意义。     

斯钙素1的表达对肺癌细胞A549细胞周期及凋亡的影响

背景与目的：斯钙素1(stanniocalcin l,STC1)在多种癌组织中表达上调,且与癌组织的恶性程度相关,但STC1在肺癌细胞中的分子作用机制尚不明确。本研究旨在探讨STC1的表达对肺癌细胞A549细胞周期及凋亡的影响。方法：构建STC1基因RNA干扰的肺癌细胞株A549-STC1-siRNA和对照细胞株A549-Vector,用实时荧光定量聚合酶链反应(real-time fluorescent quantitative polymerase chain reaction,RTFQ-PCR)和蛋白[质]印迹法(Western blot)检测A549-Vector及A549-STC1-siRNA细胞株的细胞周期蛋白基因CyclinA、CyclinB1、CyclinD1、CyclinE、CDK2、CDK4,凋亡抑制基因Bcl-2、Bcl-xl及凋亡诱导基因Caspase-3、Bax、Bak、Bid的表达水平,用流式细胞术检测STC1基因对A549细胞周期的影响,用原位末端标记(terminal deoxynucleotidyl transferase-mediated nick-end labeling,TUNEL)检测STC1基因对A549细胞凋亡的影响。结果：与A549-Vector细胞相比,A549-STC1-siRNA的细胞周期蛋白基因CyclinA、CyclinB1、CyclinD1、CyclinE、CDK2和CDK4在转录和蛋白表达水平上均显著减少(P<0.05),G0/G1期细胞比例明显增加,S期及G2/M期细胞比例降低(P<0.05),细胞周期受阻;A549-STC1-siRNA的凋亡抑制基因Bcl-2和Bcl-xl表达下调(P<0.05),而凋亡诱导基因Caspase-3、Bax、Bak及Bid显著上调(P<0.05);TUNEL实验表明,A549-STC1-siRNA细胞的凋亡率明显增加。结论：STC1基因的低表达可阻滞肺癌细胞A549的细胞周期,抑制细胞增殖,同时促进细胞凋亡。     

miR-145通过靶向抑制SMAD3的表达抑制非小细胞肺癌细胞侵袭能力

目的:探讨miR-145靶向调控SMAD3的表达对非小细胞肺癌细胞侵袭能力的影响。方法:采用qRT-PCR检测miR-145和SMAD3在30例非小细胞肺癌组织和癌旁组织中的表达水平并分析其相关性。利用靶基因预测网站预测miR-145的潜在靶基因SMAD3,利用双荧光素酶报告基因实验验证。利用细胞转染实验对非小细胞肺癌A549细胞进行了miR-145 mimics、miR-145 inhibitor、siRNA SMAD3及其相关对照的细胞转染,采用Transwell实验检测转染后A549细胞侵袭能力的变化。使用Western blot检测上调或下调miR-145表达对A549细胞中SMAD3蛋白表达的影响。结果:qRT-PCR结果显示,非小细胞肺癌组织中miR-145低表达,SMAD3高表达,且两者表达水平呈负相关。靶基因预测及验证实验结果显示miR-145可以与SMAD3 的 3'-UTR特异性结合,SMAD3是miR-145的靶基因。Western blot 结果显示,转染miR-145 mimics可以显著降低SMAD3蛋白的表达水平（P<0.001）,转染miR-145 inhibitor则显著提高SMAD3蛋白的表达水平（P<0.01）。Transwell体外侵袭实验结果显示,与对照组相比,转染miR-145 mimic显著降低了A549细胞的侵袭能力（P<0.001）,转染miR-145 inhibitor显著提高了A549细胞的侵袭能力（P<0.05）;与对照组相比,敲低SMAD3的表达A549细胞的侵袭能力减弱（P<0.001）;与单独敲低SMAD3相比,共同转染siRNA SMAD3和miR-145 mimics A549细胞的侵袭能力减弱（P<0.05）,共同转染siRNA SMAD3和miR-145 inhibitor A549细胞的侵袭能力无显著差异（P>0.05）。结论:miR-145在非小细胞肺癌组织中低表达,miR-145通过靶向抑制SMAD3的表达发挥对非小细胞肺癌细胞侵袭能力的抑制作用,为临床综合治疗提供了新的作用靶点。     

shRNA沉默环指蛋白146基因对非小细胞肺癌细胞迁移、侵袭及其相关蛋白表达的影响

目的：shRNA沉默环指蛋白146（RNF146）基因,观察非小细胞肺癌细胞中RNF146沉默对肺癌细胞迁移和侵袭及其相关蛋白表达的影响。方法：逆转录聚合酶链反应（ RT-PCR）和Western blot方法用于筛选RNF146高表达肺癌细胞系。构建shRNA-RNF146真核表达载体,瞬时转染A549和H1299肺癌细胞,West-ern blot检测转染效率。划痕实验评价肺癌细胞体外迁移能力;Buyden小室实验检测肺癌细胞体外侵袭能力。Western blot检测肺癌细胞中迁移和侵袭相关蛋白的表达。结果：RT-PCR和Western blot方法筛选RNF146高表达肺癌细胞系,显示 A549和 H1299细胞中 RNF146蛋白均高于其它细胞系。shRNA -RNF146转染A549和H1299细胞系后,划痕实验显示转染组细胞24小时迁移率明显低于空载体组和未转染组（ P＜0.01）。Buyden小室实验结果表明转染组比空载体组和未转染组穿膜细胞数目明显减少（ P＜0.05）。West-ern blot检测与细胞迁移和侵袭相关的调控蛋白（ MMP2、MMP7、MMP9、RhoA、RhoB、RhoC、Rock1、TIMP-1等）的表达情况,结果显示干扰 RNF146后 A549细胞中 MMP2和 MMP7表达明显减少,而 MMP9、RhoA、RhoB、RhoC、Rock1、TIMP-1等蛋白的表达变化不明显。结论：RNF146可能通过调控MMP2和MMP7的蛋白水平促进肺癌细胞迁移和侵袭。     

外泌体APE1对非小细胞肺癌A549细胞顺铂敏感度的影响CSCD

目的探讨外泌体脱嘌呤脱嘧啶核酸内切酶(APE1)对非小细胞肺癌(NSCLC)A549细胞顺铂(CDDP)敏感度的影响。方法Western blot检测顺铂处理和APE1基因重组慢病毒载体转染A549细胞后,细胞及其分泌的外泌体中APE1的变化情况。PKH26对外泌体染色后,激光共聚焦观察其进入细胞内的情况。将外泌体和带GST标签的APE1纯化蛋白(GST-APE1)与A549细胞共培养,观察细胞内GST-APE1的表达情况。分别将顺铂处理后的细胞外泌体(EXOCDDP)和慢病毒转染细胞产生的外泌体(EXOAPE1)与A549细胞共培养48 h,观察外泌体对A549细胞顺铂敏感度的影响。敲低A549细胞内APE1后,采用APE1的功能抑制剂处理与EXOAPE1共培养的A549细胞,观察处理后A549细胞对CDDP的敏感度以及γ-H2AX蛋白变化情况。结果高表达APE1的A549细胞产生高表达APE1的外泌体。APE1能够以外泌体包裹的形式被受体细胞所吸收。将EXOCDDP和EXOAPE1分别与A549细胞共培养后,A549细胞对顺铂的敏感度明显低于对照组。采用APE1碱基切除修复功能抑制剂,能够逆转EXOAPE1所致的细胞耐药性。结论A549细胞可通过外泌体传递APE1降低受体细胞对顺铂的敏感度。     

长链非编码 RNA MEG3在非小细胞肺癌中的表达与功能

目的：探讨长链非编码 RNA MEG3在非小细胞肺癌中的表达情况及其分子机制。方法：采用 qRT -PCR 方法检测肺癌组织中 MEG3的相对表达量,分析其与临床病理资料的相关性。将 MEG3转染到肺癌A549细胞后,应用 qRT - PCR 检测 A549细胞中 MEG3的表达;MTT 检测细胞转染后肿瘤细胞增殖的变化;并用 Western blot 检测转染后细胞中凋亡相关蛋白（BCL -2和 BCL - XL）表达。结果：肺癌组织中 MEG3的相对表达水平显著低于正常肺组织（P <0.05）。各肺癌细胞株中 MEG3的表达水平均低于肺上皮细胞株（P <0.05）。MEG3的表达水平与肿瘤大小、临床分期以及淋巴结转移之间有显著相关性（P <0.05）。MEG3转染A549细胞48h 和72h 后,A549细胞的增殖率明显低于空白对照组和阴性对照组（P <0.05）。其 BCL - XL 蛋白表达水平相较于空白对照组和阴性对照组表达明显下调（P <0.05）。结论：MEG3在 NSCLC 肿瘤组织中表达下调,可能部分通过下调 BCL - XL 的表达而抑制肺癌细胞的增殖。     

Polo-like激酶1反义RNA对肺癌细胞A549细胞周期的影响

背景与目的Polo-Like激酶1(Polo-likekinase 1,Plk1)是参与有丝分裂调控的重要分子,已在肺腺癌细胞株A549中检测到Plk1的高表达,并认为Plk1高表达与肺癌患者的放化疗耐受和预后相关。本研究利用反义RNA技术,探讨Plk1基因表达下调对肺癌细胞细胞周期的影响。方法培养肺腺癌细胞株A549,构建表达Plk1反义RNA的质粒pcDNA3.0-Plk1(pc3.0P),通过脂质体介导转入A549细胞,Westernblot、RT-PCR检测Plk1的表达,BrdU脉冲标记和流式细胞术分析细胞周期变化;免疫荧光染色检测α微管蛋白的表达。结果A549细胞转染pc3.0P后,Plk1mRNA的表达较对照组显著下降(P<0.05),转染24h后Plk1mRNA的表达下降46.75%,转染48h后下降61.84%;蛋白表达亦有下降;S期细胞百分数(BrdU标记指数)较对照组明显下降(P<0.05),转染后48h仅有25.59%;转染后72h出现G2/M期阻滞(P<0.05),并出现细胞凋亡;微管染色显示细胞周边缺乏微管的聚集,单极纺锤体形成。结论Plk1影响纺锤体微管的形成,使A549细胞增殖速度减慢,细胞周期阻滞并发生凋亡。     

MicroRNA-145增强非小细胞肺癌细胞对吉非替尼敏感性及其机制探讨

目的:探讨微小RNA-145（microRNA-145，miR-145）对非小细胞肺癌细胞系吉非替尼耐药的作用及其可能的潜在机制。方法:实时荧光定量PCR（Q-PCR）方法检测正常细胞及非小细胞肺癌细胞中miR-145的表达差异；不同时间5 μmol/L吉非替尼干预肺癌细胞SPC-A-1和A549后，Q-PCR检测miR-145表达变化；miR-145 mimics和miR-145 inhibitors分别转染SPC-A-1和A549肺癌细胞后，CCK8检测细胞活力变化;双荧光素酶报告系统检测miR-145与ADAM19的靶向结合；miR-145 mimics转染SPC-A-1和A549肺癌细胞，Western blot检测ADAM19蛋白表达；Western blot检测5 μmol/L吉非替尼干预后，SPC-A-1和A549肺癌细胞中ADAM19蛋白的表达；miR-145 mimics转染SPC-A-1和A549肺癌细胞，再用5 μmol/L吉非替尼干预，Western blot检测ADAM19蛋白的表达；采用siRNA抑制ADAM19表达，再用5 μmol/L吉非替尼干预，CCK8检测细胞活力；采用BALB/C雌性裸鼠皮下接种肿瘤细胞的方法，观察上述效应。结果:Q-PCR结果显示，与正常肺上皮细胞系BEAS-2B相比较，肺癌细胞SPC-A-1和A549中miR-145表达明显降低；5 μmol/L吉非替尼干预SPC-A-1和A549细胞后，miR-145表达显著上调；转染miR-145 mimics后,CCK8结果显示两种细胞细胞活力下降；双荧光素酶报告系统结果显示，miR-145靶向结合ADAM19基因的3'-UTR区；Western blot结果显示，5 μmol/L吉非替尼诱导SPC-A-1和 A549细胞后，两种细胞中ADAM19蛋白表达均降低；miR-145 mimics转染SPC-A-1和A549细胞，之后给予5 μmol/L吉非替尼治疗，ADAM19蛋白表达下调；siRNA抑制SPC-A-1和A549细胞中ADAM19表达，再给予5 μmol/L吉非替尼治疗，CCK8结果显示，两种细胞的细胞活力显著降低；过表达BALB/C雌性裸鼠的miR-145后，显著抑制皮下肿瘤生长，并且增强吉非替尼的抗肿瘤效果。结论:miR-145显著增强肺癌细胞SPC-A-1和A549对吉非替尼的敏感性，其机制可能是通过靶向结合AMDM19基因的3'-UTR区域，从而抑制其表达。miR-145有可能成为治疗非小细胞肺癌吉非替尼耐药的有效靶点。