延迟并连续小鼠异基因骨髓移植减轻移植物抗宿主病的探讨

目的 探讨延迟并连续小鼠异基因骨髓移植减轻急性移植物抗宿主病(aGVHD)的作用及其机制.方法 选择BALB/c(H-2d)/b鼠为受者,C57BL/6(H-2b)小鼠为供者.受者接受60Coγ射线全身照射(TBI)后,建立骨髓移植模型.实验分为5组.对照组:TBI后4 h经受者尾静脉输注RPMI 1640液0.4 ml;经典移植组:TBI后4 h经受者尾静脉输注供者的骨髓细胞(BMC)和脾细胞(SC)各1×107个/0.2 ml;连续移植组:TBI后4 h、1 d、2 d和3 d分4次经受者尾静脉输注供者的BMC和SC,每次输注量各为2.5 × 106个/0.05 ml;延迟移植组:TBI后第4天经受者尾静脉输注供者的BMC和SC各1× 107个/0.2 ml;延迟并连续移植组:TBI后第4、5、6和7天分4次经受者尾静脉输注供者的BMC和SC,每次输注量各为2.5×106个/0.05 ml.移植后观察受者的临床表现、病理学改变及存活时间,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)测定受者外周血中白细胞介素(IL)-2、IL-4、IL-10及γ干扰素(IFN-γ)的水平,应用流式细胞仪测定受者H-2b细胞、T淋巴细胞亚群及自然杀伤(NK)细胞的百分率.结果 对照组和经典移植组受者均在TBI后3周内因造血功能衰竭和/或aGVHD死亡;连续移植组和延迟移植组受者TBI后60 d存活率分别为30%和50%;延迟并连续移植组受者TBI后60 d的存活率为70%,高于其它4组(P＜0.05).延迟并连续移植组IL-4、IL-10的表达高于经典移植组(P＜0.05);IL-2和IFN-γ的表达低于经典移植组(P＜0.05).延迟并连续移植组TBI后20 d时外周血白细胞计数恢复正常,30 d时外周血T淋巴细胞亚群和NK细胞的表达恢复正常,60 d时H-2b细胞的百分率为(98.13±1.11)%.结论 延迟并连续小鼠异基因骨髓移植能减轻移植后的aGVHD.其作用机制主要是避开了TBI后炎症冈子表达的高峰期,下调了炎症因子和Th1类细胞因子的表达,促进了Th2类细胞因子的表达.     

基因工程Treg细胞对小鼠异基因骨髓移植后GVHD和GVL效应的影响

目的 探讨输注慢病毒载体介导的小鼠基因工程调节性T淋巴细胞(Treg细胞)对小鼠异基因骨髓移植后移植物抗宿主病(GVHD)及移植物抗白血病(GVL)效应的影响.方法 利用慢病毒载体介导,将小鼠叉状头螺旋转录因子(Foxp3)基因转导入Balb/c小鼠的CD4+CD25-T淋巴细胞,即为基因工程Treg细胞.以Balb/c小鼠为供者.C57BL/6小鼠为受者,进行异基因骨髓移植,移植当天受者接受X线直线加速器全身照射.用随机数字表法将受者分为5组,每组10只.(1)单纯照射组:经受者尾静脉输注RPMI 1640培养液0.2 ml;(2)白血病对照组:经受者尾静脉输注供者骨髓细胞5×106个+C57BL/6小鼠T淋巴细胞白血病/淋巴瘤细胞株(EL4细胞)500个;(3)移植对照组:经受者尾静脉输注供者骨髓细胞5×106个+脾细胞5×106个+EL4细胞500个;(4)工程Treg组:经受者尾静脉输注供者骨髓细胞5×106个+脾细胞5×106个+EL4细胞500个+基因工程Treg细胞5×106个;(5)空载体对照组:经受者尾静脉输注供者骨髓细胞5×106个+脾细胞5×106个+EL4细胞500个+空载体转导的CD4+CD25-T淋巴细胞5×106个.每天观察受者存活情况;记录GVHD及白血病的发生情况;各组均于小鼠濒死前取其肝脏、小肠、皮肤、脾脏等组织,进行病理学观察;取长期存活(超过60 d)受者的骨髓细胞,检测嵌合情况.结果 单纯照射组、白血病对照组、移植对照组、工程Treg组和空载体对照组小鼠存活时间分别为(10.3±1.5)d、(20.7±1.9)d、(26.0±4.3)d、(49.0±17.7)d和(24.4±4.1)d,工程Treg组小鼠存活时间明显长于其他各组,差异有统计学意义(P＜0.05).白血病对照组小鼠肝、脾组织病理切片均存在白血病细胞浸润表现,移植对照组及空载体对照组小鼠肝脏、皮肤和小肠病理切片存在GVHD病理改变,而工程Treg组长期存活小鼠各组织病理切片结构基本正常,未见GVHD及白血病细胞浸润病理表现,该组GVHD评分明显低于移植对照组及空载体对照组.结论 小鼠异基因骨髓移植时联合输注基因工程Treg细胞可有效减少GVHD的发生并保留GVL效应.     

同种异基因造血干细胞移植急性移植物抗宿主病小鼠模型的制作

目的 制作同种异基因造血干细胞移植急性移植物抗宿主病(GVHD)小鼠模型.方法 以C57BL/6( H-2b)小鼠为供者,Balb/c( H-2d)小鼠为受者,进行同种异基因骨髓移植.设立全身照射(TBI)对照组(4只)、GVHD组(10只)、单纯骨髓移植组(10只)及正常对照组(4只).TBI对照组仅进行致死性TBI,TBI后不进行骨髓移植;GVHD组于TBI前5d开始饮用含320 mg/L庆大霉素和250 mg/L红霉素的饮用水,移植当天以60Co γ射线行一次性TBI,总剂量8.0Gy,TBI后5h内每只小鼠经尾静脉输注C57BL/6小鼠骨髓细胞2×106个+脾细胞1×107个;单纯骨髓移植组预处理与GVHD组相同,每只小鼠经尾静脉输注C57BL/6小鼠骨髓细胞2×106个.移植后观察小鼠的精神状态、活动能力、体位改变、皮毛、体重和大便等,记录每只小鼠的存活时间,计算存活率,并绘制生存曲线.濒死小鼠的皮肤、肝脏、小肠和骨髓行病理检查.结果 TBI对照组小鼠的存活时间为(9.0±0.7)d,GVHD组为(32.0±3.2)d,单纯骨髓移植组为(17.5±1.6)d,3组间两两比较,存活时间的差异均有统计学意义(P＜0.01).TBI对照组病理检查显示造血功能衰竭.GVHD组于移植后第10～13天出现急性GVHD表现,其皮肤、肝脏和小肠组织的病理表现均符合Ⅰ～Ⅱ度急性GVHD改变,单纯骨髓移植组也于移植后第10～13天出现GVHD表现,但其GVHD表现和组织学改变明显轻于GVHD组,仅为0～Ⅰ度GVHD.结论 Balb/c小鼠经致死性TBI后移植同种异基因小鼠骨髓细胞+脾细胞可成功制作稳定的急性GVHD模型.     

伊马替尼联合供者淋巴细胞输注治疗造血干细胞移植后慢性粒细胞白血病复发

目的 探讨伊马替尼联合供者淋巴细胞输注(DLI)治疗异基因造血干细胞移植后慢性粒细胞白血病(CML)复发的效果.方法 3例CML(慢性期)患者,在接受预处理后,例1接受其胞妹外周血造血干细胞移植,例2接受其胞兄的骨髓移植,例3接受其胞弟的骨髓与外周血造血干细胞联合移植.例1移植后采用环孢素A(CsA)和霉酚酸酯(MMF)预防移植物抗宿主病(GVHD),例2采用CsA、短程甲氨蝶呤(MTX)、抗胸腺细胞球蛋白及抗CD25单克隆抗体预防GVHD,例3应用CsA、MTX和MMF预防GVHD.采用细胞遗传学及荧光原位杂交技术动态监测治疗效果.移植后发生血液学复发时,给予伊马替尼口服,并行DLI.结果 例1移植后30 d行DLI,输注CD3+T淋巴细胞0.5×107 /kg,移植后50 d和70 d,再次行DLI,分别输注CD3+ T淋巴细胞1.0 × 107 /kg和2.0×107 /kg,短串联重复序列(STR)检测提示为完全供者嵌合(DC).移植后120 d,疾病进展,给予伊马替尼400 mg/d,同时输注供者CD3+ T淋巴细胞2.5 × 107/kg.移植后180 d,STR检查提示仍为DC.患者最终于移植后17个月因髓外复发死亡.例2的染色体核型于移植后35 d转变为46,XY,XY为100%,BCR-ABL融合基因阴性.移植后100 d,原发病复发.停用免疫抑制剂,输入供者CD3+ T淋巴细胞3.9×107 /kg,同时口服伊马替尼500 mg/d.DLI联合伊马替尼治疗后30 d,患者的染色体核型为46,XY,XY为100%,BCR-ABL融合基因阴性,患者至今无病存活53个月.例3移植后5 d造血功能获得重建,移植后60 d,染色体核型为46,XY.移植后120 d,确诊CML复发,遂给予伊马替尼400 mg/d,并行DLI,共输注供者CD3+ T淋巴细胞8×107 /kg,1个月后,患者的染色体核型再次转为46,XY,患者至今无病存活50个月.结论 伊马替尼联合DLI对造血干细胞移植后CML复发具有一定的治疗效果.     

供者型CIK细胞输注治疗异基因造血干细胞移植后白血病复发

目的 采用受者体内供者型或供者来源的细胞因子诱导杀伤细胞(CIK细胞)过继性免疫治疗异基因造血干细胞移植(allo-HSCT)后白血病复发的效果.方法 回顾性分析2例allo-HSCT后白血病复发患者输注供者型CIK细胞成功开展过继性免疫治疗的临床资料.例1在移植后986 d出现白血病复发,经化疗取得短暂部分缓解,采集受者外周血完全供者型单个核细胞扩增CIK细胞,先后给予受者5个周期的CIK细胞治疗.例2在亲缘allo-HSCT后158 d出现白血病复发,采集亲缘供者外周血单个核细胞扩增CIK细胞,于移植后204 d和294 d给予2个周期的CIK细胞输注治疗.结果 例1经化疗降低白血病细胞负荷后,经过1个周期的CIK细胞输注治疗,获得完全缓解,之后再次给予4个周期CIK细胞治疗,随访7个月取得持续完全缓解.例2复发后停用免疫抑制剂,并行化疗及输注供者干细胞采集物,于移植后187 d出现急性移植物抗宿主病及髓外浸润情况,移植后204 d输注1个周期的CIK细胞后,症状明显减轻.移植后294 d给予第2个周期的CIK细胞治疗,骨痛缓解,现骨髓细胞学持续完全缓解,髓外病灶消失.结论 受者体内供者型或供者来源的CIK细胞可用于allo-HSCT后白血病复发的治疗,效果良好,耐受性好.     

HLA不相合异基因造血干细胞移植后输注供者CD34^＋祖细胞来源的自然杀伤细胞可预防肿瘤复发

动物实验研究表明,NK细胞可以杀伤肿瘤细胞而不引起移植物抗宿主病（graft—versus—host disease,GVHD）,这一独特的生物学效应使HLA不相合造血干细胞移植（hematopoietic stem cell transplantation,HSCT）后输注供者NK细胞有可能成为有效预防肿瘤复发的措施,但前提是要明确在人体中输注供者NK细胞不会引起GVHD以及其他不良反应。     

非血缘关系造血干细胞移植61例分析

目的 探讨非血缘关系造血干细胞移植(URD-HSCT)的临床疗效,移植相关并发症及影响预后的危险因素.方法 回顾性分析61例接受URD-HSCT患者的临床资料.所有患者根据原发病分别给予非清髓性及清髓性预处理;供、受者HLA配型6/6抗原位点全相合21例,5/6相合5例,1个基因亚型不合24例,2个基因亚型不合11例;供、受者间ABO血型相合18例,不合43例;受者接受供者的有核细胞中位数为4.5×108/kg,CD34+细胞中位数为4.3×106/kg.术后移植物抗宿主病(GVHD)的预防采用以短程甲氨蝶呤+环孢素A+霉酚酸酯为基础的方案,49例加用抗CD25单克隆抗体,9例加用抗淋巴细胞或抗胸腺细胞免疫球蛋白;并常规采用促进造血功能恢复、抗感染等治疗.术后观察受者的造血功能重建、并发症以及预后情况.结果 61例患者中,59例术后经血型、染色体及DNA多态性检测证实供者细胞植活.术后23例受者发生Ⅱ～Ⅳ度急性GVHD,25例发生慢性GVHD;术后100 d内,48例受者发生细菌和(或)真菌感染,36例发生巨细胞病毒感染,以下呼吸道感染较多.术后有18例受者死亡,受者总的2年无病存活率为(68.0±6.4)%,其中12例因移植相关并发症死亡,移植相关死亡率19.7%;6例原发病复发的受者均死亡,复发率9.8%.其余受者经治疗后好转.结论 URD-HSCT是治疗造血系统恶性疾病的有效方法.急性GVHD和感染是严重影响移植疗效和预后的危险因素,需早期预防.     

非清除性异基因骨髓移植后输注供者淋巴细胞诱导的GVHD和GVL效应

目的　探讨非清除性异基因骨髓移植后输注逐渐增量的异基因供者淋巴细胞 ,是否能在减轻移植物抗宿主病 (GVHD)的同时保留移植物抗白血病效应 (GVL)。方法　L6 15白血病小鼠(H 2 k)为受者 ,于接种白血病细胞后的第 3d接受60 Coγ射线全身照射 ,总剂量 5Gy ,照射当天移植BALB/c小鼠 (H 2 d)的骨髓细胞 (3× 10 7个 )和脾细胞 (1× 10 7个 ) ,移植后 2d腹腔注射环磷酰胺 2 0 0mg/kg ,并分别于移植后 14d或 14、2 1、2 8d输注 2× 10 7个和 1× 10 7、2× 10 7、4× 10 7个供鼠脾细胞。结果　未处理的对照组受鼠平均存活时间为 (14 .1± 1.1)d ,均死于白血病 ;移植后未接受供鼠脾细胞组的小鼠平均存活 (2 6 .2± 3.6 )d ,均死于白血病复发 ;移植后 14d接受供鼠脾细胞输注的小鼠平均存活 (2 9.3± 3.7)d ,均死于GVHD ;移植后输注逐渐增量的供鼠脾细胞者 ,平均存活 (5 9.4± 5 .6 )d ,6 0 %的受者存活超过 5 0d ,均未发生GVHD。结论　非清除性异基因骨髓移植后输注逐渐增量的异基因供者淋巴细胞可在减轻GVHD的同时保留抗白血病效应。     

异基因造血干细胞移植后白血病髓外复发的临床分析

目的 探讨异基因造血干细胞移植(allo-HSCT)后髓外复发的发病机理、危险因素、治疗方法及临床转归.方法 回顾分析164例allo-HSCT受者的临床资料,选择受者性别、年龄、原发病、移植前疾病状态、是否有髓外浸润、预处理方案、供者类型、HLA相合程度、术后移植物抗宿主病(GVHD)发生情况等10个临床参数做单因素分析,对P＜0.1的单因素进行多因素分析.髓外复发的治疗方法包括局部放疗、单纯手术切除,全身化疗、供者淋巴细胞输注和二次移植.结果 164例受者均顺利重建造血功能.术后发生白血病髓外复发9例(5.5%),髓外复发的中位时间为7.5个月(2.3～42.6个月);术后发生急性GVHD 94例次(57.3%),慢性GVHD 83例次(50.6%).复发后有4例受者死亡.单因素分析表明,受者性别、移植前疾病进展期、移植前髓外浸润、供者类型及术后发生慢性GVHD等因素与白血病髓外复发显著相关(P＜0.1).经Cox回归多因素分析发现,移植前疾病处于进展期(P＜0.05)、白血病髓外浸润(P＜0.01)及术后发生慢性GVHD(P＜0.01)为alloHSCT后白血病髓外复发的独立危险因素.结论 多种因素参与了髓外复发的发病机理,免疫逃逸可能在其中起主要作用.疾病进展期、移植前伴髓外浸润和慢性GVHD是白血病髓外复发的独立危险因素.白血病髓外复发常伴随骨髓复发,预后较差,因此预防白血病细胞由髓外向髓内扩散对长期存活非常重要.     

造血干细胞移植治疗儿童髓系白血病26例疗效分析

目的 了解造血干细胞移植对儿童急性髓系白血病(AML)和慢性粒细胞白血病(CML)的治疗效果.方法 髓系白血病患儿26例,平均年龄为9.8岁,其中CML 8例,AML18例.CML患儿中,第1次慢性期(CPl)6例,加速期(AP)1例,第2次慢性期(CP2)1例;AML患儿中,第1次缓解(CRl)9例,第2次缓解(CR2)7例,2例未缓解(NCR).26例中,2例接受HLA全相合同胞供者的外周血与骨髓干细胞联合移植;2例接受由HLA半相合母亲供者外周血干细胞分离出的CD34+细胞输注;2例接受脐血移植;其余20例接受外周血造血干细胞移植.每例移植有核细胞(6.8±6.0)×108/kg,CD34+细胞(4.0±5.8)×106/kg,CD3+细胞(2.6±3.8)×108/kg.所有患儿均采用白消安及环磷酰胺进行清髓性预处理.移植后采用环孢素A和甲氨蝶呤联用预防移植物抗宿主病(GVHD),接受无关供者造血干细胞移植者加用抗胸腺细胞球蛋白,6例CML患儿加用霉酚酸酯.若发生Ⅱ度以上GVHD,则给予甲泼尼龙或巴利昔单抗治疗.结果 除2例HLA半相合移植失败外,其余24例均获得造血功能重建.24例植入成功的患儿中,2例未发生急性GVHD(aGVHD),15例(62.5%,15/24)出现Ⅰ～Ⅱ度aGVHD,7例(29.2%,7/24)出现Ⅲ～Ⅳ度aGVHD(重度aGVHD).7例重度aGVHD均为CML患儿.26例平均随访20.5个月,其中原发病复发死亡者4例,治疗相关死亡者5例,尚有17例(65.4%,17/26)患儿无病存活.结论 异基因造血干细胞移植有助于提高髓系白血病患儿的存活率,只要加强预防,无关供者造血干细胞移植产生的GVHD是可以控制的.而对于高危患儿,无关供者造血干细胞移植的效果与亲缘相关供者移植相似.     

半相合基因骨髓细胞移植小鼠的嵌合体程度对移植物抗肿瘤效应的影响

目的 探讨半相合基因骨髓细胞移植后受体形成的嵌合体程度对抗肿瘤效果的影响.方法 25只BALB/C青春期小鼠随机分为3组:混合型嵌合体组(A组,10只)、完全型嵌合体组(B组,10只)、对照组(C组,5只).首先,A、B组小鼠行直线加速器全身照射,剂量分别为4、8Gy,照射后4～6 h内经尾静脉注射入CB6F1代小鼠的骨髓细胞(5×106/只),C组无处理.A、B、C三组均给予Renca肾癌细胞腋窝下注射,每只2.6×106.观察所有组别小鼠的肿瘤生长速率,通过流式细胞仪测定A、B组小鼠移植后不同时间的嵌合体水平.荷瘤32 d时断颈处死小鼠,取肿瘤组织称重.结果 (1)流式细胞术鉴定血液白细胞中供者源细胞比例:A组移植后2周后形成混合嵌合体(47.51%～72.64%)并达高峰,以后逐渐下降,3～4周时下降至10%以下.B组小鼠移植后14 d形成完全供者型嵌合体(供体细胞＞90%),28 d后仍达90%以上.(2)与对照组和混合型嵌合体组比较,完全型嵌合体组的肿瘤生长速度明显减慢,肿瘤重量显著减小(P＜0.01),抑瘤率高达52%.结论 半相合基因骨髓细胞移植后形成的稳定的完全型嵌合体状态是抗肿瘤效应的基础.     

利用脊柱骨来源骨髓细胞建立急性移植物抗宿主病模型

目的探讨利用脊柱骨来源骨髓细胞建立小鼠异基因造血干细胞移植(allogeneic hematopoietic stem cell transplantation,Allo-HSCT)急性移植物抗宿主病(aGVHD)模型的可行性。方法选择C57BL/6(H-2b)雄性小鼠为供体鼠,BALB/c(H-2d)雌性小鼠为受体鼠。制备供体鼠的脾细胞和脊柱骨来源骨髓细胞悬液。受体鼠采用药物加小剂量辐照的预处理方式,于移植前8d～移植前4d腹腔注射氟达拉滨(200mg/kg),接着移植前3d～移植前1d腹腔注射环磷酰胺(60mg/kg),最后在移植前进行全身照射(total-body irradiation,TBI),照射剂量为4Gy(戈瑞)。18只受体鼠经预处理后随机分为3组,每组6只:(1)骨髓移植组,只输入1×107个脊柱骨来源骨髓细胞;(2)aGVHD组,输注1×107个脊柱骨来源骨髓细胞和5×106个脾细胞,建立aGVHD模型;(3)空白对照组,不输入任何细胞。观察3组小鼠生存状态及存活率,取aGVHD组与骨髓移植组存活21d的受体鼠进行病理学检查,取aGVHD组移植后21～28d存活的小鼠的脾脏进行流式细胞术检测骨髓细胞嵌合度。结果骨髓移植组小鼠全部存活,可重建造血,单纯输注骨髓细胞不会诱发aGVHD。aGVHD组小鼠出现aGVHD表现,100%发生aGVHD相关死亡,中位生存期为18d;病理检查结果显示符合aGVHD病理表现,移植后21～28d存活的小鼠诊断为供受体混合嵌合状态,符合aGVHD诊断标准。结论用脊柱骨来源骨髓建立的aGVHD模型完全符合标准,且更加经济,适合大规模建模。     

半相合基因骨髓细胞移植联合抗原免疫对小鼠肾癌的抑制作用

目的 探讨半相合基因骨髓细胞移植联合抗原免疫对移植物抗肿瘤效应的影响及其机制.方法 26只BALB/c青春期小鼠为受者,随机分为单纯骨髓细胞移植组(A组,10只)、联合抗原免疫移植组(B组,10只)、对照组(C组,6只).取BALB/c(H-2d)和C57BL/6(H-2b)交配后产生的F1代小鼠为供者.A、B组小鼠均行直线加速器全身照射(8 Gy),照射4～6 h内经尾静脉分别注射入供者小鼠的骨髓细胞(5×106/只),C组无处理.1周后3组小鼠均给予Renca肾癌细胞腋窝下注射(2.6×106/只),B组小鼠在荷瘤1 d后给予33 Gy照射的Renca肾癌细胞(5×105/只)皮下注射免疫,间隔1周,重复免疫1次.通过流式细胞术(FACS)测定移植后不同时间的嵌合体水平.断颈处死小鼠后,观察所有组别受者小鼠的肿瘤质量、体积增加量、肿瘤抑瘤率,取肿瘤组织做成石蜡切片HE染色后,观察肿瘤坏死面积比,采用原位末端标记法(TUNEL)检测各组小鼠肿瘤组织的凋亡指数(AI).结果 (1)FACS检测嵌合体水平:A、B组小鼠移植后14 d供体细胞嵌合体水平均＞90%,28 d后仍＞90%.(2)与C组和A组相比,B组的肿瘤生长速率明显减慢,肿瘤质量明显减小(P＜0.05),体积增加量明显降低(P＜0.01),抑瘤率高达60%,肿瘤坏死面积比明显增高(P＜0.05),AI明显增高(P＜0.01).结论 抗原免疫能增强半相合基因骨髓细胞移植的抗肿瘤作用,其机制可能是促进肿瘤细胞坏死和细胞凋亡增加.     

氟达拉滨联合阿糖胞苷化疗治疗异基因造血干细胞移植后急性白血病复发

目的 观察氟达拉滨联合阿糖胞苷(FA方案)大剂量化疗对异基因造血干细胞移植(allo-HSCT)后急性白血病复发的治疗效果.方法 急性白血病患者10例,7例接受亲缘供者造血干细胞移植,3例接受非亲缘供者造血干细胞移植,所有患者移植后均获得造血重建,为完全供者型.10例于首次移植后38～213 d(中位数为126 d)急性白血病复发,其中完全供者型复发1例,完全受者型复发4例,混合嵌合体型复发5例.原发病复发后均采用FA方案化疗,氟达拉滨用量为25 mg/m2,阿糖胞苷用量为1.5 g/m2,用5 d,其中6例于化疗结束后第2天还接受原供者外周造血干细胞(PBSC)移植,未使用预防移植物抗宿主病(GVHD)的药物.结果 除1例早期(8 d)死亡外,其余9例再次获得造血重建,经外周血DNA序列分析证实为完全供者型.获得造血重建的9例,4例由于复发、感染、多脏器功能衰竭等原因死亡,5例无病存活至随访结束,存活时间分别为585、442、405、213和243 d.治疗后,3例未发生GVHD,其余7例发生急性或慢性GVHD;7例并发肺部真菌感染,3例并发出血性膀胱炎,4例并发巨细胞病毒血症.10例的6个月实际无病存活率为60%,2年预期无病存活率为53%.结论 对于allo-HSCT后的急性白血病复发,采用FA方案化疗,如条件允许联合原供者造血干细胞输注,可能是目前可采取的一种有效治疗方案.     

Effect of interleukin-15 on alloreactivity in umbilical cord blood

Interleukin(IL)-15 is a promising immunotherapeutic agent for immune reconstitution following stem cell transplantation. To investigate whether IL-15 would aggravate graft-versus-host disease (GVHD) in the setting of unrelated umbilical cord blood (CB) transplantation, we examined the effect of IL-15 on activation marker expression, proliferation and cytokine production of CB in a one-way mixed lymphocyte culture (MLC) assay. We found that IL-15 differentially enhanced CD69 and CD25 expression on CB T cells following allo-stimulation. The maximum degree of allo-specific CB proliferation was achieved on Day 6. IL-15 down-regulated the CB alloreactive proliferative response on Days 4, 6, and 8, with preferentially enhanced autologous proliferation. Exogenous IL-15 further enhanced CB TNF-alpha and IL-10 production in both autologous and allogeneic MLC 6 days after allopriming. Thus, IL-15 was effective in enhancing activation marker expression and cytokine production during CB alloreactivity, but failed to enhance allospecific proliferation. Further studies would be needed to study the role of IL-15 on GVHD in the setting of CB transplantation.     

HSCT联合不同剂量内皮祖细胞输注对小鼠造血重建的影响

目的 探讨异基因造血干细胞移植联合不同剂量内皮祖细胞(EPC)输注对移植后造血重建的影响.方法 以C57BL/6小鼠为供鼠,Balb/c小鼠为受鼠,进行HSCT,输注骨髓单个核细胞数量为5×106个/只.仅进行HSCT者为单纯骨髓细胞移植组;行HSCT的同时经尾静脉输注供者骨髓单个核细胞诱导培养的EPC的受鼠为EPC联合移植组,EPC的输注量分别为5×104、1×105、5× 105和1×106个/只.另设正常对照组和致死量照射组.观察小鼠的存活率、造血重建情况及骨髓微环境的变化.结果 各EPC联合移植组小鼠存活时间长于单纯骨髓移植组,5×105 EPC联合移植组至观察结束时存活率为100％,高于其他各组(P＜0.05).移植后10和15 d,5×105 EPC联合移植组外周血白细胞数量高于其他组(P＜0.05).移植后15 d,5×105 EPC联合移植组外周血血小板数量高于其他组(P＜0.05).5×105 EPC联合移植组造血组织增生程度也好于其他组.5×105 EPC联合移植组骨髓内HSC比例为(1.06±0.03)％,高于其他各组(P＜0.05).结论 小鼠异基因骨髓移植中联合输注5×105 EPC能够有效促进造血重建,提高小鼠存活率.