Survivin反义寡核苷酸对肝癌细胞增殖和凋亡的影响

目的：观察Survivin反义寡核苷酸对SMMC-7721细胞增殖、凋亡的影响.方法：设计合成特异性Survivin 反义寡核苷酸,转染肝癌SMMC-7721细胞,MTT法测定Survivin ASODN对细胞增殖抑制情况的影响,FCM法检测对细胞周期、凋亡及Survivin蛋白表达的影响.结果：Survivin ASODN可抑制SMMC-7721细胞的生长增殖,并呈浓度和时间依赖性.ASODN转染组可诱导SMMC-7721细胞凋亡（P＜0.01）,细胞周期阻滞于G2/M期（P＜0.05）.ASODN转染组Survivin蛋白表达水平显著降低（P＜0.01）.结论：Survivin ASODN能下调SMMC-7721细胞Survivin表达,并可抑制其增殖并诱导凋亡.     

罗格列酮对肝癌细胞SMMC-7721增殖、凋亡及PTEN、存活蛋白表达的作用

目的:探讨过氧化物酶体增殖激活物受体γ(peroxisome proliferators-activated receptor γ,PPARγ)配体罗格列酮对人肝癌细胞SMMC-7721增殖、凋亡及肿瘤抑制基因PTEN和存活蛋白(survivin)表达的影响.方法:经不同浓度罗格列酮(0、0.1、1、10和100 μmol/L)处理SMMC-7721细胞24、48和72 h后,用MTT法测定细胞的增殖情况,FCM法检测细胞周期变化和凋亡情况,Westem印迹法检测细胞中PTEN和survivin蛋白表达的变化.结果:罗格列酮可以显著抑制SMMC-7721细胞增殖(P＜0.01);可使SMMC-7721细胞G0/G1期比例明显升高(P＜0.05),G2/M期比值降低(P＜0.05),并能显著诱导细胞凋亡(P＜0.05),呈时间依赖性和剂量依赖性.罗格列酮能上调细胞PTEN的表达,并呈时间和剂量依赖性,而对survivin的表达则无明显改变(P＞0.05).结论:PPARγ/被罗格列酮活化后可抑制SMMC-7721细胞增殖、诱导细胞凋亡,该作用可能是与上调细胞PTEN的表达有关.     

Skp2在三氧化二砷诱导的肝癌SMMC-7721细胞周期阻滞中的表达变化和意义

目的：探讨三氧化二砷（As2O3）对肝癌SMMC-7721细胞周期的影响,及其与细胞周期素依赖性激酶抑制因子（CDKI）p27^kip1和p27^kip1相关蛋白S期激酶相关蛋白2（S-phase kinase-associated protein2,Skp2）的关系,为临床应用提供依据。方法：体外培养人肝癌细胞株SMMC-7721,用2μmol/LAs2O3处理72h,流式细胞仪检测细胞周期变化,采用核浆分离、Western Blot技术及细胞免疫荧光技术检测该过程中p27^kip1、Skp2在SMMC-7721细胞中的表达变化及亚细胞定位情况。结果：与对照组比较,As2O3使SMMC-7721细胞周期阻滞在G2/M期。经As2O3作用的人肝癌细胞p27^kip1蛋白水平增加,Skp2蛋白水平降低,同时p27^kip1发生从胞浆到胞核的易位。结论：As2O3可下调Skp2的表达,从而促进SMMC-7721细胞中p27^kip1的积聚,干扰细胞周期的进程,抑制SMMC-7721细胞的增殖。     

灵芝L08对CD34～＋肝癌SMMC-7721细胞增殖及CD34表达的影响

目的探讨灵芝L08对CD34＋肝癌SMMC-7721细胞增殖及其CD34蛋白表达的影响。方法培养肝癌SMMC-7721细胞,并用灵芝L08处理,MTT法测定细胞增殖情况,流式细胞术测定肝癌SMMC-7721细胞中CD34＋肝癌SMMC-7721细胞数量,Western blot法测定CD34蛋白的水平。结果灵芝L08处理肝癌SMMC-7721细胞后,细胞增殖率及CD34＋肝癌SMMC-7721细胞数量都有所降低,CD34＋肝癌SMMC-7721细胞的CD34蛋白表达水平也降低（P〈0.05）。结论灵芝L08能抑制CD34＋肝癌细胞的增殖及CD34蛋白的表达。     

Hsa-miR-4282对肝癌细胞系SMMC-7721生长的影响

目的  探讨Hsa-miR-4282在肝癌细胞系SMMC-7721中的表达及其对细胞生长的影响。方法 采用实时荧光定量PCR法检测Hsa-miR-4282在人正常肝上皮细胞系HL-7702和人肝癌细胞系MHCC97-H、SMMC-7721，以及 20例肝癌组织及其相应癌旁组织中的表达。采用瞬时转染法将Hsa-miR-4282 mimics（上调组）和Hsa-miR-4282 inhibitor（下调组）分别转染肝癌SMMC-7721细胞，上调组和下调组分别设置相应阴性对照组。转染后采用MTT法检测细胞增殖能力，平板克隆形成实验检测细胞克隆形成能力，流式细胞仪检测细胞凋亡能力。结果 Hsa-miR-4282在肝癌组织、肝癌细胞MHCC97-H及肝癌细胞SMMC-7721中的表达均低于癌旁组织及正常肝细胞HL-7702（P＜0.05）。MTT实验结果显示，Hsa-miR-4282上调后肝癌SMMC-7721细胞的OD值低于其阴性对照组，而下调后OD值高于其阴性对照组 （P＜0.05）。平板克隆形成实验显示，下调组的细胞克隆数高于其阴性对照组［（240±7） 个 vs （191±10） 个，P=0.005）］，而上调组细胞克隆数低于基阴性对照组［（146±10） 个 vs （193±12） 个，P=0.013）］。流式细胞仪检测结果显示，Hsa-miR-4282上调组细胞凋亡率较其阴性对照组升高［（23.89±1.89）% vs（16.6±1.14）%，P=0.009）］，下调组细胞凋亡率较期阴性对照组降低［（14.98±0.46）% vs （17.79±0.73）%，P=0.010］。结论 Hsa-miR-4282上调可抑制肝癌SMMC-7721细胞增殖，促进细胞凋亡，可能与肝癌的发病机制有关。     

蛇毒精氨酸酯酶Agkihpin抑制人肝癌SMMC-7721细胞株MRP1表达

  目的   探讨蛇毒精氨酸酯酶Agkihpin对人肝癌细胞株SMMC-7721中多药耐药相关蛋白1(multidrug resistance associated protein 1, MRP1)表达的影响, 并阐明Agkihpin抑制人肝癌SMMC-7721细胞活力的机制。   方法   目的: 方法: 采用不同浓度的Agkihpin处理SMMC-7721细胞72 h后, 应用免疫细胞化学、Western blot和RT-PCR等方法检测MRP1在SMMC-7721细胞中的转录和表达。   结果   不同浓度Agkihpin作用SMMC-7721细胞72 h后MRP1表达均降低, 显示Agkihpin可显著下调SMMC-7721细胞中MRP1转录和表达(P < 0.05), 并呈现出一定的浓度依赖效应。   结论   Agkibpin能抑制人低分化肝癌细胞株SMMC-7721中MRP1的表达, 并呈一定程度的浓度依赖效应, 提示Agkihpin在一定程度上可用于提高肝癌细胞对化疗药物的敏感性。      

白藜芦醇通过下调PRMT5表达抑制肝胆管癌SMMC-7721细胞的增殖、侵袭和细胞周期

目的：探究白藜芦醇（Res）通过调控PRMT5表达对肝胆管癌SMMC-7721细胞增殖、侵袭、细胞周期的影响及其机制。方法：常规培养正常肝细胞LO2和SMMC-7721细胞,用0、20、40、80μmol/L的Res进行处理,用qPCR法、MTT法、Transwell实验、流式细胞术和WB法分别检测Res处理后PRMT5 mRNA在LO2和SMMC-7721细胞中的表达,Res对SMMC-7721细胞增殖能力、侵袭能力、细胞周期和凋亡,以及PRMT5、cyclin D1和cyclin E1蛋白表达的影响。结果：PRMT5在SMMC-7721细胞中呈高表达（P<0.01）;20、40、80μmol/L Res均能明显抑制PRMT5 mRNA和蛋白在SMMC-7721细胞中的表达（均P<0.01）,抑制SMMC-7721细胞的增殖能力（P<0.01）和侵袭能力（P<0.05）,阻滞SMMC-7721细胞周期于G0/G1期并促进其凋亡（P<0.01）,明显抑制SMMC-7721细胞中周期蛋白cyclin D1、cyclin E1蛋白的表达（P<0.01）。...     

穿心莲内酯通过抑制PI3K/AKT通路对人肝癌HEPG2细胞凋亡的影响

摘 要：［目的］ 探讨穿心莲内酯通过抑制磷脂酰肌醇3-激酶（PI3K）/蛋白激酶 B（AKT）通路对人肝癌细胞凋亡的影响。［方法］ 将人肝癌细胞株HEPG2分为对照组、低浓度穿心莲内酯组、中浓度穿心莲内酯组、高浓度穿心莲内酯组，低、中、高浓度穿心莲内酯组分别加入培养基稀释的终浓度为10、30、50 μmol/L的穿心莲内酯，对照组加入等剂量的培养基。采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测各组HEPG2细胞增殖率，流式细胞术检测各组HEPG2细胞凋亡率，Western blot法检测各组HEPG2细胞PI3K、p-AKT蛋白表达水平。［结果］低浓度穿心莲内酯组HEPG2细胞增殖率及PI3K、p-AKT蛋白表达水平较对照组明显下降（Q=2.942、9.836、6.348，P＜0.05）；中浓度穿心莲内酯组HEPG2细胞增殖率及PI3K、p-AKT蛋白表达水平较低浓度穿心莲内酯组明显下降（Q=2.942、13.832、10.691，P＜0.05）；高浓度穿心莲内酯组HEPG2细胞增殖率及PI3K、p-AKT蛋白表达水平较中浓度穿心莲内酯组明显下降（Q=13.411、19.058、16.371，P＜0.05）。低浓度穿心莲内酯组HEPG2细胞凋亡率较对照组明显升高（Q=83.662，P<0.05）；中浓度穿心莲内酯组HEPG2细胞凋亡率较低浓度穿心莲内酯组明显升高（Q=147.267，P<0.05）；高浓度穿心莲内酯组HEPG2细胞凋亡率较中浓度穿心莲内酯组明显升高（Q=241.925，P<0.05）。［结论］ 穿心莲内酯可能通过抑制PI3K/AKT通路抑制人肝癌细胞增殖，促进人肝癌细胞凋亡，可为临床治疗肝癌提供新方向。     

原发性肝癌组织中KruPPel样因子6(KLF6)的表达及其对肝癌细胞增殖的抑制作用

目的了解Kruppel样因子6（KLF6）基因在原发性肝癌组织中的表达水平及其对肝癌细胞增殖的抑制作用。方法分别以逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）和Wstern blot检测原发性肝癌及其癌旁组织KLF6 mRNA及蛋白质的表达水平。构建KLF6真核表达质粒并转染肝癌细胞SMMC-7721,流式细胞仪及MTT试验观察KLF6基因对细胞周期及细胞增殖活性的影响。以Western blot技术检测外源KLF6基因对p21WAF1表达的影响。结果与对应的癌周组织比较,23例原发性肝癌组织中8例（34.8%）KLF6 mRNA,9例（39.1%）KLF6蛋白质水平明显下降。与对照组比较,转染KLF6基因的SMMC-7721细胞G0~G1期所占细胞的比例明显增高,转染KLF6基因SMMC-7721的增殖率明显下降。外源KLF6基因能上调肝癌细胞p21WAF1表达。结论KLF6基因表达水平的下降可能在原发性肝癌发病机制中起到一定作用。上调p21WAF1表达是KLF6基因抑制肝癌细胞增殖的重要途径.     

人剪切修复基因XPD对肝癌细胞生长的抑制作用

目的探讨野生型人剪切修复基因着色性干皮病基因D(xeroderma pigmentosum D,XPD)对肝癌细胞SMMC-7721增殖的影响,并探讨其机制。方法用脂质体转染法瞬时转染SMMC-7721细胞,转染重组质粒XPD-N2和空载质粒N2,并用未转染的与XPD-N2、N2具有相同遗传背景和代数的SMMC-721细胞作为空白对照。荧光显微镜观察绿色荧光蛋白报告基因表达情况,流式细胞仪检测细胞周期,逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）、Western blot法检测细胞中XPD、c-myc、cdc25A、cdK2表达量变化,MTT法观察细胞增殖的活力。结果提取出的重组质粒pEGFP-N2-XPD用酶切鉴定,与Genebank上的相符。在荧光显微镜下,可以在SMMC-7721-pEGFP-N2、SMMC-7721-pEGFP-N2-XPD细胞中观察到绿色荧光蛋白的表达,质粒的转染效率为30%左右。流式细胞仪结果显示,pEGFP-N2-XPD重组质粒转染入细胞后,肝癌细胞进入S期发生阻滞,停滞在G1期。RT-PCR、Western blot检测发现SMMC-7721-pEGFP-N2-XPD细胞与SMMC-7721-pEGFP-N2和SMMC-7721两对照组相比,其XPD 表达明显增高（P<0.05）。c-myc、cdc25A、cdK2相对表达量明显减少,差异有统计学意义（P<0.05）。与两对照组相比,SMMC-7721-pEGFP-N2-XPD细胞增殖率明显减弱（P<0.05）。结论野生型XPD基因可以在转录和翻译水平抑制SMMC-7721细胞内c-myc、cdc25A、cdK2的表达。而且野生型XPD基因通过抑制cdK2的表达作用于S期DNA损伤检控点,从而抑制SMMC-7721细胞增殖。     

食管平滑肌瘤10例临床治疗体会

我院１９７５年６月～１９９０年７月共收治食管平滑肌瘤１０例，占同期食管肿瘤总数的０．１９２％（１０／１０９２）。位于食管上段２例，中段５例，下段３例。Ｘ线食管钡餐造影是诊断本病的主要方法。行食管粘膜外肿瘤摘除９例，食管部分切除１例，效果良好。本文就其诊断与手术治疗进行了讨论。     

仙人掌原液毒性的初步研究

背景与目的： 研究仙人掌原液的毒性。 材料与方法： 小鼠急性毒性试验、Ames试验、小鼠骨髓嗜多染红细胞微核试验、小鼠精子畸形试验、大鼠30 d喂养试验。 结果： 仙人掌原液雌、雄小鼠LD50均大于20.0 g/kg,属无毒物质;Ames试验、微核试验和精子畸形试验结果均为阴性;大鼠30 d喂养试验结果显示该样品30 d喂养对大鼠各项观察指标未见毒性作用。结论： 在本次实验条件下,仙人掌原液为无毒物质,未显示有遗传毒性和亚急性毒性作用。     

胰头癌手术切除可能性的术前评价

目的通过总结胰头癌病人的临床表现和影象学检查结果来评价手术切除的可能性。方法总结32例胰头癌病人的临床表现和CT、磁共振（MRI）检查结果,判断肿瘤是否已发生邻近浸润或远处转移,以此来评价其手术切除的可能性。结果在22例作CT检查的病例中,判断正确的为17例,准确率为77．3%。作MR检查9例,全部判断正确,准确率为100%。结论某些特殊的临床表现和CT、MR检查对判断肿瘤是否发生邻近浸润或转移有较大价值,为术前评价手术切除的可能性提供依据。     

Assessment of the degree of carcinogenicity of small doses of nitrites

Chronic experiments on CBA and C57B1 mice and acute experiments on CBA mice established: (a) carcinogenic effect of sodium nitrite given continuously with drinking water (0.1; 1.0 and 10.0 maximum allowable concentration) in combination with morpholine fed with bread, and (b) endogenous synthesis of nitrosomorpholine as a result of simultaneous intragastric administration of same doses of sodium nitrite and morpholine. Also, nitrosomorpholine and N-nitrosodimethylamine synthesis was observed in vitro following addition of low-dose sodium nitrite, morpholine and amidopyrine to human gastric juice. Carcinogenic hazard associated with low-dose nitrite consumption in humans is discussed.     

仙人掌原毒性的初步研究

背景与目的:研究仙人掌原液的毒性。材料与方法:小鼠急性毒性试验、Ames试验、小鼠骨髓嗜多染红细胞微核试验、小鼠精子畸形试验、大鼠30 d喂养试验。结果:仙人掌原液雌、雄小鼠LD50均大于20.0 g／kg,属无毒物质;Ames试验、微核试验和精子畸形试验结果均为阴性;大鼠30 d喂养试验结果显示该样品30 d喂养对大鼠各项观察指标未见毒性作用。结论:在本次实验条件下,仙人掌原液为无毒物质,未显示有遗传毒性和亚急性毒性作用。     

胆囊癌29例分析

目的探索胆囊癌的防治方法。方法分析29例胆囊癌病人临床资料、治疗方法及结果。结果术前诊断明确者21例，剖腹探查发现已属晚期，9例为Ⅳ期行根治术，12例为Ⅴ期未行根治术，均于术后1年内死亡。术前怀疑胆囊癌者5例，剖腹探查冰冻切片证实为Ⅴ期及Ⅳ期者各1例，Ⅴ期未行根治术，Ⅳ期行根治术，均于术后1年内死亡；Ⅲ期者3例，行胆囊癌根治术分别于术后10月、13月、17月死亡。2例术中冰冻切片发现的Ⅱ期胆囊癌，行胆囊癌根治术，分别于术后23月、26月死亡。1例意外胆囊癌属Ⅰ期胆囊癌，术后5年半死亡。结论要减少胆囊癌危害，重在及时治疗胆囊结石。     

中晚期贲门癌148例的外科治疗

目的　总结贲门癌手术治疗影响生存率的因素 ,提供今后工作参考。方法　对 14 8例经手术治疗的贲门癌患者进行术后并发症、绝对生存率的X2 检验。结果　本组切除率为 94.5 9% ,近半胃切除占 72 .14 % ,1、3、5年生存率分别为 67.9%、45 %和 2 4.3 %。病期、外侵程度和淋巴结转移等因素对 5年生存率有显著影响 (P <0 .0 1)。术后并发症以吻合口瘘及肺癌并发症为多见 ,其发生率为 3 .6% ,手术死亡率 1.4%。结论　提高生存率的关键在于早期诊断 ,根治手术和术后积极综合治疗。