Th17细胞在原发免疫性血小板减少症动物模型中的作用

目的 探讨Th17细胞在原发免疫性血小板减少症(ITP)中的作用。方法 采用腹腔注射大鼠抗小鼠CD41抗体(MWReg30)的方法诱导BALB/c小鼠产生ITP,之后分离外周血和脾单个核细胞,采用实时定量PCR法检测Th17细胞相关转录因子及细胞因子mRNA的表达水平,同时采用流式细胞术检测外周血和脾细胞内Th17细胞的比例。结果 ITP模型小鼠外周血及脾单个核细胞Th17细胞百分比分别为(1.410±0.307)％和(0.220±0.045)％,明显高于正常对照小鼠[分别为(0.457±0.089)％和(0.064±0.024)％](P值分别为0.007、0.006)。同时,ITP模型小鼠脾单个核细胞中IL-17F、IL-17A和IL-6 mRNA相对表达量分别为2.203±0.427、2.981±0.860和1.949±0.423,明显高于对照组(分别为1.099±0.250、1.005±0.253和0.990±0.110)(P值均＜0.05)。外周血有核细胞IL-21 mRNA相对表达量为1.857±0.533,明显高于正常对照(0.824±0.190)(P＜0.05)。结果 显示IL-17F和IL-17A的表达呈明显正相关性(r=0.934,P=0.000),IL-17F和IL-17A与IL-6也具有相关性(r =0.598,P=0.001;r=0.619,P=0.000)。结论 Th17细胞在ITP发病过程中起重要作用,它至少参与了血小板的清除。     

补肾活血方对原发性免疫性血小板减少症小鼠的药效学研究

目的通过观察补肾活血方对原发性免疫性血小板减少症(ITP)模型小鼠的体重变化、外周血小板计数、外周血常规指标、脏器指数的影响来探讨补肾活血方的药效。方法 168只小鼠随机分为正常组(生理盐水)、模型组(ITP模型+生理盐水)、阳性药物强的松组[ITP模型+阳性药物强的松0.2 ml/(10 g·d)]、补肾活血高剂量组[ITP模型+补肾活血0.4 ml/(10 g·d)]、补肾活血中剂量组[ITP模型+补肾活血0.2 ml/(10 g·d)]和补肾活血低剂量组[ITP模型+补肾活血0.1 ml/(10 g·d)],造模8 d后每日灌胃一次,连续给药14 d。比较各组体重变化、脏器指数、外周血小板数量、外周血常规等指标。结果与正常组比较,模型组小鼠状态萎靡、体重下降、血小板数量明显降低、脾脏系数明显增大,有显著差异(P<0.05);给药后阳性药物强的松组、补肾活血方高剂量组小鼠精神状态恢复,血小板计数回升,外周血常规指标得到改善,脾脏系数降低,与模型组比较有显著差异(P<0.05)。并且血小板数随着补肾活血方剂量增加呈浓度依赖回升,补肾活血方高剂量组血小板数量与阳性对照强的松组相比无显著差异(P>0.05)。结论补肾活血方能够剂量依赖性地改善ITP小鼠整体精神状态,对血小板数量、血常规指标、降低脾脏系数等方面都具有明显的改善作用,0.4 ml/(10 g·d)补肾活血方与强的松0.2 ml/(10 g·d)疗效相当。     

抗原模拟法构建的免疫性血小板减少症小鼠模型中巨核细胞形态学及超微结构的研究

目的：采用抗原模拟法构建免疫性血小板减少症（immune thrombocytopenia,ITP）小鼠模型,并观察模型小鼠的骨髓巨核细胞形态学及超微结构特点。方法：实验组CBA/Ht小鼠通过腹腔注射Wistar大鼠血小板免疫,对照组CBA/Ht小鼠仅注射0.9%氯化钠溶液。动态监测两组小鼠血小板计数,并取骨髓组织分别行涂片检查及扫描电镜观察。结果：与对照组比较,实验组小鼠在接受大鼠血小板免疫后第2周起血小板数量开始降低（P〈0.05）,至第4周达到最低点（P〈0.01）。免疫后第4周实验组小鼠骨髓涂片中巨核细胞显著增生,且以幼稚巨核细胞为主;电镜下常可见巨核细胞核分叶减少,分界膜系统扩张或数量减少,胞浆内因颗粒物质减少且缺乏细胞器而显得更加致密,胞浆内常可见较多空泡。结论：该模型可较好地模拟人类ITP的发病特点,在模型中观察到的巨核细胞的形态及超微结构的改变进一步揭示了巨核细胞存在的发育异常与ITP的发病有关系。     

同基因背景小鼠核蛋白诱导狼疮鼠模型

背景：自发性狼疮鼠模型不能对基因以外其他的致病因素进行研究。目的：以同基因背景Balb/c小鼠核蛋白免疫小鼠后诱导狼疮鼠模型。方法：选取4～6周SPF级Balb/c小鼠30只,等分为3组。V1组肌肉注射提取的同系Balb/c小鼠核蛋白,间隔3周免疫1次,共免疫4次;V2组注射等体积PBS;V3组为正常对照。检测小鼠末次免疫后3周的24h尿蛋白、血清抗核抗体、抗双链DNA抗体、小鼠肾脏直接免疫荧光。结果与结论：V1组小鼠24h尿蛋白、血清抗双链DNA抗体、抗核抗体均明显高于V2组、V3组,且V1组小鼠肾小球有免疫球蛋白G免疫复合物沉积,可见肾小球轮廓,V2组、V3组未见肾小球轮廓,只见非特异性的微弱荧光。说明以同基因背景Balb/c小鼠核蛋白免疫Balb/c小鼠能够成功诱导狼疮鼠模型。     

同基因背景小鼠核蛋白诱导狼疮鼠模型

背景:自发性狼疮鼠模型不能对基因以外其他的致病因素进行研究。目的:以同基因背景Balb/c小鼠核蛋白免疫小鼠后诱导狼疮鼠模型。方法:选取4～6周SPF级Balb/c小鼠30只,等分为3组。V1组肌肉注射提取的同系Balb/c小鼠核蛋白,间隔3周免疫1次,共免疫4次;V2组注射等体积PBS;V3组为正常对照。检测小鼠末次免疫后3周的24h尿蛋白、血清抗核抗体、抗双链DNA抗体、小鼠肾脏直接免疫荧光。结果与结论:V1组小鼠24h尿蛋白、血清抗双链DNA抗体、抗核抗体均明显高于V2组、V3组,且V1组小鼠肾小球有免疫球蛋白G免疫复合物沉积,可见肾小球轮廓,V2组、V3组未见肾小球轮廓,只见非特异性的微弱荧光。说明以同基因背景Balb/c小鼠核蛋白免疫Balb/c小鼠能够成功诱导狼疮鼠模型。     

124例特发性血小板减少性紫癜患者相关实验室检测指标的结果分析

目的通过测定特发性血小板减少性紫癜(ITP)患者的血小板表面相关抗体(PAIg)含量和骨髓巨核细胞计数及分型,探讨ITP的实验室诊断方法,以提高诊断准确率。方法对418例各类型血小板减少症患者和30例正常对照,采用Sysmex全自动血细胞分析仪计数血小板及ELISA双抗体夹心法测定血小板表面相关抗体含量(PAIg G、A、M);对124例已确诊的ITP患者进行骨髓细胞学巨核细胞分析。结果血小板计数(BPC)<80×109/L组的PAIg含量远高于正常组,差异有统计学意义(P<0.05),而BPC(80~100)×109/L组与正常对照组之间差异无统计学意义(P>0.05);ITP慢性组与急性组间PAIg含量差异有统计学意义(P<0.05);PAIg含量阳性率排序为慢性ITP(96%)>急性ITP(91.1%)>非ITP(87.5%)>正常对照组(10%)。结论血小板数量与PAIg呈负相关,血小板减少越明显,测定PAIg含量的意义越大;PAIg检测有助于ITP的诊断,但并非ITP患者所特有,也不能代替骨髓检查,在诊断ITP时应首先排除相关疾病,骨髓检查仍是诊断ITP的主要依据,两者结合可进一步完善诊断。     

难治性特发性血小板减少性紫癜的治疗进展

特发性血小板减少性紫癜(ITP)为血液专科最常见的出血性疾病,慢性难治性ITP诊断条件如下:1)曾经用标准剂量糖皮质激素(泼尼松1～2 mg·kg-1·d-1)治疗无效;2)血小板计数<30×109 L-1;3)ITP病程在6个月以上;4)无引起血小板减少的其他原因.关于难治性ITP的治疗近年已有许多研究进展,现综述如下.     

原发性血小板减少性紫癜39例临床分析

总结 39例原发性血小板减少性紫癜 (Idiopathicthrombocytopenicpurpura ,ITP)患者的临床特点及疗效 ,结果急性型与慢性型ITP的年龄有显著性差异 ;两组的骨髓巨核细胞计数及分类、血小板相关抗体值无显著性差异     

靶向肝脾巨噬细胞治疗血小板减少性紫癜的实验研究

本研究制备兔抗鼠血小板血清以建立SD大鼠免疫性血小板减少性紫癜(ITP)模型,使用明胶微粒装载二氯亚甲基二膦酸(Cl2MDP),并将药物导向模型的肝脾巨噬细胞内以杀伤巨噬细胞或降低其免疫活性,以期达到治疗ITP的目的。每24小时重复注射1次抗血小板血清150μl,所建立的SD大鼠的ITP模型中,血小板计数于实验期间能维持在低于50×109/L的病理水平。用Cl2MDP-明胶微粒进行巨噬细胞株RAW264.7的MTT试验及模型的实验性治疗,以治疗前后的血小板计数和出血时间作为疗效的观察指标。结果表明:Cl2MDP-明胶微粒呈剂量依赖关系抑制体外培养的巨噬细胞的增殖并可迅速、有效地升高模型鼠血小板的数量,平均达180×109/L水平,并能维持血小板计数在生理范围内而不下降。此外,预先注射Cl2MDP-明胶微粒的SD大鼠可避免抗血小板血清引起的血小板计数降低。结论:Cl2MDP-明胶微粒静脉注射可以有效地提高SD大鼠ITP模型的血小板数量,达到避免发生出血的安全水平。这种靶向巨噬细胞的药物输送技术为ITP的治疗提供了一种新的治疗理念和方法,值得进一步深入研究。     

党参多糖对环磷酰胺所致小鼠贫血的治疗效果观察

目的 探讨党参多糖对环磷酰胺(CTX)所致小鼠贫血的疗效.方法 将60只SPF级健康雄性BALB/c小鼠均分为空白组、模型组和低、中、高剂量组及阳性对照组6组,除空白组外,其他5组分别于实验第1天按100 mg/kg剂量腹腔注射CTX,每日1次,空白组予等容积生理盐水腹腔注射,连续7 d.实验第2天注射CTX后2 h,...     

特发性血小板减少性紫癜患者CD138表达情况及其意义

目的:探讨CD138细胞与特发性血小板减少性紫癜(ITP)惠者预后,及其与相关临床指标的关系.方法:用流式细胞术检测100例初诊ITP患者和20例正常对照外周血CD138细胞表达率.随访6个月后,将ITP患者分为急性型与慢性型二组,比较初诊时外周血CD138细胞表达率,并分析CD138细胞表达率与就诊时间、初诊时血小板计数、血小板相关抗体、骨髓巨核细胞计数、治疗反应的关系.结果:外周血CD138细胞表达率,急性型组与对照组无差异(P>0.05),慢性型组明显高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);慢性型患者外周血CD138细胞表达率与初诊时血小板计数、血小板相关抗体无相关(P>0.05),与就诊时间、骨髓巨核细胞计数、治疗反应相关(P<0.05).结论:CD138细胞在慢性型ITP患者外周血中高表达,可作为早期判断ITP惠者预后的重要指标之一.     

血小板计数、血小板抗体、骨髓细胞学对血小板减少鉴别诊断的意义

目的 探讨血小板计数、血小板抗体测定、骨髓细胞学检查对血小板减少鉴别诊断的临床意义.方法 对147例血小板减少患者的临床及实验室资料进行回顾性分析,应用SPSS11.5软件进行方差分析.结果 在血小板计数的比较中,特发性血小板减少性紫瘢(ITP)组与骨髓增生异常综合征(MDS)组、ITP组与系统性红斑狼疮(SLE)组、...     

致耐受树突状细胞治疗免疫性血小板减少症小鼠的研究

目的:探讨地塞米松及1α-25-(OH)2D3诱导的致耐受树突状细胞(TolDC)治疗免疫性血小板减少症小鼠的疗效。方法:用地塞米松及1α-25-(OH)2D3诱导TolDC,光镜观察形态特点,流式检测细胞膜CD80、CD86水平。将TolDC腹腔注射给免疫性血小板减少症小鼠,观察症状并检测小鼠的血小板水平及血小板相关自身抗体。结果:地塞米松及1α-25-(OH)2D3诱导的树突状细胞毛刺少、突起短,CD80、CD86水平低,符合TolDC的特点。TolDC治疗组小鼠血小板水平较模型组高(P<0.05),血小板相关自身抗体水平较模型组低(P<0.05)。结论:地塞米松及1α-25-(OH)2D3诱导的TolDC能避免免疫性血小板减少症小鼠的血小板下降,血小板相关自身抗体减少,为其应用于自身免疫性血小板减少症的治疗提供了理论依据。     

血小板特异性抗体对特发性血小板减少性紫癜诊断价值的研究

本研究的目的是比较特发性血小板减少性紫癜 (ITP)、慢性再生障碍性贫血 (CAA)、恶性血液病患者及健康志愿者特异性抗体水平 ,以评价血小板特异性抗体在ITP诊断中的价值。用改良单克隆抗体特异性俘获血小板抗原 (MAIPA)技术同时检测血小板GPIb/Ⅸ、GPIIb/Ⅲa、GPⅣ、GPⅤ的特异性抗体。结果表明 :ITP组、CAA组、恶性血液病患者及健康志愿者血小板特异性抗体总阳性率分别为 6 9.99% ,10 % ,2 0 %和 0 %。ITP组与CAA组存在显著性差异 ( χ2 =2 0 .71,P <0 .0 0 5 ) ,ITP组与恶性血液肿瘤化疗组存在显著性差异 ( χ2 =12 .2 2 ,P <0 .0 0 5 )。健康志愿组无 1例阳性。结论 :多种抗体同时检测可提高敏感性 ,血小板特异性抗体对ITP是一种特异性高、敏感性强的实验室诊断指标。     

miRNA-30a通过介导Th17细胞分化影响免疫性血小板减少性紫癜发病的初步探讨

目的:探讨miRNA-30a是否通过影响Th17细胞分化参与ITP发病;通过对miRNA-30a预测靶基因SOCS3的验证,进一步探讨miRNA-30a参与ITP发病的可能机制。方法:建立慢性ITP小鼠模型,检测其脾脏单个核细胞中miRNA-30a、RoRγt的表达并分析两者相关性;构建含靶基因mRNA 3′UTR的荧光素酶表达载体及含有miRNA的绿色荧光载体,通过Luciferase荧光检测、实时荧光定量PCR(qPCR)、Western blot验证SOCS3是否为miRNA-30a的靶基因。结果:实验组小鼠血小板计数在注射抗小鼠血小板血清(APS)48 h后下降至正常的20%,且至少可维持14 d。实验组小鼠脾脏单个核细胞中miRNA-30a及RoRγt表达较对照组升高(P<0.05),且两者存在正性相关(r=0.54)。pMDH-GFP-miRNA-30a与pMIR-report-UTR实验组的荧光素酶的活性明显低于pMDH-GFP空质粒与pMIR-report-UTR的对照组(P<0.05)。转染miRNA-30a质粒的EL4细胞中SOCS3在mRNA及蛋白水平与对照组均无差异。结论:miRNA-30a在ITP小鼠脾脏单个核细胞中表达升高,且与RORγt表达呈正相关性,它可能通过影响Th17细胞分化参与ITP发病;SOCS3能与miRNA-30a靶位点结合,却不是其功能靶基因。     

雷公藤多甙联合强的松治疗小儿难治性特发性血小板减少性紫癜

为探讨雷公藤多甙、强的松治疗小儿难治性特发性血小板减少性紫癜 (ITP)的临床疗效 ,对 2 8例难治性ITP患儿进行雷公藤多甙联合强的松治疗 ,两者的剂量分别为 1mg/ (kg·d) ,分 3次口服及 0 .5mg/ (kg·d) ,每日晨顿服 ,疗程为 2个月。治疗期间进行外周血血小板计数、骨髓检查及血小板相关抗体检测。结果显示 :随访 1年以上 ,9例治愈 ,7例显效 ,5例进步 ,7例无效 ,总有效率达 75 %。患者耐受治疗 ,未发现严重不良反应。治疗有效病例骨髓产血小板巨核细胞增加 ,外周血血小板抗体下降。结论 :雷公藤多甙联合强的松治疗小儿难治性ITP有良好疗效。     

慢性特发性血小板减少性紫癜病人静脉输注免疫球蛋白的临床效果

慢性特发性血小板减少性紫癜(ITP)的发病机理还不清楚。目前,治疗多趋向于抑制对外周血小板的免疫反应,用得最多的药物为糖皮质激素,但部份病人血小板计数增高不显著。最近,Imbach等人报告用大剂量免疫球蛋白治疗儿童急、慢性ITP,血小板计数明显增加。作者报告静脉注射大剂量免疫球蛋白治疗成人慢性ITP的临床效果。 9例慢性ITP(3男,6女),1例系统性红斑狼疮(SLE)伴血小板减少。患者均符合以下条件:1.血小板低于10万长达1年以上,2.血小板计数变动的范围低于基础血小板计数的25%,3.有时有出血趋向,4.     

慢性特发性血小板减少性紫癜患者活化T细胞CD30表达与凋亡关系

本研究检测慢性特发性血小板减少性紫癜(ITP)患者外周血单个核细胞中CD3+数、CD3+/CD30+T细胞比值和活化后T细胞凋亡率及外周血血小板计数,探讨2组间的差异和患者活化T淋巴细胞CD30表达率与凋亡率和血小板计数的相关性。以40例慢性ITP患者为研究对象,24例健康志愿者为正常对照,体外培养刺激T细胞活化后运用流式细胞仪检测外周血单个核细胞悬液中CD3+数、CD3+/CD30+T细胞比值及CD3+T细胞凋亡率,同步检测血小板计数,分析ITP组与对照组各指标间的差异和相关性。结果表明:ITP组外周血CD3+细胞数与对照组无明显差异(p0.05)。ITP组活化T细胞表面CD30表达率明显高于对照组(p0.01)。ITP组活化T细胞凋亡率明显低于对照组(p0.01)。活化后T细胞表面CD30表达与其凋亡率呈负相关(r=-0.786,p0.01)。活化T细胞凋亡率与血小板计数呈正相关(r=0.680,p0.01)。结论:慢性ITP患者活化T细胞CD30的高表达导致了T细胞活化后凋亡受阻,在体内蓄积引起免疫功能紊乱,使血小板减少。     

荔枝核提取液对糖尿病小鼠模型血糖、血脂等相关指标的干预效应

目的:观察荔枝核提取液对四氧嘧啶糖尿病小鼠血糖、血脂、脑蛋白、脑匀浆谷胱甘肽过氧化物酶、氧自由基含量的影响。方法:实验于2005-04/05在广西右江民族医学院生化教研室实验室完成,本实验室为广西高校重点实验室。①选用健康小白鼠40只,选用10只为正常对照组。对其余30只小鼠进行造模:用四氧嘧啶按200mg/kg剂量用蒸馏水溶解后作一次性腹腔注射,注射后第3天空腹血糖升高稳定后并达8.10mmol/L以上为造模成功,随机将造模成功的小鼠24只分为3个组:荔枝核提取液高、低剂量治疗组,模型组,每组8只。高剂量荔枝核提取液治疗组:每只荔枝核提取液0.3mL灌胃;低剂量荔枝核提取液治疗组用荔枝核提取液0.1mL荔枝核提取液加0.2mL蒸馏水灌胃;1次/d,连续4d。模型组和正常对照组用0.3mL蒸馏水灌胃,1次/d,连续4d。②在造模前、造模后3d,治疗后2,4d各用邻甲苯胺微量法测定空腹血糖。治疗4d后采用GPO-POD酶法测定三酰甘油,采用COD-CE-PAP酶法测定总胆固醇,采用沉淀法测定高密度脂蛋白胆固醇,采用双缩脲法测定脑蛋白,用酶促反应的速度表示脑匀浆谷胱甘肽过氧化物酶的活力,采用α-萘胺法测定脑匀浆氧自由基含量。③计量资料差异比较采用方差分析。结果:四氧嘧啶腹腔注射后有2只小鼠死亡,造模失败4只,最终34只进入结果分析。①空腹血糖:造模前各组小鼠无明显差异(P>0.05);治疗4d后,荔枝核提取液低剂量治疗组和荔枝核提取液高剂量治疗组明显低于模型组(P<0.05),与正常对照组相近(P>0.05)。②治疗4d后血脂:各组三酰甘油差异不明显(P>0.05),荔枝核提取液高剂量治疗组血清高密度脂蛋白胆固醇水平明显高于模型组和荔枝核提取液低剂量治疗组(P<0.05,0.01)。③治疗4d后脑匀浆生化指标:正常对照组、荔枝核提取液高、低剂量治疗组脑谷胱甘肽过氧化物酶活性明显高于模型组(P<0.05),脑氧自由基含量低于模型组(P<0.05)。结论:①荔枝核提取液具有降低四氧嘧啶诱导的糖尿病小鼠血糖水平,调节血脂紊乱状况功能。②荔枝核提取液具有促进氧自由基的清除,增加机体抗氧化能力的作用。     

重症特发性血小板减少性紫癜27例的临床分析

特发性血小板减少性紫癜 (ITP)是临床上常见的一种出血性疾病,也是一种自身免疫性疾病.其特征是皮肤、黏膜或内脏出血,抗血小板抗体出现,覆盖抗体的血小板在单核巨噬系统被巨噬细胞破坏引起血小板减少症。重症ITP是①血小板计数 <10×109 /L,②血小板计数在 ( 10 ~ 30 )×109, 但伴有多部位出血或近期的出血量多导致重度贫血或休克 [1]。重症ITP病情来势凶险,可致内脏出血而危及生命。本文收集了本院住院的 27例重症ITP患者的资料进行分析,现报道如下。1　临床资料1. 1　一般资料　本组病例均为 1999年 10月至2004年 11月间住院病…