小活络丸的免疫抑制、抗氧化及抗炎镇痛作用

背景：小活络丸具有祛风除湿、活络通痹等功效，用于治疗风寒湿痹、肢体疼痛，麻木拘挛等症。目的：观察小活络丸对小鼠再次免疫应答、特异性免疫（包括细胞免疫和体液免疫）、非特异性免疫（包括补体C3、单核-巨噬细胞系统和红细胞黏附功能）和自由基损伤，以及对疼痛及多种炎症模型的药理作用。设计：随机对照，分层实验。单位：广州市中医中药研究所和广州市中医医院药剂科。材料：选用NIH小鼠和ICR小鼠共628只，鼠龄6～8周。小活络丸（成分：胆南星、制川乌、制草乌、地龙、乳香（制）等；广州陈李济药厂生产，生产批号：19980612）。兔抗小鼠IgG和补体C，抗血清试剂盒，由广州市医药卫生研究所药物室提供；超氧化物歧化酶活性和丙二醛含量测定试剂盒，南京建成生物工程研究所产品。方法：实验于1998-09／1999—12在广州市中医中药研究所药理研究室和广州市医药卫生研究所药物研究室动物室完成。①观察小活络丸抑制鸡红细胞诱导小鼠再次免疫应答作用：取ICR小鼠84只，雌雄各半，取出20只作为空白对照组；其余均腹腔注射环磷酰胺0.2g/k，1次／d，1d。第4和12天，共2次腹膜内注射鸡红细胞诱导免疫增强病理模型探讨再次免疫应答。空白对照组（20只）腹腔注射等量生理盐水；动物于加强免疫后．按随机抽签法分为3组：环磷酰胺组20只（灌胃环磷酰胺40mg/kg），小活络丸组21只（灌胃小活络丸混悬液5．54g/kg），模型组20只（灌胃等量蒸馏水）；均1次／d，连续灌胃给药7d。19d后分别按单向免疫扩散法测定血清IgG，补体C3含量，采用聚乙二醇沉淀法测定循环免疫复合物含量变化：②观察小活络丸抑制小鼠迟发型超敏反应作用：取ICR小鼠54只，雌雄各半。第1天皮下注射10g/L2,4-二硝基氟苯50μL／只致敏，第4天，将处理后动物按随机抽签法分为3组：泼尼松组（灌胃泼尼松0．01g/kg），小活络丸组（灌胃小活络丸混悬液5．54g/kg），模型组（灌胃等量蒸馏水），每组18只。均1次／d，连续灌胃给药7d。11d后各组小鼠均涂10异／L2，4-二硝基氟苯25μL／右耳，24h后计算肿胀度（右、左耳质量差值）。③观察小活络丸抑制小鼠红细胞免疫黏附功能：取NIH小鼠36只，雌雄各半，按随机抽签法分为3组：环磷酰胺组（灌胃环磷酰胺20mg／kg），小活络丸组（灌胃小活络丸5．54g/kg），空白对照组（灌胃等量蒸馏水），每组12只。均1次／d．连续灌胃给药7d。7d后取小鼠眼眶血，计算红细胞C3b受体花环率和红细胞免疫复合物花环率。④观察小活络丸抑制小鼠碳粒廓清作用：取ICR小鼠33只，雌雄不拘，将其按随机抽签法分为3组：泼尼松组（灌胃泼尼松20mg/k），小活络丸组（灌胃小活络丸混悬液5．54异／kg），空白对照组（灌胃等量蒸馏水）；均1次／d，连续灌胃7d。于给药第7天末次给药后2h，进行碳粒廓清试验，计算廓清指数K（K值=（LogA1-LogA2）／（T2-T1），式中A1和A2分别表示2和10min所取血样的吸光度，正和疋表示给碳粒后5和10min取血时间；以K值高低，评价碳粒廓清作用。⑤观察小活络丸对鸡红细胞免疫小鼠溶血素．C3和丙二醛含量及超氧化物歧化酶活性的影响：取ICR小鼠80只，雌雄各半，取20只小鼠作为空白对照组，其余均腹腔注射2&;#215;10^8-鸡红细胞15mL／kg作免疫诱导，空白对照组均以等量生理盐水代替鸡红细胞，灌胃蒸馏水，1次／d，连续灌胃7d。按随机抽签法将免疫处理的动物分为3组：免疫对照组（灌胃给予蒸馏水），环磷酰胺组（灌胃环磷酰胺20mg／kg），小活络丸组（灌胃小活络丸混悬液5．54g／kg）；均1次／d．连续灌胃7d；于第7天末次给药后2h，计算IgM型溶血素半数溶血值[（样品吸收度／鸡红细胞半数溶血时的吸收度）&;#215;稀释倍数1。按相应试剂盒操作说明书方法测定血清C3含量及丙二醛含量和超氧化物歧化酶活性。⑥观察小活络丸抑制小鼠琼脂肉芽组织增生作用：取NIH小鼠59只，皮下注射20g／L琼脂0．5mL／只，24h后，按随机抽签法分为3组：双氯芬酸组（灌胃双氯芬酸10mg/kg），小活络丸组（灌胃给予小活络丸混悬液5．54g／kg）．模型组（灌胃等量蒸馏水）；均1次／d，连续灌胃给药7d；第8天处死小鼠，以每千克体质量琼脂肉芽克数表示抑制增生作用。⑦观察小活络丸抑制小鼠醋酸性扭体反应作用：取NIH小鼠63只，按随机抽签法分为3组：双氯芬酸组（灌胃双氯芬酸50mg／k），小活络丸组（灌胃小活络丸混悬液5．54g／k），模型组（灌胃等量蒸馏水）；均1次／d，连续灌胃给药2d。末次给药后2h，腹腔注射0．1mol／L醋酸0．2mL／只，计数20min内小鼠的扭体次数。⑧观察小活络丸对二甲苯、巴豆油和角叉菜胶诱发急性渗出性炎症及炎症渗出液中前列腺素E含量的影响：取NIH小鼠219只，双氯芬酸组（灌胃双氯芬酸50mg／k），小活络丸组（灌胃小活络丸混悬液5．54g/kg），模型组（灌胃等量蒸馏水）；均1次／d，共2d。末次给药后2h．①涂二甲苯25μL／右耳，20min后；②涂巴豆油25μL／右耳，4h后；计算耳肿胀度（右耳片重-左耳片重）。②用10g／L角叉菜胶20μL／右足皮内注射致炎，3h后，计算肿胀度（右足和左足间重量差值）；并测致炎足渗出液中前列腺素E含量。组间计量资料差异比较采用t（方差不齐用t’）检验。主要观察指标：小活络丸对小鼠再次免疫应答．特异性免疫．非特异性免疫和自由基损伤，以及对疼痛及多种炎症模型的药理作用一结果：NIH小鼠和ICR小鼠628只均进入结果分析。④模型组小鼠IgG．循环免疫复合物含量明显高于其他3组（P〈0．01），C3含量明显低于其他3组（P〈0．05～0．01）：②泼尼松组和小活络丸组小鼠耳肿胀度明显低于空白对照组（P〈0．01）：③空白对照组红细胞C3b受体花环率明显高于其他2组（P〈0．01），红细胞免疫复合物花环率明显低于其他2组（P〈0．01）。④泼尼松组和小活络丸组吞噬指数（K值）明显低于空白对照组（P〈0．01）。⑤环磷酰胺组和小活络丸组IgM型溶血素半数溶血值和血清丙二醛含量明显低于免疫对照组（P〈0．01），C3含量明显高于免疫对照组（P〈0．01），血清超氧化物歧化酶活力与免疫对照组比较，差异不明显（P〉0．05）：⑥双氯芬酸组和小活络丸组小鼠琼脂肉芽组织质量与体质量比值明显低于模型组（P〈0．01）。⑦双氯芬酸组和小活络丸组小鼠20min内扭体次数明显少于模型组（P〈0．01，0．05）。⑧双氯芬酸组二甲苯炎症模型和巴豆油炎症模型耳肿胀度、角叉菜胶急性炎症模型足肿胀度、炎症渗出液中前列腺索E含量明显小于或低于模型组（P〈0．05～0．01），小活络丸组炎症渗出液中前列腺素E含量明显低于模型组（P〈0．01）：结论．小活络丸既有免疫抑制的药理作用，又有抗增殖性炎症、镇痛、抗氧化药效学效应。     

补阳还五汤治疗大鼠佐剂性关节炎作用

目的探讨补阳还五汤对佐剂性关节炎（从）大鼠动物模型治疗作用的影响。方法给关节炎大鼠注射Freud＇s完全佐剂诱导13d后,当其右足趾出现肿胀而发生继发性免疫炎症反应时．将大鼠随机分成三组：阴性对照组．阳性对照尼美舒利加药组及试药组补阳还五汤（方剂组成：黄芪、赤芍、桃仁、红花、地龙及当归和川芎蒸馏所得挥发油的渗滤液）。所有大鼠在出现炎症性足29d后,均经胃每天给予蒸馏水或药物,共诱导15d;测量肿胀足跖的厚度以及病鼠血清中的白介素1（IL-1）,循环免疫复合物（CIC）,丙二醛（MDA）含量并检测超氧化物岐化酶（SDD）的活性。结果与模型组相比,补阳还五汤能抑制大鼠足肿胀的程度（P〈0．05）,同时降低免疫调节因子IL-1,CIC,MDA的含量（P〈0．05）,相反地,原本低下的SOD活性显著提高（P〈0．01）。因此,补阳还五汤和尼美舒利在抗关节炎的作用上有相关性。结论Freud＇s完全佐剂能诱导AA大鼠发生迟发性超敏反应的免疫病理损伤,补阳还五汤和尼美舒利对从大鼠的炎症具有抑制作用,两者都能调节大鼠的自身免疫情况并能减少与其调节免疫自由基损伤。     

葛根降低D-gal诱导大鼠血糖和改善糖耐量减退的作用

目的:研究葛根、二甲双胍及水飞蓟宾对D-半乳糖诱导大鼠糖耐量减退(IGT)的影响.方法:腹腔注射D-半乳糖150mg/kg,每天1次,连续56d,诱导胰岛素抵抗(IR)的IGT大鼠模型;观察口服葛根、二甲双胍和水飞蓟宾对病鼠空腹血糖和口服葡萄糖耐量试验(OGTT)后2h血糖含量的效应.结果:二甲双胍组和水飞蓟宾组与模型组比较,空腹血糖均未见明显影响,差异未见显著性(P＞0.05);而葛根组与模型组的空腹血糖差异有显著性(P＜0.05).OGTT后2h血糖,模型组明显高于空白对照组(P＜0.01),说明D-半乳糖致大鼠IGT模型成立.葛根组、二甲双胍组和水飞蓟宾组均能抑制OGTT后2h血糖的升高,差异有显著性(P＜0.01),说明各药均能改善D-半乳糖致IR模型大鼠的IGT.结论:D-半乳糖可诱导以IGT为表现的IR,葛根与二甲双胍和水飞蓟宾均能改善D-半乳糖诱导IR大鼠的糖耐量.     

甘草酸对D-半乳糖诱导大鼠醛糖还原酶活性的抑制

目的：观察氨基胍甘草酸对D-半乳糖诱导大鼠体内醛糖还原酶活性、糖耐量和蛋白非酶糖基化反应的作用。 方法：实验于2005-06／2005-09在暨南大学药学院药理教研室实验室完成。选用6周龄清洁级SD大鼠60只，雌雄各半，取15只为正常对照组，腹腔注射生理盐水，1次／d，持续8周；其余大鼠均采用腹腔注射D-半乳糖150mg／kg，1次／d&;#215;8周致病。D-半乳糖处理大鼠2周后，将大鼠按体质量均衡数字表法随机分成模型对照组、氨基胍组和甘草酸组3组，然后继续腹腔注射D-半乳糖处理同时灌胃给予蒸馏水、氨基胍和甘草酸（浓度均为30g／L）300mg／kg灌胃，1次／d&;#215;6周；实验结束时，观察氨基胍和甘草酸对D-半乳糖诱导大鼠体内醛糖还原酶活性、糖耐量和蛋白非酶糖基化反应的作用。 结果：实验动物60只全部进入结果分析，没有有脱失。①与正常对照组比较，D-半乳糖处理大鼠出现糖耐量减退、糖基化产物（包括糖化血红蛋白、果糖胺和晚期糖基化终产物）增高以及红细胞内醛糖还原酶活性增强（P〈0．01）。②氨基胍组与模型组比较，2h血糖显著降低，可拮抗D-半乳糖诱导的糖耐量减退（P〈0．01）；甘草酸对糖耐量减退也有一定的改善作用，但差异未见显著性意义（P〉0．05）。③氨基胍和甘草酸，均可抑制D-半乳糖诱导的醛糖还原酶活性增高（P〈0．01，0．05）；氨基胍能明显降低果糖胺，糖化血红蛋白和晚期糖基化终末产物含量，差异均有非常显著性意义（P〈0．01）；甘草酸则对果糖胺，糖化血红蛋白和晚期糖基化终末产物含量的影响不大，差异均未见显著性意义（P〉0．05）。 结论：氨基胍和甘草酸均能抑制D-半乳糖诱导大鼠体内增高的醛糖还原酶活性，氨基胍对D-半乳糖诱致的大鼠糖基化反应具有明显的抑制作用，祈甘草酸对大鼠糖基化反应末见抑制作用.     

知柏地黄丸对抑那通诱导特发性性早熟小鼠模型的干预作用

目的观察知柏地黄丸对抑那通诱导的特发性中枢性性早熟（ICPP）模型小鼠的影响。方法选用18日龄BALB／c雌性小鼠，随机分为5组：正常对照组，ICPP模型组，知柏地黄丸高、低剂量组（剂量分别为101．4g·kg^-1·d^-1、50．7g·kg^-1·d^-1）。甲地孕酮对照组（剂量为3．9mg·kg^-1·d^-1）；除正常对照组外，其他各组均给予促性腺激素释放激素拟似物抑那通，首次剂量为1573．5雌／kg，第2次、第3次剂量均为1180μg／kg，隔日1次，复制模型；检测各组小鼠阴道开口数，体重，血清雌二醇（E2）和黄体生成素（LH）水平，子宫、卵巢重量，计算子宫指数和卵巢指数，子宫和阴道脱落细胞涂片，卵巢组织病理学变化等。结果知柏地黄丸高剂量组于造模第3_4天对抑那通所致阴道开口提前有抑制作用（P〈0．05，P〈0．01），知柏地黄丸低剂量组于造模第2-5天对抑那通所致阴道开口提前有抑制作用（均P〈0．05，P〈0．01），甲地孕酮对照组于造模第3天对抑那通所致阴道开口提前有抑制作用（P〈0．05）；知柏地黄丸高剂量组可降低抑那通所致子宫重量增加（P〈0．05），知柏地黄丸低剂量组及甲地孕酮对照组均可降低抑那通所致子宫、卵巢重量增加及子宫指数和卵巢指数的升高（P〈0．01）；高、低剂量的知柏地黄丸及甲地孕酮均有抑制抑那通降低E2水平的作用（P〈0．05，P〈0．01），各给药组对抑那通升高LH水平、诱导阴道角化细胞的出现及排卵后出现的子宫内膜分泌期改变无明显影响。结论知柏地黄丸对抑那通刺激诱导的ICPP模型具有一定的对抗作用，其机制可能是通过抑制HPGA的靶腺（性腺）而起作用。     

葛根素对代谢综合征-高血压大鼠胰岛素抵抗、高血压的干预作用及机制研究

目的观察葛根素（puerarin,Pue）对代谢综合征（MetS）-高血压大鼠胰岛素敏感性、血压、肾素-血管紧张素系统以及糖脂代谢的作用。方法：SD大鼠,♀♂各半,除空白对照组食用标准饲料外,其余动物随机喂饲富含高盐（8%）、高脂肪（25%）和高蔗糖（10%）饲料,连续8周;当造模动物出现高血压、糖耐量减退,即建成MetS-高血压病理模型;然后将大鼠随机分为模型对照、模型咪达普利（imidapril,Imid）7mg·kg-1和Pue300,150,75mg·kg-1三个剂量组;分别灌胃给药或蒸馏水,qd×4周后，测定大鼠血压、空腹血糖（FBG）和口服糖耐量试验2小时血糖（OGTT-2hBG）及血浆胰岛素（Fins）、血糖（FPG），并计算胰岛素敏感性（ISI）以及血清甘油三酯（TG）、胆固醇（TC）、肿瘤坏死因子（TNF）-α、内皮素、肾素和血管紧张索含量。结果：与正常对照组比较，MetS大鼠血压升高、FBG和OGTF-2hBG，FPG和Fins含量增高，ISI减弱，血清TGTC，TNF-Ⅱ和肾素、血管紧张素含量增高（P〈0．05或P〈0．01）。经Pue3（Ihng·kg。或Imid处理MetS大鼠后，血压降低（尸〈0．01），FPGFBGOGTr．2hBG降低和IGT改善（P〈0．05或P〈0．01），纠正高胰岛素血症（尸〈O．05或P〈0．01），增强ISI（P〈O．01），降低TG和TC含量（P〈0．05或P〈0．01），下调内皮素、肾素、血管紧张素和TNF—a含量（P〈O05或P〈0．01），上述观察资料，差异均有显著性；而Pue150mg·kg^-1组，对Fins、TNF—α含量和ISI作用，差异则未见显著性（P〉0．05）；Pue75mg·kg^-1组对上述各指标，差异均未见显著性（P〉0．05）。结论：Pue或Imid对MetS大鼠，能对抗胰岛素抵抗、增强胰岛素敏感性、纠正高胰岛素血症，降低血糖和血脂，拮抗内皮素、肾素．血管紧张素系统，降低血压。葛根素以上效应呈量效关系。     

葛根素对胰岛素抵抗-高血压大鼠胰岛素敏感性的增强作用和降糖降脂作用

目的：观察葛根素对胰岛素抵抗—高血压大鼠血压、血糖、血脂的影响。方法：用喂饲高脂高糖高盐的方法建立胰岛素抵抗．高血压（IRH）病理模型，随机分为模型卡托普利组（Cap）、葛根素注射液（Pue）高、中、低3个剂量组、模型阴性对照组及空白对照组，分别给药后，测定大鼠的血压、血脂、空腹血糖（FBG）及口服葡萄糖耐量试验（OGTT）2h后血糖（2hBG），以及空腹血浆血糖（FPG）和胰岛素含量的变化，并计算胰岛素敏感指数（ISI）。结果：模型组的血压及血糖、血脂、Ins含量均有显著升高，胰岛素敏感指数（ISI）降低（P〈0．05～0．01）；Cap、Pue 80mg／kg和40mg／kg组能降低IRH大鼠血压及OGTY-2hBG、TG、TC和胰岛素含量，并提高ISI（P〈0．05—0．01）。但不影响FPG（P〉0．05）；Pue20mg-／kg组的上述各指标值，与模型阴性对照组比，差异均未见显著性（P〉0．05）。结论：Pue可以有效降低IRH大鼠的血压、血糖，提高胰岛素敏感性，对改善IR有着积极的意义。     

荔枝核颗粒对小鼠EAC、S_(180)及肝癌组织的抑瘤作用的实验研究

目的采用小鼠腋下接种瘤株的方法,建立EAC、S180及肝癌荷瘤小鼠动物模型;并研究荔枝核颗粒对此动物模型实体瘤生长的影响作用。方法小鼠EAC、S180细胞与肝癌细胞混悬液用生理盐水按1:1进行稀释制成含瘤腹水混悬液,在给药前24h,每只小鼠腋窝皮下接种0.2ml/只。整个操作应在无菌条件下60min内完成。荔枝核颗粒对小鼠EAC、S180、肝癌的抑瘤实验连续给药10d。结果荔枝核颗粒能够明显抑制EAC、S180肿瘤和肝癌肿瘤的生长(P<0.01);结论荔枝核具有抑制小鼠EAC、S180、肝癌的作用;