栀子抑制小鼠S180和肝癌及促进小鼠肝癌细胞凋亡作用

目的 探讨栀子提取物对荷瘤小鼠S180肉瘤和肝癌的抑瘤作用及肿瘤凋亡相关基因蛋白bcl-2表达以及细胞凋亡的作用.方法 分别采用荷瘤小鼠S180肉瘤和肝癌模型,灌胃栀子提取物10g·(kg·d)-1,qd×10d;观察瘤重和肿瘤抑瘤率,以及用酶联免疫分析法检测肝癌小鼠血清肿瘤凋亡相关基因蛋白bcl-2含量及用流式细胞仪检测肿瘤细胞凋亡情况.结果 栀子提取物能抑制荷瘤小鼠S180肉瘤和肝癌的增重(P＜0.01),抑瘤率分别为44.8%和61.0%;下调荷瘤小鼠肝癌模型血清肿瘤凋亡相关基因bcl-2表达(P＜0.01),小鼠肝癌细胞凋亡率为52.6%.结论 栀子提取物对荷瘤小鼠S180肉瘤和肝癌有抑制作用,抑瘤作用机制是下调肿瘤凋亡相关基因bcl-2表达,从而诱导小鼠肝癌细胞凋亡.     

栀子抑制小鼠S_(180)和肝癌及促进小鼠肝癌细胞凋亡作用

目的探讨栀子提取物对荷瘤小鼠S_(180)肉瘤和肝癌的抑瘤作用及肿瘤凋亡相关基因蛋白bcl-2表达以及细胞凋亡的作用。方法分别采用荷瘤小鼠S_(180)肉瘤和肝癌模型,灌胃栀子提取物10g·(kg·d)~(-1),qd×10d;观察瘤重和肿瘤抑瘤率,以及用酶联免疫分析法检测肝癌小鼠血清肿瘤凋亡相关基因蛋白bcl-2含量及用流式细胞仪检测肿瘤细胞凋亡情况。结果栀子提取物能抑制荷瘤小鼠S_(180)肉瘤和肝癌的增重(P＜0．01),抑瘤率分别为44．8%和61．0%;下调荷瘤小鼠肝癌模型血清肿瘤凋亡相关基因bcl-2表达(P＜0．01),小鼠肝癌细胞凋亡率为52．6%。结论栀子提取物对荷瘤小鼠S_(180)肉瘤和肝癌有抑制作用,抑瘤作用机制是下调肿瘤凋亡相关基因bcl-2表达,从而诱导小鼠肝癌细胞凋亡。     

内皮抑素基因腺病毒联合化疗治疗小鼠Lewis肺癌

目的:研究腺病毒介导的小鼠内皮抑素基因联合化疗对肺癌的综合治疗作用.方法:利用病毒重组技术将内皮抑素基因克隆入增殖缺陷型腺病毒基因组中,构建携带内皮抑素基因的重组腺病毒Ad-mES,复制小鼠Lewis肺癌的动物模型,随机分成4组,每组10只:化疗组,皮下隔日注射环磷酰胺150 mg/kg,共3次;基因治疗组,一次性瘤内多点注射6×1010 pfu/ml的Ad-mES病毒纯化液100 μl;基因联合化疗组,Ad-mES病毒纯化液联合环磷酰胺,剂量同上;对照组,以0.9%生理盐水100 μl替代环磷酰胺.定期测量各组肿瘤体积,采用Western印迹分析检测基因转导后肿瘤组织中内皮抑素的表达,应用免疫组化法检测肿瘤微血管密度(MVD),观察内皮抑素基因对肿瘤血管生长的抑制作用.结果:构建了表达内皮抑素的重组腺病毒载体Ad-mES;各治疗组荷瘤C57BL/6小鼠肿瘤生长抑制明显,以基因联合化疗组尤为显著(P＜0.01);基因治疗组和基因联合化疗组MVD与对照组和化疗组相比差异显著(P＜0.05).基因治疗过程中未见明显不良反应,且荷瘤鼠生存期明显延长,以联合治疗组为著(P＜0.05).结论:所构建的Ad-mES重组腺病毒载体可有效表达具有生物学活性的内皮抑素;并能减少肿瘤内微血管生成、减慢肿瘤增殖、延长生存期.     

莪术油抗小鼠结肠癌效应的实验研究

目的 探讨莪术油对小鼠结肠癌抑制作用及机制。方法 采用MTT法检测莪术油对癌细胞的生长抑制作用；建立荷瘤鼠模型，观察荷瘤鼠的肿瘤大小及生存时间；TUNEL法检测原位细胞凋亡。结果 莪术油体外可明显抑制小鼠CT26结肠癌细胞生长，其浓度与细胞生长抑制率成正比；莪术油明显抑制肿瘤生长（P〈0．05）；莪术油组对荷瘤鼠明显延长平均生存时间（P〈0．05）；莪术油明显促进荷瘤鼠结肠癌细胞的原位凋亡（P〈0．05）。结论 莪术油能够诱导机体抗肿瘤反应，促进细胞凋亡可能是其主要作用机制。     

槲皮素抗小鼠P388白血病的作用

目的：研究槲皮素抗小鼠P388白血病的作用。方法：采用DBA／2小鼠腹腔注射P388细胞的方法建立白血病小鼠模型，80只小鼠随机分为空白对照组、溶剂对照组、高剂量槲皮素组、低剂量槲皮素组，每组20只。于第7天末次给药后每组小鼠随机抽取10只处死，收集腹水分别计数，观察腹水细胞荧光形态变化，分析细胞周期及细胞凋亡率，观察骨髓涂片及心、肝、脾、肾的组织病理学改变。观察记录其它小鼠一般情况及生存期。结果：给予槲皮素的两组小鼠平均生存期较两对照组显著延长（P〈0．05），且高剂量组小鼠平均生存期较低剂量组显著延长（P〈0．05）。在第7天处死小鼠后，高剂量组小鼠无肉眼可见腹水。低剂量组小鼠腹水细胞的密度显著减小，G0-G1期细胞比例减少，S期细胞比例增加，细胞凋亡率显著升高（P〈0．05）。各组小鼠骨髓涂片及心、肝、脾、肾组织病理切片未见明显异常。结论：槲皮素对P388白血病小鼠有延长生存期及抑制腹水细胞增殖和诱导腹水细胞凋亡的作用。     

微量元素硒对HL—60细胞凋亡的诱导及bcl—2／bax基因的表达调控

目的：研究微量元素硒诱导人类白血病细胞凋亡的作用及其相关的基因调控。方法：体外培养人急性早幼粒白血病细胞（HL－60）,加入硒使其终浓度分别为0、0．1μg/ml、1μg/ml、2μg/ml,作用48h后收集细胞,分别作形态学观察、DNA琼脂糖凝胶电泳、流式细胞光度计分析、TUNEL及bcl-2/bax基因蛋白表达的细胞化学检测。结果：上述多项指标的分析结果均证明元素硒能诱导癌细胞凋亡。通过流式细胞光度计检测到对照组、0．1μg/ml、1μg/ml、2μg/ml加硒组的凋亡百分率分别为4．43％、8．36％、37．91％、63．47％。这说明浓度为0．1μg/ml的硒没有明显的诱导癌细胞凋亡的作用,而浓度为1μg/ml、2μg/ml时凋亡细胞显著增多并呈剂量依赖关系。随着凋亡细胞的增多,bcl-2基因表达相应减弱,而bax基因表达相应增强。结论：微量元素硒可诱导HL－60细胞凋亡,并且呈剂量依赖关系,凋亡的发生受bcl-2/bax基因调控。     

RNA 干扰bcl-2基因对人卵巢癌细胞株SKOV3增殖影响的实验研究

目的探讨RNA干扰bcl-2基因对人卵巢癌细胞体外增殖及凋亡的调控作用.方法选用人卵巢癌细胞进行体外培养,以siRNA分别处理SKOV3细胞24～72h后,MTT法检测细胞增殖,SABC免疫组织化学法检测细胞内bcl-2、bcl-xl、bax、caspase-3蛋白表达水平.结果 RNA干扰bcl-2基因对SKOV3细胞增殖有抑制作用.bcl-2表达下调,Caspase-3蛋白表达水平上调.结论 RNA干扰bcl-2对人卵巢癌细胞的增殖具有明显的抑制作用.下调bcl-2的表达,上调Caspase-3蛋白表达水平.特异性地降解抗凋亡基因bcl-2的mRNA是其作用机制.     

IL－2治疗微小残留白血病的动物实验研究

本研究建立了小鼠Ｌ７８１１微小残留白血病模型，观察了白细胞介素２（ＩＬ－２）对该模型鼠的疗效。给接种Ｌ７８１１淋巴白血病细胞并已发病的６１５小鼠注射环磷酰胺治疗，小鼠生存期虽延长，但最终均死于白血病复发。用生存期推测经环磷酰胺治疗后４８小时，小鼠体内残留白血病细胞数约为１０３个，可作为小鼠微小残留白血病模型。模型鼠经－２治疗后，平均生存期明显延长．     

反义bcl-2基因抗白血病作用的研究

目的 研究反义bcl-2基因抗白血病作用及其特点,探讨反义基因或联合药物体外净化和治疗白血病可行性。方法 （1）RT－PCR和蛋白印迹方法检测HL－60、U937、K562、CEM白血病细胞株以及常见白血病类型的bcl-2 mRNA和P26蛋白表达情况。（2）选择高表达bcl-2基因的HL－60细胞株作为靶细胞,用人工合成bcl-2正反义硫代寡聚脱氧核苷酸（PS－ODN）体外培养处理。检测bcl-2 mRNA和P26蛋白的变化;DNA梯形分析细胞凋亡,锥虫蓝拒染法和克隆培养观察细胞生长;同时将HL－60细胞与PS－ODN培养孵育7天后的活细胞腹腔接种Scid鼠,半巢式RT－PCR和病理分析该HL－60细胞在体内生物学行为改变。（3）建立三种白血病细胞株CEM、K562、HL－60 Scid鼠白血病模型和有效监测与追踪白血病细胞株的方法,掌握体内白血病细胞株生物学行为;用bcl-2正反义PS－ODN腹腔给药治疗HL－60 Scid鼠白血病模型,观察治疗后体内白血病进展变化。（4）用RT－PCR方法克隆bcl-2基因和构建其两种不同的反义RNA逆转录病毒表达载体。（5）转染高表达bcl-2的HL－60细胞,比较两种反义RNA在对抗bcl-2的作用与降低内源性bcl-2蛋白水平上的异同性。观察两种反义RNA介导的靶基因抑制对烷化溶血磷脂（ALP）和四种化疗药物诱导的HL－60细胞凋亡的影响。（6）RT－PCR检测基因转染HL－60在化疗药物作用下FGFβ1表达。结果 （1）白血病细胞株表达bcl-2有差异,bcl-2 mRNA和它的P26蛋白不平行。（2）三种白血病细胞株HL－60,K562,CEM可在Scid鼠增殖,产生典型白血病浸润模型特征,白血病增殖和浸润程度与白血病细胞生物特性有关,其顺序为CEM＞K562＞HL－60。（3）人工合成的bcl-2反义硫化寡脱氧核苷酸（ASPO）能够下调HL－60细胞bcl-2表达,诱导凋亡,抑制增殖和克隆形成;同时使其失去在体内的致白血病能力。（4）bcl-2反义硫代寡脱氧核苷酸,腹腔给药能够抑制肿块增长,白血病扩张,延长Scid鼠生存期,呈剂量依赖性。（5）部分编码区的反义RNA能够降低HL－60细胞内源性Bcl-2蛋白水平,提高ALP和四种化疗药物对HL－60杀伤率,促进它们诱导的HL－60细胞凋亡。（6）反义基因转染的HL－60细胞在化疗药物作用下负调控因子TGFβ1基因表达增加。结论 bcl-2反义基因可有效对抗bcl-2原癌基因表达,发挥明显的抗白血病作用,为体外净化白血病细胞和体内治疗白血病提供依据。     

肠生态制剂诱导H22细胞凋亡的实验研究

目的探讨肠生态制剂抑制肿瘤的作用机制。方法对荷H22腹水癌小鼠化疗前后分别给予双歧杆菌、地衣芽孢杆菌及两者联合应用，流式细胞仪检测H22腹水细胞凋亡，MTT法检测癌细胞死亡比值。结果双歧杆菌、地衣芽孢杆菌对比腹水癌细胞具有杀伤和促进凋亡的作用，并可延长荷瘤小鼠生存天数。上述作用两者联合较单独应用明显增强。结论肠生态制剂可增加化疗药物诱导H22腹水癌细胞凋亡，延长小鼠生存期，联合应用好于单独应用。