日本血吸虫抗原的纯化及其应用价值的研究——Ⅱ.虫卵抗原五种提取液圆盘电泳的初步比较

用聚丙烯酰胺凝胶圆盘电泳分析血吸虫可溶性虫卵抗原(SEA)五种提取液:H-SEA、U-SEA、H-SEA_1、U-C-SEA_1、JEU.其显示的电泳区带分别为8、6、1、1、1条。其中 H-SEA_1显有1条区带,具有纯度较高,糖蛋白性质的抗原组分。用 ELISA 法检测血吸虫特异性抗体,它有较高的敏感性与特异性.其纯化方法简便有效,操作过程主要是经高速离心后用高氯酸处理,沉淀除去非糖蛋白物质,然后经葡萄糖凝胶柱层析。尿素溶解性虫卯抗原(JEU)亦显示1条电泳区带.     

五种抗原用酶联免疫吸附试验诊断血吸虫病的研究

本文对用5种血吸虫抗原作ELISA诊断血吸虫病的效果进行比较研究.除盐水浸提成虫抗原SEW外,其余4种抗原(可溶性虫卵抗原SEA,尿素溶性虫卵抗原JEU,可溶性成虫抗原SWA,尿素溶性成虫抗原JWU)均具较高的敏感性(88.24%～90.20%)和特异性(86.84%～94.73%),这4种抗原间的敏感性和特异性均无显著性差异(P>0.05).结果表明用本文方法制备的2种尿素溶性抗原JEU和JWU,其制备方法简便、抗原产量高、诊断效果好,使通常废弃的沉渣得到利用,为抗原来源增辟新途径,具有较好的实用和经济价值.     

4种抗原用于斑点免疫金银染色试验诊断日本血吸虫病的比较

采用斑点免疫金银染色(Dot-IGSS)试验对4种日本血吸虫抗原的敏感性及特异性进行比较。结果显示粗提成虫抗原(AWA)、尿素溶解性成虫抗原(JWU)、硫酸铵沉淀成虫抗原(AW)和可溶性虫卵抗原(SEA)检测40例日本血吸虫病人血清抗体的敏感性均达100.0％,40例正常人血清的可疑阳性反应分别为2.5％、0、2.5％和0,40例肝吸虫病人血清的可疑交叉率分别为2.5％、0、2.5％和0,表明在高敏感的IGSS检测系统中,粗提成虫抗原的敏感性和特异性与部分纯化者和虫卵抗原无显著性差异(P>0.05)。     

日本血吸虫成虫和虫卵可溶性抗原及其组分抗原的研究

目的:探讨日本血吸虫雄虫、雌虫、虫卵的可溶性抗原雄虫(AWA-m、雌虫AWA-f、虫卵SEA)及其组分抗原的特性.方法:用DE22纤维素层析柱对日本血吸虫AWA-m,AWA-f,SEA抗原进行纯化,得到相应组分抗原.分别以SDS-PAGE和Western blot对组分抗原进行全面分析,并与相应未经纯化的可溶性抗原作比较.结果:经DE22纤维素层析处理的AWA-m,AWA-f,SEA,均能获得含多种蛋白的组分抗原.SDS-PAGE结果表明,AWA-m见10条主带和9条次带,其中Mr 37 000,28 000,25 000为特异性条带,出现8条免疫反应阳性带;而AWA-m组分抗原为9条蛋白带和6条免疫反应阳性带.AWA-f见15条蛋白带,其中Mr 26 500为特异性条带,组分抗原为8条蛋白带.AWA-f粗抗原及其组分抗原均见9条反应带.SEA见8条主带和10条次带,13条为免疫反应阳性条带;SEA组分抗原见11条带,其中9条为免疫反应阳性带.结论:AWA-m,AWA-f,SEA经DE22纤维素层析纯化获得组分抗原,方法简单、可靠.该组分抗原含有粗抗原的主要免疫反应成分,去除了多种与日本血吸虫病免疫反应无关的蛋白.     

日本血吸虫天然抗原分子的柱层析分离纯化与鉴定

目的分离纯化日本血吸虫成虫(AWA)和未成熟虫卵(SIEA)可溶性抗原中的单一蛋白,为血吸虫病免疫诊断、预防提供新的抗原分子。方法柱层析分离纯化成虫和未成熟虫卵可溶性抗原,SDS—PAGE及银染色进行分析鉴定。结果得到了三种不同大小血吸虫分子抗原AwA18000u,SIEA42000u,SIEA130000u。结论实验证明柱层析法是一种快速分离纯化血吸虫单一组分抗原简单而有效的方法。     

日本血吸虫微粒体抗原的研究——Ⅰ、成虫微粒体的制备及其抗原性质的初步报告

血吸虫病的血清诊断通常用成虫或虫卵的可溶性抗原。鉴于宿主对寄生虫的免疫反应不仅是对可溶性抗原产生抗体,曾用高浓度尿素溶液对血吸虫卵匀浆的离心沉淀物进行再提取,得到的尿素溶解性抗原在与宿主抗体的反应中显示的活力较常用的水溶性虫卵抗原(SEA)高。这种尿素溶解性抗原是大分子量蛋白质的复杂混合物,来自细胞的各种颗粒成分,为进一步阐明颗粒性抗原的性质,我们从日本血吸虫成虫中分离出微粒体部分。以此作为抗原,用ELISA法测定宿主的抗体,效果良好。     

影响血吸虫虫卵抗原间接血凝试验因素的探讨

日本血吸虫卵虫抗原间接血凝试验(简称间凝)的应用,国内已有报告。现将我们就影响间凝试验的诸问题,摘要报告如下: 一、虫卵抗原的制备与致敏的关系我们按常规获得虫卵干粉,用生理盐水配成2％的悬液,经磨碎、冻融、冷浸制成2％干卵粗抗原(代号为“O”抗原);将“O”抗原经葡聚糖凝胶G——100柱层析,收集具有活性的第一峰抗原液,制成2％干卵细抗原(代号为“G”抗原;将“O”抗原1份加9份pH6.4PBS混和隔水煮沸加热100℃30分钟,制成干卵热抗原(代号为“P”抗原)。上述“O”抗原和“G”抗原用酚试剂测定蛋白含量,分别为2.5mg/ml和1.16mg/ml,均稀     

疟疾抗原抗体常量交叉免疫电泳分析

本文利用交叉免疫电泳技术对诺氏疟原虫可溶性抗原进行了分析。实验系采用100×100×3mm~3琼脂糖玻璃板和含Ca~(2 )的巴比妥缓冲液、第一向电泳所用电压为8V/cm,电泳1小时,第二向电泳所用电压为2V/cm,电泳6—8/小时。电泳后经压片、洗绦、再压片、干燥、染色、脱色和再干燥步骤后观察结果。实验结果表明,作为标准对照的卵白蛋白抗原和人血清抗原分别与相应的抗血清形成许多沉淀峰,而且其抗原的浓度与沉淀峰高度明显相关。在待测抗原的分析中,诺氏疟原虫可溶性表面抗原能与相应的抗血清形成6条沉淀峰,由于所用抗原预先用同位素进行了标记,因而通过放射自显影提高了敏感性和分辨力。     

人血清载脂蛋白A-I的分离纯化及其抗血清的制备

用超速离心法分得高密度脂蛋白,经琼脂糖平板电泳检定为一条区带。用甲醇/氯仿(1:2V/V)脱脂。然后经SephadexG-150层析及DEAE-纤维素(DE-52)离子交换柱所得蛋白在280nm有一吸收峰。做PAGE仅出现一条区带,电泳双扩散未见交叉沉淀线,说明所得载脂蛋白A-I(apoA-I)是纯的。PAGE测得分子量为28,000,其氯基酸组成与文献报道基本一致。用纯化的apoA-I免疫新西兰兔,获得效价为1:32的特异性抗人血清apoA-I抗血清。     

不同抗原在酶标记免疫吸附试验(ELISA)检测曼氏血吸虫病中的应用

<正> 作者用七种不同的曼氏血吸虫抗原,对曼氏血吸虫病人的特异抗体进行试验,以达到对 ELISA 有效抗原成份进行研究。制备下列七种不同的曼氏血吸虫抗原。①成虫抗原(AWA)②超速离心的成虫抗原(AWA-UC)③成虫膜抗原(TAA)④三氯醋酸提取的成虫多糖类循环抗原(AWA-TCA)⑤可溶性虫卵抗原(SEA)⑥(?)球蛋白 A 纯化的可溶性卵抗原,其成     

华支睾吸虫成虫抗原纯化及鉴定

用葡聚糖凝胶Sephadex G-200柱层析法、三氯醋酸-乙醇提取物DEAE-Cellulose(DE52)柱层析法、尿素提取物Sepharose 4B柱层析法对华支睾吸虫成虫可溶性抗原进行部分纯化,获得8种不同的抗原活性组分.并用免疫电泳、聚丙烯酰胺凝胶圆盘电泳(PAGE)、薄层等电聚焦电泳、微板法动力学酶联免疫吸附试验进行鉴定.认为经纯化的抗原组分较粗抗原更适宜于临床诊断及考核疗效     

党参多糖的分离纯化及其结构研究

目的 进行党参多糖的分离纯化及结构的研究.方法 经脱脂、热水抽提、乙醇沉淀、Sevage法脱蛋白得到的粗提党参多糖(CPPS),再经DEAE-纤维素柱色谱分离得到纯化的水洗党参多糖(CPPS1).紫外光谱及SephadexG-200凝胶柱色谱鉴定其纯度.气相色谱、红外光谱和原子力显微镜(AFM)分析其结构.结果 CPPS1不含蛋白质,且为均一多糖.单糖组成为阿拉伯糖、核糖、甘露糖、果糖、半乳糖、葡萄糖.红外光谱显示CPPS1具有典型的多糖吸收峰;原子力显微镜(AFM)分析表明CPPS1分子具有高度分枝的结构,并且糖链间形成大小不等的环状结构.结论 CPPS1是一种含呋喃环结构的均一多糖,且具有高度分枝的结构.     

系统性红斑狼疮特异性抗原60KD Ro/SSA的提取和纯化

目的建立从猪脾纯化Ro/SSA自身抗原系统中60KD组分的方法.方法从猪脾提取ENA(可提取核抗原),以硫酸铵沉淀结合离子交换层析分离ENA蛋白组分,并用对流免疫电泳检测60KD SSA抗原的活性,以得到纯化60KD SSA抗原的具体条件.结果 60KD SSA抗原在Tris-HCl缓冲液(pH8.3)中的硫酸铵沉淀范围是硫酸铵饱和度50%～60%.60KD SSA抗原在50mM Tris-HCl缓冲液(pH8.3) NaCl中的DE52离子交换层析洗脱范围为电导值35～40ms/cm.结论结合硫酸铵沉淀和DE52离子交换层析两种纯化方法所得的60KD SSA抗原相对于其它ENA有较高的纯度,并能有效分离中SSA中60KD、52KD两个组分.     

成虫抗原致敏红细胞间接血凝试验诊断血吸虫病的初步观察

间接血凝试验是诊断血吸虫病的一种简便、快速、微量、敏感的方法。其特异性往往取决于抗原的质量。过去国内外学者在以虫卵抗原致敏经醛化固定和鞣酸处理过的红细胞(以下简称常规法)方面作了成功的改进。近年来,国内所应用的致敏抗原多系虫卵冷浸抗原,但虫卵收获量有限,抗原制备手续较繁,抗原的敏感性和特异性往往有批间的较大差异。因此我们仿用Hoshino(1970)方法,并参照北京19175部     

日本血吸虫卵抗原凝胶等电聚焦电詠的研究

本文首次采用一般园盘电泳装置,进行凝胶等电聚焦电泳研究日本血吸虫虫卵抗原蛋白组分,显示重现性好,分辨力高,电泳区带清晰,是目前分析抗原蛋白组分的一种较为简便而可靠的方法。     

广州管圆线虫成虫尿素溶解性抗原分析及其诊断价值的探讨

目的分析广州管圆线虫成虫尿素溶解性抗原,探讨其诊断价值。方法广州管圆线虫成虫匀浆后沉渣经尿素溶解,与成虫水溶解性抗原同时进行SDS-PAGE和Western-blot,分析蛋白谱与抗原谱;用ELISA检测不同样本中相应抗体。结果SDS-PAGE结果显示尿素抗原蛋白条带少于水溶解性抗原;尿素抗原与感染大鼠血清、免疫兔血清和广州管圆线虫病患者血清在32000Mr处均出现强反应带,尿素抗原的反应带条数较水溶性抗原少。两种抗原包被ELISA检测广州管圆线虫病疑似病人血清和感染大鼠血清的阳性率相同;尿素抗原用于检测血吸虫感染小鼠血清的交叉阳性率明显低于水溶性抗原,检测正常大鼠血清、献血员血清及其他非广州管圆线虫感染血清时,假阳性数较水溶性抗原少。结论广州管圆线虫成虫尿素抗原含有32000Mr抗原;广州管圆线虫尿素抗原用于诊断时,与水溶性抗原有同样的敏感性,而特异性高于水溶解性抗原。     

斯氏狸殖吸虫成虫尿素溶解性抗原蛋白组成及活性成份

采用8M尿素和简化方法分离、提取斯氏狸殖吸虫成虫尿素溶解性抗 原(PsAWU),并对该抗原和水溶性抗原(PsAWA)的血清学特性进行了分析比较,结果表明PsAIVU的敏感性高于PsAWA,初步证明具一定的特异性,是一种可实际应用的新型抗原。为进一步分析两种抗原,对其蛋白组成及活性成份进行了初步研究。 氨基酸组成的分析 两种抗原浓度均为1 mg/ml,用稀盐酸加热处理后,以氨基酸分析仪(Beckman公司)进行测定。结果表明两种抗原的氨基酸种类基本一致,但绝大     

血吸虫病间接红细胞凝集试验的标准化研究——抗原的筛选及标准化

分别用日本血吸虫的虫卵可溶性抗原(SEA)、成虫尿素提取抗原(AUA)、成虫表皮膜抗原(ATA)以及SEA与AUA、SEA与ATA的混合抗原致敏绵羊红细胞,并用于检测198例日本血吸虫病人血清,IHA的阳性符合率分别为95.45％、84.67％、90.23％、98.08％、96.25％;检测100例健康人血清,结果全部阴性;检测191例肺吸虫病,旋毛虫病、华枝睾吸虫病和囊虫病患者血清,其总交叉反应率分别为13.61％(SEA)、3.14％(AUA)、4.71％(ATA)、8.37％(SEA+ATA)和3.66％(SEA+AUA)。结果表明:SEA+AUA的制备方法简单,并具有较高的敏感性和特异性。     

猪囊尾蚴抗原制备物可溶性蛋白SDS-PAGE分子量测定及免疫电泳分析

应用SDS-PAGE技术对猪囊尾蚴三种抗原制备物(囊液、囊体及囊液纯化抗原Y_1)的可溶性蛋白进行分析及分子量测定;并以囊尾蚴孵育液抗原为对照,比较了囊液及其纯化抗原的免疫电泳沉淀弧。结果显示,囊液及囊体粗抗原均为多种分子量大小不同的蛋白质组成的抗原混合物,(囊液囊体分别显示17及24条蛋白区带),纯化抗原Y_1的SDS-PAGE图谱出现5条与囊液相同的蛋白区带,分子量范围92,400～38,100,其免疫电泳沉淀弧与囊液粗抗原主弧及孵育液沉淀弧相似,提示囊液及其纯化抗原含有虫体代谢或分泌产物,为纯化抗原在ESALI诊断中特异性的增高提供了依据。     

直接荧光对流免疫电泳诊断日本血吸虫病的初步报告

作者用免疫荧光技术与对流免疫电泳相结合的方法(以下简称荧光对流),检测血吸虫病人和病兔的抗体,并与酶对流和常规对流的敏感性进行了比较,现将结果报告如下。材料和方法一、虫卵抗原的制备:按李允鹤法浸提粗抗原。二、荧光抗原标记方法: (一)用1M碳酸盐缓冲液(pH9.5)调整浓缩的虫卵抗原蛋白,使含量为10～20mg/ml。然后放于小称量瓶内,置电磁搅拌器上搅拌5分钟。