七氟醚预处理大鼠肾缺血-再灌注损伤中HSP70的表达及保护机制

目的 观察七氟醚预处理大鼠肾缺血-再灌注损伤模型中HSP70的表达变化,探讨其保护作用机制.方法 72只SD雄性大鼠随机分为对照组(C组)、缺血-再灌注组(I/R组)、七氟醚预处理组(S组),每组各三个时相(4、12、24 h).所有大鼠于实验结束时测定肾组织过氧化物歧化酶(SOD)活性、丙二醛(MDA)水平及血清肌酐(Cr)、尿素氮(BUN)水平.观察肾组织病理变化,免疫组化法检测大鼠肾组织热休克蛋白70(HSP70)、核转录因子-κB(NF-κB)的表达情况.结果.与C组比较,I/R组和S组HSP70表达均显著增加(P<0.05);与I/R组比较,S组HSP70表达在12 h达到高峰,并且显著高于I/R组;C组NF-κB几乎不表达,I/R组NF-κB表达显著增加(P<0.05),并且随再灌注时间的延长而增加;S组再灌注4、12、24 h NF-κB表达显著低于I/R组(P<0.05).与C组比较,I/R组和S组MDA显著升高而SOD显著降低(P<0.05);与I/R组比较,S组SOD显著升高而MDA显著降低(P<0.05);与C组比较,随再灌注时间的延长,I/R组和S组BUN、Cr均显著升高;与I/R组比较,S组12、24 h BUN、Cr均显著低于I/R组;S组肾损伤的病理变化较I/R组显著减轻.结论.七氟醚预处理能诱导肾缺血-再灌注大鼠模型HSP70的表达增强和提早表达,减弱NF-κB活化,增加肾缺血-再灌注后氧自由基的清除能力,实现对肾缺血-再灌注损伤的保护作用.     

环磷腺苷葡胺对大鼠心肌缺血再灌注损伤后细胞凋亡和NF-κB表达的影响

目的 观察环磷腺苷葡胺对大鼠心肌缺血再灌注损伤后细胞凋亡及NF-κB表达的影响.方法 30只SD大鼠随机等分为3组:对照组为假手术组仅进行开胸手术;缺血再灌注组心肌缺血30 min,再灌注100 min;环磷腺苷葡胺注射组在心肌缺血前静脉输注环磷腺苷葡胺2 mg/kg.心肌细胞凋亡和NF-κB表达分别采用TUNEL法和免疫组织化学方法检测.结果 环磷腺苷葡胺注射组大鼠心肌细胞凋亡指数及心肌组织中NF-κB表达明显低于缺血再灌注组(P<0.01),但高于对照组(P<0.01).结论 应用环磷腺苷葡胺注射液可明显降低缺血再灌注损伤大鼠的心肌细胞凋亡和NF-κB表达.     

[Gly14]-Humanin对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤的影响及其机制研究

目的:通过观察[Gly14]-Humanin(HNG)预处理对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤后神经功能缺损评分、脑水肿、细胞凋亡及炎症反应等方面的影响,探讨其相关的神经功能保护机制。方法:将96只健康雄性SD大鼠随机分为HNG组、生理盐水组、模型组及假手术组,每组24只。采用改良的Zea-longa线栓法建立大脑中动脉缺血再灌注损伤模型,生理盐水组与假手术组大鼠术前7天给予生理盐水(2ml/kg)连续尾静脉注射,每日1次;HNG组给予HNG(2μl/kg),而模型组除正常饲养外术前不接受任何处理。各组大鼠在线栓法造模成功后6h,再拔除线栓恢复血液灌注24h后进行神经功能缺损评分(NDS),开阔法观察SD大鼠脑缺血再灌注后行为学改变;采用干湿质量法检测脑组织含水量、HE染色观察缺血区病理学改变,ELISA法测定大鼠脑组织核因子-κB p65(NF-κB p65)及干扰素-γ(IFN-γ)水平,原位末端标记染色观察凋亡细胞数并进行统计学分析。结果:①与假手术组相比,其余3组大鼠的NDS、脑组织含水量、NF-κB p65及IFN-γ水平及细胞凋亡数均升高,而行为学指数降低,差异有显著性意义(P0.01—0.05);②与生理盐水组及模型组相比,HNG组大鼠的NDS、脑组织含水量、NF-κB p65和IFN-γ水平、细胞凋亡数降低,而行为学指数增高,差异有显著性意义(P0.01—0.05);③HNG组大鼠脑组织IFN-γ与NF-κB p65含量水平呈正相关(r=0.762,P0.001)。结论:HNG预处理减轻脑缺血再灌注损伤过程中的脑水肿,下调脑组织中NF-κB p65的水平,减少促炎介质(IFN-γ)的释放,抵制神经细胞的凋亡,从而减轻临床神经功能的缺损。     

NF-κB参与低氧预适应对自体原位肝移植大鼠JNK通路的影响

背景:在肝脏缺血再灌注损伤中,NF-κB与JNK通路的串扰方式决定了细胞的死亡或存活.而将低氧预适应用于肝移植过程所导致的细胞凋亡现象,尚未见有报道.目的:探讨低氧预适应后NF-κB的表达对移植肝JNK通路的影响及保护作用.方法:采用经门静脉灌注法建立大鼠自体原位肝移植模型,SD大鼠随机分为正常对照组:不接受任何处理;自体移植组:行自体原位肝移植;低氧预适应组:移植前体积分数8%氮氧混合气体的低氧预处理90 min,然后行自体原位肝移植.分别于移植后 1,6,24 h处死大鼠取肝脏标本检测肝组织丙二醛、超氧化物歧化酶水平,免疫组化方法测定大鼠肝组织p-JNK蛋白,RT-PCR检测肝脏 NF-κB mRNA含量,透射电子显微镜下观察肝细胞的超微结构变化.结果与结论:与对照组比较,两移植组肝组织丙二醛水平升高,超氧化物歧化酶水平降低(P < 0.05);与自体移植组比较,低氧预适应组丙二醛水平显著降低、超氧化物歧化酶水平显著升高(P < 0.05).与正常对照组比较,两移植组各时相p-JNK蛋白的表达、NF-κB mRNA的转录水平显著升高 (P <0.05);与自体移植组比较,低氧预适应组NF-κB mRNA转录水平显著增高(P < 0.05),p-JNK蛋白的表达明显降低(P < 0.05).透射电镜下自体移植组肝细胞出现典型的凋亡征象,而低氧预适应组肝细胞无明显凋亡形态.提示,肝移植大鼠低氧预适应后可能通过上调NF-κB的表达,减少活性氧释放,抑制JNK通路的持续激活,从而抑制肝细胞凋亡,减轻肝脏缺血再灌注.     

异氟醚预处理延迟相对兔心肌缺血-再灌注损伤核因子-κB的影响

目的 探讨异氟醚预处理延迟相对心肌缺血-再灌注损伤的保护机制.方法 雄性新西兰兔30只,体质量2.0～2.5 ks.随机分成3组(n=10):假手术组(C组)、缺血再灌注组(I/R组)、2.0%异氟醚预处理组(S组).C组吸入100%氧气2 h,24 h后仅行左冠脉套线而不阻断160 min,I/R组吸入100%氧气2 h,24 h后行左冠状动脉前降支阻断40 min,再灌注120 min;S组吸入2.0%异氟醚+100%氧气2 h,24 h后处理同I/R组.各组分别于左冠前降支阻断前20 min(TI)、左冠前降支阻断20 min(T2)、左冠前降支阻断40 min(T3)、心肌再灌注1 h(T4)、心肌冉灌注2 h(T5)五个时点抽取颈内动脉血ELISA法测血清IL-10和TNF-α水平.再灌注结束后观察心肌细胞超微结构的变化,免疫印记法测心肌核因子-κB(NF-κB)活性水平,同时用伊文思蓝和TTC染色法测心梗面积.计量资料采用均数±标准差(x±s)表示,用SPSS 13.0统计学软件进行分析,组间采用方差分析,以P<0.05为差异具有统计学意义.结果 与I/R组比,S组IL-10明显升高(P<0.05),TNF-α明显降低(P<0.05),NF-κB表达降低(P<0.05),心肌梗死面积减少(P<0.05).结论 异氟醚预处理延迟相通过抑制心肌NF-κB的活性,调控炎性细胞因子平衡来减轻心肌缺血-再灌注损伤发挥保护作用.     

七氟醚预处理延迟相对大鼠心肌缺血再灌注损伤的保护作用

[目的]探讨七氟醚预处理延迟相对大鼠心肌缺血再灌注(IR)损伤的保护作用.[方法]将18只健康成年雄性大鼠随机分成3组:假手术组(C组)、缺血再灌注组(IR组)和七氟醚组(S组).C组仅开胸并分离冠状动脉左前降支,但不阻断血流150 min;IR组行冠状动脉左前降支阻断30 min,再灌注120 min; S组予以吸入...     

七氟醚预处理对大鼠肝缺血-再灌注后心肌损伤的影响

目的 探讨七氟醚预处理对大鼠肝缺血-再灌注后心肌损伤的影响及可能机制.方法 健康雄性SD大鼠30只,随机分为假手术组(Sham组,n=10)、肝缺血一再灌注组(IR组,n=10)和七氟醚预处理组(S组,n=10)三组.建立大鼠肝缺血-再灌注模型,S组大鼠在阻断入肝血流前吸入2.5%七氟醚30 min,IR组和s组大鼠肝缺血45 min再灌注120 min.分别测定各组大鼠血清谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、心肌型肌酸激酶(CK-MB)、乳酸脱氢酶1(LDH1)浓度及心肌组织丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、肿瘤坏死因子(TNF-α)、白细胞介素6(IL-6)浓度,光镜观察心肌组织形态学.结果 与Sham组比较,S组和IR组血清ALT、AST、CK-MB、LDH1浓度均明显升高(P<0.05);心肌组织MDA、TNF-α和IL-6浓度明显升高(P<0.05),SOD活性明显降低(P<0.05).与IR组比较,S组血清ALT、AST、CK-MB、LDH1浓度明显降低(P<0.05);心肌组织MDA、TNF-α和IL-6浓度明显降低(P<0.05),SOD活性明显升高(P<0.05).Sham组心肌肌束及细胞形态正常,IR组和S组可见肌束断裂、细胞边界不清及炎症细胞浸润,S组改变较IR组轻微.结论 七氟醚预处理可减轻大鼠肝缺血-再灌注后心肌损伤,其作用机制可能与减少氧自由基的释放和抑制炎症反应有关.     

生长激素对大鼠心肌缺血/再灌注后心肌细胞凋亡及凋亡相关基因NF-κB蛋白表达的影响

目的　研究生长激素 (growthhormone ,GH)对大鼠心肌缺血 /再灌注 (IR)后心肌细胞凋亡及相关基因NF -κB蛋白表达的影响。方法　 2 4只大鼠随机分为 3组 ,假手术组 (n =8,仅手术 2 4h)、心肌缺血 /再灌注 (IR)组 (n =8)、GH组 (n =8) ,后两组均缺血 30min ,再灌注 2 4h ,其中GH组的每只大鼠实验术前皮下肌注GH 1U/kg体重 ,连续 7d ,其中第 7次皮下注射于手术前进行。前两组每只大鼠相应皮下肌注生理盐水 0 .5mL/d。检测心肌细胞凋亡及心肌细胞核NF -κB蛋白表达并进行心肌组织病理学检查。结果　大鼠心肌IR 2 4h后心肌细胞凋亡指数明显上升 (对照于假手术组 ,P <0 .0 5 ) ,心肌细胞核NF -κB蛋白表达呈阳性染色指数明显升高 (P <0 .0 5 ) ,心肌病理检查见心肌缺血区呈大小不一的坏死孔灶 ,缺血心肌间有炎症细胞浸润 ,心肌排列不整齐 (HE染色 ) ,而GH组心肌细胞凋亡率及心肌细胞核NF -κB蛋白表达呈阳性染色指数明显好于IR组 (P <0 .0 5 ) ,心肌细胞炎症细胞也明显减少 ,坏死灶也少于IR组。结论　GH可以减少心肌缺血 /再灌注后心肌细胞凋亡及细胞核NF -κB染色阳性指数 ,说明GH对IR后的心肌具有保护作用     

七氟醚预处理早期对大鼠心肌缺血再灌注心肌细胞自噬的影响

目的探讨七氟醚预处理早期对大鼠心肌缺血再灌注心肌保护作用及对心肌细胞自噬的影响。方法清洁级雄性SD大鼠45只,8~12周龄,体质量200~240 g。随机分为假手术组(Sham组,n=15)、缺血再灌注组(I/R组,n=15)和七氟醚预处理组(Sevo组,n=15)。采用冠脉阻断30 min再灌注120 min的方法制备大鼠心肌缺血再灌注损伤模型。Sevo组于缺血前30 min行七氟醚预处理:吸入2.5%七氟醚15 min,洗脱15 min。随后结扎左前降支,阻断冠脉血流30 min后,解除阻断再灌注120 min。再灌注120 min时测定肌钙蛋白I(c Tn I)和肌酸激酶同工酶(CK-MB)的浓度、心肌梗死面积、LC3-Ⅱ和Beclin-1的蛋白表达情况。结果与Sham组比较,I/R组心肌c Tn I和CK-MB浓度升高,心肌梗死面积增加,LC3-Ⅱ和Beclin-1蛋白表达上调(P0.05);与I/R组比较,Sevo组心肌c Tn I和CK-MB浓度降低,心肌梗死面积减少(P0.05),LC3-Ⅱ和Beclin-1蛋白表达差异无统计学意义(P0.05)。结论七氟醚预处理早期能减轻心肌缺血再灌注损伤,但是七氟醚预处理早期未显著影响心肌细胞自噬水平。     

东菱迪芙对大鼠局灶性脑缺血再灌注后NF-κB表达的影响

目的 探讨东菱迪芙对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤的影响及其机制。方法 72只健康SD大鼠随机分为假手术组、缺血再灌注组和东菱迪芙组，采用大脑中动脉线栓法（MCAO）建立大鼠局灶性脑缺血再灌注模型，在大鼠脑缺血2h再灌注22h时，用免疫印迹法检测海马核因子-κB（NF-κB）、抑制蛋白-κB（IκB）、Bel-2、Bax的活性。用氯化三苯四氮唑染色和原位缺口末端标记（TUNEL）法分别观察脑梗死体积比和凋亡细胞数。结果 脑缺血．再灌注后，NF-κB、Bcl-2、Bax的活性明显升高，IκB的活性明显下降，凋亡细胞数、梗死体积比明显增高。东菱迪芙可明显降低NF-κB的活性、Bax的表达、凋亡细胞数、梗死体积比，增加IκB和Bcl-2的表达。结论 东菱迪芙对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤有保护作用，抑制IκB的降解及NF-κB的活性，从而减轻脑细胞凋亡是其脑保护机制之一。     

热休克蛋白27介导异氟醚预处理延迟相对缺血/再灌注损伤兔心肌的保护作用研究

目的 探讨热休克蛋白27(HSP27)在异氟醚预处理延迟相对缺血/再灌注(I/R)兔心肌保护中的作用机制.方法 将30只新西兰大白兔随机分成假手术组(C组)、I/R组和体积分数为2%的异氟醚预处理组(S组)3组,每组10只.C组吸入纯氧2 h,24 h后仅行左冠状动脉(冠脉)套线而不阻断血流160 min;I/R组吸入纯氧2 h,24 h后结扎左冠脉前降支阻断血流40 min,再灌注120 min;S组吸入2%的异氟醚和纯氧2 h,24 h后处理同I/R组.再灌注后抽血测定各组丙二醛(MDA)含量;用伊文思蓝和氯化三苯四唑(TTC)染色法测定心肌梗死面积;用蛋白质免疫印迹法(Western blotting)测定各组HSP27和核转录因子-κB(NF-κB)的蛋白表达.结果 异氟醚预处理延迟相可降低I/R损伤心肌梗死面积[(19.7±2.8)%比(37.8±1.75)%],上调HSP27表达[(84.5±4.3)灰度值比(53.1±3.8)灰度值],下调NF-κB表达[(58.6±4.2)灰度值比(119.3±5.6)灰度值],降低MDA含量[(5.24±0.45)kU/L比(9.42±0.83)kU/L],差异均有统计学意义(P均＜0.05).结论 HSP27介导了异氟醚预处理延迟相对I/R心肌的保护作用.     

NF-κB参与低氧预适应对自体原位肝移植大鼠JNK通路的影响

背景：在肝脏缺血再灌注损伤中,NF-κB与JNK通路的串扰方式决定了细胞的死亡或存活。而将低氧预适应用于肝移植过程所导致的细胞凋亡现象,尚未见有报道。目的：探讨低氧预适应后NF-κB的表达对移植肝JNK通路的影响及保护作用。方法：采用经门静脉灌注法建立大鼠自体原位肝移植模型,SD大鼠随机分为正常对照组：不接受任何处理;自体移植组：行自体原位肝移植;低氧预适应组：移植前体积分数8%氮氧混合气体的低氧预处理90min,然后行自体原位肝移植。分别于移植后1,6,24h处死大鼠取肝脏标本检测肝组织丙二醛、超氧化物歧化酶水平,免疫组化方法测定大鼠肝组织p-JNK蛋白,RT-PCR检测肝脏NF-κB mRNA含量,透射电子显微镜下观察肝细胞的超微结构变化。结果与结论：与对照组比较,两移植组肝组织丙二醛水平升高,超氧化物歧化酶水平降低（P〈0.05）;与自体移植组比较,低氧预适应组丙二醛水平显著降低、超氧化物歧化酶水平显著升高（P〈0.05）。与正常对照组比较,两移植组各时相p-JNK蛋白的表达、NF-κB mRNA的转录水平显著升高（P〈0.05）;与自体移植组比较,低氧预适应组NF-κB mRNA转录水平显著增高（P〈0.05）,p-JNK蛋白的表达明显降低（P〈0.05）。透射电镜下自体移植组肝细胞出现典型的凋亡征象,而低氧预适应组肝细胞无明显凋亡形态。提示,肝移植大鼠低氧预适应后可能通过上调NF-κB的表达,减少活性氧释放,抑制JNK通路的持续激活,从而抑制肝细胞凋亡,减轻肝脏缺血再灌注。     

右美托咪定对七氟醚麻醉下老年大鼠海马神经元自噬的影响

目的探讨右美托咪定(dexmedetomidine, DEX)对七氟醚麻醉下老年大鼠海马神经元自噬的影响。方法 60只雄性SD大鼠随机分为对照组、七氟醚组、DEX预处理组,每组20只,对照组大鼠吸入体积分数60%O_2 6 h,七氟醚组大鼠吸入体积分数3.4%～3.6%七氟醚6 h,DEX预处理组大鼠在吸入七氟醚前1 h腹腔注射15μg/kg DEX。分别于麻醉前(T_1)、麻醉后12 h(T_2)、24 h(T_3)、48 h(T_4)每组各处死大鼠5只并取出其海马,HE染色进行组织病理学观察,采用荧光双标法检测LC-3与NeuN、mTOR共定位表达。采用免疫组织化学法检测海马组织自噬蛋白Beclin-1相对表达量,采用Western blot法检测海马组织自噬蛋白LC3-Ⅰ、LC3-Ⅱ及p-Akt、p-mTOR通路蛋白相对表达量。于麻醉后48 h处死大鼠前进行神经功能评分,记录各组Morris水迷宫实验结果。结果七氟醚组海马组织神经细胞胞质染色变浅、细胞核染色增深,DEX预处理组神经细胞形态改善和胞核染色较七氟醚组明显减轻;七氟醚组、DEX预处理组大鼠神经运动功能评分[(7.69±2.79)、(13.38±2.36)分]低于对照组[(22.15±1.47)分](P0.05),七氟醚组低于DEX预处理组(P0.05);七氟醚组、DEX预处理组、对照组大鼠逃避潜伏期依次缩短(P0.05),平台象限停留时间、穿越平台象限次数依次增加(P0.05);T_1～T_4时,对照组大鼠海马组织LC3-Ⅰ、LC3-Ⅱ、Beclin-1及p-Akt、p-mTOR蛋白相对表达量比较差异均无统计学意义(P0.05);T_2～T_4时,七氟醚组、DEX预处理组海马组织LC3-Ⅰ、LC3-Ⅱ及Beclin-1蛋白相对表达量较T_1时增高(P0.05),p-Akt、p-mTOR蛋白相对表达量较T_1时降低(P0.05),DEX预处理组LC3-Ⅰ、LC3-Ⅱ、Beclin蛋白相对表达量低于七氟醚组(P0.05),p-Akt、p-mTOR蛋白相对表达量高于七氟醚组(P0.05)。结论右美托咪定可明显改善七氟醚麻醉下老年大鼠的神经运动和认知功能,可能与激活PI3K/Akt/mTOR通路、抑制海马神经元自噬,从而减轻脑损伤有关。     

七氟醚通过调控NF-κB信号通路对顺铂诱导的肺癌细胞转移能力的研究

目的研究七氟醚对顺铂诱导的肺癌细胞增殖、侵袭、迁移的影响以及作用机制。方法采用前瞻性研究,用含1.7%七氟醚、3.4%七氟醚、5.1%七氟醚混合气体处理肺癌A549细胞6 h。实验分为4组:对照组只充入95%O2、5%CO2混合气体;七氟醚组为充入含不同浓度七氟醚的混合气体处理细胞6 h;顺铂组为加入顺铂(10 mg/L)处理细胞24 h;联合组为加入顺铂(10 mg/L)处理24 h,同时6 h内充入含5.1%七氟醚混合气体处理。噻唑蓝(MTT)法检测细胞活力,细胞划痕实验检测细胞的迁移,Transwell小室法检测细胞侵袭能力,蛋白质印迹法(Western blot)分析Bcl-2相关X蛋白(Bax)、B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)、核因子-κB P65(NF-κB P65)蛋白的表达。结果不同浓度七氟醚显著降低肺癌A549细胞的活力,浓度越高抑制作用越强(P0.05);联合组细胞的活力显著高于单一作用。与对照组相比,5.1%七氟醚、顺铂组均可降低细胞的迁移率和侵袭数目(P0.05);联合组细胞的迁移率和侵袭数目显著高于顺铂组和5.1%七氟醚组(P0.05)。顺铂、七氟醚可显著抑制A549细胞中P65、Bcl-2蛋白水平(P0.05),升高Bax蛋白水平(P0.05)。顺铂联合七氟醚处理A549细胞,P65、Bcl-2蛋白水平低于顺铂组、七氟醚组(P0.05),Bax蛋白水平增加(P0.05)。结论七氟醚可抑制顺铂诱导的肺癌A549细胞的侵袭、迁移能力,其作用与下调P65、Bcl-2蛋白的表达量,上调Bax蛋白水平有关。     

阿托伐他汀预处理对大鼠缺血-再灌注心肌氧自由基和凋亡的影响

目的 观察短期阿托伐他汀预处理对心肌缺血-再灌注损伤(MIRI)大鼠心肌超氧化物歧化酶(SOD)和丙二醛(MDA)浓度、心肌细胞内Caspases-3、Caspases-8和NF-κB表达的影响,探讨阿托伐他汀的心肌保护作用机制.方法 将80只雄性SD大鼠随机等分为四组:假手术组(A组,生理盐水5 mL/d)、缺血再灌注组(B组,生理盐水5 mL/d)、阿托伐他汀标准剂量预处理组(C组,阿托伐他汀20 mg/d)和阿托伐他汀强化剂量预处理组(D组,阿托伐他汀40mg/d).灌胃3d后,第4天制作大鼠在体心肌I/R模型,结扎左冠状动脉前降支30 min,再灌注120 min后,用比色法检测心肌中MDA和SOD浓度,Western blot检测活化Caspase-3、Caspase-8和NF-κB的表达.结果 与B组比较,C组SOD浓度明显增加(P＜0.05),MDA浓度明显减少(P＜0.05),Caspases-3和Caspases-8表达明显减少(P＜0.05),NF-κB表达明显减少(P＜0.05);与C组比较,D组SOD浓度增加更为明显(P＜0.05),MDA、Caspases-3和Caspases-8及NF-κB表达减少更为明显(P＜0.05).结论 阿托伐他汀预处理明显增强抗氧化酶活性,抑制脂质过氧化损伤,降低细胞凋亡,减轻MIRI损伤,表现出较强的心肌保护作用,其机制可能与增加心肌NF-κB表达有关.     

白介素-1信号通路在七氟烷预处理脊髓损伤中的作用

目的探讨白介素-1(IL-1)信号通路在七氟烷预处理脊髓损伤(SCI)中的作用。方法按照是否进行SCI和是否进行预处理的原则将30只大鼠分为假手术组(S组)、脊髓损伤组(SCI组)和七氟烷预处理组(SEV组),每组10只。采用BBB评分评估三组神经功能缺损情况,运用HE染色计数存活神经元数量,通过免疫组化来标记小胶质细胞及IL-1β的数量,Western blot法测定IL-1β蛋白和NF-κB蛋白的表达水平。结果SCI组和SEV组的BBB评分低于S组,存活神经元数量少于S组(P<0.05);SEV组的BBB评分高于SCI组,存活神经元数量多于SCI组(P<0.05)。SCI组、SEV组的小胶质细胞和IL-1β免疫荧光表达数量多于S组(P<0.05);SEV组的小胶质细胞和IL-1β免疫荧光表达数量少于SCI组(P<0.05)。SCI组、SEV组的IL-1β和NF-κB蛋白表达量高于S组(P<0.05);SEV组的IL-1β和NF-κB蛋白表达量低于SCI组(P<0.05)。结论七氟烷预处理可能通过抑制IL-1信号通路减轻大鼠SCI。     

七氟醚预处理对心肌缺血再灌注损伤大鼠血清NF-κB、TNF-α、IL-6表达的影响

目的探究七氟醚(SEVO)预处理对心肌缺血再灌注损伤大鼠血清核因子(NF-κB)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素6(IL-6)表达的影响。方法雄性SD大鼠70只,随机分为7组(n=10):(1)Shame组(假手术组)。(2)I/R组(单纯缺血再灌注组)。(3)BW1组:缺血前注射NF-κB特异性激动剂灰树花β-葡聚糖BW1 1.0 mg/kg,30 min后进行缺血再灌注。(4)SEVO+NO组:缺血前先吸入SEVO 30 min后,停止吸入165 min,不进行缺血再灌注。(5)SEVO组:缺血前30 min吸入SEVO维持30 min。(6)BW1+SEVO组:缺血前先注射BW1,30 min后,吸入SEVO。(7)SEVO+BW1组:缺血前先吸入SEVO 30 min后,立即注射BW1。对于SEVO处理组,SEVO持续吸入30 min后,停止吸入15 min以排除SEVO,心肌缺血30 min后,再灌注2 h。比较各组麻醉后即刻、吸入SEVO 15 min、缺血前、缺血15 min、再灌注1 h、再灌注2 h时的心率(HR)、平均动脉压(MAP)、收缩压与心率的乘积(RPP)情况。采用三苯基四唑氯化物(TTC)染色法测定心肌危险区域梗死面积和梗死区域面积。30只大鼠随机分为3组,每组10只,Shame组、I/R组、SEVO组大鼠处理同上。再灌注2 h后,腹主动脉取血,采用放射性免疫法分别测各组血清NF-κB、TNF-α、IL-6水平。结果吸入SEVO 15 min时,SEVO-NO组、SEVO组、BW1+SEVO组、SEVO+BW1组的HR、MAP、RPP水平均显著低于麻醉后即刻水平(P0.05)。各组危险区面积差异无统计学意义(P0.05)。与I/R组相比,SEVO组和BW1+SEVO组梗死区面积显著减小(P0.05);与SEVO组相比,SEVO+BW1组梗死面积显著增加(P0.05)。与Shame组相比,I/R组NF-κB、TNF-α、IL-6水平显著增加(P0.05);与I/R组相比,SEVO组NF-κB、TNF-α、IL-6水平显著下调(P0.05)。结论七氟醚预处理,可减少大鼠心肌缺血再灌注后梗死面积,保证血流动力学稳定,并通过抑制NF-κB信号通路活性来抑制TNF-α、IL-6分泌,保护心脏以免于受缺血再灌注的损伤。     

七氟醚预处理联合后处理对大鼠缺血-再灌注损伤心肌的保护作用及机制

目的探讨大鼠缺血-再灌注损伤后七氟醚预处理联合后处理对其心肌的保护作用和机制。方法选取60只SD大鼠,随机分为对照组、模型组、预处理组、后处理组、联合组,各组12只,对照组进行假手术,模型组大鼠建立IRI损伤模型;预处理组大鼠在IRI模型制备过程中,仅于结扎前30 min吸入七氟醚(2. 5%,15 min);后处理组大鼠仅在再灌注前10 min吸入七氟醚(2. 5%,15 min);联合组大鼠在结扎前30 min吸入七氟醚(2. 5%,15 min),并在再灌注前10 min吸入七氟醚(2. 5%,15 min)。观察:各组大鼠心肌病理变化,缺血前30 min、缺血30 min、再灌注2 h时心率(HR)、平均动脉压(MAP)、心率与收缩压的乘积(RPP),超氧化物歧化酶(SOD),丙二醛(MDA)含量及凋亡指数。结果光镜下联合组细胞轻度水肿,纤维排列基本整齐,细胞间质部分水肿;预处理组和后处理组心肌病理变化大致相同,比模型组好,但差于联合组。与对照组比较,模型组、预处理组、后处理组及联合组HR三个时间段(缺血前、缺血时、再灌注后)差异均无显著性(P 0. 05),而再灌注后MAP、RPP相对对照组均明显降低,差异具有显著性(P 0. 05)。模型组、预处理组、后处理组及联合组各组间HR、MAP、RPP差异均无显著性(P 0. 05)。SOD:对照组明显高于模型组、预处理组、后处理组及联合组,而预处理组、后处理组及联合组SOD含量较模型组高,预处理组、后处理组SOD含量低于联合组(P 0. 05),预处理组、后处理组SOD含量差异无统计学意义(P 0. 05); MDA含量及凋亡指数:对照组低于其余四组,模型组高于其余三组,联合组较预处理组和后处理组低(P 0. 05),预处理组、后处理组比较差异无显著性(P 0. 05)。对照组TNF-α、caspase-3表达均明显低于其余四组,模型组则又明显高于其余3组,联合组明显低于预处理组和后处理组,差异均具有显著性(P 0. 05),预处理组和后处理组差异无统计学意义(P 0. 05)。结论七氟醚预处理或后处理均可对大鼠IRI产生心肌保护作用,效果相当,但两者联合效果更佳,其作用机制可能与下调caspase-3蛋白,抑制炎症因子的激活相关。     

核因子-κB对急性缺血-再灌流心肌细胞凋亡及左室局部功能的影响

目的 探讨核因子-κB（nuclear factor-κB，NF-κB）对急性缺血-灌流心肌细胞凋亡及左室局部功能的影响。方法 4只健康杂种犬随机分为对照组（C组）、缺血-再灌流组（IR组）和缺血-再灌流加特异性NF-抑制剂二硫代氨基甲酸吡咯烷组（PDTC组）。IR组于第一对角支以下1cm处套扎左冠状动脉前降支30min，恢复血流再灌流120min，PDTC组在心肌缺血前应用PDTC（100mg／kg），C组游离左冠状动脉前降支不结扎。超声心动图中的应变率法测量左室局部收缩功能，Simpson’s双平面法测左室射血分数（EF），应用脱氧核甘酸末端转移酶介导的缺口末端标记法（TUNEL）测心肌细胞凋亡指数，免疫组化法及蛋白印迹（western-blot）检测心肌组织中NF-κB的表达。结果 R组NF-κB在缺血心肌组织中表达增高，显著高于C组（P〈0．05），而PDTC组NF-κB表达明显减弱，显著低于IR组（P〈0．05）；PDTC组心肌细胞凋亡数较IR组明显减少（P〈0．05）；IR组左室前壁缺血节段收缩期峰值应变率（SRpeak）明显减低（P〈0．01），PDTC组的应变率与IR组比较明显增高（P〈0．05）。射血分数在三组间差异无统计学意义。结论 NF-κB在心肌缺血-再灌流中起重要作用，PDTC通过抑制NF-κB的表达从而减轻心肌缺血-再灌流损伤，改善心功能。     

生长激素对大鼠心肌缺血再灌注后心肌细胞凋亡的作用

目的:研究生长激素对大鼠心肌缺血再灌注(myocardialischemiareper-fusion,MIR)后心肌细胞凋亡及其机制的影响。方法:24只大鼠随机分为3组,假手术组(仅手术24h)、MIR组、生长激素组,每组8只。后两组均缺血30min,再灌注24h,其中生长激素组的每只大鼠每天皮下肌注生长激素1U/kg,连续7d。前两组每只大鼠相应皮下肌注生理盐水0.5mL/d。以TUNEL法检测心肌细胞凋亡情况,DAB免疫组化法检测心肌细胞核NF-κB蛋白、心肌细胞胰岛素样生长因子-1(insulin-likegrowthfactor-1,IGF-1)的表达并进行心肌组织病理学检查。结果:大鼠MIR24h后心肌细胞凋亡指数明显上升犤MIR组(16.17±5.02)%,假手术组为0犦(t=9.111,P<0.05)。心肌细胞核NF-κB蛋白表达呈阳性染色指数(positiveindex,PI)明显升高犤MIR组(18.60±7.21)%,假手术组为0犦(t=7.297,P<0.05)。心肌病理检查见心肌缺血区呈大小不一的坏死孔灶,缺血心肌间有炎症细胞浸润,心肌排列不整齐(HE染色),而生长激素组心肌细胞凋亡率及心肌细胞核NF-κB蛋白PI明显好于MIR组(t=4.302,2.943,P<0.05)。生长激素组IGF-1着色强度明显高于另外两组(χ2=12.443,9.167,P<0.05),心肌细胞间炎症细胞也明显减少,坏死灶也少于MIR组。结论:生长激素可以减少MIR后心肌细胞凋亡及细胞核NF-κB