托吡酯对发育期大鼠癫痫模型脑神经元损伤的保护作用

目的:探讨托吡酯对发育期大鼠癫痫发作引起的脑神经元损伤的保护作用。方法:戊四氮点燃发育期大鼠癫痫模型,随机分为正常对照组、点燃模型组和托吡酯治疗组,每组27只,观察大鼠惊厥发作频率、发作程度、血清神经元特异性烯醇化酶(neuron-specificenolase,NSE)水平变化及海马区病理改变。结果:正常对照组大鼠无惊厥发作,血清NSE水平在正常范围,海马区无神经元死亡;点燃模型组大鼠惊厥出现时间早(第3天即有发作),发作程度重(第1周2级以上惊厥14只,并有3只死于惊厥),血清NSE水平犤第7,14,21天分别为(23.4±2.7),(33.4±7.8),(27.7±7.2)μg/L犦及海马区神经元死亡程度明显高于其他两组(F=1.710～5.255,P<0.05);托吡酯治疗组大鼠惊厥出现时间晚,发作程度轻(第1周2级以下轻度发作13只,2～4级中度发作4只,无重度发作),血清NSE水平犤第7,14,21天分别为(18.6±3.7),(14.9±3.7),(12.8±3.2)μg/L犦及海马区神经元死亡程度略高于正常对照组而低于点燃模型组(F=1.710～5.255,P<0.05)。结论:托吡酯对癫痫发作引起的脑神经元损伤有保护作用。     

托吡酯、氟桂利嗪对大鼠海马快速电点燃模型的干预效果

目的：观察托吡酯、氟桂利嗪对大鼠海马快速电点燃模型-慢性颞叶癫痫模型的干预效果。 方法：实验于2004—12在中山大学电生理实验室完成。选择8—10周成年雌性Wistar大鼠60只，右侧海马植入双极电极，随机数字表法分为对照组、单纯刺激组、氟桂利嗪组，托吡酯组和联合用药组。每组12只。对照组植入电极不予电刺激，单纯刺激组仅给予电刺激，氟桂利嗪组，托吡酯组和联合用药组刺激前90min分别给予40mg／kg氟桂利嗪、80mg／kg托吡酯及上述剂量两药联合灌胃。观察点燃率，点燃速度及异常脑电发放时间。经历全面痫性发作后，主动脉灌注法处死动物做右侧海马部尼氏体（标记神经元）和胶质纤维酸性蛋白（标记星形胶质细胞）染色并计数。对照组大鼠与其他组饲养相同天数后处死做病理检查。 结果：对照组动物无死亡，单纯刺激组、氟桂利嗪组，托吡酯组和联合用药组分别有11,10,11,11只大鼠充分点燃并完成后续实验。成功率组间差异无显著性意义（P〉0．05）。（1）单纯刺激组、氟桂利嗪组、托吡酯组和联合用药组首次全面点燃所需刺激次数分别为[（16．36&;#177;4．32）、（18．40&;#177;3．86）、（24．36&;#177;7．71）、（32．01&;#177;9．46）次]，平均异常脑电发放时间分别为[（46．24&;#177;12．22）、（43．52&;#177;13．40）、（30．92&;#177;6．73）、（25．20&;#177;3．86）s]除单纯刺激组、氟桂利嗪组间差异无显著性意义（P〉0．05）。其余两两组间差异均有显著性意义（P〈0．05）；（2）对照组、单纯刺激组、氟桂利嗪组，托吡酯组和联合用药组动物右侧海马神经元计数均值分别为[（5958．5&;#177;167．5）、（4838．5&;#177;70．0）、（5159．0&;#177;175．5）、（5480．5&;#177;219．5）、（5547．0&;#177;321．0）个／mm]，星形胶质细胞计数均值分别为[（2162．5&;#177;173．0）。（3282．0&;#177;163．5）、（2872．0&;#177;163．0）、（2532．5&;#177;82．0）、（2502．5&;#177;1375）个／mm^2，除托吡酯组和联合用药组间差异无显著性意义（P〉0．05），其余两两组间差异均有显著性意义（P〈0．05）。 结论：托吡酯对大鼠海马快速电点燃模型有明显抑制效果。氟桂利嗪作用不明显。联合用药时有一定的叠加作用。     

幼鼠持续惊厥状态脑损伤时托吡酯的神经保护作用

目的：研究托吡酯对惊厥性脑损伤是否具有保护作用。方法：制作毛果芸香碱惊厥持续状态动物模型，给予托毗酯干预，检测海马区神经元坏死、凋亡、凋亡蛋白表达和胶质细胞增生变化情况。结果：毛果芸香碱惊厥持续状态模型鼠病理损伤特点为神经元坏死、细胞凋亡、凋亡蛋白表达增多，胶质细胞增生。托吡酯可减少海马区细胞坏死：CA3区坏死细胞百分比由(72．1&;#177;13．4)％降至(20．6&;#177;7．2)％(P&;lt;0．05)；CA1区由(67．1&;#177;9．3)％降至(18．3&;#177;4．8)％(P&;lt;0．05)；减少细胞凋亡：CA1区单位面积凋亡细胞数由9．4&;#177;6．1降至1．7&;#177;0．8(P&;lt;0．05)；减少凋亡蛋白表达：单位面积caspase-3阳性面积由1．49&;#177;0．25降至0．71&;#177;0．12(P&;lt;0．05)；缓解胶质细胞增生：单位面积胶质细胞数由47．3&;#177;3．6降至19．5&;#177;3．9(P&;lt;0．05)。结论：托吡酯对幼鼠惊厥性神经变性，可减少神经的死亡和凋亡，缓解胶质细胞增生。     

大鼠脑电图及大脑皮质和海马中谷氨酸脱氢酶活性的变化与不同时程急性惊厥的关系

目的：探讨不同时程急性惊厥大鼠脑电图及大脑皮质及海马中谷氨酸脱氢酶活性的变化与惊厥的关系。方法：实验于2004-10／12在河北医科大学基础医学研究所生物化学研究室完成。选用成年健康雄性SD大鼠26只，随机分为急性惊厥模型组(n=20)，腹腔注射60mg／kg戊四氮致痫复制大鼠急性惊厥模型，造模后又分急性惊厥发作后0，4，24h和7d4个时程阶段组，每组5只。生理盐水对照组(n=6)：腹腔注射等体积生理盐水。观察大鼠行为学表现及脑电图的变化，应用DGKC速率法检测大鼠皮质和海马中谷氨酸脱氢酶的活性。结果：①急性惊厥组大鼠注射戊四氮后5～15min均出现Ⅳ-Ⅴ级癫痫样发作，可持续达1h，之后在行为学上的表现逐渐安静和趋于正常。②生理盐水对照组大鼠脑电图为正常α节律，急性惊厥组大鼠脑电图呈现高幅棘-慢、尖-慢波以及多棘、多尖综合波。③谷氨酸脱氢酶活性：急性惊厥模型组大鼠大脑皮质及海马0h[(21510．97&;#177;1040．86)，(17542．51&;#177;1107．39)nkat／g]，24h[(12625．52&;#177;2066．04)，(12091．08&;#177;709．74)nkat／g]；7d[(14253．18&;#177;1099．98)，(13826．10&;#177;797．60)nkat／g]，与生理盐水对照组相比，均显著降低[(25246．99&;#177;2211．15)nkat／g，(2l635．72&;#177;2154．54)nkat／g，P&;lt;0．05]。急性惊厥后7d有所回升，但仍未回到正常水平。结论：戊四氮诱发急性惊厥发作，大鼠脑电图出现特征性波型变化。而脑中谷氨酸脱氢酶活性变化与大鼠行为(痫样发作)并非一致；由于谷氨酸脱氢酶活性降低而影响谷氨酸的代谢，导致脑组织产生兴奋性毒性，也许是惊厥发作的原因之一。     

托吡酯对慢性癫痫幼鼠脑神经元损伤的影响

目的:探讨托吡酯(TPM)对幼鼠慢性癫痫发作引起的脑神经元损伤的影响。方法:将3周龄雄性Wistar大鼠随机分为5组。阳性对照组和TPM不同剂量治疗组先行戊四氮腹腔注射制造幼鼠慢性癫痫模型,再分别给予等量蒸馏水、TPM20、40、80mg/(kg·d)灌胃;阴性对照组则先行生理盐水腹腔注射,再给予等量的蒸馏水灌胃。连续用药2个月。观察幼鼠行为、血清神经元特异性烯醇化酶(NSE)及海马区病理改变。结果:(1)阴性对照组幼鼠无惊厥发作;TPM治疗组与阳性对照组相比,幼鼠惊厥发作次数少、程度轻。(2)TPM治疗组幼鼠血清NSE值均高于阴性对照组而明显低于阳性对照组,且TPM剂量越高,血清NSE值越低。(3)阴性对照组幼鼠海马区未见神经元死亡;TPM治疗组幼鼠海马坏死神经元细胞数明显低于阳性对照组,且TPM剂量越高,坏死神经元细胞数越少,差异有显著性。结论:TPM对幼鼠慢性癫痫发作引起的脑神经元损伤具有保护作用,且其保护作用存在剂量效应,TPM80mg/(kg·d)保护作用最强。     

电惊厥大鼠心电图及血清心肌肌钙蛋白Ⅰ的变化

目的：观察电惊厥大鼠癫痫发作时及发作后心电图变化，并检测动态血清心肌肌钙蛋白Ⅰ的变化。方法：实验于2004-10／12在重庆医科大学附属第一医院中心实验室进行。选20只SD大鼠，用电惊厥仪致痫动物。刺激条件：最大电休克用交流电500Hz，50mA，0.3s。刺激后大鼠100％惊厥发作，以双后肢强直为指标，用标准Ⅱ导联记录发作前、发作时以及发作后的心电图变化，用化学发光法动态检测大鼠惊厥前及惊厥后6，12，24h血清心肌肌钙蛋白水平的变化。结果：20只大鼠均进入结果分析。①血清心肌肌钙蛋白水平：惊厥6h即增高，12h达高峰，24h下降，均高于惊厥前[（9．51&;#177;3．68），（21．7&;#177;6．53），（7．26&;#177;1．95），（0．48&;#177;0．31）μg／L，P〈0．01]。②心电图表现：表现为伴有窄QRS复合波的窦性心动过速。异常主要表现为ST段下降、ST段抬高、T波倒置以及心房纤颤。这种异常改变在癫痫发作停止后仍持续两三分钟。③心率：惊厥时较惊厥前明显增快[（467．6&;#177;56．8），（373．5&;#177;41．6）次／min，t=5．39，P〈0．01]，平均增加86.6次／min。结论：电惊厥大鼠癫痫发作可引起心电图异常改变。心肌肌钙蛋自在惊厥后的升高说明癫痫发作可引起心脏结构性损害。     

托吡酯对局灶性脑缺血大鼠的神经保护作用

背景：近年来研究发现托吡酯能阻断电压依赖性钠通道；增强γ氨基丁酸(Gamma-aminobutyric acid．GABA)能的活性；阻滞α-氨基-3-羟基-5-甲基-4-异恶唑丙酸／海人藻酸(α-amino-3-hydroxy-5-methy-lisoxazole-4-propionic acid／kainic acid．AMPA／KA)型谷氨酸受体的作用，从而推测其有神经保护作用。目的：观察托吡酯对大鼠局灶脑缺血的神经保护作用。设计：完全随机设计、对照实验研究。地点与材料：地点为上海第二医科大学附属仁济医院神经生物实验室。健康雄性大鼠50只Sprague-Dawley，体质量280～350g，随机分为3组，购自中科院上海实验动物中心。干预：以腔内线栓法制作大鼠局灶脑缺血模型，将50只Sprague-Dawley大鼠单纯随机分为对照组(10只)、40mg／kg治疗组(20只)、80mg／kg治疗组(20只)，在缺血30min后一次腹腔注射托吡酯，对照组注射生理盐水。主要观察指标：分别在4，24h后观察神经功能评分，24h后干／湿重法测定脑组织含湿量、氯化三苯基四氮唑(2，3，5-triphenyl tetrazolium chloride，TTC)染色观察测定梗死体积百分比．结果：①24h后神经功能评分显示，无论是40mg／kg组(3．20&;#177;0．52)还是80mg／kg组(2．70&;#177;047)，分别与4h(40mg／k，3．90&;#177;0．31；80mg／k，3．80&;#177;0．41)相比有非常显著(P&;lt;0．01)的差异，两治疗组24h的评分与对照组的评分(3．80&;#177;0．63)相比也有显著(P&;lt;0．05)和差异有非常显著的意义(P&;lt;0．01)。②托吡酯治疗40mg／kg、80mg／kg两组大鼠梗死侧大脑半球的含水量分别为(81．98&;#177;0.78)％，(80．38&;#177;0．80)％较对照组(83．05&;#177;0．56)％有显著的(P&;lt;0．05)和非常显著的(P&;lt;0．01)减少.③40mg／kg托吡酯治疗组观察的梗死体积百分比(38．00&;#177;4．26)％比对照组(41．40&;#177;3．36)％小(P=0．1686)；而80mg／kg治疗组的脑梗死体积百分比(34．50&;#177;6．52)％则较对照组显著减少(P&;lt;0．05)。结论：托吡酯能减轻线栓法大鼠急性局灶脑缺血模型神经功能损害，减轻脑组织水肿程度，大剂量托吡酯还能减小梗死体积，托吡酯对大鼠脑缺血有一定的神经保护作用。     

惊厥阈下电刺激诱发大鼠发作间痫样放电致认知功能障碍时相关神经生物学改变

目的：探讨发作间痫样放电致大鼠认知行为障碍时的相关神经生物学改变。方法：实验于2001—1／2003一12在第三军医大学大坪医院及成都军医总医院完成。选择6-7周龄雄性Wistar大鼠241只，成组设计随机分为海马点燃组（n=62），电极对照组（n=58），正常对照组（n=56）及发作间痫样放电组（n=65）。将大鼠用2％戊巴比妥钠腹腔麻醉后，固定于立体定向仪上，暴露颅顶骨，按Pllegrino大鼠脑图谱确定海马CA1区双极漆包不锈钢刺激电极埋植部位，海马快速电点燃模型电刺激参数为波宽1ms、频率15Hz、串长10s、刺激强度400μA、串隔5min，恒流、单向方波，刺激40次。发作间痫样放电大鼠在海马快速电点燃后13d再次阈下电刺激，电刺激参数为波宽1ms、频率25Hz、串长10s、刺激强度100μA、串隔7min，恒流、单向方波，刺激15次。电极对照组于海马CA1区埋植电极，不给予电刺激。于电点燃后1，7，14d分三次取各组大鼠8只，麻醉断头处死后分离双侧海马，常规方法制备10^5～10^7／mL的细胞悬液及胞浆蛋白，采用荧光探针标记法及流式细胞仪分别定量观测大鼠海马细胞内游离钙含量与钙调素相对活性平均通道荧光的变化，采用蛋白质免疫印迹法检测海马组织总钙调素、钙／钙调素依赖性蛋白激酶Ⅱα与钙／钙调素依赖性蛋白激酶Ⅳ表达的动态变化规律。采用SPSS9．0软件进行单因素或双因素方差分析，以及各组均数的最小显著差值法和Tamhane’s T2检验。结果：实验过程中发作间痫样放电组、海马点燃及电极对照组分别有9、6、2只大鼠因电极脱落而被剔除实验，进入结果分析224只。①海马细胞内游离钙浓度变化：电点燃后1d海马点燃组及发作间痫样放电组大鼠海马细胞内游离钙浓度明显高于对照组及电极对照组[（659．2&;#177;134.3，684.6&;#177;138.5）nmol／L,（209.6&;#177;40．1，221．5&;#177;43．1）nmol／L,（P〈0．01）]，14d时发作间痫样放电组大鼠再次明显高于其他三组[（435．1&;#177;87．1）nmol／L（194．9&;#177;38．3，215．1&;#177;42．0,218．7&;#177;42．9）nmol／L，P〈0．01）]。②海马细胞内游离钙调素平均通道荧光改变：电点燃后1d海马点燃组及发作间痫样放电组大鼠海马细胞内游离钙调素平均通道荧光明显低于正常对照组及电极对照组[（1．16&;#177;0．28，1．26&;#177;0．31），（3．35&;#177;0．82，3．38&;#177;0．83），（P〈0．01～0．05）]，14d时与其他三组比较发作间痈样放电组大鼠再次降低[（2．36&;#177;0．58），（3．08&;#177;0．74,3．61&;#177;0．88,3．20&;#177;0．76），P〈0．05）]。③海马钙调素、钙／钙调素依赖性蛋白激酶Ⅱα及钙／钙调素依赖性蛋白激酶Ⅳ免疫印迹检测结果：电点燃后1d海马点燃组及发作间痫样放电组大鼠海马钙调素、钙／钙调索依赖性蛋白激酶Ⅳ校正吸光度值均较对照组及电极对照组表达明显增高（P〈0．01），14d时发作间痫样放电组大鼠再次明显增高（P〈0．01-0．05）。而电点燃后1d海马点燃组及发作间痫样放电组大鼠钙／钙调索依赖性蛋白激酶Ⅱα校正吸光度值则较对照组及电极对照组明显减少（P〈0．01），14d时发作间痫样放电组大鼠再次明显降低（P〈0.01-0．05）．结论：惊厥阈下电刺激诱发实验大鼠发作间痫样放电所致认知行为异常的同时，亦同步引发了海马细胞内游离钙浓度短期明显增高，海马细胞内游离钙调素甲均通道荧光明显降低，伴有明显的海马细胞钙／钙调素依赖性蛋白激酶信号途径调控紊乱，这对发作间痫样放电所致情感行为异常及学习记忆障碍可能有重要意义．     

草果知母汤对癫痫大鼠行为和海马神经元显微结构的影响

目的：观察中药复方草果知母汤对癫痫大鼠行为和脑海马神经元显微结构的影响。 方法：实验于2005-03／05在广西中医学院中心实验室完成。选择SD雄性大鼠110只，按随机数字表法分成4组，草果知母汤组、苯巴比妥组、模型组各34只（每组10只用于电镜），正常对照组8只（2只用于电镜）。除正常对照组，其他3组均以戊四唑慢性点燃癫痫模型。各组在造模同时即开始给药，草果知母汤组予草果知母汤液（由草果，知母，厚朴，半夏，黄芩，甘草等组成）5g／（kg&;#183;d）灌胃，苯巴比妥组予苯巴比妥混悬液60mg／（kg&;#183;d）灌胃，模型组和正常对照组均以双蒸水灌胃2mL／（ks&;#183;d）；1次／d，持续5周。采用Smialowki 6级评分法进行行为学观察（1级，节律性点头或头部颤搐；6级，强直性惊厥），采用苏木精-伊红染色和光镜技术观察大鼠脑海马神经元的显微结构。 结果：110只大鼠全部进入结果分析，无脱失。①大鼠行为学观察结果：除正常对照组外，各组大鼠均出现惊厥行为，点燃率为83％。随着点燃周数的增加，惊厥级别不断增高，尤以模型组最为显著，第5周时草果知母汤组、苯巴比妥组惊厥级别均显著低于模型组[2．30&;#177;0．54，1．85&;#177;0.46，5．2&;#177;0.80（P〈0．05）]。②大鼠脑海马神经元数目及显微结构：从第4周开始，与正常对照组比较，模型组脑海马区神经元数目明显减少（P〈0．05-0．01）；与模型组比较，草果知母汤组、苯巴比妥组脑海马区神经元数目显著增多（P〈0．05-0．01），后两组差异未见显著性意义（P〉0.05）。与正常对照组比较，模型对照组的神经元出现不同程度的变性、坏死，重者伴有神经元凋亡；草果知母汤组、苯巴比妥组改变不明显。 结论：草果知母汤对癫痫大鼠有明显的抗惊厥作用，其抗痫疗效与苯巴比妥相似，且能较好地抑制癫痫引起的脑海马神经元形态结构的改变。     

学习记忆训练对阿尔茨海默病大鼠空间认知能力及脑组织的保护作用

目的：探讨学习记忆训练对阿尔茨海默病大鼠行为学变化和海马异常磷酸化tau蛋白和神经元型一氧化氮合酶阳性神经元表达的影响。方法：实验于2004-04／07在武汉大学医学院神经生物学实验室完成。选取86只大鼠运用淀粉样B蛋白双侧海马注射建立大鼠阿尔茨海默病模型，随机抽取造模成功大鼠56只分为阿尔茨海默病训练组40只、阿尔茨海默病对照组16只。未建立阿尔茨海默病模型16只大鼠为正常对照组。用Y型迷宫对阿尔茨海默病大鼠进行学习记忆训练4周，分别在训练第7，14，21，28天观察各组大鼠行为学变化和脑内异常磷酸化tau蛋白和海马神经元型一氧化氮合酶阳性神经元表达情况。结果：参加实验动物100只，模型制备成功72只进入结果分析。①训I练第28天时，阿尔茨海默病训练组Y型迷宫检测达标训I练次数，错误反应次数，潜伏期，全天总反应时间[15．82&;#177;2．64．4．18&;#177;1．75，(6．18&;#177;4．86)s，(1236．78&;#177;97．26)s]均接近正常对照组[16.10&;#177;3．94，3．90&;#177;1．72，(5．87&;#177;4．08)s，(1175．40&;#177;81．76)s，(P&;gt;0．05)】，而与阿尔茨海默病对照组大鼠比较差异显著[48．33&;#177;5．10．8．83&;#177;2，98，(11．32&;#177;12．23)s，(2264．32&;#177;244．60)s，(P&;lt;0．05)]。②训练第28天时阿尔茨海默病训练组大鼠脑海马异常磷酸化tau蛋白和神经元型一氧化氮合酶阳性信号的积分吸光度(19．33&;#177;3．14，213．59&;#177;24．38)接近于正常对照组[(16．27&;#177;2．55)，(233．46&;#177;25．83)，P&;gt;0．05]。结论：学习记忆训练能明显改善海马注射淀粉样B蛋白l～40致阿尔茨海默病模型大鼠的空间学习记忆能力，减轻淀粉样B蛋白1～40诱导异常磷酸化tau蛋白的形成，提高海马神经元型一氧化氮合酶阳性神经元的表达。说明学习记忆训练能通过改善阿尔茨海默病认知障碍的主要病理特征的物质基础，从而提高模型大鼠学习记忆力。     

脑尔康对老年痴呆小鼠脑内胆碱酯酶活性及神经元的影响

目的：探讨复方中药脑尔康对小鼠学习记忆障碍的保护作用及其对胆碱酯酶活性的影响及保护神经元的抗痴呆作用机制。方法：健康昆明种雄性小鼠60只，按随机数字表法分为6组，除空白组外，连续造模50d后，每组随机取3只，用苏木精-伊红(HE)染色法，观察小鼠海马CA1区细胞数量及形态，其余动物迅速断头取脑，冰台分离海马及皮质，检测各自的胆碱酯酶活性。结果：模型组胆碱酯酶活性明显增高[脑皮质、海马：模型组(3．0&;#177;0．1)．(2．7&;#177;0．1)mol／s；空白组(2．2&;#177;0．1)，(2．2&;#177;0.1)mol／s](q=16．7，48．2，P&;lt;0．01)，用药各组与模型组比较，除小剂量组外胆碱酯酶活性均明显低于模型组(q=7．9-37．9，P&;lt;0．01)；模型组[(47&;#177;4)个／200μm]海马CA1区神经元数量明显少于空白组[(101&;#177;11)个／200μm](q=5．39，P&;lt;0．01)，可见神经元脱失，并有胶质细胞增生。用药各组与模型组比较，仅有中药大、中剂量组神经元数量显著多于模型组[q=3．4，P&;lt;0．05或q=4．3，P&;lt;0．01)。结论：脑尔康能明显降低老年痴呆模型小鼠皮层及海马胆碱酯酶活性，并有保护海马CAl1区神经元的作用。     

灵芝孢子粉对癫痫大鼠皮质和海马区谷氨酸、γ-氨基丁酸含量的调节

目的：观察使用灵芝孢子粉后，癫痫点燃大鼠模型皮质和海马区谷氨酸和1一氨基丁酸的含量及神经元形态学改变。 方法：实验于2005-08在佳木斯大学基础医学院完成。选择健康雄性wistar大鼠30只（鼠龄12周），随机分为3组，空白对照组、癫痫模型组、灵芝孢子粉组，每组10只。采用戊四氮腹腔注射制作大鼠慢性点燃模型，癫痫模型组采用戊四氮腹腔注射＋生理盐水灌胃；灵芝孢子粉组采用戊四氮腹腔注射＋灵芝孢子粉灌胃；空白对照组采用生理盐水腹腔注射＋生理盐水灌胃。腹腔注射剂量为35mg／kg，灌胃剂量为150mg／kg，1次／d，持续28d。每次注射后观察大鼠60min，记录癫痫发作情况。惊厥发作评分标准：0级，没有行为上的发作；Ⅰ级，节律性点头或头部颤搐；Ⅱ级，阵挛性咀嚼；Ⅲ级，头部颤搐加前肢阵挛性抽搐；Ⅳ级，袋鼠姿势（上身直立）；Ⅴ级，跌倒；Ⅵ级，强直性惊厥。凡显示连续5次Ⅱ级以上惊厥的大鼠为达到点燃标准。点燃后断头取脑，行免疫组化染色观察各指标含量变化及神经元形态学改变。显微镜观察显示棕黄色颗粒者为阳性。结果：实验过程中，无动物死亡，全部进入结果分析。①灵芝孢子粉组和癫痫模型组所有大鼠均有连续多次的Ⅲ～Ⅴ级癫痫发作，均达到癫痫模型点燃标准。②免疫组织化学染色后，空白对照组大脑皮质谷氨酸免疫反应阳性细胞密集分布于各层，海马谷氨酸免疫反应阳性细胞主要分布在海马回的锥体细胞层和齿状回的颗粒层。谷氨酸阳性神经元胞体呈圆形、椭圆形或不规则形，谷氨酸阳性反应产物为棕黄色，呈细颗粒状。癫痫模型组大脑皮质及海马谷氨酸免疫反应阳性细胞数比空白对照组明显增多，差异具有显著性[（206&#177;41），（96&#177;12）个／张，P〈0．05]；[（164&#177;41），（69&#177;14）个／张，P〈0．05]。灵芝孢子粉组大脑皮质及海马谷氨酸免疫反应阳性细胞比癫痫模型组数减少，差异具有显著性[（108&#177;23），（206&#177;41）个／张，P〈0．05]；[（100&#177;12），（164&#177;41）个／张，P〈0．05]。③免疫组织化学染色后空白对照组大脑皮质γ-氨基丁酸有较多分布，浅层尤为明显。大鼠海马回和齿状回均可见γ-氨基丁酸阳性细胞散在分布γ-氨基丁酸阳性神经元胞体呈圆形，胞浆均匀深染。癫痫模型组大脑皮质及海马γ-氨基丁酸免疫反应阳性细胞数比空白对照组明显减少，差异具有显著性[（69&#177;16），（149&#177;21）个／张，P〈0．05]；[（47&#177;9），（108&#177;10）个／张，P〈0．05]；灵芝孢子粉组大脑皮质及海马γ-氨基丁酸免疫反应阳性细胞比癫痫模型组数增多，差异具有显著性[（113&#177;17）（69&#177;16）个／张，P〈0．05]；[（80&#177;11）（47&#177;9），个／张，P〈0．05]。 结论：灵芝孢子粉能够有效降低皮质和海马区兴奋性氨基酸谷氨酸的含量，降低病变神经元兴奋性以达到抗癫痫作用。同时还能增强抑制性氨基酸氨基丁酸的表达，使神经元兴奋性减弱，抑制癫痫的发作，从而减轻癫痫发作给神经系统带来的损伤，所以灵芝孢子粉可能具有减轻痫性发作、保护神经元的作用。     

针刺诱导脑缺血耐受的实验研究

目的：探讨预先针刺是否能诱导脑缺血耐受而具有脑保护作用及对神经元凋亡的影响。方法：实验在黑龙江中医药大学神经解剖教研室进行。取40只Wistar大鼠随机分为正常对照组、假手术组、脑缺血组、针刺预处理组各10只。针刺预处理组脑缺血前给予针刺，采用“4-动脉阻断”方法建立大鼠全脑缺血模型。神经元内氏体亚甲兰特殊染色法观察大鼠脑缺血后海马CA1区神经元内氏体变化；原位细胞凋亡检测法(TUNEL染色)及电镜观察脑缺血后大脑皮质、海马CA1区神经元凋亡情况。结果：脑缺血组皮质、海马CAl区可见大量棕色TUNEL染色阳性细胞核，皮质为(65．36&;#177;10．18)个／视野，海马CA1区(58．34&;#177;9．64)个／视野，针刺预处理组阳性细胞核皮质(10．63&;#177;5．39)个／视野，海马CAt区为(12．16&;#177;5．69)个／视野，较脑缺血组明显减少(q=6．55，8．73，P&;lt;0．05)，内氏体染色阳性细胞数脑缺血组皮质为(16．16&;#177;8．31)个／视野，海马CA1区(21.66&;#177;9．39)个／视野，针刺预处理组阳性细胞核皮质(55．36&;#177;12．19)个／视野，海马CAl区为(79．36&;#177;10．69)个／视野，较脑缺血组明显增多(q=7．65，9．23，P&;lt;0、05)。结论：针刺预处理可以诱导脑缺血耐受，减轻缺血后神经元损伤，抑制神经元凋亡可能是预先针刺发挥脑保护作用的一种途径。     

定志小丸对抑郁模型大鼠海马神经元结构和功能及雌激素分泌的影响

目的：观察定志小丸对抑郁模型大鼠海马神经元和血清雌二醇的影响。方法：实验于2004-09／2005-01在辽宁中医学院中心实验室进行。取成年Wistar雌性大鼠，采用0penfield法进行行为学评分，选评分相近的40只大鼠随机分为正常组、模型组、生理盐水组和定志小丸组，每组10只。除正常组外其他3组采用慢性不可预见性应激造成大鼠抑郁模型，定志小丸组于每次刺激前半小时灌服0．02mL／g的定志小丸提取物的浓缩液(1μg／L)，生理盐水组灌服等容积生理盐水。应用0penfield法在刺激前和刺激后第22天测定行为学(以3min内大鼠水平穿越方格数作为水平活动得分、前肢抬起次数为垂直活动得分)，放免法测定血清雌二醇水平，苏木精一伊红染色观察海马神经元形态变化。结果：所有40只大鼠均进入结果分析。①海马形态学：模型组和生理盐水组海马结构不清晰，细胞形态异常；定志小丸组与正常组无明显差异。②行为学评分：刺激前各组水平活动和垂直活动得分比较均无差异(P&;gt;0．05)，至第22天，模型组和生理盐水组的水平活动得分较正常组低[(34．9&;#177;16．3)，(30．5&;#177;17．7），(48．4&;#177;21．5）次，P&;lt;0．01]，垂直活动得分也较正常组低[(7．2&;#177;3．9)，(6．5&;#177;2．6)，(10．0&;#177;3．2)次，P&;lt;0．01)；定志小丸组此两项评分与正常组无明显差异[(49．3&;#177;23．6)，(9．9&;#177;3．0)次，P&;gt;0．05]。③血清雌二醇：模型组和生理盐水组雌二醇浓度低于正常组[(37．15&;#177;6．90)，(33．34&;#177;14．31)，(64．27&;#177;28．18)pmol／L，t=3．477，6．757，P&;lt;0．01]，而定志小丸组与正常组比无差异[(55．80&;#177;26．32)pmol／L，P&;gt;0．05]。结论：定志小丸对抑郁症模型大鼠的海马组织具有保护作用，对雌激素分泌有调整作用。     

艾灸大椎穴对慢性应激大鼠神经营养因子的影响

目的：试图发现艾灸大椎穴对慢性应激状态下大鼠海马神经元及脑源性神经营养因子(brain-erived neurotrohic factor，BDNF)的影响。方法：SD雄性大鼠18只，按随机数字表法分为正常组、模型组、艾灸组。应用孤养和长期不可预见性的中等强度刺激造成慢性应激失调模型，观察各组大鼠海马神经元的变化。采用苏木精-伊红(HE)染色、尼氏体染色的方法光镜下观察海马神经元形态的改变，用免疫组织化学的方法对海马BDNF阳性神经元进行染色，并用图像分析仪定量分析。结果：慢性应激可致大鼠海马神经元明显受损，BDNF阳性神经元数量亦显著减少，形态以空泡为主。与模型组比较，艾灸穴对此有明显改善作用。艾灸组海马BDNF阳性神经元的平均光密度CA2，CA3，CA3区面积百分比：(16．98&;#177;1．34)％，(32．77&;#177;2．38)％，(2．48&;#177;0．25)％；模型组相应指标分别为(12．21&;#177;1．58)％，(19．89&;#177;3．82)％，(1．04&;#177;0.38)％(F=6．25。P&;lt;0.05；F=12．27，11．45，P&;lt;0.01)。结论：艾灸大椎穴对慢性应激大鼠BDNF有良性调节作用，并对海马神经元有保护作用。     

传统抗癫痫药物和托吡酯对成年癫痫患者生活质量的影响

背景：托吡酯现已广泛应用于临床治疗各型癫痫，但对国内成年癫痫患者生活质量影响的报道较少。目的：比较传统抗癫痫药物和托吡酯对成年癫痫患者生活质量的影响，以探讨产生影响的机制。设计：采用随机对照的临床研究。地点和对象：中南大学湘雅二医院及湘雅医院门诊新诊断癫痫患者，共102例，其中男60例，女42例，年龄16～60岁。干预：102例临床新确诊的成年癫痫患者被随机分为两组：一组予以传统抗癫痫药物单药系统治疗(传统抗癫痫药物组，54例)，另一组予以托吡酯单药治疗(托吡酯组，48例)。1个月后比较两组的发作频率和不良反应，并用QOLIE-30量表对这102例癫痫患者进行生活质量评定。主要观察指标：①两组发作频率和不良反应。②生活质量评分。结果：托吡酯组的发作频率和不良反应均明显低于传统抗癫痫药物组。其中前者有效11例，显效7例，控制16例；而后者有效13例，显效5例，控制13例。托吡酯组的生活质量总分却明显高于传统抗癫痫药物组，分别为60&;#177;13和53&;#177;15，尤其在前5个分项的评分中更加明显。结论：托吡酯能提高癫痫患者的生活质量，其改善生活质量的作用主要是通过控制发作和减轻不良反应实现的。     

天A1中药对穹隆-海马伞切断模型大鼠脑内乙酰胆碱转移酶和脑源性神经生长因子的影响

目的：利用穹隆-海马伞切断模拟制作大鼠痴呆模型，观察天A1中药对模型大鼠脑内乙酰胆碱转移酶(choline acetyltransferas，ChAT)和脑源性神经生长因子(brain-derived neurotzophic factor，BDNF)的影响。方法：健康雌性Wistar大鼠，随机分为模型组、天A1治疗组和对照组。每组各5只。模型组和治疗组动物切断双侧穹隆一海马伞后，分别用生理盐水和中药煎剂灌胃，对照组不切断海马伞并正常喂养。4周后灌注固定动物，显微镜下进行海马CA1区、皮质、杏仁核、Meynert核ChAT和BDNF免疫组化阳性细胞计数，观察天A1中药治疗效果。结果：对照组比较，模型组大鼠脑内海马CA1区、皮质、杏仁核、Meynert核各区ChAT[(6．76&;#177;2．51)，(3．96&;#177;0．86)．(2．36&;#177;1．23)，(4．88&;#177;4．92)个]和BDNF[(4．3&;#177;0．99，8．3&;#177;0．28)，(6．4&;#177;4．51)，(6．6&;#177;4．51)个]阳性神经元数均显著减少(P均&;lt;0．01)；天A1治疗组大鼠脑内各区ChAT阳性细胞数为(34．76&;#177;5．56)，(50．96&;#177;7．55)．(24．92&;#177;1．92)，(29．36&;#177;12．27)个和BDNF(46．8&;#177;5．54)，(57．6&;#177;6．32)，(51．4&;#177;7．96)，(49．3&;#177;7．47)个阳性神经元数与对照组比较，差异无显著性意义(P&;gt;0．05)，而与模型组比较，均明显著增加，差异有非常显著性意义(P&;lt;0．01)。结论：天A1中药制剂对穹隆一海马伞切断大鼠的胆碱能神经元具有保护作用，并能激活BDNF的表达。     

杏仁核点燃癫痫大鼠nNOS的表达及抗癫痫药物的影响

目的建立大鼠杏仁基底外侧核电点燃模型，测定大鼠海马nNOS的表达情况并观察常用抗癫痫药物对nNOS表达的影响，探讨癫痫的可能发病机制及常用抗癫痫药的药理作用。方法把双极电极插入大鼠左侧杏仁基底外侧核，给予慢性电刺激使大鼠达到点燃状态。设立空白对照组、手术对照组、电点燃癫痫组及托吡酯、丙戊酸钠、卡马西平治疗组，采用半定量RT-PCR法检测各组大鼠海马组织nNOSmRNA的表达，并用免疫组织化学法检测各组大鼠海马组织中nNOS的表达。结果杏仁核点燃癫痫组大鼠海马组织中nNOS较空白及手术对照组明显升高。经药物治疗后的nNOS表达出现明显下调，其中托吡酯组与其他两个药物组相比nNOS表达增高，差异具有显著性。免疫组化结果表明nNOS定位于神经元胞浆，癫痫组及托吡酯治疗组的强阳性表达率高于对照组及其他治疗组。结论杏仁核点燃癫痫大鼠海马组织nN08表达明显增加，提示nNOS可能参与了杏仁核点燃癫痫的形成过程；抗癫痫药物明显减少了nNOS的表达，有利于保护正常的神经细胞功能。     

血管性痴呆大鼠模型学习记忆障碍与海马半胱氨酸蛋白酶1蛋白的表达：空白对照及量化盲法评估

目的：定量测定血管性痴呆大鼠的学习记忆成绩，同时观察海马半胱氨酸蛋白酶1蛋白在血管性痴呆大鼠海马中的表达及其意义。方法：实验于2004-01／11在中国医科大学动物实验室进行，取健康雄性SD大鼠100只，随机分正常对照组(n=28，仅分离双侧颈总动脉)、假手术组(n=28，仅麻醉，不做手术)，和血管性痴呆组(n=44)。采用血管阻断的方法，复制大鼠血管性痴呆模型，每组随机取10只大鼠，采用水迷宫实验进行行为学检测，定量测定其学习记忆成绩。每组剩余大鼠在缺血后24，48，72，96，120h及7d处死，用免疫组化方法检测海马区半胱氨酸蛋白酶1蛋白表达水平的变化。结果：100只大鼠死亡4只，进入结果分析96只。①水迷宫学习成绩：血管性痴呆组大鼠游完全程的时间、进入盲端的次数及时间[(3．78&;#177;1．65)min，(5．21&;#177;1.56)次，(1.90&;#177;1．38)min]明显多于正常对照组及假手术组[(0．68&;#177;0．12)min，(1．13&;#177;0．21)次，(0．21&;#177;0．08)min；(0．76&;#177;0．13)min，(0．98&;#177;0．32)次，(0．31&;#177;0．09)min]。②水迷宫记忆成绩：血管性痴呆组大鼠游完全程的时间、进入盲端的次数及时间[(2．98&;#177;1．05)min，(5．62&;#177;2．11)次，(1．78&;#177;0．84)min]明显多于正常对照组及假手术组[(0．24&;#177;0．16)min，(0．48&;#177;0．73)次，(0．04&;#177;0．02)min；(0．35&;#177;0．20)min，(0．52&;#177;0．80)次，(0．10&;#177;0．02)min]。③血管性痴呆组脑缺血后24h半胱氨酸蛋白酶1蛋白表达，为(82&;#177;12)个／视野，第3天时达高峰[(198&;#177;20)个／视野]，明显多于正常对照组和假手术组[(17&;#177;3)，(20&;#177;3)个／视野]。结论：血管性痴呆大鼠发生了明显的学习记忆功能障碍，在血管性痴呆大鼠海马脑区有大量半胱氨酸蛋白酶1蛋白表达。作为一种抑制细胞凋亡的基因，半胱氨酸蛋白酶1蛋白可能对血管性痴呆大鼠脑内与学习记忆密切相关的海马神经元有保护作用。     

番茄汁对D-半乳糖衰老模型大鼠海马神经元的抗衰老作用

目的：探讨番茄汁对衰老模型大鼠海马神经元的抗衰老作用。方法：采用随机数字表将30只Wistar大鼠随机分成3组，建立D-半乳糖亚急性衰老模型，采用生化、光镜和电镜等方法，观察番茄汁对衰老大鼠海马神经元的影响。结果：番茄汁组大鼠大脑丙二醛含量[(3．41&;#177;0．36)μmol／g]，与乳糖组[(4．01&;#177;0．27)μmol／g]相比显著降低(P&;lt;0．05)，超氧化物歧化酶(SOD)活性[(25．06&;#177;1．86]NU／mg]与D-半乳糖组[(20．63&;#177;2．52)NU／mg]相比明显增高(P&;lt;0．0.01)；海马神经元形态结构衰老征象明显减轻。结论：番茄汁可延缓海马神经元的衰老进程，具有一定的抗衰老作用.