内侧隔区预毁损对海马CA1区迟发性神经元死亡的影响

目的 :探讨乙酰胆碱 (ACh)对短暂性全脑缺血再灌后海马CA1区迟发性神经元死亡 (DND)的作用。方法 :46只健康雄性Wistar大鼠随机分为 3组 :Ⅰ 手术对照组 ;Ⅱ MS假性损毁脑缺血再灌组 ;Ⅲ MS预损毁缺血再灌组 ,动物先行MS损毁 ,第 15天再行 4 VO ,使脑缺血 2 0min恢复灌注 72h后取材 ,采用NissleHE和TUNEL染色 ,在光镜下观测计数 ,经统计学处理。结果 :①Ⅱ、Ⅲ组缺血再灌后海马CA1出现迟发性神经元死亡 ;②Ⅲ组较Ⅱ组迟发性神经元损伤明显减轻。结论 :乙酰胆碱参与短暂性全脑缺血再灌后海马CA1区迟发性损伤过程 ,MS预毁损能使死亡细胞明显减少     

大鼠内侧隔区预损毁对海马迟发性神经元死亡的影响

目的：探讨乙酰胆碱（ACh)对短暂性全脑缺血再灌后海马迟发性神经元死亡（DND）的作用。方法：80只健康雄性Wistar大鼠随机分为5组。I组：手术对照组；Ⅱ组：单纯内侧隔区（MS）损毁组；Ⅲ组：单纯脑缺血再灌注组；Ⅳ组：MS假性损毁脑缺血再灌注组；Ⅴ组：MS预损毁脑缺血再灌注组，动物先行MS损毁，第15d再行血管阻断，使脑缺血20min，并于恢复灌注72h后处死，将脑采用常规石蜡包埋、切片，Nissle、HE和Tunel免疫组化染色，在光镜下观测计数海马的神经元数。结果：（1）DND细胞主要发生在各缺血再灌注组（Ⅲ，Ⅳ，Ⅴ组）的海马CA1区，其他各区未发现明显变化；（2）V组较Ⅲ，Ⅳ组DNA明显减轻，差异有统计学意义（P＜0．05）。结论：ACh参与短暂性全脑缺血再灌后海马CA1区迟发性神经元损伤过程，MS预损毁能使死亡细胞明显减少。     

灯盏花素对大鼠脑缺血再灌注后迟发性神经元死亡的保护作用

目的观察灯盏花素对大鼠脑缺血再灌注后海马CA1区迟发性神经元死亡的保护作用。方法夹闭Wistar大鼠双侧颈总动脉20min造成脑缺血模型,再灌注7d后,观察灯盏花素低、高剂量对海马CA1区神经元组织病理学及神经元密度的影响。结果缺血再灌注后灯盏花素组海马CA1区组织学状况明显改善,神经元密度显著增加(与模型组比较P<0.01),且与剂量无明显关系(P>0.05)。结论蛋白激酶C抑制剂灯盏花素能减轻脑缺血再灌注后海马CA1区迟发性神经元死亡,具有脑保护作用。     

二氢卡因酸盐对海马CA1区锥体神经元的影响

目的观察不同剂量谷氨酸转运体GLT1抑制剂二氢卡因酸盐(DHK)对海马CA1区锥体神经元的影响。方法采用四血管闭塞法(4VO)制作大鼠全脑缺血模型,右侧脑室注射DHK。脑组织切片硫堇染色法观察海马CA1区锥体神经元迟发性死亡(DND)程度,确定组织学分级(HG)。结果对照(双蒸水)组海马CA1区未见明显的DND,不同剂量DHK引起不同程度海马CA1区的DND,且呈剂量依赖性。结论不同剂量谷氨酸转运体GLT1抑制剂DHK引起海马CA1区锥体神经元迟发性死亡,且呈剂量依赖性。     

70味珍珠丸对全脑缺血/再灌注大鼠海马CA1区神经元的保护作用

目的研究70味珍珠丸对大鼠全脑缺血/再灌注后海马的保护作用。方法 48只雄性Wistar大鼠采用4血管闭塞法制造大鼠全脑缺血模型,观察不同剂量70味珍珠丸对大鼠全脑缺血/再灌注后海马CA1区神经元形态学的影响,并应用流式细胞仪检测海马神经元凋亡率。结果 70味珍珠丸组与缺血/再灌组相比表现为海马神经元凋亡率下降,海马CA1区锥体细胞组织学分级（histological grade,HG）明显降低,神经元密度（neuronal density,ND）明显升高（P〈0.05）。结论藏药70味珍珠丸可以抑制脑缺血再灌注时海马神经元凋亡,从而对脑缺血/再灌注损伤有明显的对抗作用。     

不同Hemin预处理条件对全脑缺血/再灌注大鼠海马CA1区迟发性神经元死亡的影响

目的 观察不同条件下氯化血红素(Hemin)预处理对全脑缺血/再灌注(I/R)大鼠海马CA1区迟发性神经元死亡(DND)的影响.方法 将102只雄性Wistar大鼠随机分成17组,应用四血管闭塞法复制I/R模型,予不同时间、不同剂量、不同途径、不同次数的Hemin预处理,观察(硫堇染色下)大鼠海马CA1区神经元组织学分级(HG)和神经元密度(ND),对DND进行评价.结果 所有Hemin预处理组大鼠海马CA1区HG和ND与Sham、I/R组比较,除I/R前48 h、20 mg/kg、1次灌胃预处理组外,结果存在差异(P＜0.05);所有Hemin预处理组中I/R前24 h、80 mg/kg、3次灌胃预处理组ND值最高,HG最低(P＜0.05);I/R前Hemin 50、80 mg/kg预处理组海马CA1区ND值高于20 mg/kg预处理组(P＜0.05),Hemin 50、80 mg/kg预处理组间ND值差异无统计学意义(P＞0.05);Hemin不同时间预处理ND值大小规律为I/R前24 h＞0.5 h＞48 h;Hemin灌胃给药效果好于腹腔注射(P＜0.05);I/R前Hemin3次预处理ND值高于单次预处理(P＜0.05).结论 HeminI/R前24 h、80 mg/kg、3次灌胃预处理下,或最有效减少I/R大鼠海马CA1区DND,发挥对脑组织的保护作用.     

间歇性低压低氧预处理对大鼠全脑缺血/再灌注后海马CA1区神经元DND及HSP70表达的影响

目的 探讨间歇性低压低氧预处理(Hypobaric Hypoxia Preconditionin,HHP)对大鼠全脑缺血/再灌注(Global cerebral ischemia and reperfusion,GCIR)后海马CA1区神经元迟发性死亡(Delayed Neuron Death,DND)及热休克蛋白70( HSP70)表达的影响.方法 将Wistar大鼠48只随机分为四组:假手术组(Sham组)、低压低氧对照组(HHP组)、全脑缺血/再灌注组(GCIR组)、低压低氧预处理+全脑缺血/再灌注组(HHP+ GCIR组).采用吴穹改良的复制间歇性低压低氧环境模型,选用四血管闭塞法复制大鼠GCIR模型.硫堇染色下观察海马CA1区锥体神经元组织学分级(Histological grade,HG)和神经元密度(neuronal density,ND),反映锥体细胞DND程度;免疫组织化学方法观察神经细胞HSP70阳性细胞表达变化,将四组结果进行统计学比较.结果 Wistar大鼠HHP+ GCIR组海马CA1区较GCIR组HG分级降低、ND明显增加(P＜0.05),HSP70阳性表达明显增高(P＜0.05).结论 推测间歇性HHP是通过上调神经细胞HSP70的表达,减少神经元DND,发挥对脑组织的保护作用.     

谷氨酸转运体抑制剂DHK抑制脑缺血预处理的保护作用

目的:观察谷氨酸转运体GLT1抑制剂二氢卡因酸盐(DHK) 对脑缺血预处理(CIP)诱导脑缺血耐受的影响.方法:采用四血管闭塞法制作大鼠全脑缺血模型,右侧脑室注射DHK.脑组织切片硫堇染色法观察海马CA1区锥体神经元迟发性死亡(DND)程度,确定组织学分级.结果:假手术组和CIP组海马CA1区未见明显的DND;损伤性缺血组海马CA1区有明显的DND;CIP 损伤性缺血组海马CA1区DND不明显; DHK CIP 损伤性缺血组中,DHK阻断了CIP对海马CA1区锥体神经元的保护作用.定量分析发现,DHK CIP 损伤性缺血组较CIP 损伤性缺血组的保护效应明显降低.结论:DHK可抑制CIP诱导的脑缺血耐受.     

中药益智胶囊对大鼠全脑缺血后海马CA1区神经元迟发性死亡的影响

目的 观察中药益智胶囊对大鼠全脑缺血后海马CA1区神经元迟发性死亡及学习功能的影响。方法 以四血管闭塞(4-VO)法制成大鼠急性全脑缺血再灌注模型。采用免疫组织化学方法计数脑缺血再灌注脑损伤后1、2、4、8及40d后,大鼠海马CA1区正常神经元数目;用Morris水迷宫实验观察脑缺血再灌注脑损伤后40d时各组大鼠的学习记忆功能。结果 从缺血再灌注后第2天起,益智胶囊(100mg/kg·b.w.)组大鼠海马CA1区正常神经元数量显著高多于缺血对照组大鼠(P<0.01)。全脑缺血再灌注脑损伤后40d时,益智胶囊(100mg/kg·b.w.)组大鼠记忆功能明显好于缺血对照组大鼠(P<0.01)。结论 益智胶囊对全脑缺血后大鼠海马CA1区神经元具有保护作用,并可改善大鼠的记忆功能障碍。     

缝隙连接对局灶性脑缺血后海马迟发性神经元死亡及神经行为学的影响

目的探讨阻断缝隙连接对大鼠局灶性脑缺血后海马迟发性神经元死亡（DND）及神经行为学的影响。方法术前2h左侧脑室注射缝隙连接阻断剂甘珀酸（CBX）,对照组左侧脑室注射生理盐水,颈内动脉插线法制备大鼠大脑中动脉缺血-再灌注模型。术后72h采用尼氏染色检测海马迟发性神经元死亡,术后24h和72h进行神经行为学评分．数据进行统计学分析,观察阻断缝隙连接对大鼠局灶性脑缺血72h后海马迟发性神经元死亡及神经行为学的影响。结果不用CBX预处理,大脑中动脉缺血模型72h后有45％的动物出现海马DND,用CBX预处理后．DND发生率降到30％．较对照组明显降低（P〈0．01）。CBX干预组的行为学评分明显比对照组低（P〈0．01）。结论阻断缝隙连接可以减少局灶性脑缺血后海马迟发件神经元死亡的发生率,改善局灶性脑缺血术后动物行为学表现。     

促红细胞生成素预处理对大鼠全脑缺血海马CA1区的保护作用

目的　探讨促红细胞生成素 (erythropoietin ,EPO)进行预处理对缺血海马CA1区神经元是否具有保护作用。方法　采用 4 -VO法制作全脑缺血模型 ,将SD大鼠分为假手术组、生理盐水对照组、EPO处理组。生理盐水对照组和EPO处理组于术前 3h ,分别脑室立体定向注射生理盐水和重组人促红细胞生成素 (rHu -EPO) ,假手术组只进行假手术处理。观察缺血后 72h大鼠的生存情况及海马细胞凋亡和超微结构。结果　EPO处理组海马CA1区较生理盐水对照组有较少的凋亡神经元 (P <0 0 1)。结论　EPO预处理可以对缺血后海马CA1区神经元产生保护作用。     

利用冰冻切片技术检测大鼠全脑缺血后海马CA1区线粒体细胞色素C变化

目的利用冰冻切片技术检测大鼠全脑缺血后海马CA1区神经元线粒体CytC的变化.方法采用4-VO法制作全脑缺血模型,将SD大鼠随机分为假手术对照组、全脑缺血组.观察缺血后24 h海马CA1区细胞色素C(Cytochrome C,CytC)变化.结果缺血后24 h,假手术组海马CA1区CytC呈阳性表达,并且呈现出特异性的点状分布,符合CytC线粒体分布的特征,全脑缺血组海马CA1区CytC表达明显降低.结论利用冰冻切片技术能方便、直观的检测脑缺血再灌注后神经元线粒体CytC的变化,再灌注24小时海马CA1区神经元线粒体CytC明显下降.     

促红细胞生成素对全脑缺血后大鼠海马CA1区神经元凋亡和学习记忆能力的影响

目的探讨促红细胞生成素（erythropoietin，EPO）进行预处理对全脑缺血大鼠学习记忆能力的影响。方法采用4-VO法制作全脑缺血模型，将SD大鼠分为假手术组、生理盐水组和EPO组。生理盐水组和EPO组于术前3h，分别脑室立体定向注射生理盐水和重组人促红细胞生成素（rHu—EPo），假手术组只进行假手术处理。观察缺血后72h海马细胞凋亡和缺血后4周大鼠学习和记忆力的变化。结果缺血后72h，EPO组海马CA1区较生理盐水处理组有较少的凋亡细胞（P〈0．01），并且缺血4周后，EPO组学习记忆能力明显高于生理盐水组（P〈0．01）。结论EPO预处理可以抑制缺血海马神经元凋亡及减轻全脑缺血造成大鼠学习和记忆力的损害。     

缺血预处理对缺血再灌注后神经元长期保护效应的观察

目的 动态观察缺血预处理后脑缺血大鼠脑皮层和海马CA1区神经元凋亡数和神经元数，探讨缺血预处理能否提供长时期神经元保护作用。方法 四血管阻断法复制全脑缺血模型，动物随机分为非缺血对照组、预处理对照组、缺血预处理组和缺血组。采用TUNEL和尼氏染色法观察缺血后不同时相点皮层及海马CA1区神经元凋亡细胞数和神经元数。结果 全脑缺血可诱导皮层及海马CA1区神经元凋亡；缺血预处理明显减少缺血再灌注后的神经元凋亡。缺血组神经元在缺血后7天明显减少．12周时大量减少；缺血预处理后7天神经元未见明显减少，但12周时仍然大量减少，与缺血组相比无显著差异。结论 全脑缺血可能通过诱导缺血区神经元凋亡，导致缺血区神经元的大量丢失；缺血预处理可在短时间内提供一定程度的神经元保护作用，但不能完全阻止缺血后神经元的凋亡，可能仅仅是推迟了缺血后神经元凋亡发生的进程。     

外源性NO供体对脑缺血/再灌注神经元的保护作用

目的观察外源性一氧化氮（NO）供体硝普钠（SNP）和亚硝基谷胱甘肽（GSNO）对脑缺血/再灌注过程中c-jun N末端激酶3（JNK3）磷酸化的影响,及其对再灌注海马CA1区锥体神经元的作用。方法采用四动脉结扎法建立大鼠全脑缺血模型。SNP（5 mg/kg）溶于生理盐水,间隔1.5 h分别腹腔注射3次,第1次注射时间在全脑缺血前30 min。GSNO（100μg/kg）溶于生理盐水,缺血前20 min于侧脑室注射给药。大鼠随机分为假手术组、缺血/再灌注组、缺血/再灌注溶剂对照组、缺血/再灌注给予SNP组和缺血/再灌注给予GSNO组,缺血15 min后分别灌注1天或5天。利用免疫印迹、免疫沉淀和焦油紫染色法检测相关蛋白的表达、磷酸化水平及神经元细胞的存活。结果给予SNP组和GSNO组与生理盐水对照组相比,能够显著抑制脑缺血/再灌注过程中JNK3的磷酸化,并且能显著提高再灌注过程中海马CA1区锥体神经元的存活。结论外源性NO供体能够抑制脑缺血/再灌注过程中JNK3的磷酸化,进一步对海马CA1区锥体神经元发挥了保护作用。本研究为外源性NO对脑卒中的有效治疗提供了参考价值。     

永久性局灶性中动脉阻断脑缺血(pMCAO)模型大鼠脑内突触相关蛋白表达的免疫组织化学观察

目的观察永久性局灶性中动脉阻断脑缺血(pMCAO)模型大鼠脑缺血发作后2 d、7 d脑内突触相关蛋白表达的变化。方法制作大鼠永久性局灶性中动脉阻断脑缺血(pMCAO)模型。缺血动物术后随机分为缺血2 d组、缺血7 d组,另设假手术组。在术后2 d、7 d 2个时间点采用HE染色观察动物神经病理学改变,同时采用免疫组织化学法观察动物的缺血侧脑组织突触素-I(synapsin-I)、突触后致密蛋白95(PSD-95)、α-突触核蛋白(α-synuclein)表达情况。结果与假手术组相比,缺血后,模型动物神经元大量变性坏死,数目减少,排列散乱。缺血后2 d,synapsin-I在CA1区、CA3区、皮层表达显著减少(P<0.05或P<0.01),PSD-95在CA1区、皮层表达显著减少(P<0.05或P<0.01),α-synuclein在CA1区神经元产生显著积聚(P<0.01);缺血后7 d,synapsin-I在CA1区、皮层表达仍显著降低(P<0.01),PSD-95在CA1区、皮层表达显著减少(P<0.05或P<0.01),α-synuclein在CA1、CA3、皮层表达显著增加(P<0.05或P<0.01)。结论 pMCAO模型大鼠在脑缺血发生后,神经突触有关蛋白的表达显著改变,并随缺血后不同时间点表达情况不同,这可能与神经元突触重塑有关。突触相关蛋白的表达与缺血损伤程度密切相关。     

对大鼠脑缺血再灌注后tTG表达的影响

目的   研究胱氨酸（Cystamine）对全脑缺血再灌注损伤后大鼠海马组织型转谷氨酰胺酶（tTG）表达的影响。方法    用四血管阻断法制作大鼠全脑缺血再灌注模型。将SD大鼠随机分为假手术组（n=8）,全脑缺血组（n=48）及全脑缺血治疗组（n=48）,全脑缺血组和全脑缺血治疗组按照缺血再灌注时间点的不同再将大鼠随机分为6h、12h、1d、3d、5d、7d六个亚组,每个亚组8只。全脑缺血治疗组大鼠给予Cystamine腹腔注射（0.15mg/g）,全脑缺血组和假手术组大鼠给予生理盐水腹腔注射。TUNEL染色法观察细胞凋亡水平的变化,免疫组织化学方法分析再灌注后不同时间点海马CA1区tTG表达水平的变化。另取52只大鼠随机分为假手术组（n=4）、全脑缺血组（n=24）及全脑缺血治疗组（n=24）,全脑缺血组和全脑缺血治疗组按照不同时间点每个亚组4只,免疫印迹方法测定tTG的表达。结果   缺血组再灌注24h后TUNEL阳性细胞明显增加,1、3、5、7d亚组与假手术组差异有统计学意义（P<0.05）;治疗组与缺血组相比,在1、3、5、7d相应时间点亚组TUNEL阳性细胞数减少（P<0.05）。治疗组海马CA1区tTG平均阳性细胞数于全脑缺血后12h开始下降,3、5、7d亚组均明显低于缺血组（P<0.05）。治疗组海马tTG蛋白水平于缺血再灌注后1d开始降低,3、5和7d亚组显著低于缺血组（P<0.05）。结论   Cystamine可以降低大鼠全脑缺血再灌注后海马CA1区tTG的表达,从而对神经元细胞起到一定的保护作用。     

间歇性低压缺氧预处理对大鼠全脑缺血/再注后海马神经元的保护作用

目的 探讨间歇性低压缺氧预处理对大鼠全脑缺血/再注后海马神经元的保护作用.方法 72只健康雄性Wistar大鼠,体重280～300g,随机分为6组,每组12只.分别为假手术组(Sham);间歇性低压缺氧预处理组(IHHP);缺血/再灌注组(I/R);间歇性低压缺氧预处理2次+全脑缺.血/再灌注组( IHHP2+ I/R);间歇性低压缺氧预处理4次+全脑缺血/再灌注组(IHHP4+I/R);间歇性低压缺氧预处理6次+全脑缺血/再灌注组(IHHP6+ I/R).采用四血管闭塞法复制大鼠全脑缺血/再灌注模型,全脑缺血后8 min行再灌注.硫堇染色观察海马CA1区组织学分级及锥体神经元密度;流式细胞技术检测海马神经元凋亡率.结果 与Sham组相比,单纯性间歇性低压缺氧预处理对海马组织形态和神经元凋亡率均无明显影响;I/R组大鼠海马CA1区组织损伤明显,存活的锥体细胞稀疏,排列紊乱,细胞明显缺失.I/R组与Sham组相比,组织学分级明显升高,神经元凋亡率明显增加;间歇性低压缺氧预处理2次、4次和6次+ I/R各组大鼠海马CA1区细胞损伤均明显改善,组织学分级明显降低,存活神经元密度值均明显增加,神经元凋亡率明显降低,其中IHHP4+ I/R组效果最为明显.结论 间歇性低压缺氧本身对大鼠海马神经元无明显损伤作用,但可对其后短期内发生的缺血/再灌注脑组织发挥保护作用,适当的预处理是诱导有效脑保护作用发生的必要条件.     

神经节苷脂对大鼠脑缺血损伤后海马组织的保护作用

目的探讨神经节苷脂对脑缺血损伤后大鼠海马组织的保护作用。方法取健康成年雄性SpragueDawley大鼠60只,随机分为假手术组、缺血组和神经节苷脂治疗组(治疗组),每组20只。缺血组和治疗组制备大脑中动脉狭窄模型。模型建立成功后,假手术组和缺血组注射9 g.L-1的氯化钠溶液1 mL.kg-1.d-1,治疗组注射神经节苷脂20 mg.kg-1.d-1。采用末端脱氧核苷酰基转移酶介导性dUTP切口末端标记法检测各组神经元凋亡。结果假手术组、缺血组和治疗组大鼠CA1区凋亡神经元数量分别为2.23±0.67、26.17±4.82、15.40±5.30。缺血组大鼠CA1区神经元凋亡数目高于假手术组和治疗组,差异均有统计学意义(P<0.01);治疗组大鼠海马CA1区神经元凋亡数高于假手术组(P<0.01)。结论神经节苷脂可能是通过减少海马神经元凋亡,进而改善脑损伤,起到对脑缺血损伤后大鼠的神经保护作用。     

缺血早期Genistein对海马CA1区神经元保护作用机制的研究

目的 探讨缺血早期Genistein对脑缺血/再灌注后大鼠海马CA1区神经元的保护作用及其可能的机制.方法 采用四动脉结扎建立大鼠全脑缺血模型.实验动物随机分为假手术组、缺血/再灌注组、溶剂对照组、Genistein处理组.缺血5 min时,溶剂对照组、Genistein处理组分别尾静脉注射二甲基亚砜（l ml/kg）和Genistein（1 mg/kg）.Western blot和免疫荧光法检测大鼠海马CA1区HAX-1蛋白的表达,焦油紫染色法观察海马CA1区神经元的存活情况.结果 与对照组比较,Genistein处理组在再灌注3h时HAX-1蛋白表达水平显著升高（P＜0.05）,免疫荧光实验结果与此一致.焦油紫染色结果显示,Genistein处理组与对照组相比较,海马CA1区存活的神经元细胞明显增加（P＜0.05）.结论 缺血早期Genistein对脑缺血造成的神经元损伤有明显的保护作用,这一作用可能是通过增加HAX-1蛋白表达水平来实现的.