α亚族趋化因子受体3在人舌鳞癌细胞株的表达及其配体干扰素诱导蛋白-10对CAL-27细胞增殖和凋亡的影响

目的探讨α亚族趋化因子受体3(CXC-chemokine receptor 3,CXCR3)在不同人舌鳞癌细胞株的表达以及其配体干扰素诱导蛋白-10(interferon induced protein 10,IP-10)对人舌鳞癌细胞株CAL-27增殖和凋亡的影响。方法采用蛋白印迹法和免疫荧光染色对3种人舌鳞癌细胞株(CAL-27、UM-1、Tca-8113)IP-10的相应受体CXCR3的表达进行检测。CAL-27细胞被分为3个实验组和1个对照组,3个实验组根据IP-10的刺激浓度,分为10 ng/mL组、20 ng/mL组、40 ng/mL组,对照组不予刺激。12 h、24 h、48 h时检测4组细胞的增殖;24 h时用流式细胞仪检测细胞的凋亡。结果 CXCR3在3种人舌鳞癌细胞株均有表达,并且CXCR3在3株细胞的胞膜及胞质内均有染色。和对照组相比,12 h、24 h时,3种浓度的IP-10均能够促进CAL-27细胞增殖(P<0.05);在48 h时,只有40 ng/mL的IP-10能够促进CAL-27细胞增殖(P<0.05),10 ng/mL、20 ng/mL的IP-10对CAL-27细胞的增殖无促进作用(P>0.05)。在24 h时,对照组、10 ng/mL组、20 ng/mL组和40 ng/mL组的细胞凋亡率分别为(0.053 3±0.472 6)%、(3.236 7±0.940 0)%、(4.516 7±1.115 4)%和(3.363 3±0.571 2)%,3种浓度IP-10均能够促进CAL-27细胞的凋亡(P<0.05),但3个实验组之间差异无统计学意义(P>0.05)。结论CXCR3在3种人舌鳞癌细胞株的胞膜及胞质内均有表达;IP-10既能促进CAL-27细胞的增殖,又能促进其凋亡。随着时间的延长,IP-10的促增殖作用减弱,而这种减弱可能是由IP-10的促凋亡作用的逐步发挥所引起的。     

TGF-β1/iNOS在Tca8113细胞系中的表达

目的:探讨转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)和诱导型一氧化氮合酶(inducible nitricoxide synthase,iNOS)在舌鳞癌细胞株Tca8113中的表达,为进一步研究TGF-β1和iNOS在舌鳞癌浸润转移中的作用提供实验依据。方法:应用SP免疫组化方法和逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法,对舌鳞癌细胞株Tca8113中TGF-β1和iNOS的蛋白、mRNA表达情况进行检测。结果:SP免疫组化检测到TGF-β1/iNOS蛋白在舌鳞癌Tca8113细胞胞浆中呈强阳性表达,RT-PCR检测到舌鳞癌Tca8113细胞株中TGF-β1/iNOS的mRNA条带明显。结论:TGF-β1/iNOS的蛋白和mRNA在舌鳞癌Tca8113细胞株中同时呈高水平表达。     

血竭素高氯酸盐对舌鳞癌细胞Tca-8113增殖及凋亡的影响

目的:研究血竭素高氯酸盐(Dracorhodin perchlorate,DP)对舌鳞癌细胞Tca-8113增殖和凋亡的影响并初步探讨其相关机制。方法:以舌鳞癌细胞Tca-8113为研究对象,采用CCK-8、流式细胞术分析及Western Blot等方法检测不同浓度DP对Tca-8113细胞的增殖、凋亡及核因子E2-相关因子2(nuclear factor E2-related factor 2,Nrf2)、血红素氧合酶 1(heme oxygenase 1,HO-1)蛋白表达的变化。采用SPSS17.0统计软件对实验结果进行分析。结果:CCK-8检测表明,与空白对照组相比,DP可以显著抑制细胞增殖,且对细胞的增殖抑制作用有时间-剂量依赖性(P<0.05)。流式细胞术及Western Blot检测结果显示DP可以促进细胞凋亡(P<0.05),并提高Nrf2、HO-1在Tca-8113细胞中的表达。结论:DP能抑制舌鳞癌细胞Tca-8113增殖并诱导其发生凋亡,其作用可能与Nrf2/HO-1信号通路激活有关;可能成为抗口腔癌药物。     

Survivin基因在顺铂诱导Tca8113舌鳞癌细胞凋亡中的作用

目的体外观察顺铂（DDP）诱导Tca8113舌鳞癌细胞株凋亡的作用, 同时检测在此过程中凋亡蛋白抑制因子Survivin mRNA表达和蛋白表达的变化。方法将人Tca8113舌鳞癌细胞株进行传代培养,MTT法检测顺铂不同浓度和不同时间对Tca8113舌鳞癌细胞生长的抑制作用,通过RT- PCR检测凋亡过程中Survivin基因mRNA的表达,免疫细胞化学观察Survivin基因的蛋白表达,以及流式细胞术观察顺铂诱导各组Tca8113细胞的凋亡率。结果顺铂可明显抑制Tca8113舌鳞癌细胞的增殖, 其增殖抑制率呈浓度和时间依赖性,细胞凋亡率也呈同样的趋势,最高可达34.1%。1.0 μg/mL DDP处理Tca8113舌鳞癌细胞,Survivin mRNA和蛋白表达水平随时间的增加而降低,在24h达到最低,随后又升高。结论抗凋亡蛋白Survivin在Tca8113舌鳞癌细胞高表达,顺铂可有效诱导Tca8113舌鳞癌细胞凋亡, Survivin mRNA表达在化疗早期随作用时间的延长而降低,Survivin基因的抑制在顺铂诱导的Tca8113舌鳞癌细胞的细胞凋亡中起着重要的作用。     

内质网应激诱导的TRB3在人舌体鳞状细胞癌细胞中抑制AKT磷酸化

目的:研究在人舌体鳞状细胞癌发生内质网应激后,TRB3与AKT磷酸化的关系。方法:在人舌体鳞癌细胞Tca8113及CAL-27中,使用毒胡萝卜素或衣霉素诱导内质网应激,采用腺病毒质粒转染及短发夹RNA干扰技术验证TRB3与AKT磷酸化的关系。结果:Tca8113及CAL-27细胞通过毒胡萝卜素或衣霉素诱导24h后,TRB3mRNA及蛋白表达升高。在Tca8113细胞中,通过腺病毒质粒转染上调TRB3蛋白表达后,磷酸化AKT蛋白表达下降;通过短发夹RNA干扰下调TRB3蛋白表达后,磷酸化AKT蛋白表达升高。结论:在人舌体鳞癌细胞发生内质网应激后,TRB3蛋白表达上调并且抑制AKT磷酸化。     

JSI-124靶向性阻断STAT3通路对舌鳞癌Tca-8113细胞增殖抑制的研究

目的:观察选择性JAK/STAT3抑制剂JSI-124对舌鳞状细胞癌Tca-8113细胞增殖抑制以及胞质转录因子STAT3蛋白表达的影响。方法:用MTT、流式细胞仪分别检测Tca-8113细胞在不同浓度JSI-124及不同时间作用下,细胞增殖及凋亡的情况;Western Blot法检测作用后细胞中STAT3蛋白及其磷酸化蛋白表达的变化,并对所得结果进行统计分析。结果:JSI-124可以抑制舌鳞癌Tca-8113细胞的增殖,其抑制作用随着时间的延长和药物浓度的增加而增强;STAT3蛋白的表达无明显变化,而磷酸化激活状态的STAT3蛋白表达显著降低(P<0.01)。结论:选择性JAK/STAT3抑制剂JSI-124可明显抑制舌鳞癌Tca-8113细胞的增殖并诱导其细胞凋亡。     

α5β1在舌鳞状细胞癌中的表达及其在细胞粘附与运动中的作用

目的：探讨舌鳞状细胞癌Tca-8113细胞纤维连接蛋白受体α5β1的表达，及α5β1在Tca-8113细胞粘附、运动中的作用。方法：培养Tca-8113细胞，采用间接免疫荧光检测细胞α5β1的表达；应用抗α5β1抗体结合细胞表面纤维连接蛋白受体α5β1，分析α5β1在细胞粘附、运动行为中的作用。结果：α5β1在舌鳞状细胞癌Tca-8113细胞表面呈点状和团块状分布；抗α5β1抗体可以显著抑制细胞在纤维连接包被表面的粘附和运动行为。结论：舌鳞状细胞癌细胞存在α5β1的表达，α5β1在舌鳞状细胞癌的浸润、转移中可能起着重要的作用。     

表皮生长因子影响肿瘤病人舌苔形成的机理探讨

目的:研究表皮生长因子(EGF)对舌鳞癌细胞Tca-8113株粘附分子CD29、CD54、CD106表达的影响,探讨EGF促进肿瘤患者舌苔增厚的分子机制。方法:应用流式细胞术,检测CD29、CD54、CD106的表达。结果:EGF能明显促进Tca-8113细胞膜上CD29、CD54的表达,但对CD106的表达影响不明显。结论:EGF可能通过促进CD29、CD54的表达影响舌苔形成。     

STAT3促进舌鳞癌细胞侵袭与转移的实验研究

目的:研究信号转导和转录激活因子3(STAT3)在人舌鳞状细胞癌组织中的表达,探讨STAT3对舌鳞癌细胞侵袭与转移的促进作用。方法:免疫组织化学染色法检测STAT3在舌鳞状细胞癌组织中的表达,利用小分子干扰RNA(siRNA)体外抑制舌鳞癌细胞系Tca-8113中STAT3的表达,运用体外侵袭实验检测细胞侵袭能力的改变。结果:STAT3表达与肿瘤临床分期(P=0.029)及淋巴结转移(P=0.009)密切相关;siRNA抑制STAT3表达后,细胞侵袭能力明显下降。结论:STAT3促进舌鳞癌细胞侵袭与转移,STAT3 siRNA可以抑制肿瘤细胞的体外侵袭能力。     

非转移性黑色素瘤糖蛋白B对口腔鳞癌细胞增殖、侵袭影响的研究

目的研究非转移性黑色素瘤糖蛋白B(glycoprotein(transmembrane)nonmetastatic melanoma protein b,GPNMB)对口腔鳞癌细胞增殖、侵袭的影响。方法采用RT-PCR及Western blot法检测口腔鳞癌组织、口腔鳞癌细胞中GPNMB的表达变化;构建GPNMB-siRNA载体,转染细胞后分别采用MTT法、Transwell小室法观察其对Tca-8113细胞增殖、侵袭的影响。结果 GPNMB在口腔鳞癌组织及口腔鳞癌细胞中均呈现高表达;增殖实验结果表明GPNMB-siRNA可显著抑制Tca-8113增殖;细胞侵袭结果表明GPNMB-siRNA可显著抑制Tca-8113侵袭。结论 GPNMB在口腔鳞癌细胞的增殖和侵袭中起着重要作用。     

p75神经营养蛋白受体阳性舌鳞状细胞癌细胞的生物学特性研究

目的 对流式细胞仪分选获得的p75神经营养蛋白受体（p75NTR）阳性舌鳞状细胞癌细胞进行生物学特性研究。方法 通过流式细胞术检测舌鳞状细胞癌细胞系Tca-8113和Cal-27中p75NTR阳性细胞的表达。对流式细胞仪分选获取的 p75NTR阳性细胞进行单克隆培养、四甲基偶氮唑盐比色法及划痕实验检测,以未分选细胞为对照,分析 p75NTR阳性细胞的生物学特性。结果 舌鳞状细胞癌细胞株Tca-8113、Cal-27中,p75NTR阳性细胞的比例分别为3.1％和1.9％。与未分选的细胞相比,p75NTR阳性细胞的单克隆形成能力更高（ Tca-8113细胞, P=0.024;Cal-27细胞,P=0.009）;单克隆 p75NTR阳性细胞再培养 2周后, p75NTR阳性细胞率分别降为14.5%（Tca-8113）和5.8%（Cal-27）;p75NTR阳性细胞体外增殖能力显著增强,且具有明显的侵袭迁移能力。结论 p75NTR阳性舌鳞状细胞癌细胞具有肿瘤干细胞的特性。     

小干扰RNA沉默Dicer酶对人舌鳞癌细胞Tca-8113的增殖和细胞周期的影响

目的研究沉默Dicer酶的表达对人舌鳞癌细胞Tea-8113的增殖和细胞周期的影响。方法实验组转染靶向Dicer酶的siRNA序列；时照组转染尤义序列siRNA；空白组细胞未做转染？采用RNA于扰技术沉默Tea-8113中Dicer酶的表达，通过荧光定量聚合酶链反应、蛋白质印迹法及免疫组织化学技术，检测Tea-8113转染小干扰RNA（small interference RNA，siRNA）后Dicer酶的mRNA和蛋白质水平的表达情况；应用噻唑蓝比色法及流式细胞术榆测细胞增殖及细胞周期的变化。结果Tea-8113细胞转染siRNA24h后，实验组Dicer酶mRNA表达量是空白组的0．39倍．表达水平下降，实验组与空白组或对照组比较，表达水平都有所下降，差异有统计学意义（P〈0．05）、转染48h后实验组蛋白质表达较空白组下调53．67％。Dicer酶表达下凋后，Tca-8113细胞增殖加速，G1期细胞百分率减少，S期和G2期细胞百分率增多。结论沉默Dicer酶的表达可加快细胞周期从G1期向S期和G2期进展．促进Tea-8113细胞的生长。     

Tca-8113细胞系单细胞体外增殖的实验观察

目的:观察舌鳞癌Tca-8113细胞系的单细胞体外增殖能力,寻找肿瘤干细胞存在的依据,从而为鉴定其表面标记物奠定理论基础。方法:采用有限稀释法对舌鳞癌Tca-8113细胞进行单细胞体外培养,了解舌鳞癌细胞(Tca-8113)的分裂、增殖特点。结果:单细胞培养8d后,舌鳞癌Tca-8113细胞株中具有持续增殖能力的细胞占肿瘤细胞的10.85%,12d后,继续分裂增殖的细胞比例为5.23%,16d后,仅有5.09%的细胞继续增殖。结论:舌鳞癌Tca-8113细胞具有异质性,仅有少量细胞具有持续增殖能力,而这部分细胞是否就是舌鳞癌Tca-8113细胞的肿瘤干细胞。还有待进一步的实验研究证实。     

间隙连接蛋白43在口腔颌面部鳞癌组织及舌癌细胞株(Tca8113)中表达的研究

目的:探讨间隙连接蛋白43(Cx43)在口腔鳞癌组织(oscc)和舌鳞癌细胞株(Tca8113)中的表达及其生物学行为的关系;细胞分化诱导剂全反式维甲酸(ATRA)对人舌鳞癌细胞株(Tca8113)中Cx43表达的影响。方法:应用免疫组织、细胞化学、免疫荧光及结合免疫印迹技术,观察OSCC组织中以及ATRA对Tca8113细胞株进行培养及分化诱导后Cx43在蛋白水平的变化。结果:Cx43在正常口腔鳞状上皮主要表达于相邻细胞间相互接触的细胞膜上,而在OSCC组织中,Cx43细胞膜表达与组织的分化程度、转移之间有显著性差异(Cx43:х2=7.42、12.43,P<0.05、P<0.01)。免疫细胞化学检测可见舌癌细胞中Cx43异常定位于细胞浆中和/或细胞膜不与邻近细胞接触的游离缘上。Tca8113经ATRA诱导后,Cx43蛋白表达增加。结论:Cx43表达的改变与OSCC的发生和发展有关。ATRA可以通过上调Cx43表达,实现对肿瘤生长的抑制     

利用RNAi技术抑制人舌癌Tca－8113细胞增殖的实验

目的：通过转染可抑制Tca-8113细胞tankyrase1表达的siRNA,达到抑制Tca-8113细胞增殖的目的。方法：采用体外转录合成方法,合成针对tankyrase1的siRNA,并进行Cy-3荧光标记,用脂质体转染至Tea-8113细胞,荧光显微镜观察判断转染效果。应用噻唑蓝（MrIrr）法和流式细胞仪检测siRNA的作用效果;应用Westernblot方法鉴定siRNA抑制tankyrase1表达效果。结果：tankyrase1siRNA组与空白对照组、脂质体对照组相比．可诱导11ca-8113细胞tankyrase1表达下调,Westernblot结果分析显示,转染siRNA后可下调tankyrase1表达量的1／2,并抑制Tca-8113细胞的增殖（P〈0．05）,同时改变了细胞周期各时相的细胞分布。结论：tankyrase1siRNA在体外实验中可沉默目的基因以及抑制Tca-8113细胞增殖。     

口腔鳞癌细胞系KB和Tca8113中的SP细胞含量分析

目的探讨两种口腔鳞状细胞癌细胞系KB和Tca8113中的侧群细胞的含量,寻找口腔鳞癌肿瘤干细胞存在的依据。方法采用有限稀释法对口腔鳞癌细胞系KB和Tca8113细胞株经Hoechst 33342/碘化丙啶（propidium iodide,PI）双染色后,采用流式细胞仪测定,分析两细胞株中侧群细胞的含量。结果口腔鳞癌细胞系KB和Tca8113中具有不同的表型,即侧群细胞和非侧群细胞。在体外培养中,KB和Tca8113细胞株中侧群细胞含量分别为0.6%和2.3%。经维拉帕米阻断后,侧群细胞含量均明显降低,分别降为0和0.1%。结论 KB和Tca8113细胞株中均存在侧群细胞,但含量较少。     

肿瘤相关成纤维细胞促进舌鳞癌细胞上皮间质转化

目的：检测舌鳞癌组织中肿瘤相关成纤维细胞是否诱导舌癌细胞的上皮间质转化。方法：通过体外原代培养舌鳞癌组织肿瘤相关成纤维细胞的培养上清作用于舌鳞癌细胞系Tca8113,通过检测细胞形态确认肿瘤细胞是否发生上皮间质转化。利用实时定量PCR及免疫印迹检测舌鳞癌细胞上皮标志及间质标志物表达。利用TGF-β/Smad信号通路阻断剂探究TGF-β在此过程的作用。结果：肿瘤相关成纤维细胞促进Tca8113的上皮间质转化。利用实时定量PCR检测及免疫印迹发现肿瘤相关成纤维细胞可以明显促进Tca8113细胞的Vimentin的表达。SB431542,TGF-β/Smad信号通路特异性阻断剂可明显阻断肿瘤相关成纤维细胞条件培养基对Tca8113上皮间质转化的诱导作用。结论：舌鳞癌组织中的肿瘤成纤维细胞可通过诱导舌鳞癌细胞的上皮间质转化促进舌鳞癌细胞的迁移及侵袭,可能在肿瘤发展过程发挥重要作用。