大蒜多糖及其硒化产物抗氧化活性的比较研究

目的比较大蒜多糖与硒化大蒜多糖对经过氧化氢(H2O2)诱导损伤的大鼠嗜铬瘤细胞株(PC12)的保护作用。方法用H2O2建立PC12细胞损伤模型,应用四氮唑蓝(MTT)比色法检测PC12细胞的活力;化学比色法测定细胞培养液中乳酸脱氢酶(LDH)释放量、细胞内和细胞培养液中丙二醛(MDA)含量及超氧化物歧化酶(SOD)的活性。结果硒化大蒜多糖、大蒜多糖500μg/ml及以上剂量组和亚硒酸钠12.50μg/ml及以上剂量组均能有效抑制由H2O2引起的细胞存活率的下降(P<0.01)。硒化大蒜多糖、大蒜多糖2000μg/ml可显著降低LDH释放量和细胞培养液及细胞内的MDA含量,以及提高SOD活性(P<0.01),表现出良好的抗氧化活性,而硒化大蒜多糖的抗氧化作用更为明显(P<0.05)。结论硒化大蒜多糖对经H2O2诱导损伤的PC12细胞具有保护作用,这种保护作用明显优于大蒜多糖或单纯硒,其作用机制可能与提高PC12细胞的抗氧化能力有关。     

硒对体外心肌细胞过氧化损伤保护和骨架蛋白actin表达的影响

目的探讨硒对H2O2损伤心肌细胞的保护作用以及α-actin和β-actin表达的影响。方法培养乳鼠心肌细胞随机分为对照组,H2O2组,Se 0.05、0.5、1.0和5.0μmol/L组,采用透射电镜观察实验心肌细胞的超微结构,比色法检测心肌细胞培养介质中LDH和MDA含量,Western Blot检测α-actin和β-actin蛋白的表达。结果 Se 0.5μmol/L可减轻心肌细胞超微结构损伤;各加硒组LDH和MDA水平较H2O2组显著降低(P<0.05),较对照组显著升高(P<0.05),其中Se 0.5μmol/L组LDH和MDA含量在各加硒组中最低;Se 0.5μmol/L组α-actin表达水平较H2O2组升高并高于正常对照组;Se 0.5μmol/L组β-actin表达水平较损伤组升高,低于正常对照组。结论 0.5μmol/L硒对H2O2损伤心肌细胞具有较好的保护作用,可维持和保护α-actin和β-actin的表达,参与细胞骨架蛋白重构。     

玉米低聚糖阿魏酸酯体外抗氧化作用及机制研究

目的观察从玉米麸皮中提取的低聚糖阿魏酸酯(corn feruloyl oligosaccharides,CFOs)体外对H2O2诱导损伤的PC12细胞的保护作用,探讨其抗氧化作用及机制。方法采用H2O2建立PC12细胞损伤模型,应用MTT法检测各组PC12细胞的增殖率;倒置显微镜下观察细胞形态的变化;流式细胞术测定细胞凋亡率;试剂盒检测PC12细胞内及培养液中LDH、SOD、MDA活力及含量。结果除25μmol/L CFOs组外,其余CFOs各组的细胞活力(A值)与H2O2组相比,差别均有统计学意义(P<0.05),且随着CFOs浓度的加大,细胞活力有逐渐增强的趋势。在800μmol/L时,细胞存活率达到最高值。CFOs的抗氧化作用强度与其浓度存在量效及时效双重依赖性关系。与H2O2组相比,CFOs低、中、高浓度组细胞形态均有所好转,随浓度升高,贴壁细胞数量明显增加,细胞突触逐渐增长并趋于正常。细胞凋亡率均低于H2O2组,且具有浓度依赖性,细胞内外MDA含量明显减少;细胞液中LDH活力明显减弱;细胞内SOD活力显著增强(P<0.01)。结论 CFOs对经H2O2诱导的PC12细胞具有保护作用,该作用的机制与提高PC12细胞的抗氧化能力相关。     

过氧化氢致H9c2大鼠心肌细胞DNA损伤作用

目的 研究不同浓度过氧化氢(H2O2)对H9c2大鼠心肌细胞DNA损伤及诱导细胞凋亡的作用.方法 H9c2心肌细胞处理组分别暴露于50,100,200,400μmol/L H2O2中1,3,6,12,24 h后,采用四甲基偶氮噻唑蓝(MTT)法检测细胞存活率;采用丫啶橙/溴乙锭(AO/EB)双染技术观察细胞凋亡;利用单细胞凝胶电泳技术(SCGE)观察细胞DNA损伤.结果 H2O2可以引起H9c2心肌细胞损伤,随时间呈剂量效应关系(P<0.05),其中24 h,400μmol/L剂量组细胞存活率最低达40.6%.H2O2可诱导H9c2心肌细胞出现凋亡并观察到明显的凋亡形态学的改变,与阴性对照组比较,差异有统计学意义(P<0.05),其中6 h时,100 μmol/L剂量组细胞凋亡最明显,凋亡率达22.2%.H2O2可引起H9c2心肌细胞DNA损伤,且损伤随剂量增加而增大(P<0.01),以400 μmol/L剂量组最为明显,细胞DNA损伤率可达64.0%.结论 H2O2造成H9c2心肌细胞氧化损伤和DNA损伤,随着其暴露剂量和时间的不同表现为凋亡和坏死.     

原花青素对过氧化氢损伤血管内皮细胞的保护作用

目的：探讨原花青素对氧化损伤的人脐静脉内皮细胞（HUVEC）的保护作用。方法：体外培养内皮细胞,将细胞分为6组,即空白对照组（Control组）、氧化损伤组（H2O2组）、氧化损伤加入VitC对照组（VC＋H2O2组）、氧化损伤加入原花青素5μmol/L、25μmol/L、50μmol/L浓度组（procyanidin-L＋H2O2组、procyanidin-M＋H2O2组、procyanidin-H＋H2O2组）。将750μmol/LH2O2作用于加入VitC及不同浓度原花青素预培养24h的内皮细胞,继续培养18h,以细胞毒四唑盐（MTT）比色试验、乳酸脱氢酶（LDH）、一氧化氮（NO）、丙二醛（MDA）作为检测指标。结果：原花青素呈剂量依赖性降低H2O2对内皮细胞的生长抑制率,降低MDA、LDH量,增加培养液中NO2-/NO3-含量,各指标比较差异有统计学意义（P〈0.01）。结论：原花青素可保护和修复过氧化氢诱导的血管内皮细胞的损伤,其作用可能与抗氧化、促进NO释放有关。     

H2O2诱导建立HTR-8/SVneo胎盘滋养细胞氧化应激模型

目的通过观察不同浓度过氧化氢(H2O2)对人胎盘滋养层细胞HTR-8/SVneo处理不同时间后的氧化应激状态,探讨建立H2O2诱导HTR-8/SVneo胎盘滋养细胞氧化损伤模型的最佳条件。方法2017年11月至2018年2月于西安交通大学第一附属医院进行实验研究。将HTR-8/SVneo细胞实验组分别给予不同终浓度的H2O2(50、150、300、500μmol/L),同时设立对照组,相同实验条件下分别继续培养1、3、6、12h,随后对此进行细胞存活率、细胞形态学观察,对超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、乳酸脱氢酶(LDH)、过氧化氢酶(CAT)测定,流式细胞仪分析活性氧自由基(ROS)水平和细胞凋亡的水平。结果与对照组比较,300μmol/L 3h经H2O2处理后可降低HTR-8/SVneo细胞的存活率(P=0.00<0.01),而且提高了LDH的释放,促使了SOD、CAT活性的下降和MDA含量的增加(P=0.00<0.01)。300μmol/L3h经H2O2处理后增加了细胞的凋亡率(P=0.00<0.01)及细胞内ROS水平(P=0.00<0.01)。同时,300μmol/L3h经H2O2处理后可明显促进细胞的形态学改变。结论通过H2O2可以成功建立HTR-8/SVneo氧化应激损伤细胞模型,最佳实验条件为300μmol/L H2O2处理3h。     

两种细胞建立肝细胞氧化损伤模型比较

目的比较过氧化氢诱导人肝癌细胞株(Hep G2)与正常肝细胞株(Chang liver)建立的肝细胞氧化应激损伤模型。方法用不同浓度过氧化氢诱导Hep G2细胞和Chang liver细胞氧化应激损伤,采用噻唑蓝法检测细胞生长抑制率;分光光度法测定培养液中乳酸脱氢酶(LDH)、谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)活性,以及肝细胞中超氧化物歧化酶(SOD)活性、还原型谷胱甘肽(GSH)及丙二醛(MDA)含量。结果作用时间在0.5~4 h时,在75~600μmol/L浓度范围内,过氧化氢可浓度和时间依赖性地抑制2种肝细胞增殖,促使细胞内AST、ALT和LDH向培养液中释放;细胞中SOD和GSH活性明显降低,MDA含量明显升高,表明2种肝细胞氧化损伤模型构建成功;选择300μmol/L H2O2作用4 h为致Hep G2和Chang liver细胞氧化应激损伤的最佳条件,结果显示,Hep G2和Chang liver细胞的生长抑制率分别为62%和76%,培养液中ALT、AST、LDH活性分别为(18.2±0.2)、(34.2±4.6)、(544.2±26.8)和(19.1±0.1)、(30.3±2.5)、(536.8±22.3)U/L,细胞中MDA含量分别为(7.8±0.9)和(8.6±1.1)nmol/mgprot。结论Hep G2与Chang liver细胞均可用于氧化应激细胞损伤模型的制备。     

枸杞多糖对小鼠睾丸细胞DNA损伤的保护作用

目的 :研究枸杞多糖 (LBP)对过氧化氢 (H2 O2 )引起的睾丸细胞DNA氧化损伤的保护作用。方法 :睾丸细胞先用不同浓度LBP作用 1h ,再加入 10 0 μmol LH2 O2 共同培养 2 5min ,然后用单细胞凝胶电泳技术(SCGE)测定DNA链断裂情况 ,分析LBP的抗氧化损伤作用。结果 :H2 O2 作用一定时间后 ,可引起DNA链断裂。 50、10 0、2 0 0、40 0 μg mL的LBP预处理可使H2 O2 染毒细胞的拖尾百分率和尾长显著降低。结论 :LBP本身没有致氧化损伤作用 ,它能够清除自由基 ,对氧化应激所致的睾丸细胞DNA损伤具有抑制作用     

H_2O_2诱导大鼠原代海马神经细胞建立氧化损伤细胞模型

目的以H2O2诱导大鼠原代海马神经细胞建立氧化损伤细胞模型。方法取新生大鼠海马神经细胞,培养至第5天,加入终浓度为50、100、150、200和250μmol/L的H2O2,培养12、24和48 h后,观察细胞形态,通过MTT法测定细胞存活率,CCK-8法测定细胞损伤率,LDH酶标法测定上清液LDH活性,Annexin V-FITC/PI流式细胞术检测细胞凋亡率,确定出细胞损伤的最佳浓度时间。结果 H2O2可诱导神经细胞损伤且呈时间浓度依赖性。150μmol/L H2O2作用24 h时,MTT法测得细胞存活率为(70.18±4.66)%;CCK-8法测得细胞损伤率为(28.30±6.72)%;LDH酶标法测得LDH活性为(208.81±12.24)U/L;流式细胞术测得细胞早期凋亡率为(11.53±2.53)%,晚期凋亡率及坏死率为(13.75±2.22)%。结论 150μmol/L的H2O2作用24 h,可成功构建海马神经细胞氧化损伤模型。     

硒对体外培养血管内皮细胞的影响

目的 研究不同浓度的硒对体外培养人脐静脉血管内皮细胞(HUVEC-304)的影响.方法 体外培养人脐静脉血管内皮细胞株,在培养液中加入不同浓度的亚硒酸钠(50、100、500、1 000、2000 nmoL/L),连续培养48 h后,以瑞氏-吉姆萨染色观察细胞形态,以四唑氮蓝(MTT)比色法检测细胞活性,并检测培养液中超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)、内皮型一氧化氮合酶(eNOS)的活力,丙二醛(MDA)、NO的含量.结果 硒浓度为1 000、2000nmoL/L时,细胞出现损伤样改变.硒浓度为100nmol/L时,细胞活性高于正常对照组(P＜0.05);硒浓度为1 000、2000 nmol/L时,细胞活性降低.与对照组比较,硒浓度为50～500 nmol/L时,培养液中的SOD、GSH-Px活力升高,差异有统计学意义(P＜0.05);硒浓度达2000nmoL/L时,SOD、GSH-Px活力明显降低(P＜0.01).与对照组比较,MDA在硒低浓度时无显著变化,当硒浓度升高至1 000、2 000 nmol/L时显著增高(P＜0.05,P＜0.01).低浓度的硒增强eNOS活力,降低iNOS活力,降低NO浓度;高浓度的硒降低eNOS活力,增强iNOS活力,升高NO浓度.结论 低浓度的硒对脐静脉血管内皮细胞有促进增生作用,高浓度的硒有损伤作用,并随剂量的增高而加重.     

山楂对人血管内皮细胞的作用

目的 :　探讨山楂对人血管内皮细胞的保护作用及其机制。方法 :　通过原代培养人脐静脉内皮细胞 (EC) ,从细胞形态学、细胞生长状态、细胞内乳酸脱氢酶 (LDH)释放、内皮细胞对单核细胞 (MC- EC)的粘附作用、以及低密度脂蛋白脂质过氧化 (TBARS)值测定方面 ,观察不同剂量山楂对氧化修饰的低密度脂蛋白 (Ox LDL)引起的 EC损伤的影响和对 EC的直接作用。结果 :　Ox LDL对 EC具有明显的损伤作用 ,Ox LDL组的细胞存活率低于正常对照组 (P<0 .0 5) ,细胞内 LDH释放率和 MC- EC粘附率均高于正常对照组 (P<0 .0 5) ;山楂可以有效地抑制 Ox LDL对 EC的损伤作用 ,三个剂量的山楂 +Ox LDL各组的细胞存活率均显著高于 Ox LDL 组 (P<0 .0 5) ,LDH释放率、MC- EC粘附率及 TBARS值均显著低于 Ox LDL组 (P<0 .0 5) ,呈剂量效应关系。单纯山楂组的中、高剂量组 MC- EC粘附率均显著低于正常对照组 (P<0 .0 5)。结论 :　山楂可以有效地保护人内皮细胞免受 Ox LDL的损伤 ,其机制与山楂的抗氧化作用和对 EC的直接作用有关     

维生素C和谷胱甘肽对离体肺泡巨噬细胞超微弱发光的影响

目的　研究外源维生素 C(VC)和谷胱甘肽 (GSH)对家兔离体肺泡巨噬细胞(AM)超微弱 (自主 )发光的影响。方法　将 AM悬浮在含有 VC或 GSH的 DMEM培养介质中 ,放入一特制恒温箱的培养盒内 ,连续通入不同浓度的氧气 ,用发光仪检测培养 AM的超微弱发光。结果　浓度超过 0 .3mmol/L的 VC能明显增强有氧培养细胞超微弱发光和加速细胞死亡 ,对无氧培养细胞的影响不明显。低浓度 (0 .0 3mmol/L) VC与 GSH相同 ,能降低由高浓度 (99.1 % )氧暴露引起的细胞发光增强。结论　细胞在含氧气体中的自发氧化是产生超微弱发光的重要原因 ;高浓度 VC能促进离体细胞氧化损伤 ,GSH则有抗氧化作用。     

β-胡萝卜素对心肌细胞缺氧损伤的保护作用研究

目的 :　研究β-胡萝卜素在离体心肌细胞缺氧损伤时的保护作用。方法 :　建立幼鼠心肌细胞缺氧损伤模型 ,观察乳酸脱氢酶 ( LDH)、氧自由基 ( OFR)、超氧歧化酶 ( SOD)、丙二醛( MDA)等项过氧化物造成心肌损伤的检测指标 ,并对经 β-胡萝卜素预处理的心肌细胞缺氧模型进行观察。结果 :　乳鼠心肌细胞经 2 h缺氧损伤后 LDH,MDA,OFR,SOD等项指标均与对照有显著性差异 ( P<0 .0 1 )。用 β-胡萝卜素预处理的心肌细胞缺氧后经检测其保护作用随浓度梯度增强。结论 :　 1 0 -2和 1 0 -1mmol/L的 β-胡萝卜素对心肌细胞缺氧具有抗氧化保护作用。     

锌对缺血再灌注大鼠肝脏金属硫蛋白-1基因表达的影响

目的　研究锌对肝脏缺血再灌注损伤 (HIRI)保护作用的分子机制。方法　采用RT- PCR技术 ,检测分析金属硫蛋白 - 1 (MT- 1 )基因在 HIRI大鼠肝组织中的表达和锌对其表达的调节。结果　各组大鼠肝组织均有MT- 1基因表达 ;缺血 30 min、再灌 90 min大鼠肝组织中 MT- 1m RNA较对照组显著降低 (P<0 .0 1 ) ;灌胃补锌后 ,HIRI大鼠肝 MT- 1 m RNA转录水平较对照组明显增高 (P<0 .0 1 ) ,单纯补锌亦可上调其组织中 MT- 1基因表达 (P<0 .0 1 )。结论　在锌对HIRI产生保护作用的分子机制中 ,调节其肝组织中 MT- 1转录水平的表达可能是一条重要途径。     

支链氨基酸提高大鼠游泳耐力作用探讨

目的 :　探讨支链氨基酸 (BCAA)对提高大鼠运动耐力的作用。方法 :　取雄性Wistar大鼠 2 1只 ,随机分为三组 :正常组、游泳对照组及游泳补充 5% BCAA饲料组。两个游泳组每天游泳训练 1 h,1 0 d后 ,游泳 6h,观察游泳大鼠的存活率 ,测定血乳酸和尿素氮水平 ,血清和骨骼肌乳酸脱氢酶 (LDH)活力 ,线粒体脂质过氧化物 (LPO)水平和线粒体膜的粘度系数。另取昆明种小鼠 ,随机分为三组 ,用实验一相同的饲料喂养 ,两周后 ,于每只小鼠尾静脉注射 15N-甘氨酸 (15N-Gly) 1 .0 mg,注射后 和 组立即游泳 ,分别于注射后的 1、2、3及 4h,测定各组骨骼肌蛋白质中15N-甘氨酸 (15N- Gly)的丰度。结果 :　BCAA可明显提高大鼠游泳存活率 ,抑制游泳运动后大鼠的血乳酸浓度、LDH活力、骨骼肌 LPO的升高幅度 ,抑制骨骼肌 LDH活力和膜流动性下降的趋势。并且 BCAA还可增加 15N- Gly在骨骼肌蛋白质中的滞留时间。结论 :　BCAA可改善运动后骨骼肌线粒体功能 ,改善运动性疲劳 ,提高大鼠的运动耐力     

硒在前列环素生物合成中作用机制的研究

目的　评价硒在前列环素生物合成中的作用机制。方法　用低硒饲料、补硒饲料和常规饲料饲养雄性大鼠 1 4周后 ,测定血液和某些组织中硒、前列环素 ( PGI2 )、血栓素 ( TXA2 )和脂质过氧化物 ( LPO)的含量 ,谷胱甘肽过氧化物酶 ( GSH- Px)活性及前列腺素内过氧化物合成酶( PGHS)的过氧化物酶活性 ,并采用 RNA折叠程序对 3个前列环素合成酶 ( PGIS)基因 3 非翻译区 ( UTR)的二级结构进行计算机预测 ,与已知的 39个真核生物硒蛋白基因的硒代半胱氨酸插入序列 ( SECIS)进行比较。结果　低硒大鼠血浆 PGI2 浓度、血和组织中硒含量及 GSH- Px活性显著下降 ,LPO水平升高 ,但三组之间血浆 TXA2 水平和组织中 PGHS-过氧化物酶活性均无显著差异 ,在 PGIS基因中未见到硒蛋白所特有的 SECIS。结论　PGIS可能不是硒酶 ,硒可能是通过 GSH-Px或其他硒蛋白抑制过氧化物的产生而影响 PGI2 的合成     

维持生长大鼠最佳学习记忆功能的补锌量研究

目的　研究不同含锌饲料对生长大鼠学习记忆的影响及与其脑中生长抑素、锌和钙含量的关系 ,以确定维持大鼠最佳学习记忆状态的补锌范围。方法　以含锌量为 2 0、50、1 0 0、2 0 0、40 0和 80 0 mg/kg的饲料饲喂 88g左右的 Wistar大鼠 ,雌雄各半 ;以避暗法测试各组实验动物学习记忆能力 ,并以放免法测定了脑组织生长抑素 ;以原子吸收光谱法测定脑组织锌和钙含量。结果　 1 0 0 mg/kg和 2 0 0 mg/kg的饲料锌含量 ,使大鼠学习记忆功能最好 ,而较低和较高的饲料锌水平对学习记忆功能均有不同程度的不利影响 ;同时较低和较高的饲料锌水平使下丘脑、海马和大脑皮层生长抑素水平都有不同程度的降低 ;另外 ,较低的饲料锌水平可使血液锌、海马、大脑皮层和下丘脑锌水平一致性地降低 ,同时使大脑皮层钙含量降低。结论　 1 0 0～ 2 0 0 mg/kg饲料锌含量 ,对维持大鼠学习记忆功能是最适的补锌范围 ,这与大鼠脑组织较高的生长抑素、锌和钙水平一致。     

硒和维生素E对胰岛细胞保护作用的研究

目的　观察膳食硒 ( Se)、维生素 E( VE)水平对糖尿病中间性状——胰岛β细胞合成及分泌胰岛素功能的影响 ,探讨其对糖尿病 ( DM)易感性的作用。方法　用低 Se膳食造成大鼠低 Se模型 ,再应用链脲佐菌素 ( streptozotocin,STZ)诱导成 DM模型 ,结合放免技术观察胰岛功能的变化。结果　低 Se、低 VE大鼠对 DM易感性明显增强 ,表现为血清胰岛素水平明显降低 ,胰岛素分泌贮备显著减少 ,血清果糖胺水平明显升高。分别或联合补充 0 .2 mg Se及 50 0 mg VE/kg饲料可程度不同地提高血清胰岛素水平及其分泌贮备 ,降低血清果糖胺含量 ,其中联合补充 Se和VE的生物学效应最佳。结论　DM发作前 ,Se和 VE的联合生物学效应 ,可拮抗 DM致病因素引起的胰岛损害 ,具有重要的胰岛细胞保护作用     

牛磺酸和复合微量营养素对大鼠视网膜mGluR6 mRNA的影响

目的　探讨牛磺酸和复合微量营养素对光照和暗适应条件下大鼠视网膜代谢型谷氨酸受体 6亚型 (m Glu R6) m RNA的影响。方法　在幼年大鼠饲料中添加牛磺酸或 VA、VB1、VB2 、尼克酸、Zn、Se等复合微量营养素 ,营养干预 4wk后 ,采用原位分子杂交技术检测各组大鼠视网膜 m Glu R6m RNA在光照和暗适应条件下的分布和表达。结果　光照和暗适应时 m Glu R6m RNA均集中表达于内、外核层和神经节细胞层。牛碘酸能增加光照和暗适应时上述部位m Glu R6m RNA的表达 ,而复合微量营养素对其表达无明显影响。结论　除双极细胞外 ,部分神经节细胞也表达 m Glu R6;光感受器突触前膜存在反馈性的 m Glu R6。牛磺酸可能通过促进光照和暗适应条件下 m Glu R6m RNA的表达 ,调制大鼠视杆通路视觉信号传递     

甲鱼脂肪酸和微量元素含量的分析及其抗氧化作用研究

目的　研究甲鱼脂肪酸和微量元素组成及含量特点 ,揭示其抗氧化作用效果。方法　用气相色谱法和原子吸收光谱法分别测定甲鱼脂肪酸和微量元素组成及含量 ,并按 0 .8%的剂量饲喂大鼠 ,测试大鼠血液中谷胱甘肽过氧化物酶 (GSH- Px)和超氧化歧化酶 (SOD)、肝脏中SOD、肌肉中过氧化氢酶 (CAT)活性以及血清和肝脏中丙二醛 (MDA)含量。结果　甲鱼单不饱和脂肪酸 (MUFA)、Zn含量高 ,Mn、Fe及 Cu的含量也高 ,且使试验组大鼠血液中 GSH- Px和SOD,肝脏中 SOD和肌肉中 CAT活性增高 ,而血清和肝脏中 MDA含量下降。结论　饲喂甲鱼粉可提高大鼠体内抗氧化酶系的活性 ,并能降低体内脂质过氧化物含量 ,说明甲鱼粉具有较强的抗氧化作用效果。