浙江省丽水市狂犬病新发疫区病毒检测及在防制中的应用

目的了解狂犬病毒在疫区犬间的流行状况。方法收集浙江省丽水市198份狂犬病新发疫区犬脑组织标本,用直接免疫荧光试验（DFA）特异性检测狂犬病毒抗原和逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）特异性检测狂犬病毒核酸,确定犬感染狂犬病毒状况。 结果犬脑组织DFA和RT-PCR平行检测阳性的标本13份,阳性率为6.57%（13/198）,其中松阳县9份,占采集标本的69.23%（9/13）,具有攻击人/犬史或者被犬攻击史的疑似狂犬病犬标本10份,占采集标本的76.92%（10/13）。 结论免疫学和分子生物学两种方法平行进行犬狂犬病毒的实验室检测,可以更准确地进行狂犬病的实验室诊断。市民暴露于犬后要及时到所在地狂犬病暴露门诊严格按照国家相关标准及规范正确处理伤口并注射狂犬病疫苗及抗血清或人源免疫球蛋白。建议相关部门加强犬的管理,同时对犬进行全面的狂犬病疫苗免疫接种。     

2006-2008年浙江省松阳县狂犬病流行因素调查

目的研究浙江省松阳县狂犬病的流行因素、流行规律。方法对狂犬病进行个案调查,同时用直接免疫荧光法和RT-PCR方法分别检测疫区234份宿主动物脑组织中的狂犬病毒抗原及核酸确定阳性标本。结果2006-2008年,松阳县共报告2例狂犬病。从234份宿主动物脑组织检测出狂犬病毒抗原阳性标本9份,阳性率为3.85%（9/234）,阳性者全部为犬;犬阳性率为8.26%（9/109）。结论犬只饲养量多,缺乏监管,且犬只免疫率极低,病毒感染率高,暴露后未进行伤口正确处理及免疫接种等是狂犬病发病回升的主要原因。有关部门应加强合作,在现阶段采取切实可行的预防控制策略和措施,遏止疫情的回升势头。     

浙江省丽水山区134份犬脑组织狂犬病病毒抗原检测

目的对浙江省丽水市山区犬脑组织标本进行狂犬病病毒抗原检测,了解犬狂犬病毒感染状况。方法收集丽水市山区狂犬病和疑似狂犬病犬以及外观健康犬脑组织标本134份,用直接免疫荧光试验（DFA）检测狂犬病病毒抗原,确定阳性标本。结果134份犬脑组织标本印片DFA检测9份为阳性,占所检标本的 6.72%（9/134）,其中外观异常并攻击人/犬导致人或犬间疫情的犬脑组织标本8份,均阳性;外观正常犬脑组织标本共126份,1份阳性,阳性率0.79%（1/126）。结论在丽水市首次用免疫学方法进行狂犬病病毒的实验室检测,狂犬病病毒在丽水山区狂犬病疫区的犬间相互传播,犬狂犬病疫情存在扩散的现象。     

云南省禄丰县家犬狂犬病毒带病毒率及阳性犬分布情况的调查

目的 分析云南省禄丰县自然状态家犬狂犬病毒携带阳性率及阳性犬分布情况,为制定狂犬病防制对策提供依据。 方法 2012年3月12 18日在全面扑杀8个自然村疫区的犬只过程中,采犬脑标本检验,调查家犬狂犬病毒携带阳性率,分析阳性犬分布情况;全面扑杀犬只3个月、6个月和1年后开展3次农户恢复养犬情况调查。 结果 8个自然村扑杀1103只家犬,采集犬脑标本542只(份),检测阳性24只,阳性率4.43%,阳性犬呈离散性分布,阳性率最高的自然村达9.09%;全面扑杀犬只1年后养犬户和养犬数分别恢复到扑杀前的80.38%和61.92%,户均养犬恢复到0.56只(扑杀前0.90只)。 结论 禄丰县家犬狂犬病毒带病毒率不高,阳性犬呈离散性分布,阳性率与疫点距离远近不存在比例关系。扑杀后农户恢复养犬较快,犬只来源较为复杂,狂犬病等疫源输入的危险因素增加。 科学抽样监测动物狂犬病带病毒动态,以免误杀健康犬只,可避免大面积扑杀犬只带来的社会慌恐和经济损失。     

江苏省发热伴血小板减少综合征布尼亚病毒血清流行病学调查

目的 调查江苏省人与动物发热伴血小板减少综合征布尼亚病毒(SFTSV)血清流行病学情况,为控制疫情提供流行病学线索。 方法 2010年7-11月在江苏省南京江宁区、溧水县,常州溧阳市,无锡宜兴市,淮安盱眙县和连云港东海县共采集2853份血清,其中人血清1922份、动物(犬、羊、猪、牛、鹅、鼠和鸡)血清931份, 运用双抗原夹心ELISA法检测血清中SFTSV总抗体,并进行不同地区SFTSV总抗体阳性率比较。 结果 本次调查2853份血清样本中SFTSV总抗体阳性血清121份,阳性率为4.24%,提示江苏省存在SFTSV的流行。在7种被调查的动物样本中,5种动物(犬、羊、牛、猪、鸡)血清样本SFTSV总抗体阳性,阳性率分别为6.40%、57.14%、31.82%、5.33%和0.98%;人血清中SFTSV总抗体阳性率为0.94%。血清中SFTSV总抗体阳性率存在地区差异。人群与动物SFTSV血清总抗体阳性率存在正相关关系。 结论 江苏省是SFTSV的流行区域,需加强SFTSV的预防意识及诊断能力。     

多重RT-PCR与毛细电泳联用技术在儿童下呼吸道感染病原体检测中的应用

目的采用多重逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)与毛细电泳联用技术对13种儿童呼吸道常见病原体痰液标本进行检测,研讨其在儿童下呼吸道感染病原体检测中的价值。方法采集2019年12月至2020年1月该院38例因下呼吸道感染住院患儿的痰液标本,应用多重RT-PCR技术检测13种呼吸道病原体,同时采用直接免疫荧光法检测7种常见呼吸道病毒抗原。结果38例下呼吸道感染住院患儿的痰液标本中,多重RT-PCR检出至少一种病原体阳性36份,检出率94.7%(36/38),其中乙型流感病毒检出最多,阳性20例(52.6%),其次检出呼吸道合胞病毒14例(36.8%)阳性,甲型流感病毒H1N1(2009)8例(21.0%)阳性,鼻病毒6例(15.8%)阳性,副流感病毒4例(10.5%)阳性,其中检出2种或2种以上呼吸道病原体混合感染14份,检出率为36.8%(14/38)。选取与直接免疫荧光法(DFA)检测相同的7种病毒进行比较,DFA检出阳性16份,检出率仅有42.1%(16/38),多重RT-PCR阳性检出率高于DFA方法,两种方法病毒阳性检出率差异有统计学意义(P<0.01)。结论多重RT-PCR与毛细电泳联用方法是一种高效快速、高通量、准确的检测技术;同DFA比较特别在流感病毒检测方面具有更高灵敏度,可同时检测更多病原体,能指导临床了解儿童下呼吸道感染病原并进行及时有效治疗。     

上海市儿童下呼吸道感染常见病毒诊断方法比较

目的应用直接免疫荧光法（DFA）和多重逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）对呼吸道感染患儿鼻咽分泌物的常见病毒进行检测,比较2种方法的符合率并评估其临床应用价值。方法选取急性呼吸道感染患儿鼻咽分泌物540例,分别用DFA和多重RT-PCR进行检测,分析其结果。结果 DFA检测阳性率为43.9%（237/540）,多重RT-PCR检测阳性率为55.7%（301/540）,多重RT-PCR阳性检出率显著高于DFA的阳性检出率（χ2=29.093,P〈0.01）。DFA和多重RT-PCR同时阳性163例,DFA阳性而多重RT-PCR阴性74例,多重RT-PCR阳性而DFA阴性138例,DFA和多重RT-PCR同时阴性165例。DFA和多重RT-PCR同时为阳性的163例标本中,有15例标本两者检测结果不一致,符合率为91.0%。结论 DFA快速、简便、特异性及敏感性高,适用于临床检测。多重RT-PCR的敏感性高,检测病毒谱广,且可以做亚型鉴定,适用于呼吸道病毒流行病学的调查。     

联合检测前S1、前S2抗原在乙型肝炎诊断中的意义

目的探讨联合检测前S1(Pre-S1)、前S2(Pre-S2)抗原及DNA在乙型肝炎诊断中的意义。方法采用ELISA双抗体夹心法检测乙肝Pre-S2、Pre-S1抗原阳性及同时阳性标本各100例,并以PCR法检测其DNA含量。结果Pre-S1抗原阳性样本100份中,检测出乙肝DNA阳性85份,检出率85%;Pre-S2抗原阳性样本100份中,检测出乙肝DNA阳性83份,检出率83%;Pre-S1、Pre-S2抗原均阳性样本100份中,检测出乙肝DNA阳性93份,检出率93%,明显高于单一抗原检测(P<0.05)。结论乙肝Pre-S1、Pre-S2抗原与其病毒复制有关,两种抗原同时在同一样本中的检出,可作为判断乙肝病毒复制的可靠依据。     

2010-2012年内蒙古呼和浩特市儿童轮状病毒腹泻病监测分析

目的 研究呼和浩特地区5岁以下儿童腹泻轮状病毒(Rotavirus, RV)的流行病学特征及病毒基因亚型特点。 方法 采集内蒙古妇幼保健医院2010年7月至2012年6月所有≤59月龄的住院腹泻患儿粪便标本789份。采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测RV,抗原阳性标本以反转录-聚合酶链反应 (RT-PCR)方法做基因亚型检测。最后整理数据,应用SPSS 13.0统计软件进行统计分析。 结果 共检测789份粪便标本,ELISA法检出阳性288份,阳性率为36.50%。轮状病毒腹泻的主要流行月份为10月至次年2月,12~23月龄组感染率最高为50.00%,2岁以下患儿占全部患儿总数的95.83%。轮状病毒G血清亚型检测中,2010 2011年以G3亚型为主,占37.6%,2011 2012年以G9亚型为主,占67.3%;轮状病毒P基因亚型检测中,2010 2012年以P[8]亚型为主。 结论 轮状病毒是引起呼和浩特地区婴幼儿腹泻的主要病原之一,流行优势毒株发生了从G3到G9的转变。     

一起新生儿病毒性腹泻病原学分析

目的　查明引起新生儿病毒性腹泻疫情的病原并对其进行分子生物学特征分析。方法　采用金标法检测轮状病毒抗原，采用乳胶凝集法 检测腺病毒；通过聚丙烯酰胺凝胶电泳（PAGE）检测粪便样品中的轮状病毒核酸；利用逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）检测肠道病毒和扩增轮 状病毒VP7基因并测序；利用DNAstar和Blast软件对测序结果进行分析。结果　11份样品中，金标法检测到轮状病毒阳性样品9份，阳性率为81 .82%；腺病毒和肠道病毒检测均为阴性； PAGE法检测到10份轮状病毒阳性样品，电泳带型为4?鄄2?鄄3?鄄2的样品有8份，阳性率为72.73％， 另2份阳性样品的电泳条带特殊；8份带型为4?鄄2?鄄3?鄄2的阳性样品均能通过RT－PCR扩增出VP7基因，选择其中3份样品进行测序，测序结果 经过比对发现这3个毒株的核苷酸的同源性为99.90％，氨基酸的同源性为100％，与G1型标准株Wa的核苷酸同源性分别为91.30%～91.50％，氨 基酸同源性为94.80％；与泰国流行株Thai?鄄2104亲缘关系最近，与中国以前的流行株处于不同的进化分支上。结论　引起此次新生儿病毒性 腹泻疫情的病原是A组轮状病毒，PAGE带型主要为4-2-3-2，其血清型为G1型。     

2012－2015年云南省狂犬病病毒糖蛋白基因进化特征分析

目的 了解云南省2012－2015年35株狂犬病病毒（RABV）糖蛋白（G）基因的进化特征及流行病学特点。方法 在云南省狂犬病流行区采集可疑犬脑组织以及狂犬病患者脑组织和唾液标本,用直接免疫荧光法进行病毒抗原检测,阳性标本提取病毒核酸,通过反转录聚合酶链式反应（RT-PCR）扩增RABV的G基因序列,用MEGA 5.0软件邻接法（NJ）进行系统进化树分析。结果 经RT-PCR和序列测定获得2012－2015年云南省35株RABV的G基因序列,并与2006－2011年获得的云南省11株RABV及邻省和东南亚地区的15株RABV的G基因序列进行系统进化分析。结果表明,云南省46株RABV中,除2006年的Tc06株属于China-Ⅵ进化群外,其他45株均属于China-Ⅰ进化群。云南省China-Ⅰ进化群流行株在2006－2015年间每年均有分布,其中,2006－2011年10株,2012－2015年35株,分布于云南省10个州（市）并与来自四川、贵州和湖南省的China-Ⅰ进化群病毒株的进化关系最为接近。China-Ⅵ（Tc06）则与缅甸、老挝和越南的东南亚进化群病毒株亲缘关系最近。结论 2012－2015年,RABV China-Ⅰ进化群在云南省狂犬病流行区广泛分布,属云南省主要进化群并具较强的传播速率,期间云南省未再发现China-Ⅱ、China-Ⅲ和China-Ⅵ等进化群病毒株的流行。     

2010-2015年山东省狂犬病病毒分子流行病学特征

目的了解山东省境内流行的狂犬病病毒(RABV)的遗传进化特征和流行特点。方法对山东省2010-2015年收集的犬脑组织标本和病例唾液、血液等标本用RABV直接免疫荧光法或反转录-聚合酶链式反应法进行检测,检测阳性标本进行N基因序列测定和种系发生分析。结果 70份犬脑组织标本有11份为阳性,31份病例液体标本有2份为阳性,13份阳性标本都测序得到N基因全序(1 353 bp)。汇总已发表所有山东标本N基因序列(共26个)以及我国7个RABV种群的代表株共同构建的种系发生树显示,近90%的山东株(2006-2015年)属于ChinaⅠ进化群,其余3株(2006-2008年)属于ChinaⅡ进化群;山东省东部和西部地区的流行株相对聚集又明显交叉,泰安流行株最具多样性。结论山东省RABV分属ChinaⅠ和Ⅱ两个种群,近年山东省狂犬病的流行基本是ChinaⅠ传播扩散的结果。     

湖南省疑似狂犬病病例皮肤组织标本首次检出狂犬病病毒

目的对疑似狂犬病病例标本进行狂犬病病毒抗原检测,为临床病例诊断提供实验室依据。方法对疑似病例组织标本（皮肤、角膜、脑组织等）运用直接免疫荧光实验法检测狂犬病病毒抗原。结果在送检的皮肤、角膜、脑组织中,皮肤、脑组织狂犬病病毒抗原阳性,角膜阴性。结论在疑似狂犬病病例的背部皮肤毛囊组织中首次检出狂犬病病毒,填补了湖南省疑似狂犬病病例皮肤标本实验室诊断的空白,为狂犬病疑似病例的早期实验室诊断提供了经验和依据。     

浙江省野生动物鼬獾和家犬狂犬病病毒L基因序列测定分析

目的测定浙江省野生动物鼬獾和家犬狂犬病病毒L基因序列,在分子水平分析转录酶大蛋白(LP)的变异特点和遗传进化特征。方法对实验室检测阳性的狂犬病病毒标本进行L基因编码区核酸序列测定,通过生物分析软件比较L基因核苷酸序列和氨基酸序列,并与GenBank的36个参考序列编码区进行比对分析。结果测序获得野生动物鼬獾(F02、F04)和家犬(D01、D02)二种宿主来源的狂犬病病毒街毒株L基因核苷酸全长序列并递交GenBank,开放读码框(ORF)均为6 387 bp,编码区均以2个连续的起始密码子ATG起始,编码2 128个氨基酸。在LP保守结构域上的特异功能短序列几乎完全保守,各结构域之间的序列保守性略差,对存在的变异位点绝大多数极性并没有变化,系统进化分析显示浙江省鼬獾、犬街毒株均归属于传统的狂犬病病毒Asian谱系,与我国广泛传播的狂犬病病毒同属一种系。结论浙江省狂犬病病毒L基因的构成与传统狂犬病病毒一致,所构建进化树的分析作用与N基因相同,鼬獾病毒依然具有本土狂犬病病毒的基因特点,家犬病毒可能与我国多种宿主动物病毒来源相同或者具有新近的相互传播,不同宿主动物狂犬病病毒具有种群多样性的进化特点和地域性流行特征。     

2014年云南省瑞丽市登革1和2型病毒流行的分子流行病学研究

目的 阐明云南省中缅边境的瑞丽市2014年登革热流行的登革病毒血清型及分子流行病学特点。方法 收集登革热病例资料, 采集患者急性期血清标本, 用RT-PCR法检测登革病毒核酸, 并进行登革病毒C/PreM区核苷酸序列测定和分析。结果 2014年6-12月, 瑞丽市共确诊登革热病例292例, 其中本地感染病例139例(47.77%), 输入性病例153例(52.23%;缅甸输入152例, 广州输入1例)。2014年瑞丽市登革热本地感染病例发病率为72.77/10万。主要流行地区为瑞丽市城区、姐告开发区和勐卯镇。经登革病毒核酸检测和序列测定, 从患者血清中获得65株病毒的C/PreM区基因核苷酸序列, 其中本地感染40例, 缅甸输入25例。进化分析表明, 登革1型病毒53株(本地感染31例, 缅甸输入22例), 2型11株(本地9例, 缅甸输入2例), 4型1株(缅甸输入病例), 它们均与东南亚登革病毒流行株具有较近的亲缘关系。结论 2014年瑞丽市发生了输入性和本地感染并存的登革热流行, 缅甸木姐市和中国瑞丽市均存在登革1和2型病毒的共同流行, 来自缅甸木姐市的登革热输入性病例是引起瑞丽市登革热本地流行的主要原因。     

Development and evaluation of a RT-qPCR assay for fast and sensitive rabies diagnosis

Rabies virus is endemic to Russia, among other countries. It is therefore critical to develop a high-quality and high-precision diagnostic procedure for the control and prevention of infection.The main objective of the research presented here was to develop a reliable RT-qPCR assay for rabies diagnostics.For this purpose, a RABV strains from various biological and geographical origins were used. In addition, rabies-positive and rabies-negative samples, as well as nucleic acids from other viruses and DNA extracted from the brain tissues of mice, dogs, cats, bats and humans, were studied using the developed assay.The analytical sensitivity of the assay, as assessed using armored recombinant positive control dilutions, was 10³ copies/ml, and the sensitivity measured using characterized strains was between 0.1 LD50/ml and 1.0 LD50/ml. A broad range of RNA from RABV strains circulating in different regions of Russia, as well as RNA from RABV-positive primary brain samples from 81 animals and two humans, was detected using the developed assay. No false-positive or false-negative results were obtained.Given that high analytical and diagnostic sensitivities and a high specificity were verified for this assay, it has high potential as a screening test that may be suitable for the epizootiological monitoring of animals and for the fast postmortem diagnosis of rabies.