SEVENTY TWO-HOUR RAT PANCREAS PRESERVATION USING PERELUOROCHEMICAL

ＳＥＶＥＮＴＹＴＷＯ－ＨＯＵＲＲＡＴＰＡＮＣＲＥＡＳＰＲＥＳＥＲ－ＶＡＴＩＯＮＵＳＩＮＧＰＥＲＥＬＵＯＲＯＣＨＥＭＩＣＡＬＨｏｎｇＨｅｑｕｎ（洪鹤群）（ＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＳｕｒｇｅｒｙ，ＲｕｉｊｉｎｇＨｏｓｐｉｔａｌ，ＳＳＭＵ，Ｓｈａｎｇｈａｉ...     

随机扩增多态DNA技术在地高辛标记HCMV DNA探针中的应用研究

应用ＲＥＡＰＤ－ＰＣＲ技术结合地高辛非放射生标记制备了人巨细胞病毒ＤＮＡ探针，并与常规随机引物法进行对照。ＲＡＰＤ－ＰＣＲ制备的ＨＣＭＶ ＤＮＡ探针长度呈多态性，扩增过程中不需合成特异引物，探针特异性强，产量高，用５０ｍｇ ＨＣＭＶ ＤＮＡ模板即可制备８．０μｇ探针；标记体系中ＲＡＰＤ－ＰＣＲ方法Ｄｉｇ－ｄＵＴＰ浓度为５．２％。     

过期生化质控血清再利用价值的探讨

我们对已过有效期２－４个月的生化质控血清测试钙（ＣＡ），尿素氮（ＢＵＮ），肌酐（ＣＲＥ），尿酸（ＵＡ），葡萄糖（ＧＬＵ），总蛋白（ＴＰ）和白蛋白（ＡＬＢ）等７项指标，与靶值相比，ＣＲＥ值升高，ＵＡ和ＧＬＵ值下降，而ＴＰ、ＡＬＢ和ＣＡ则不变，故后３项仍有做为生化质控血清的价值。     

大鼠血管中a_1－肾上腺素受体不同亚型的减敏差异

目的：观察α＿１－ＡＲ的减敏过程及其亚型差异。方法：给清醒大鼠持续输注苯肾上腺素（ＰＥ）及离体主动脉和肾动脉用去甲肾上腺素（ＮＥ），持续温育后，测定血压或进行血管收缩功能实验。结果：持续输注ＰＥ后，由ＰＥ介导的升压作用较对照组明显降低，升高相同血压所需的ＰＥ剂量显著增加；离体血管经不同时间和不同浓度的ＮＥ预温育后，α＿１－ＡＲ介导的血管收缩－效应曲线（ＣＲＣ）显著右移，但含α＿（１Ｄ）－ＡＲ的主动脉的右移程度均显著大于含。α＿（１Ａ）－ＡＲ的肾动脉。结论：α＿１－ＡＲ在激动剂持续作用下可产生减敏，且α＿（１Ｄ）－ＡＲ远较α＿（１Ａ）－ＡＲ容易发生。     

胆固醇酯转运蛋白的提纯和鉴定

目的：分离纯化人血清胆固醇酯转运蛋白（ＣＥＴＰ），为制备ＣＥＴＰ单克隆抗体和ＣＥＴＰ浓度测定提供物质基础。方法：制备无脂血清，用Ｂｕｔｙｌ－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ４ＦＦ、ＣＭ－ＳｅｐｈａｒｏｓｅＦＦ和ＳｅｐｈａｃｒｙｌＳ－２００三步柱层析分离、纯化ＣＥＴＰ。结果：纯化的ＣＥＴＰ经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ与ＣＥＴＰ特异性单克隆抗体免疫反应和活性测定等鉴定证实为纯化ＣＥＴＰ。结论：经三步柱层析获得了纯化ＣＥＴＰ，得率约２５％，活性３０ｎｍｏｌ／（μｇ·ｈ）。     

蛋白激酶C在维甲酸诱导人早幼粒白血病细胞成熟分化中的作用

为探究维甲酸（ｒｅｔｉｎｏｉｃａｃｉｄ，ＲＡ）诱导人早幼粒白血病细胞ＨＬ－６０分化的作用机理，作者以鱼精蛋白为底物，用［γ－￣（３２）Ｐ］ＡＴＰ同位素标记，动态检测诱导前后蛋白激酶Ｃ（ＰｒｏｔｅｉｎｋｉｎａｓｅＣ，ＰＫＣ）的活性变化，并观察ＰＫＣ亚细胞分布。结果发现，ＲＡ诱导后细胞质ＰＫＣ活性显著升高，以ＰＫＣ抑制剂（Ｈ－７）处理后再进行诱导，ＨＬ－６０细胞分化受阻。表明细胞质ＰＫＣ活性增高在ＲＡ诱导ＨＬ－６０细胞分化中起重要作用；但未见ＰＫＣ向细胞膜转移，提示ＲＡ诱导ＨＬ－６０细胞分化可能还通过其它途径进行。     

CEA,CYFRA21—1测定在胸腔积液诊断中的价值

用酶联免疫方法，联合测定胸腔积液患者胸液的ＣＥＡ、ＣＹＦＲＡ２１－１，结果显示恶性胸腔积液组的ＣＥＡ１ＣＹＦＲＡ２１－１水平与良性胸腔积组相比有显著差异性；ＣＥＡ、ＣＹＦＲＡ２１－１联合测定有并协效果；ＣＹＦＲＡ２１－１的特异性、敏感性，准确性无高于ＣＥＡ；ＣＹＦＲＡ２１－１与疾病的病程及治疗过程变化有显著相关性。     

骨骼肌高表达质粒VR／TPO在CHO细胞中瞬时表达及动物实验

目的：构建肌肉高表达质粒ＶＲ／ＴＰＯ,将其在体外定量表达,并初步了解其体内表达活性。方法;以重组ＴＰＯ ＣＤＮＡ为目的基因,构建人ＶＲ／ＴＰ炕效表达质粒,用脂质体法将共转染ＣＨＯ细胞,ＲＴ－ＰＣＲ法检测ＭＲＮＡ表达,ＥＬＩＳ 表达量,并不入体内了解其对巨核各级造血的影响。结果：ＶＲ／ＴＰＯ可在ＣＨＯ中高效表达,其在表量超过ＰＣＤＮＡ３ＴＰＯ,并初步发现有促进血小板增加作用。结论：ＶＲ／ＴＰＯ为一高     

不同年龄组人红细胞内ATP含量

本文用萤光素－萤光素酶生物发光法测定了不同年龄组人红细胞内ＡＴＰ含量，发现老年组和脐血组红细胞内ＡＴＰ含量分别为１．５５±０．２８ｍｍｏｌ·Ｌ~（－１）ＲＢＣ和１．５６±０．２５ｍｍｏｌ·Ｌ~（－１）ＲＢＣ，中年组和青年组红细胞内ＡＴＰ含量分别为１．４５±０．１２ｍｍｏｌ·Ｌ~（－１）ＲＢＣ和１．４２±０．１２ｍｍｏｌ·Ｌ~（－１）ＲＢＣ，老年组和脐血组红细胞内ＡＴＰ含量明显高于中青年组。     

天津地区国人CETP第15外显子突变（Asp^442→Gly）频率

目的：检测胆固醇酯转移蛋白第１５外显子突变（Ａｓｐ＾４４２→Ｇｌｙ）,为探讨ＣＥＴＰ在ＡＳ发生、发展中的作用提供基础数据和参考资料。方法：利用特异设计的错配碱基引物,在ＰＣＲ扩增获得的人ＣＥＴＰ第１５外显子突变片段人工导入了－ＭｓｐＩ酶切位点,根据酶切片段的电泳图谱检测人ＣＥＴＰＡｓｐ＾４４２→Ｇｌｙ突变。结果：１３１例正常成年人中发现４例杂合子突变,突变率为３．０５％,首次证实Ａｓｐ＾４４２→Ｇ     

摇瓶发酵过程中OUR,CER和RQ的在线检测

用一种特制摇瓶可在线检测摇瓶发酵过程中Ｎ２，Ｏ２，ＣＯ２的浓度变化，继而能进一步得出过程中摄氧率，二氧化碳释放率和呼吸商随发酵时间的变化，并以酵母菌为对象菌种进行了实验研究。结果证明该实验装置和实验方法是可靠的。     

紫球藻多糖的降解及其体外抗氧化活性

表达蛋白HIV-TATm-Survivin (T34A)的重组大肠杆菌BL21(DE3)在长时间保存后其表达水平明显下降,发酵罐放大难以顺利进行。利用该蛋白的本底表达对宿主菌产生的生长压力进行了实验室自适应进化工作,得到携带相同质粒但表达水平呈两极分化的两类菌株HTS1和HTS2。摇瓶培养时,HTS1菌株生长较迅速,但重组蛋白几乎无表达;HTS2生长较缓慢,却可以高效积累重组蛋白。因此HTS1菌株的出现,可能是原始菌株长时间保存后蛋白表达能力下降的原因之一。另外,HTS2菌株应用上的优势,外源添加高达300 mmol/L的乙酸钠对HIV-TATm-Survivin (T34A)的表达水平没有较明显负的影响,4 L和30 L发酵罐表达验证了摇瓶培养的结果。     

毕赤酵母菌分泌表达重组抑肽酶的高密度发酵工艺研究

目的:对毕赤酵母高密度表达重组抑肽酶的发酵工艺进行探讨。方法:先通过摇瓶培养方法,确定表达抑肽酶的毕赤酵母在BSM培养基中生长所需的最佳配方。在此基础上,采用分批补料培养方法,对毕赤酵母pSA/GS115进行高密度发酵。紫外吸收法测定重组抑肽酶竞争性抑制胰蛋白酶对底物BAEE的水解活性。结果:BSM培养基中毕赤酵母生长必需的最佳配方为甘油40 g.L-1、氨水单次补加量0.1%、甲醇流加量1%。经过毕赤酵母高密度发酵,发酵液上清中蛋白的表达量为37.08 mg.L-1,目的蛋白活性达到4 450 BAEEU.ml-1,比摇瓶培养表达提高了8倍。结论:本发酵工艺可实现酵母工程菌的高密度表达发酵,其发酵产物具有较高的生物活性,为下一步大规模化制备抑肽酶奠定了基础。     

纳米氧化镁灭菌效果与抑菌能力研究

目的：研究纳米氧化镁(MgO)灭菌效果与抑菌能力。方法：将不同量的MaO粉体分散于染菌菌片载体上放置不同时间，计算其杀灭率以评价MaO粉体的灭菌能力；将不同量的MaO粉体混合菌液放置在摇床中振荡不同时间，计算其抑菌率以评价MgO粉体的抑菌能力。结果：①纳米氧化镁能有效杀灭大肠杆菌，对枯草杆菌黑色变种芽孢也有显著的杀灭效果；②纳米氧化镁对金黄色葡萄球菌和枯草杆菌黑色变种芽孢有很好的抑菌作用；③纳米氧化物的磨蚀性、碱性、氧化性以及对微生物的静电吸附使它具有抑菌和杀菌作用。结论：纳米氧化镁粉体有较强的杀菌效果和抑菌能力。     

高表达抗PD-1抗体CHO细胞株的筛选及代谢分析

筛选高表达抗PD-1抗体的工程细胞株和较优的基础及补料培养基,并进行代谢分析。 方法 分别在TPP摇管、摇瓶中通过流加培养的方式,从6株细胞株和5种商业培养基中筛选高表达抗PD-1抗体的GS-CHO细胞株和较优的基础及补料培养基。在流加培养过程中,检测葡萄糖、谷氨酰胺、谷氨酸、乳酸及氨等的浓度变化。同时为分析限制性营养因素,进一步对乳酸、氨及氨基酸代谢进行分析。 结果 通过TPP摇管初步筛选,显示122和126两株细胞在HyCell CHO培养基中表现最好,表达量分别为1.945和1.989 g/L; 在摇瓶中进一步验证显示122细胞在6株细胞中的最大活细胞密度图最高,达2.21×10⁷ cells/mL,表达量>2 g/L。代谢分析发现,乳酸代谢切换和谷氨酸及丙氨酸代谢相关。氨基酸分析发现,蛋氨酸、异亮氨酸、亮氨酸等必需氨基酸可能为122细胞株生长和(或)表达限制性成分。 结论 筛选出高表达抗PD-1抗体的细胞株和较优培养基,同时代谢分析和氨基酸分析为后续细胞培养工艺开发及个性化培养基优化提供理性指导。     

含多官能团聚丙烯腈抗菌消臭纤维的制备、结构与性能

合成了一种多官能团聚丙烯腈纤维,并测定了它的抗菌消臭性能。结果表明：此纤维含有多种含氮、含氧、杂环等官能团,其对不同菌类具备优异的杀菌活性,并且具有抗菌广播,作用时间持久和效率高等特点。     

盐酸雷洛昔芬平衡溶解度与表观油水分配系数的测定

目的测定盐酸雷洛昔芬的平衡溶解度以及表观油水分配系数,为药物新剂型设计与研究提供基础。方法采用饱和溶液法和摇瓶法测定盐酸雷洛昔芬在蒸馏水和pH 2.0-9.0磷酸盐缓冲液的平衡溶解度及其在正辛醇-水/磷酸盐缓冲液体系中的表观油水分配系数。结果 37℃时,盐酸雷洛昔芬在水中溶解度为（3.941±0.06）μg/mL,在pH 2.0-9.0缓冲液中,平衡溶解度随pH值升高而减小;盐酸雷洛昔芬在正辛醇-水体系中表观油水分配系数（P）为（17.261±2.84）,lgP=1.24;在正辛醇-缓冲液体系中,P值随pH值升高而增大。结论本文建立的测定方法简单可行,盐酸雷洛昔芬不溶于水,且pH值影响平衡溶解度和表观油水分配系数。     

正丙醇、铜离子、烟酰胺对红霉素合成的作用

在摇瓶培养过程中，发酵初期加入正丙醇可使红霉素的效价提高49．31％，正丙醇提高了丙酸激酶的比活力，表现出对该酶诱导作用，而对丙酰CoA合成酶比活力无影响。加入铜离子和烟酰胺可使红霉素效价分别提高24％和179／5。用HPLC测定发酵液中有机酸含量，分析测定结果认为发酵过程可分为3个阶段：积累期、转折期和生产期。     

产核苷磷酸化酶大肠杆菌的培养及2′-脱氧-5-氟尿苷的酶法合成

研究了产核苷磷酸化酶大肠杆菌的摇瓶培养和发酵罐培养特征以及乙酸盐和底物诱导对核苷磷酸化酶活力的影响。结果表明：摇瓶培养时，延长菌体培养时间，菌体部分自溶时酶的转化率最高；发酵培养基中加入１０ｇ／Ｌ乙酸钠可使底物转化率提高７．７％，０．００１ｇ／Ｌ的底物ｄＵ诱导可使酶活力提高１１．０％；流加底物ｄＵ对酶反应转化率无显著影响，表明该酶促反应为非２′－脱氧尿苷底物抑制型；反应过程存在扩散控制，酶反应的最佳摇床转速为１６０ｒ／ｍｉｎ。     

Using the CER Hub to ensure data quality in a multi-institution smoking cessation study

Comparative effectiveness research (CER) studies involving multiple institutions with diverse electronic health records (EHRs) depend on high quality data. To ensure uniformity of data derived from different EHR systems and implementations, the CER Hub informatics platform developed a quality assurance (QA) process using tools and data formats available through the CER Hub. The QA process, implemented here in a study of smoking cessation services in primary care, used the ‘emrAdapter’ tool programmed with a set of quality checks to query large samples of primary care encounter records extracted in accord with the CER Hub common data framework. The tool, deployed to each study site, generated error reports indicating data problems to be fixed locally and aggregate data sharable with the central site for quality review. Across the CER Hub network of six health systems, data completeness and correctness issues were prevalent in the first iteration and were considerably improved after three iterations of the QA process. A common issue encountered was incomplete mapping of local EHR data values to those defined by the common data framework. A highly automated and distributed QA process helped to ensure the correctness and completeness of patient care data extracted from EHRs for a multi-institution CER study in smoking cessation.