洛伐他汀诱导人子宫内膜癌JEC细胞G1 期同步化的研究

目的: 探讨洛伐他汀(Lov)诱导人子宫内膜癌JEC细胞G₁期同步化的方法及JEC细胞解除G₁期同步化后的细胞周期进程。方法: CCK-8法测定JEC细胞的倍增时间,采用10 μmol/L、20 μmol/L、30 μmol/L和40 μmol/L的Lov,作用1×细胞倍增时间进行流式细胞术检测G₁期细胞的比例,获得G₁期同步化的最佳Lov浓度;采用最佳浓度作用JEC细胞,于作用后的0.5×倍增时间~2×倍增时间内,每隔4 h检测同步化程度,获得最佳浓度Lov作用下的最佳同步化时间;解除G₁期同步化,每隔4 h检测一次,研究JEC细胞解除G₁期同步化后的细胞周期进程。结果: CCK-8法检测显示JEC细胞的倍增时间约为24 h;JEC细胞的最佳G₁期同步化条件为:20 μmol/L Lov作用24 h,可获取G₁期细胞(85.00±0.79)%;JEC细胞于解除G₁期同步化后16 h,获得最大量的S期细胞,为(45.28±0.53)%;同时G₁期细胞比例达到最低,为(35.93±0.44)%。结论: 20 μmol/L Lov作用24 h,可获得大量G₁期细胞;解除G₁期同步化后16 h,S期细胞比例最高,G₁期细胞比例达到最低,达到满意的G₁期同步化释放后效果。     

光敏化促进姜黄素诱导人胃癌MGC-803细胞凋亡

目的: 探讨光敏化促进姜黄素诱导人胃癌MGC-803细胞凋亡及其机制。方法: 用MTT法检测光敏化姜黄素对胃癌MGC-803细胞株的增殖抑制率,Hoechst 33258荧光染色观察细胞核形态的变化,流式细胞术检测细胞的凋亡率、线粒体膜电位、细胞内活性氧和Ca²⁺;比色法检测caspase-3、8和9酶活性;Western blotting分析细胞色素C、Bcl-2、Bax和热休克蛋白70(HSP70)水平。结果: 单纯姜黄素(5.0μmol/L)对MGC-803细胞增殖抑制率为(29.74±2.30)%,在光学显微镜下可见部分凋亡细胞,凋亡率为(12.54±1.75)%。而光敏化姜黄素组细胞增殖抑制率则为(44.93±3.61)%,在光学显微镜下能见明显细胞核形态改变,染色质凝集,凋亡小体形成,凋亡率为(26.58±2.67)%,细胞周期主要阻滞于G₀/G₁期。光敏化姜黄素显著降低线粒体膜电位,显著增加细胞色素C、细胞内活性氧和Ca²⁺以及caspase-3、8和9酶活性,与单纯姜黄素组比较,差异显著(P<0.01)。Western blotting结果显示光敏化姜黄素同时显著抑制Bcl-2和HSP70蛋白表达水平。结论: 光敏化姜黄素通过Bcl-2和线粒体途径增强其诱导胃癌MGC-803细胞凋亡的作用。     

阿霉素联合塞来昔布诱导胃癌细胞凋亡的作用研究

目的:研究环氧化酶-2 (COX-2) 抑制剂塞来昔布联合阿霉素对胃癌MGC-803细胞株的凋亡诱导作用，并探讨其相互作用的可能的分子机制。方法:用MTT法检测MGC-803的增殖情况。用荧光显微镜、流式细胞术和DNA梯度电泳检测肿瘤细胞凋亡的情况。结果:随着阿霉素剂量的增加，MGC-803细胞的数量明显减少。细胞大部分静止于G₀/G₁期，S期细胞明显减少。 阿霉素（5 mg/L）联合塞来昔布（25 μmol/L）明显抑制MGC-803细胞的生长。肿瘤细胞经阿霉素或塞来昔布处理后荧光显微镜下可观察到典型的细胞凋亡形态变化。与两者单独用药相比，联合用药后的DNA梯度变化更为明显。联合用药 48 h 后MGC-803细胞堆积在G₀/G₁，而S期减少的细胞数量比两者分别用药时更为显著。结论：塞来昔布和阿霉素具有协调的诱导凋亡的作用，这对于将COX-2抑制剂用于肿瘤的临床辅助化疗具有重要意义。     

叶酸和维生素B12减轻高同型半胱氨酸血症诱导的老年大鼠阿尔茨海默样病变

目的:探讨慢性高同型半胱氨酸血症对老年大鼠脑内tau蛋白结构和功能的影响以及其可能机制。方法:选取18月龄健康大鼠,尾静脉注射同型半胱氨酸(Hcy)生理盐水溶液(1.6mg·kg^-1·d^-1)制造高同型半胱氨酸血症模型组,在给予Hcy的同时通过饮用水给予叶酸(4mg·kg^-1·d^-1)和维生素B₁₂(VitB₁₂,250g·kg^-1·d^-1)作为治疗组,单纯注射生理盐水作为对照组,持续28周,Bielschowsky银染观察磷酸化tau蛋白的分布和聚集;Westernblotting检测磷酸化tau蛋白、糖原合酶激酶3β(GSK-3β)和蛋白磷酸酶2A(PP2A)的表达。结果:(1)血浆中Hcy水平增高导致神经原纤维样缠结;给予叶酸和VitB₁₂能够有效减轻缠结;(2)血浆高Hcy水平诱导老年大鼠脑内tau蛋白在Ser^199/202和Ser³⁹⁶位点磷酸化水平升高;(3)血浆高Hcy水平激活GSK-3β同时抑制PP2A的活性。补充叶酸和VitB₁₂有效地缓解了这些激酶和酯酶的活性改变,并下调了tau蛋白Ser^199/202和Ser³⁹⁶位点的磷酸化水平。结论:补充叶酸和VitB₁₂能够有效改善高同型半胱氨酸血症所诱导的tau蛋白阿尔茨海默样病理改变,其机制可能与其抑制GSK-3β活性和激活PP2A有关。     

α1胸腺肽对胸腺细胞发育和成熟的影响

目的:探讨α₁胸腺肽对胸腺细胞发育的影响。方法:测定CD4⁺CD8⁺胸腺细胞群的比例及 5-FU和胸腺肽处理组在CD4^-CD8^-胸腺细胞群上Hh信号的Smo分子(增生反应的潜在阴性调节者)的表达效果来估价胸腺肽对胸腺细胞成熟和发育的影响。结果:发现α₁胸腺肽在30μg/kg的低剂量下显示活性。流式细胞仪分析根据CD4^-CD8^-胸腺细胞上Hh信号的Smo分子的表达确定α₁胸腺肽在此剂量加快了胸腺细胞的成熟。结论:α₁胸腺肽能加快CD4^-CD8^-胸腺细胞向CD4⁺ CD8⁺阶段的发展。     

白三烯D4在促进培养的人气管 平滑肌细胞增殖中的作用

目的和方法:研究白三烯D₄(LTD₄)是否剌激培养的人气管平滑肌细胞(ASMC)增殖。将分离的人ASMC进行传代培养,在培养基中加入各种浓度的LTD₄,计数细胞并测定 [³H]-胸腺嘧啶核苷([³H]-TdR)掺入量和三磷酸肌醇(IP₃)累积量。结果: LTD₄在一定范围内(0.1 nmoL·L^-1~10 nmoL·L^-1)以浓度依赖的方式增加人ASMC(P＜0.01)。LTD₄也增加[³H]-TdR的掺入量和IP₃累积量(P＜0.01)。磷脂酶C抑制剂新霉素(1 μmol·L^-1)阻止IP₃累积量的增加(P＜0.01)。结论:LTD₄剌激培养的人ASMC增殖并且可能在哮喘的气道重塑中起了作用。     

Role of nitric oxide in isometric contraction properties of rat diaphragm during hypoxia

Hypoxia disturbs Ca²⁺ regulation and increases the intracellular Ca²⁺ concentration ([Ca²⁺]_i), which may in turn activate the nitric oxide synthase (NOS) regulated by [Ca²⁺]_i. Since nitric oxide (NO) reduces the isometric contractility of rat diaphragm in vitro, we hypothesized that NO contributes to the impaired force generation of an hypoxic diaphragm. The effects of different concentrations of the NOS inhibitor, N^G-monomethyl-L-arginine (L-NMMA), the NO scavenger haemoglobin (150 μmol·l^–1) and the NO donor spermine NONOate (Sp-NO; 1 mmol·l^–1) were determined on isometric contractility during hypoxia [partial pressure of oxygen, PO₂, about 7 kPa (about 54 mmHg)] and hyperoxia [PO₂ about 83 kPa (about 639 mmHg)]. Hypoxia significantly reduced maximal twitch force (F _t), and submaximal tetanic force (30 Hz, F ₃₀) in all L-NMMA groups. A low concentration of L-NMMA (30 μmol·l^–1) increased F ₃₀ but a high concentration (1,000 μmol·l^–1) reduced F ₃₀ during hypoxia. The effects of L-NMMA on force generation were more pronounced during hypoxia compared to hyperoxia. Peak increases in F ₃₀ and F _t were observed at a concentration of 30 μmol·l^–1 L-NMMA during hypoxia, but with 10 μmol·l^–1 L-NMMA during hyperoxia. The same concentration of haemoglobin increased F ₃₀ and F _t less during hypoxia compared to hyperoxia. The Sp-NO reduced F _t, F ₃₀ and maximal tetanic force (F ₀) during hypoxia; these effects were abolished in the presence of haemoglobin. The Sp-NO did not alter F _t, F ₃₀ and F ₀ during hyperoxia. We conclude that NO plays a more prominent role during hypoxia and that NO contributes to the depression of force generation in the hypoxic rat diaphragm in vitro. This change may be related to an elevated NO generation within the hypoxic diaphragm. Electronic Publication     

黄芪注射液联合葛根素注射液对2型糖尿病KKAy小鼠肾脏TGF-β1和BMP-7表达的影响

目的: 观察黄芪注射液联用葛根素注射液对2型糖尿病KKA^y小鼠肾脏转化生长因子β₁(TGF-β₁)和骨形态发生蛋白7(BMP-7)表达的影响。方法: 雄性KKA^y小鼠饲养至14周龄时随机分成模型组和黄芪注射液联合葛根素注射液治疗组,同龄雄性C57BL/6J小鼠作为正常组。观察各组小鼠一般状态并测量体重;检测20周龄、24周龄及28周龄小鼠空腹血糖(BG)、血清甘油三酯(TG)、胆固醇 (TC) 和血清肌酐(SCr);免疫组化法测定肾脏组织TGF-β₁蛋白表达情况,RT-PCR法检测肾脏组织BMP-7和TGF-β₁ 的mRNA表达情况。结果: 与正常组相比,模型组小鼠的体重、BG、TG、TC和SCr均有较明显增高;肾组织TGF-β₁蛋白和mRNA表达明显升高,BMP-7 mRNA表达下降。与模型组比较,黄芪注射液联合葛根素注射液治疗组小鼠的体重、BG、TG 、TC 及SCr均有不同程度下降;肾组织BMP-7 mRNA表达升高,而TGF-β₁蛋白及mRNA表达明显下调。结论: 黄芪注射液联合葛根素注射液对2型糖尿病KKA^y小鼠肾脏有保护作用,其机制可能与恢复肾组织BMP-7表达,降低肾组织TGF-β₁过度表达有关。     

人参单体皂甙Rh2对前列腺癌细胞株PC-3M细胞移行周期的影响

目的:探讨Rh₂对体外培养的PC-3M细胞移行周期的影响。方法:应用[³H]-TdR掺入法和流式细胞仪测定DNA含量及进行细胞周期的分析。结果:PC-3M细胞的[³H]-TdR掺入量明显少于对照组(P＜0.01);流式细胞仪测定G₁期细胞数百分比明显高于对照组。结论:Rh₂可使PC-3M细胞增殖周期阻滞在G₁期,肿瘤细胞增殖减慢。     

1,25-二羟维生素D3抑制被动致敏人气道平滑肌细胞的增殖

目的: 检测1,25-二羟维生素D₃ 对被动致敏的人气道平滑肌细胞(HASMCs)增殖的调节作用,探讨其对哮喘气道重塑的可能作用。方法: 离体培养HASMCs,并将细胞分为对照组、哮喘组及1,25-(OH)₂D₃组。MTT法检测细胞增殖活力并确定1,25-(OH)₂D₃最佳作用浓度;用最佳作用浓度刺激HASMCs 48 h后以流式细胞术测定细胞周期,免疫细胞化学染色(SABC法)检测增殖细胞核抗原(PCNA)的表达。结果: 1,25-(OH)₂D₃在10^-9-10^-7 mol/L范围内能显著抑制哮喘血清被动致敏的HASMCs增殖(P<0.05),且10^-7 mol/L时抑制作用最强;流式细胞术检测显示这一最佳作用浓度的1,25-(OH)₂D₃能显著抑制被动致敏HASMCs由G₀/G₁期向S期的转化;此外,1,25-(OH)₂D₃能显著抑制被动致敏HASMCs中PCNA的表达。结论: 1,25-(OH)₂D₃能抑制哮喘血清被动致敏的HASMCs增殖,有助于哮喘气道重塑的防治。     

槲皮素对人胃癌MGC-803细胞中瘦素、瘦素受体表达及JAK-STAT通路的影响

目的:研究槲皮素对人胃癌MGC-803细胞中瘦素、瘦素受体表达及JAK-STAT传导通路的影响。方法:实验分组为胃癌细胞组(只加入MGC-803细胞)、槲皮素处理组(40μmol/L槲皮素)和阳性对照组(40μmol/L AG490,AG490为JAK2激酶抑制剂)。采用免疫组织化学法和Western blot法检测槲皮素对胃腺癌MGC-803细胞中Leptin、Leptin receptor和P-STAT3蛋白阳性表达率的影响。应用半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)的方法,检测槲皮素对Leptin、Leptin re-ceptor mRNA表达水平的抑制作用。采用流式细胞术(FCM)测定槲皮素对MGC-803细胞的周期阻滞。应用AnnecxinV标记检测细胞凋亡率。结果:槲皮素处理MGC-803细胞后Lep-tin、Leptin receptor、P-STAT3蛋白水平减少,Leptin、Leptin re-ceptor mRNA水平减少,与对照组相比差异均有统计学意义(P<0.05),瘦素和P-STAT3蛋白之间呈直线相关关系(r=0.741,P<0.05),痩素受体和P-STAT3蛋白之间也呈直线相关关系(r=0.693,P<0.05);FCM显示细胞周期阻滞于G2/M期,凋亡率明显增加;随着槲皮素浓度升高,凋亡细胞和坏死细胞比例增加。结论:槲皮素可能通过JAK-STAT途径有效的下调胃癌中瘦素、痩素受体和P-STAT3表达而发挥抑制细胞增殖和诱导细胞凋亡的作用。     

吡格列酮预处理对大鼠心脏缺血再灌注/缺氧再复氧线粒体结构及膜电势的影响

目的： 观察吡格列酮预处理对大鼠缺血再灌注心肌线粒体超微结构及缺氧再复氧心肌细胞线粒体膜电势的影响，并探讨可能机制。方法: 建立大鼠缺血再灌注模型，分别设假手术对照（SO）组、单纯缺血再灌注 (IR) 组、吡格列酮预处理 (Pio－P) 组和5-HD+Pio组；缺血30 min再灌注4h后取心室肌观察线粒体超微结构并行Flameng线粒体半定量分析。TUNEL法检测心肌细胞凋亡指数（AI）；培养大鼠心肌细胞，分别分成对照组、缺氧再复氧（HR）组和不同浓度Pio－P组，缺氧1 h再复氧2 h后，利用JC-1染色流式细胞术检测线粒体膜电势（ΔΨm）变化。结果: IR组线粒体超微结构损害严重，Pio－P组明显减轻，5-HD+Pio组与IR组差异不大，IR组和Pio－P组线粒体Flameng评分为 2.75±1.09和1.62±0.60，2组间差异显著（P﹤0.01）。IR组和Pio－P组AI为(55.44±6.63)%和(28.19±4.93)%，2组间差异显著（P﹤0.05），5-HD+Pio组与IR组差异无显著（P>0.05）；HR组ΔΨm降低的细胞百分率为（56.52±2.87）%,较对照组（6.52±0.59）%差异显著（P﹤0.01）；不同浓度（5 μmol/L、10 μmol/L及15 μmol/L）Pio－P组ΔΨm降低的细胞百分率分别为(45.89±3.63)% 、（17.13±1.37）%和（18.43±2.44）%,与HR组（56.52±2.87）%相比明显降低（P﹤0.05），但10 μmol/L组及15 μmol/L组差异无显著（P>0.05）。结论: 吡格列酮预处理可以通过保护线粒体结构，抑制线粒体膜电势降低而起到抗缺血再灌注/缺氧再复氧损伤作用，该保护作用可被线粒体ATP敏感性钾通道阻滞剂所拮抗。     

C9orf72 G4C2 repeat expansions in Alzheimer's disease and mild cognitive impairment

C9orf72 G₄C₂ repeat expansion is a major cause of amyotrophic lateral sclerosis and frontotemporal lobar degeneration. Its role in Alzheimer's disease (AD) is less clear. We assessed the prevalence of G₄C₂ pathogenic repeat expansions in Flanders-Belgian patients with clinical AD or mild cognitive impairment (MCI). In addition, we studied the effect of non-pathogenic G₄C₂ repeat length variability on susceptibility to AD, and on AD cerebrospinal fluid (CSF) biomarker levels. A pathogenic repeat expansion was identified in 5 of 1217 AD patients (frequency <1%). No pathogenic expansions were observed in patients with MCI (n = 200) or control individuals (n = 1119). Nonpathogenic repeat length variability was not associated with AD, risk of conversion to AD in MCI individuals, or CSF biomarker levels. We conclude that pathogenic C9orf72 G₄C₂ repeat expansions can be detected in clinical AD patients and could act as a contributor to AD pathogenesis. Non-pathogenic repeat length variability did not affect risk of AD or MCI, nor AD biomarker levels in CSF, indicating that C9orf72 is not a direct AD risk factor.     

辛夷二氯甲烷提取物对离体大鼠胸主动脉环的舒张作用及其机制

目的:研究辛夷二氯甲烷提取物(CEF)的舒张血管作用以及其作用机制。方法:采用大鼠离体血管功能实验装置,描记张力变化,每组血管来自5只同批大鼠,分别保留和去除内皮。结果:CEF(0.1-1000mg/L)对去氧肾上腺素(PE)预收缩的血管环具有浓度依赖的舒张作用,内皮去除前后最大舒张效率Emax分别为78.68%±6.03%和64.98%±13.90%,该舒张作用为非内皮依赖性(P0.05)。钾通道阻断剂格列苯脲(Glib,10μmol/L)、四乙基氯化铵(TEA,3mmol/L)、氯化钡(BaCl2,100μmol/L)和鸟苷酸环化酶抑制剂1H-[1,2,3]恶二唑[4,3-a]喹喔啉-1-酮(ODQ,10μmol/L)预处理不能抑制CEF对去除内皮血管的舒张效应;CEF对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)、前列腺素F2α(PGF2α)、多巴胺(Dopa)、血管加压素(Vaso)、五羟色胺(5-HT)和PE诱发的血管收缩均具有明显的抑制作用(P0.01),抑制率分别为91.31%、82.11%、95.32%、90.53%、72.22%和83.63%。CEF对无钙液中PE引起的内钙释放和无钙高钾液中Ca2+收缩曲线均有显著的抑制作用(P0.01)。结论:CEF具有舒张血管作用,其机制可能与抑制外钙内流和胞质内钙释放干扰胞质内钙离子平衡有关。     

P53-mediated G1/S checkpoint dysfunction in lymphocytes from Alzheimer's disease patients

To date, Alzheimer disease (AD) is still difficult to be diagnosed in its earliest stage. The cell cycle aberrations may be the earliest neuropathological events detected in AD thus far. The cell cycle regulatory failure in AD occurring at “G₁/S transition checkpoint” which is mediated by the tumor suppressor protein p53 has been identified. Herein, we observed the response of activated lymphocytes to G₁/S transition blocker to assess the G₁/S checkpoint function and the p53 conformation state adopted in lymphocytes from AD patients and healthy non-AD controls. We found that the activated lymphocytes from AD patients were less sensitive to G₁/S transition blocker than those from controls, indicating that the G₁/S checkpoint failed to function well in AD lymphocytes. In addition, AD cells specifically expressed an anomalous conformationally mutant-like p53 that made these cells distinct from lymphocytes of controls. We speculated that the altered conformational p53 probably be responsible for G₁/S checkpoint dysfunction in AD cells. Our hypothesis was supported by the results that G₁/S checkpoint dysfunction was not restricted to neurons in AD patients, but also occurred in peripheral lymphocytes. Two potential biomarkers were indicated in blood lymphocytes from AD patients: the G₁/S checkpoint dysfunction and the conformationally mutant-like p53 protein.     

β2肾上腺素受体拮抗剂对大鼠心肌梗死后心肌细胞胞浆游离Ca2+浓度的影响

目的：观察β2肾上腺素受体拮抗剂对心肌梗死后心肌细胞胞浆游离Ca2+浓度(［Ca2+］i)的影响。 方法： 结扎冠状动脉，复制大鼠心肌梗死模型。随机分为心肌梗死后2、4、8周组，正常对照组作假手术。分离大鼠心肌细胞，每组大鼠制备20份样品，再随机分为4小组，分别给予β2受体拮抗剂ICI118,551、β1受体拮抗剂阿替洛尔、非选择性β受体拮抗剂普萘洛尔后，用Fura-2荧光技术测定心肌细胞［Ca2+］i。 结果： 心肌梗死后4、8周，ICI118,551组心肌细胞［Ca2+］i增幅显著低于异丙肾上腺素组(24.5%±5.7% vs 57.8%±13.2%, P<0.01; 12.2%±7.9% vs 44.6%±11.3%,P<0.01)；正常对照组和心肌梗死后2周，上述两组心肌细胞［Ca2+］i增幅无显著差异(P>0.05)。正常对照组和心肌梗死后2周，阿替洛尔组心肌细胞［Ca2+］i增幅显著低于异丙肾上腺素组(P<0.05)；正常对照组及心肌梗死后2、4、8周,普萘洛尔组心肌细胞［Ca2+］i增幅均显著低于异丙肾上腺素组（P<0.05）。 结论： β2受体拮抗剂对于有效抑制心肌梗死后交感神经激动引起的心肌细胞内钙超载可能起重要作用。     

白藜芦醇经蛋白激酶G影响豚鼠心室肌细胞L-型钙通道

目的： 研究白藜芦醇经蛋白激酶G对正常豚鼠心室肌细胞L-型钙电流（I_Ca-L）的影响。 方法： 采用全细胞膜片钳技术,记录给予白藜芦醇前后I_Ca-L的变化，并分别记录给予蛋白激酶G（PKG）特异性激动剂8Br-cGMP(100 μmol·L^-1)、PKG特异性拮抗剂H8（5 μmol·L^-1）后白藜芦醇对I_Ca-L的影响。 结果： （1）白藜芦醇呈浓度依赖性抑制I_Ca-L，1、50、100 μmol·L^-1可使ICa-L峰值分别低18.31%±0.68％，56.20%±2.19％，84.51%±2.52％(n=5,P<0.05),但对I_Ca-L激活电位、峰电位、反转电位均没有影响；（2） 100 μmol·L^-1 8Br-cGMP轻度抑制I_Ca-L，电流密度低10.50%±1.11％，100 μmol·L^-1 8Br-cGMP+50 μmol·L^-1白藜芦醇使I_Ca-L电流密度降低87.58%±3.49％(n=6,P<0.05)；（3）5 μmol·L^-1 H8对I_Ca-L无影响，5 μmol·L^-1 H8+50 μmol·L^-1白藜芦醇对I_Ca-L无抑制作用。 结论： 白藜芦醇浓度依赖性抑制豚鼠心室肌细胞I_Ca-L，此作用机制可能与PKG激活有关。     

Differential distribution of γ-aminobutyric acidA, receptor subunit (α1, α2, α3, α5 and β2+3) immunoreactivity in the medial prefrontal cortex of the rat

A detailed mapping of the γ-aminobutyric acid (GABA)_A receptor subunits (α₁, α₂, α₃ and β₂₊₃) in the infralimbic/ventral prelimbic region (IL/vPL) of the rat frontal cortex was carried out using subunit-specific antibodies. The α₁ and β₂₊₃ subunit antibodies immunostained all layers of the IL/vPL region. Layers II and III displayed immunostaining of cell bodies whereas I, V and VI showed predominantly neuropil staining. The size of the α₁-positive cell bodies corresponded to that of small interneurons (range, 20–55 μm²; mean ± SEM, 37 ± 5.5 μm²) as well as pyramidal cells or large interneurons (range, 87–135 μm²; mean ± SEM, 103.4 ± 9.7 μm²). However, β₂₊₃ antibody immunostained only small cell bodies. Immunoreactivity for α₂ was restricted to layers I and II, whereas α₃ and α₅ subunit expression was seen only in layer VI. The antibody to the α₂ subunit immunostained small cell bodies (range, 29–63 μm²; mean ± SEM, 32 ± 4.5 μm²) in layer II, resembling interneurons. Conversely, both α₃ and α₅ antibodies immunostained large cell bodies (range, 94–151 gmm²; mean ± SEM, 115.7 ± 13.4 μm²), consistent with pyramidal cell labelling in layer VI.     

H2S通过cAMP介导PI3-K/Akt/P70S6K通路抑制缺氧/复氧后神经元的凋亡

目的: 研究H₂S对缺氧/复氧后神经元存活信号转导通路PI₃K/Akt/P70S6K的影响。方法: 取96孔和6孔培养板上培养7 d的海马神经元，正常培养组（C组）神经元按正常培养方法培养。NaHS组在进行缺氧/复氧时加入NaHS使其终浓度为150 μmol/L。Tri组、Rap组和Tri+Rap组在加入150 μmol/L NaHS的同时分别加入triciribin 10 μmol/L、rapamycin 10 nmol/L或triciribin 10 μmol/L+rapamycin 10 nmol/L。96孔培养板的神经元进行细胞存活力的检测。6孔培养板的神经元进行神经元纯度鉴定、神经元凋亡、cAMP和PI₃-K、Akt和P70S6K蛋白表达的检测。结果: NaHS显著增加了cAMP的浓度和PI₃、Akt、P70S6K蛋白的表达，同时增加了神经元存活率、降低了神经元凋亡率（P<0.01 vs C组和A/R组）。Triciribin抑制了Akt和P70S6K表达同时降低了神经元存活率、升高了神经元凋亡率（P<0.05,P<0.01 vs NaHS组）。Rapamycin抑制了P70S6K表达同时降低了神经元存活率、升高了神经元凋亡率（P<0.05,P<0.01 vs NaHS组）。结论： H₂S通过cAMP激活了PI₃K/Akt/P70S6K信号通路，抑制缺氧/复氧后海马神经元的凋亡。