人类不脱钙骨组织的免疫组化与原位杂交

目的 探讨在人类不脱钙骨组织切片上行免疫组化和原位杂交技术的可行性。方法 采用Erben报道的改进的甲基丙稀酸甲酯低温塑料包埋方法包埋人类髂骨活检组织。制备不脱钙骨组织切片。切片行Goldner’s三色法及甲苯胺蓝染色观察骨组织的形态结构；采用免疫组化S-P法和原位杂交技术检测骨组织中碱性成纤维细胞生长因子（FGF-2）蛋白和mRNA的表达。结果 组织形态学上，两种染色法均示骨组织中成骨细胞、破骨细胞及骨细胞清晰可辨，钙化的骨基质与类骨质分界清楚。免疫组化和原位杂交示FGF-2蛋白和mRNA表达于骨髓腔中一些单个核细胞及少许成骨细胞的胞浆中。此外。骨髓基质亦可见FGF-2蛋白和mRNA的阳性表达。结论 低温塑料包埋方法制备的人类不脱钙骨组织切片可同时进行免疫组化和原位杂交的检测观察。     

低钙日粮诱导蛋鸡骨质疏松模型的研究

目的建立蛋鸡骨质疏松模型,研究蛋鸡骨质疏松,为人类骨质疏松的研究提供参考。方法用低钙日粮(钙含量1.5%),连续60d诱发笼养蛋鸡骨质疏松症,并设立对照组(钙含量3.7%),分光光度法检测血清中钙、磷、碱性磷酸酶和抗酒石酸酸性磷酸酶的含量;称量蛋鸡股骨和胫骨的重量;游标卡尺测量骨骼的长度、宽度;万能材料试验机进行三点弯曲实验检测骨骼的强度;并制作观察骨组织切片进行HE染色,分析骨切片上成骨细胞、破骨细胞和骨细胞的变化。结果研究发现与对照组相比,低钙日粮导致了血清中碱性磷酸酶含量显著性增加,血清钙含量显著性下降,蛋鸡股骨和胫骨重量显著性变轻,宽度显著性变窄,骨强度显著性降低。病理切片结果显示,与对照组相比,低钙组蛋鸡股骨远端骨切片中成骨细胞和破骨细胞含量均增加,但骨细胞含量减少。结论连续60d给蛋鸡饲喂低钙日粮可成功建立蛋鸡骨质疏松模型,且该模型为高转化型骨质疏松。     

硬组织切片技术在组织工程骨研究中的应用

目的改进硬组织切片技术以适应骨组织工程研究.方法组织工程骨修复兔桡骨的术后标本和四环素标记大鼠股骨标本的观察.通过对硬组织切片中组织包埋、切片的方法、步骤及染色法,确定操作过程中的关键技术和需注意的问题,重点解决硬组织切片易于脱片的缺点.结果经改进后的硬组织切片技术能保持其原有组织结构,可进行HE、Masson法以及免疫组织化学染色,染色后组织结构完整,细胞形态清晰,切片质量好.荧光显微镜观察骨组织结构完整.克服了普通硬组织切片技术容易发生脱片的缺点.结论改进的硬组织切片技术适合骨组织工程研究.     

深低温冷藏骨组织存活时限的研究

目的研究储藏在液氮中的骨组织保持存活状态的时限，为吻合血管同种异体骨移植中供体的供给时机提供理论依据。方法对冷藏不同时段的骨组织进行光镜、电镜及琥珀酸脱氢酶(SDH)染色检查。结果冷藏4个月后的骨组织结构形态学正常，骨细胞SDH染色阳性．而冷藏6个月后的骨组织有线粒体肿胀的超微结构改变，骨细胞SDH染色阴性。结论存储于液氮中的骨组织维持存活状态的最佳时限为4个月。     

不同方法制备生物衍生骨体内植入的组织学观察

目的探讨不同方法制备的生物衍生骨植人大耳白兔体内后的组织学变化，为组织工程研究提供异种动物源支架材料。方法取新鲜市售猪股骨两端，除去软组织及骨膜后切割为0．5cm×0．5cm×0．5cm大小骨块。根据不同处理方法分为5组：A组仅用生理盐水冲洗，B组经脱脂处理，C组经脱脂脱钙处理，D组经脱脂脱钙脱细胞处理，E组经脱脂脱细胞处理。取各组骨块行微量元素检测；经25kGy辐照灭菌后植入26只新西兰大耳白兔股部肌袋内，左侧植入A、B组骨块，右侧植入C、D及E组骨块，各肌袋植入1块。术后2、6及12周取材，作HE及Masson染色，行炎性细胞、破骨细胞计数，观察胶原纤维生成及成骨情况。结果各组骨块微量元素残留量符合标准。所有动物术后生存良好。各组实验兔植入部位均未见组织坏死、积液及化脓感染。炎性细胞计数以A组为最多，与其他各组比较差异有统计学意义（P〈O．05）；破骨细胞计数各组间差异无统计学意义（P〉0．05）。HE及Masson染色观察，胶原纤维及新骨形成C、D组为最好，E组次之，A、B组最差。结论脱脂脱钙脱细胞处理的猪股骨有良好的降解性、成骨性及较低的炎性反应，有可能成为组织工程骨的支架材料。     

同种异体骨与血管组织深低温冷藏的时限研究

目的 研究储藏在液氮中的带血管蒂骨组织保持存活状态的时限，为下一步行带血管蒂的骨移植提供理论依据。方法 对冷藏不同时段的带血管蒂骨组织进行组织学、电镜及琥珀酸脱氢酶(SDH)染色。结果 酚冷藏4个月后的骨组织结构形态学正常，骨细胞SDH染色阳性，而冷藏6个月后的骨组织有线粒体肿胀的超微结构改变，骨细胞SDH染色阴性；冷藏6个月后的血管结构形态学正常，内膜SDH染色阳性。结论存储于液氮中的带血管蒂骨组织维持存活状态的最佳时限为4个月。     

改良的硬组织包埋技术对乳牙破骨细胞的观察

硬组织切片技术主要应用于骨组织、羟基磷灰石等坚硬标本的切片制作。牙齿比以上标本更坚硬。传统的牙齿标本是将一颗牙齿磨成一张薄片来观察其结构 ,且不能进行一般组织样本的染色观察。为了解儿童乳牙髓腔内破骨细胞的数量 ,进而为收集破骨细胞进行培养提供依据 ,我们采用硬组织两次包埋技术 ,使切片可进行组织学、免疫组织化学染色 ,获得较理想的破骨细胞观察结果 ,报告如下。1　材料与方法　　莱卡 16 0 0切割机 ,莱卡 2 5 0 0 E切片机 ,口腔慢速涡轮机 ;乙二醇乙醚乙酸酯 ,甲基丙烯酸甲酯 ,过氧化苯甲酰 ,离体乳牙。第 1渗透液 :甲基…     

大鼠膝关节不稳定骨性关节炎软骨与软骨下骨组织微观结构的变化

[目的]观察大鼠膝关节经前交叉韧带切断术(anterior cruciate ligament transection,ACLT)造成关节不稳定情况下,其关节软骨与软骨下骨骨组织微结构的变化.[方法] 20只3个月龄雄性SD大鼠按体重随机分为对照组与实验组,每组10只动物.实验组切断右膝关节前交叉韧带,对照组只暴露前交叉韧带而不切断,术后12周处死所有动物并取材.取右肢股骨远端膝关节于70％酒精固定后脱钙6周,石蜡包埋切片,经HE染色及Masson染色,普通光学显微镜观察摄片,采用图像分析系统做定量分析;取右肢胫骨膝关节于70％酒精固定后不脱钙做硬组织包埋切片,行Van Kossa染色后,定量分析软骨下骨组织微观结构变化.[结果]术后12周后大体观察发现,实验组关节面较对照组明显失去光泽,呈颗粒感,部分软骨面破溃,关节面周围可见骨赘形成;实验组关节软骨HE及Masson染色着色不均,软骨细胞排列紊乱,且实验组Mankin评分结果显著高于对照组,差异具有统计学意义(P＜0.05);实验组软骨下骨组织微结构较对照组改变明显,差异具有统计学意义(P＜0.05).[结论]ACLT术导致膝关节不稳定,在此情况下对大鼠膝关节软骨形态及软骨下骨组织微结构造成显著破坏,若不能及时采取干预措施,将加速膝关节功能退变进程.     

骨相关细胞中钙敏感受体研究进展

钙平衡对机体的正常生理功能至关重要.骨组织是人体最重要的钙库,维持骨组织的动态平衡有利于机体的钙平衡.钙敏感受体在多种细胞中都有表达.研究发现在成骨细胞中,钙敏感受体促进细胞增殖、分化以及矿化作用;而在破骨细胞中,钙敏感受体介导高浓度钙离子引起细胞分化和凋亡.此外,钙敏感受体还能协助造血干细胞的准确定位.而肿瘤细胞中钙敏感受体的高度表达,提示该肿瘤细胞具有骨转移的倾向.笔者综述了钙敏感受体在成骨细胞、破骨细胞、造血干细胞、肿瘤骨转移中的研究进展.     

不同方法显像骨组织微血管的对比研究

[目的]比较血管墨汁灌注-Van Gieson（VG）复合染色法与其他组织染色法在组织切片血管显像中的优缺点，为骨组织血管化检测寻找一种简单直观的方法。[方法]青山羊一侧股动脉内灌注10％中华墨汁、10％甲醛和20％甘露醇混合液（体积比7：2：1）至股静脉流出液呈黑色。取下胫骨，10％甲醛溶液固定，EDTA脱钙，香柏油浸泡，制成50-100μm厚切片，用复合墨汁灌注-VG染色法观察山羊胫骨微血管。[结果]复合墨汁灌注-VG染色法既可清楚显示微血管的数量、大小、分支和吻合，还能清楚显示微血管与周围组织的关系。较单纯墨汁灌注厚切片、HE、Masson和Weigert间苯二酚-碱性品红染色VG复染法显示微血管清楚。[结论]复合墨汁灌注-VG染色法对微血管显像较清楚，且还可清楚显示微血管与周围组织的关系，可在骨组织工程血管化检测中试用。     

护骨素及配体在卵巢切除大鼠骨组织的蛋白表达和细胞定位

目的对卵巢切除和假切大鼠骨组织中护骨素（OPG）和配体（RANKL）的表达进行比较，观察不同分化阶段成骨细胞的OPG和RANKL表达变化，深入地探讨成骨细胞对破骨细胞发生的调控作用。方法9月龄雌性大鼠分为卵巢切除组和假切组，相同条件喂养3月后处死，取材制作骨病理切片，用免疫组织化学方法测定大鼠股骨OPG和RANKL的蛋白表达，用图像分析软件对蛋白表达情况半定量分析，对各组数据和组织形态进行分析比较。结果OPG和RANKL蛋白在骨组织表达相对稳定。RANKL主要表达在增殖活跃的成骨细胞和幼稚的骨细胞，OPG主要表达在成熟骨细胞和静息骨衬里细胞。与假切组相比，卵巢切除组骨组织内RANKL表达升高（P〈0．01），OPG表达降低（P〈0．05）。结论卵巢切除后骨组织中RANKL/OPG升高，破骨细胞活性增强，骨转换加快。不同发育阶段的成骨细胞对破骨细胞有不同的调节作用，幼稚阶段表现出对破骨细胞的诱导作用，而成熟阶段则表现为抑制作用。     

原发性骨质疏松症患者中轴骨IL—6，bFGF的免疫组化

目的：了解白细胞介素6(IL-6),碱性成纤维细胞生长因子（bFGF)在原发笥骨质疏松症患者中轴骨中的细胞定位,表达强度及其与骨密度MD）的关系。方法：采用原发性骨质疏松症患者和正常人腰椎椎板近关节突部松质骨组织切片,以IL－6,bFGF单克隆抗抗体进行免疫组化研究。结果：骨质疏松组骨组织中成骨细胞,骨髓基质细胞bFGF染色浅淡,IL－6染色阳性,较对照组染色深,且IL－6阳性细胞数随BMD减低而增多,对照组上述细胞IL－6染色浅谈,bFGF染色阳性,bFGF阳性细胞数随BMD增高而增多,两组骨细胞bFGF,IL-6染色均阴性,结论：IL－6,bFGF作为调节骨代谢的肽类生长因子在骨质疏松的发病机制中起一定作用。     

神经切除对骨形态发生蛋白异位诱导成骨的影响

[目的]通过rhBMP-2异位诱导成骨模型，观察坐骨神经和股神经切除对骨再生的影响，探讨神经支配在骨再生中的作用以及失神经所致骨折骨痂增大的部分机制。[方法]1CR小鼠36只随机分为实验组和对照组。行右侧股后部肌袋模型，实验组行右侧坐骨神经和股神经切除后植入含0．125mgrhBMP-2胶原复合物。对照组仅进行神经暴露后植入等量rhBMP-2胶原复合物。于术后7、14、21d取材，行湿重测量、放射学、生化检测、组织学观察和形态计量分析以及破骨细胞TRAP染色。[结果]湿重检测显示实验组组织块湿重明显大于对照组。X线检测实验组成骨范围较对照组明显增大，成骨组织密度不及对照组。生化检测结果显示术后第7d实验组AKP含量明显高于对照组，术后第14d，实验组钙含量高于对照组，术后21d，实验组钙、磷含量均低于对照组。组织学观察显示实验组成骨范围大于对照组，成骨后期破骨细胞活跃，骨小梁稀疏。组织形态计量分析显示实验组术后21d破骨细胞相对数增多，骨小梁体积密度、平均宽度均低于对照组。TRAP染色显示实验组破骨细胞明显较对照组活跃。[结论]在外源性BMP-2异位诱导过程中，神经切除引起骨诱导早期成骨活动的增加，在成骨中后期失神经导致破骨细胞活动增强引起骨小梁的稀疏和骨密度的降低，提示神经支配可能通过直接或间接的方式影响骨再生活动。     

骨细胞的体外分离培养及鉴定

目的 建立较稳定的实验室骨细胞分离培养方法.方法 采用序列酶消化法,从3 d龄Sprague-Dawley乳鼠颅骨中分离骨细胞,通过形态学、改良钙钴法碱性磷酸酶(ALP)染色和免疫细胞化学法骨钙素(BGP)染色来鉴定骨细胞.结果 细胞形态呈星状、有树状突起,ALP染色阴性,BGP染色阳性,说明分离出的细胞为骨细胞.结论 本实验结果为在体外深入研究骨细胞的功能提供实验手段.     

激素性骨坏死关节软骨下皮质骨病理改变的实验研究

[目的]观察激素性骨坏死关节塌陷早期软骨下皮质骨的病理形态改变,分析关节塌陷的原因.[方法]将新西兰白兔分为两组,A组复制激素增强的Shwanzman反应骨坏死模型,B组为空白对照组.停药后10周获取肱骨头标本,分别制备脱钙和不脱钙切片,脱钙标本HE染色,观察软骨下皮质骨改变,哈佛管计数.不脱钙标本进行荧光观察,比较软骨下皮质骨形态、结构;扫描电镜观察,比较软骨下微循环改变、软骨下方骨组织形态、结构改变.[结果]A组标本出现坏死改变.软骨下方骨组织内哈佛管减少消失,即软骨下皮质骨及由其构成的球拱、桥拱结构破坏,支撑软骨层的骨组织呈松质骨改变.有部分肱骨头出现关节塌陷早期改变.软骨下微血管内广泛存在红细胞淤滞、填塞现象.B组软骨下方骨组织具有较丰富的哈佛管,为皮质骨.完整且连续的皮质骨支撑关节软骨,同时构成球拱、桥拱结构.软骨下微血管内无红细胞淤滞、填塞现象.[结论]关节软骨下皮质骨缺失是关节发生塌陷的原因.软骨下微循环障碍是其重要原因.     

脱蛋白骨复合纤维蛋白胶构建骨组织工程支架的体外实验研究

[目的]探讨复合纤维蛋白胶的脱蛋白骨与单纯脱蛋白骨作为骨髓基质干细胞（MSCs）支架材料的差异，为骨组织工程提供合适的复合支架材料。[方法]实验组使用复合纤维蛋白胶的脱蛋白骨与MSCs复合培养，对照组用单纯脱蛋白骨与MSCs复合培养，取不同时间点进行光学显微镜观察、扫描电镜观察、细胞DNA含量检测及钙结节染色比较两组细胞的情况。[结果]实验组骨髓基质干细胞在黏附能力与分泌情况明显优于对照组，细胞DNA检测表明实验组细胞增殖明显优于对照组（P〈0．05）。[结论]复合纤维蛋白胶的脱蛋白骨比单纯脱蛋白骨更适合细胞生长，可作为MSCs的载体应用于骨组织工程的构建。     

降钙素对正常成年雄性大鼠骨重建过程的影响

目的 在体研究降钙素对成年雄性大鼠松骨重建过程的影响,并分析其影响机制。方法 １２只大鼠平均分成对照组和降钙素组,后皮内注射鳗鱼降钙素１Ｕ／１００ｇ／日,连续２日。７日后取第４、５腰椎,行不脱钙骨组织切片,骨组织形态计量学分析,方差分析比较两组结果。结果 骨吸收陷窝表面、活性吸收表面、破骨细胞平均细胞核数,降钙素组明显小于对照组。类骨质表面、类骨质相对体积、类骨质厚度,降钙素组明显小于对照组,成     

特发性脊柱侧凸患者骨组织中唾液酸蛋白的表达

目的:检测青少年特发性脊柱侧凸(AIS)患者脊柱不同部位和髂骨松质骨骨唾液酸蛋白(bone sialo-protein,BSP)的表达量,并与先天性脊柱侧凸(CS)患者比较,探讨非胶原结构蛋白与AIS患者骨代谢异常的关系。方法:从12例平均年龄为13.8岁的AIS患者取7块髂骨(7例患者)、12对关节突和17个棘突,从10例平均年龄为11.2岁的CS患者中收集10块髂骨。骨组织块固定脱钙处理,石蜡包埋切片,片厚5!m,免疫组织化学染色,观察骨基质中BSP阳性面积比、骨基质总光密度/骨面积和阳性细胞比率。结果:BSP在骨细胞和骨基质中均有表达,AIS组和CS组患者髂骨骨基质总体光密度/骨面积(total OD/bone area)为0.0678±0.0003和0.0803±0.0013,差异有显著性(P<0.05),AIS患者顶椎区凹、凸侧关节突的骨基质BSP阳性面积比和骨基质BSP面积×平均光密度/骨面积分别为0.7363±0.0632、0.5552±0.0259和0.0761±0.0079、0.0632±0.0058,差异有显著性(P<0.05)。AIS患者上胸椎棘突与胸腰段棘突骨基质BSP染色阳性率分别为63.2%和65.5%,阳性细胞表达率分别为58.7%和61.2%,差异无显著性(P>0.05)。结论:BSP对AIS患者骨异常代谢及骨量降低的影响不大,非胶原结构蛋白可能不是AIS患者骨代谢研究的首要考虑对象;脊柱侧凸异常应力影响脊椎骨骼塑型和代谢,脊柱侧凸畸形对脊椎各结构的影响是多方面的。     

异位成骨材料修复新西兰兔桡骨干骨缺损

目的探索异位成骨材料修复新西兰兔桡骨干骨缺损的可行性。方法13只新西兰白兔(4周龄,体质量1.5 kg)作为实验动物。取新西兰白兔骨髓间充质干细胞进行成骨诱导,2周后予碱性磷酸酶染色确认其成骨活性。取诱导后的间充质干细胞悬液与β-磷酸三钙生物陶瓷共培养,3天后植入4只新西兰白兔股骨骨膜旁。于植入后第8周收取异位成骨材料,行骨组织切片检查。取8只新西兰兔,制作桡骨干骨缺损动物模型,并将其均分为实验组(4只)和对照组(4只),分别植入异位成骨材料和β-磷酸三钙生物陶瓷修复骨缺损,于术后4、8、12周行手术侧X线摄片,术后12周取修复处骨,行组织切片检查。结果异位成骨植入第8周见植入物成骨完整,获取的成骨材料组织切片显示与股骨干骨细胞结构相似。骨缺损修复动物实验术后X线摄片显示,实验组修复效果显著优于对照组;术后12周修复处骨组织切片显示,实验组新生骨与周边骨组织边界消失,融合度好,骨小梁密度高,新生血管较多。结论异位成骨材料可用于兔桡骨干骨缺损修复。     

镓盐对骨质疏松大鼠骨组织板层结构影响的实验研究

[目的]探讨镓盐对大鼠骨质疏松骨组织板层结构的影响.[方法]应用脱钙骨切片观察光镜下骨形态;制作扫描电镜样本,在电镜下观察骨质疏松骨组织板层结构情况.[结果]扫描电镜显示对照组骨排列紧密,呈非常规则的板层状;骨质疏松组骨排列紊乱,结构松散,板层结构有破坏;硝酸镓治疗组骨结构比骨质疏松组规则,排列较整齐、密度较大.[结论]镓盐对骨质疏松引起的骨组织板层结构的损伤有改善作用.