板层角膜移植术后全层角膜组织改变的共焦显微镜观察

目的研究活体扳层角膜移植术后角膜各层组织的共焦显微镜(confocal microscopy)形态学改变，方法应用Confoscan 2.0共焦显微镜对板层角膜移植术后3月～3年，角膜植片稳定的患者共17例17眼，进行扫描检查，记录与分析各层角膜图像。结果共焦显微镜上能够清楚地观察到稳定角膜的上皮细胞、基底层细胞、前弹力层，它们同正常角膜的相应细胞在图像上没有显著差别。但植片与植床的基质细胞在共焦显微镜图像上有着明显的差异。板层角膜移植术后稳定角膜植片的基质细胞，细胞核较小呈中等反光，排列较植床的基质细胞紊乱。而角膜植床的基质细胞，细胞核较大也呈中等反光，排列较植片的基质细胞稍整齐，结论1、Confoscan 2.0共焦显微镜可活体检查，板层角膜移植术后角膜组织结构和细胞的病理改变。2、板层角膜移植术后可成功的重建眼表。3、活体板层角膜移植术后稳定角膜上有自体角膜基质细胞与异体的角膜基质细胞同时共存，角膜内发细胞的形态结构正常。4、角膜板层间的不平滑与植片基质细胞结构紊乱可能是导致板层角膜移植术后视力不佳的重要原因。     

甘油保存角膜材料行深板层角膜移植术后临床和共焦显微镜观察

目的 观察甘油保存角膜材料行深板层角膜移植术后临床和共焦显微镜活体组织学改变.方法 2008年1月至2011年5月在我院行深板层角膜移植治疗的患者26例（26只眼）,所有患者植片均选择甘油脱水低温保存角膜材料,术后裂隙灯观察角膜植片愈合和透明情况,Cochet-Bonnet角膜知觉计测量角膜中央知觉值,共焦显微镜观察角膜全层组织的活体改变.结果 （1）裂隙灯观察26例患者均于术后1~3个月上皮完全修复,角膜植片透明,术后2例发生基质排异反应.（2）术后3个月可不同程度检测到角膜中央知觉,术后3个月角膜中央知觉平均阈值（18.35±9.56）mm,12个月（51.62±6.48）mm.（3）共焦显微镜观察术后1~3个月上皮细胞密度达正常值,3个月内未观察到角膜基质细胞,6~12个月基质细胞密度增加,术后6个月可观察到基质内神经干细胞,角膜内皮细胞密度维持稳定,但在两例发生基质排异反应患者出现内皮细胞密度明显下降.结论共焦显微镜在组织学上证明甘油保存角膜材料行深板层角膜移植后可在一定程度上恢复正常生理结构,并与临床观察角膜愈合过程相吻合.     

圆锥角膜的共焦显微镜表现临床分级

目的 观察临床上不同阶段圆锥角膜的共焦显微镜图像，推测圆锥角膜的病理发展过程，并进行圆锥角膜的共焦显微镜分级。方法 采用共焦显微镜（Confoscan 2．0），观察24例24眼不同发展阶段（lawless分期）圆锥角膜患者的角膜共焦显微镜图像，进行分析并提出焦显微镜下的临床分分期。结果 共焦显微镜下圆锥角膜首先出现了排列规则的裂隙状暗纹，随着病情的不断进展，病变逐渐由角膜后弹力层向前发展，逐渐累及角膜的后基质和前基质，同时角膜基质细胞核拉长、排列出现紊乱，前后基质细胞失去了原有特征。急性圆锥角膜的患者角膜基质细胞出现水肿，角膜瘢痕在共焦显微镜下呈强反光的无细胞样结构。讨论 共焦显微镜下圆锥角膜的病理发展过程，是从角膜后弹力层开始，由后向前发展，逐渐累及角膜的后基质、前期基质，最后角膜破裂引起急性圆锥角膜，角膜出现水肿，愈合后遗留瘢痕。据此提出圆锥角膜共焦显微镜分期将为四个阶段：第一阶段、角膜裂隙样暗纹累及角膜后弹力层；第二阶段、角膜裂隙样暗纹累及角膜后后基质；第三阶段、角膜裂隙样暗纹累及角膜前基质；第四阶段、出现角膜基质水肿或者瘢痕。     

微型角膜刀联合纤维蛋白黏合剂行无缝线光学板层角膜移植术的实验研究

目的 探讨微型角膜刀联合纤维蛋白黏合剂行无缝线光学板层角膜移植术的可行性和安全性。方法 24只健康纯种新西兰白兔随机均分为两组,用微型角膜刀制作植片和植床,Ⅰ组应用市售纤维蛋白生物黏合剂Tisseel,Ⅱ组不用纤维蛋白生物黏合剂。术后3d、2周、1个月、3个月裂隙灯显微镜观察角膜透明度和排斥反应情况,自动验光角膜曲率仪检测角膜屈光状态的改变,共焦显微镜活体观察术后角膜的创伤愈合反应。同期取角膜标本进行常规苏木素-伊红(HE)观察,并用荧光显微镜观察层间新生胶原纤维的情况。结果 Tisseel组11只眼(92％)的植片在位,未用纤维蛋白生物黏合剂组所有植片均脱落。Tisseel组术后1个月角膜完全透明;共焦显微镜发现术后植片植床层间附近的基质细胞数量减少,而后基质细胞、内皮细胞数量和形态均无变化。HE染色显示,术后3d层间出现无固定形态的嗜曙红染色带,1个月时消失,荧光显微镜观察DTAF组织染色未见术后明显新生胶原纤维。结论 微型角膜刀联合纤维蛋白黏合剂行无缝线光学板层角膜移植术简便、安全,术后角膜的创伤愈合反应轻微,纤维蛋白黏合剂不影响角膜的光学性能。     

完全钝性基质层间分离的深板层角膜移植术

目的 介绍一种虹膜恢复器辅助的完全钝性基质层间分离的深板层角膜移植术,并评估应用该术式治疗各种角膜病的有效性和安全性.方法 通过激光共聚焦显微镜检查,选择角膜病变深度未达后弹力层,内皮功能正常的各类角膜病患者35例35只眼.通过虹膜恢复器辅助的完全钝性基质层间逐层分离的方式行深板层角膜移植,并对其疗效进行观察、分析.结果 35只眼中,2只眼(5.71%)有小的钝性撕裂,在保留少量深基质后均能继续完成手术;术后2只眼(5.71%)出现双前房,3d内均自行吸收;细菌和真菌性角膜溃疡术后均未复发.其中18只眼拆线后两周视力高于0.5(约占51.4%),25只眼高于0.3(约占71.4%).术后角膜地形图散光呈现递减的趋势,角膜内皮细胞密度无明显下降.术后6个月角膜植片均透明愈合,无明显层间混浊.结论 通过虹膜恢复器辅助的基质层间钝性分离的深板层角膜移植术是一种安全有效的手术方式.激光共焦显微镜检查可活体检查角膜各层组织结构,可为深板层角膜移植术提供良好的客观依据.     

激光扫描共焦显微镜观察穿透角膜移植术后角膜的形态学特征

目的研究活体穿透角膜移植术后各层角膜组织的激光扫描共焦显微镜(Laser Scan-ning Confocal Microscope,LSCM)的形态学特征。方法应用海德堡视网膜激光断层扫描仪Ⅱ/Rostock角膜模块(HRTⅡ)对20例20眼穿透角膜移植术后40天～2年的患者进行检查,记录并分析其各层角膜图像。结果穿透角膜移植术后早期角膜上皮细胞排列欠规则;Bowman膜和Descemet膜在激光共焦显微镜下无细胞结构;所有患者浅基质层细胞均较深基质层密集;稳定角膜植片其内皮细胞排列紧密,形态为均一六边形结构;所有患者均未发现上皮下神经丛及基质神经;术后植片排斥者有其特殊形态学表现。结论激光扫描共焦显微镜可活体检查穿透角膜移植术后角膜各层组织结构和细胞的病理改变,为临床诊断及用药提供有价值的客观依据,并在跟踪随访方面具有重大意义。     

准分子激光原位角膜磨镶术后弥漫性板层角膜炎的共焦显微镜观察

目的探讨准分子激光原位角膜磨镶术（LASIK）后弥漫性板层角膜炎（DLK）的临床病理学特征及发病机制。方法LASIK术后DLK患者30例（39只眼）（Ⅰ～Ⅳ期）,术后1、3、5、7d及1个月进行裂隙灯显微镜检查,术后3、7d及1个月进行共焦显微镜检查。结果Ⅰ期及Ⅱ期DLK的典型表现出现在术后3d,共焦显微镜观察所见：角膜板层切口前基质及层间可见大量直径12～20μm的圆形或卵圆形细胞,反光较强,散在分布或排列成行,细胞内可见偏心的高反光的核和低反光的细胞内结构。层间还可见大量直径8～12μm的圆形细胞,强反光,多聚集成簇或排列成行,细胞核形态不规则。术后7d上述细胞几乎消失。Ⅲ期DLK出现于术后3～5d,表现为前基质中的细胞浸润更浓密,层间无定形的高反光物质较明显。Ⅳ期DLK在术后5～7d出现明显的前基质结构模糊,高反光,角膜瓣全层皱褶,晚期形成大量高反光的瘢痕组织。结论LASIK术后弥漫性板层角膜炎是角膜瓣层间的炎性反应,主要病理学特征为角膜瓣层间的炎性细胞浸润,其发病是多种因素通过内源性途径和外源性途径共同作用的结果。     

圆锥角膜各期的共焦显微镜表现

目的评价共焦显微镜在圆锥角膜临床研究中的应用价值。方法应用共焦显微镜观察圆锥角膜患者32例（48眼）及正常对照组17例（28眼），分别比较早、中、晚期圆锥角膜与正常对照组的图像特点。结果早期圆锥角膜出现激活状态的角膜细胞、浅基质层的细小皱褶、深基质层的暗纹、部分内皮细胞异形性明显，中、晚期圆锥角膜出现角膜上皮细胞拉伸、细胞核皱缩；基质细胞排列紊乱、基质层暗纹；而对照组未发现上述表现。各期圆锥角膜的角膜基质层厚度、不同深度角膜基质细胞密度、内皮细胞密度与对照组之间差异有统计学意义（P〈0．05）。结论共焦显微镜对早期圆锥角膜的发现以及圆锥角膜病理发展的研究具有重要的临床价值。     

前房气体介导下的深板层角膜移植术

目的 探讨前房气体介导下可重复切的深板层角膜移植术的临床疗效.方法 对41例(41只眼)行此改良的深板层角膜移植术.其中角膜炎反复发作所致混浊累及深层基质者22只眼、化学伤或热烧伤所致混浊累及深层基质者12只眼、完成期圆锥角膜4只眼、累及深层基质的角膜营养不良2只眼及角膜变性1只眼.术后以裂隙灯显微镜观察患眼角膜植片的转归、原眼表疾病的预后、角膜层间的透明度、新生血管的侵入、后弹力层破口的闭合、视力和眼内炎性反应的情况.结果 在41只患眼中,有31只眼完整的暴露了后弹力层,有6只眼的部分基质瘢痕与后弹力层不能完整分开;另4只眼在分离近中央部深层基质和后弹力层时,发生穿孔.术后有1只眼发生了严重的前房毒性反应.随访期内无其他严重并发症发生.结论 前房气体介导下手法分次切的深板层角膜移植术安全有效.     

三种实验动物角膜活体共焦显微镜检测的比较解剖学研究

背景 海德堡视网膜厚度分析仪和角膜模块的结合实现了对眼表活体组织结构的非侵入性检查,利用共焦显微镜对常用实验动物角膜结构进行比较研究可为相关研究提供依据.目的 利用活体共焦显微镜比较新西兰大白兔、Lewis大鼠、Swiss小鼠的角膜结构,建立实验动物角膜的活体组织图像资料,为共焦显微镜的实验研究提供依据.方法 利用海德堡视网膜厚度分析仪(HRT-Ⅱ)的Rostock角膜模块对新西兰大白兔、Lewis大鼠、Swiss小鼠的角膜进行活体分析,角膜的每一层各采集20张共焦显微镜图片,比较分析实验动物角膜各层的形态学特点及角膜内皮细胞密度.结果 共焦显微镜下3种实验动物角膜表层上皮细胞表现为高反光或低反光的多形细胞,基底上皮细胞表现为暗的细胞质,细胞核不可见,细胞间排列紧密、规则；前弹力层均表现为含有丰富上皮下神经丛的无定形物质.兔角膜基质层在黑色背景中散布着高反光物质,即为角膜基质细胞核,后基质层细胞密度高于前基质层；大鼠和小鼠的角膜基质层仅观察到大量反光的星形结构,无明显的细胞核.3种实验动物的角膜内皮细胞形态相似,均表现为高反光的胞体,边界较暗且细胞排列成蜂窝状.新西兰兔前基质角膜细胞密度中位数为387.5个/mm2,后基质角膜细胞密度中位数为223.5个/mm2,明显少于前基质的细胞密度(U=0.000,P=0.000)；新西兰兔、Lewis大鼠、Swiss小鼠角膜内皮细胞密度中位数分别为2192.5、1936.0、1565.0个/mm2,总体差异有统计学意义(H=49.940,P=0.000),兔角膜内皮细胞密度明显高于大鼠和小鼠,差异均有统计学意义(x2=0.000,P=0.000；x2=0.000,P=0.000),大鼠和小鼠的角膜内皮细胞密度差异亦有统计学意义(x2=0.000,P=0.000).结论 共焦显微镜下新西兰大白兔、Lewis大鼠、Swiss小鼠角膜各层的细胞形态相似,但内皮细胞密度和基质细胞形态之间存在明显差异.HRT-Ⅱ的Rostock角膜模块可为动物实验提供角膜各层次的高分辨率图像.     

Comparison of the Objective Optical Quality in Keratoconus Patients after Penetrating Keratoplasty versus Lamellar Keratoplasty

Objective: To evaluate the optical quality of keratoconus patients after penetrating keratoplasty (PKP) or lamellar keratoplasty (LKP) using a dual-channel optical quality analysis system (OQAS). Methods: This was a prospective study. A total of 40 keratoconus patients in Qingdao Eye Hospital were involved in thisstudy from January 2016 to December 2017. And they were divided into a PKP group (23 patients, 24 eyes) or LKP group (17 patients, 19 eyes), depending on the surgical selection. Visual acuity, astigmatism, the density of the corneal endothelium cells, objective scatter index (OSI), predicted visual acuity (PVA), modulation transfer function cut-off frequency (MTF cutoff), Strehl ratio (SR) and tear film analysis of the mean OSI with a dual-channel optical quality analysis system were compared. Data were analyzed using χ2 test and independent t test. Results: There was no statistically significant difference between the PKP group and the LKP group for best corrected visual acuity, and spherical and cylindrical powers. But there was a significant difference between the two groups in the density of the corneal endothelium cells (t=3.91, P<0.001). In addition, there were statistically significant differences between the PKP and the LKP groups for the MTF cutoff and PVA100 (t=2.58, P=0.01; t=2.66, P=0.01). There was also a statistically significant difference between the PKP group and the LKP group in the tear film analysis mean OSI (t=3.48, P<0.001). Conclusions: The objective optical qualities of keratoconus patients after PKP measured by OQAS are better than after LKP, and the MTF cutoff and contrast vision are also better.     

穿透性角膜移植术与板层角膜移植术治疗圆锥角膜术后客观视觉质量比较

目的：探讨采用双通道视觉质量分析系统（OQAS）评估圆锥角膜患者行穿透性角膜移植术（PKP）和 板层角膜移植术（LKP）后的客观视觉质量。方法：前瞻性临床研究。收集2016年1月至2017年12 月在青岛眼科医院因圆锥角膜行角膜移植的患者40例进行研究,其中PKP组23例（24眼）,LKP组 17例（19眼）,术前2组患者最佳矫正视力、屈光度和临床分期差异均无统计学意义,术后随访并应 用OQAS检查术后的客观视觉质量,检查指标包括客观散射指数（OSI）、调制传递函数（MTF）截止 频率、客观对比度视力和泪膜质量OSI变化。分类变量比较采用χ2 检验,组间连续变量比较采用独 立样本t检验。结果：术后随访23～25个月,PKP组和LKP组患者角膜植片均保持透明状态,2组间 最佳矫正视力、球镜度和柱镜度差异均无统计学意义,但PKP组角膜内皮细胞计数明显低于LKP组 （t=3.91,P<0.001）。PKP组的斯特列尔比、20%对比度视力、9%对比度视力以及OSI与LKP组相比, 差异均无统计学意义。PKP组的MTF截止频率和100%对比度视力较LKP组高,差异均有统计学意 义（t=2.58,P=0.01;t=2.66,P=0.01）。泪膜质量OSI在LKP组明显高于PKP组,差异有统计学意义 （t=3.48,P<0.001）。结论：双通道OQAS测量结果表明圆锥角膜患者行PKP术后的客观视觉质量优 于行LKP术后,PKP术后的MTF截止频率和对比度视力高于LKP术后。     

角膜上皮移植术治疗陈旧性眼部烧伤的临床应用

应用角膜上皮移植术联合干燥板层角膜移植术治疗１６例１６眼曾行新新供眼材料全板层角膜移植术而失败的陈旧性眼部烧伤患者，术后随访３￣１２个月同时，与新鲜供眼材料的板层角膜移植术术后同期结果相比较。ＫＥＰ－ＤＬＫＰ和ＬＫＰ－Ｆ术后，角膜植片透明率分别为８７．５％和３１．２５％，Ｐ〈０．００５，角膜新生儿血管复发率分别为６．２５％和８１．２５％，Ｐ〈０．００５，持续性角膜上皮损发生率分别为０％和８７．５％     

角膜移植术式的重大变化趋势

角膜移植手术是治疗多种角膜疾病的有效方法，有时是唯一方法。能否正确选择手术时机和手术方式，对于治疗效果至关重要。因手术技术的改进、对感染性角膜病较早采用板层角膜移植且疗效肯定、对穿透性角膜移植术后植片慢性失功等问题的发现、研究和认识，以及免疫排斥反应仍是角膜移植早期失败的主要原因，所以传统观念上穿透性角膜移植和板层角膜移植的适应证发生巨大变化，对传统的适应证提出了新的挑战。     

角膜缘库的建立及在眼表重建术中的应用

目的研究改良后的甘油长期冷冻保存法保存的角膜缘组织的超微结构及临床应用效果。方法取角膜移植术后的新鲜角膜缘组织及严重眼球裂伤后健康的角膜缘组织18例（18眼）以改良甘油长期冷冻保存法进行保存,保存时间3～24个月,其中12例应用于临床板层角膜缘移植术,6例保存时间大于半年的角膜缘组织进行光镜及电镜检查。结果11例（12眼）手术均顺利,术后随访6～24个月,无植片融解脱落,10眼植片透明,1眼植片呈半透明状,1眼植片部分血管化。光镜及电镜检查显示角膜组织的显微结构及超微结构得到良好保存。结论改良甘油长期冷冻保存的角膜缘组织具有一定活性,应用于角膜缘移植成功率高,能够满足临床应急需要。     

Observation on ultrastructure and histopathology of cornea following femtosecond laser-assisted deep lamellar keratoplasty for acute corneal alkaline burns

AIM: To demonstrate the changes in ultrastructure and histopathology of the cornea in acute corneal alkaline burns after femtosecond laser-assisted deep lamellar keratoplasty. METHODS: The New Zealand white rabbits treated with alkaline corneal burn were randomized into two groups, Group A (16 eyes) with femtosecond laser-assisted deep lamellar keratoplasty 24h after burn and Group B (16 eyes) without keratoplasty as controls. All eyes were evaluated with transmission electron microscopy (TEM) at 1, 2, 3, and 4wk follow-up, then all corneas were tested by hematoxylin and eosin staining histology. RESULTS: The corneal grafts in Group A were transparent, while those in Group B showed corneal stromal edema and loosely arranged collagen fibers. One week after treatment, TEM revealed the intercellular desmosomes in the epithelial layers and intact non-dissolving nuclei in Group A. At week 4, the center of the corneas in Group A was transparent with regularly arranged collagen fibers and fibroblasts in the stroma. In Group B, squamous cells were observed on the corneal surface and some epithelial cells were detached. CONCLUSION: Femtosecond laser-assisted deep lamellar keratoplasty can suppress inflammatory responses, prevent toxic substance-induced injury to the corneal endothelium and inner tissues with quicker recovery and better visual outcomes.     

继发性角膜溃疡的临床治疗

目的:探讨继发性角膜溃疡的临床治疗方案。方法:回顾性分析我院2006-12/2008-12临床诊断为"继发性角膜溃疡"的患者8例8眼,其中4例选择结膜瓣遮盖术,3例行部分板层角膜移植术(lamellar keratoplasty,LKP),1例因角膜穿孔行穿透性角膜移植术(penetratingkeratoplasty,PKP)。术后随访4~10(平均6)mo,观察视力、溃疡愈合及复发情况、角膜植片和植床情况。结果:行结膜瓣遮盖术者溃疡均治愈;行部分LKP术者植片透明,植床残留薄层瘢痕,行PKP术者植片透明,两者视力均有所提高。所有病例溃疡未见复发。结论:对于继发性角膜溃疡,应该根据不同病例的特点采取个体化的手术方式治疗,从而获得比较满意的临床疗效。     

Ex vivo transfer of Smad7 decreases damage to the corneal endothelium after penetrating keratoplasty

PURPOSE: To determine whether transient gene transfer and expression of the intracellular antagonist of transforming growth factor beta (TGF-beta), Smad7, to corneal endothelial cells decreases corneal endothelial cell damage after penetrating keratoplasty in a rabbit model. METHODS: Rabbit corneas were transfected ex vivo with replication-deficient adenoviruses encoding Flagtagged Smad7, Flag-tagged Smad3, or LacZ (termed AdCMV-Smad7, AdCMV-Smad3, AdCMV-LacZ) and then transplanted to normal rabbits. Expression of the exogenous Smads and phosphorylation of endogenous Smad2 in the transplanted corneal endothelium were examined by immunoblotting and immunohistochemistry with anti-Flag or anti-phosphorylated Smad2 antibodies. Cellular density and morphological changes in the corneal endothelium of the transplanted cornea were evaluated by scanning electron microscopy after transplantation of the Smad-transfected corneas. RESULTS: Transplanted AdCMV-Smad7-transfected corneas significantly inhibited the decrease in cellular density and accelerated wound healing at the host-graft junction when compared with transplanted AdCMV-LacZ-transfected corneas. Transplanted AdCMV-Smad3-transfected corneas showed decreased cellular density and delayed wound healing at the host-graft junction. CONCLUSIONS: Ex vivo gene transfer of Smad7 to corneal endothelial cells inhibits the decrease in cellular density and accelerates wound healing after penetrating keratoplasty in rabbits. Thus, modulation of Smad7 expression in corneal endothelial cells may decrease corneal endothelial cell damage after penetrating keratoplasty.     

部分板层角膜移植联合层间羊膜填垫术治疗穿孔性角膜溃疡

目的 探讨部分板层角膜移植联合层间羊膜填垫术治疗穿孔性角膜溃疡的治疗效果。方法 对28例28眼角膜溃疡并穿孔患者行角膜溃疡板层切除联合层间羊膜填垫术。术后随访6～12个月。结果 28例术后植片植床透明，羊膜平整，前房形成，上皮完整。1例轻度双前房，术后第2d消失。无排斥反应及继发感染等并发症，视力27眼提高，1眼下降。结论 部分板层角膜移植联合层间羊膜填垫术后并发症较少，视力恢复好，是治疗角膜溃疡穿孔的较好方法。