丝裂原活化蛋白激酶信号转导通路在电磁辐射诱导PC12细胞凋亡中的作用

目的 探讨丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号转导系统的差别激活与电磁辐射诱导PC12细胞凋亡的关系.方法 经MAPK特异性抑制剂SB203580、U0126预处理的PC12细胞接受65mW/cm2电磁波辐照20min,在辐照后3、24h2个观察时相点,采用蛋白质免疫印迹方法检测ERK1/2、JNK、P38 MAPK蛋白质磷酸化水平,采用Annexine-V-FITC标记流式细胞仪检测PC12细胞凋亡率.结果 电磁辐射后,PC12细胞ERK1/2的激活可以被U0126明显抑制,而SB203580对其无抑制作用.U0126和SB203580对辐照后JNK的活性无明显影响.SB203580可以明显抑制P38 MAPK的激活,而U0126对P38 MAPK激活的抑制作用不明显.SB203580可以明显减轻电磁辐射诱导的PC12细胞凋亡,而U0126预处理对细胞凋亡无明显影响.结论 电磁辐射诱导PC12细胞凋亡主要通过P38 MAPK信号通路的激活调控,而ERK通路对电磁辐射诱导的细胞凋亡无明显影响,JNK可能对辐照后早期的细胞凋亡有一定促进作用.     

尤瑞克林对脑缺血再灌注损伤大鼠模型p38M APK信号通路的影响

目的探讨尤瑞克林对局灶性脑缺血再灌注损伤大鼠模型的神经保护作用及其可能的机制。方法 60只SD大鼠随机分为3组:假手术组、缺血再灌注损伤模型组和尤瑞克林治疗组,用线栓法制作大鼠大脑中动脉脑缺血再灌注损伤模型,缺血2 h再灌注24 h后,观察各组大鼠神经行为学评分,HE染色观察神经细胞组织形态变化,免疫组化法检测磷酸化p38MAPK的表达,TUNEL法检测凋亡细胞。结果与假手术组比较,模型组大鼠神经行为学评分明显升高(P<0.01),HE染色神经细胞受损明显(P<0.01),脑组织磷酸化p38MAPK表达水平、凋亡神经细胞数量明显增加(P<0.01)。与模型组比较,尤瑞克林治疗组大鼠的神经功能缺损得到改善、神经元形态结构损伤减轻、磷酸化p38MAPK表达水平以及神经细胞凋亡数量回降(P<0.01)。结论尤瑞克林对局灶性脑缺血再灌注损伤大鼠有神经保护作用,其机制可能与抑制p38MAPK活化、减少神经细胞凋亡有关。     

Caspase-3和p38MAPK在MMT诱导的PC-3M细胞凋亡中的作用

目的确定Caspase-3和p38MAPK在大气污染物甲基环戊二烯羰基锰（MMT）诱导人前列腺细胞系PC-3M凋亡过程中的作用。方法1mmol／LMMT诱导PC-3M细胞后，化学发光法检测细胞Caspase-3活力的变化，MTS法检测Caspase-3特异性多肽抑制剂Z-DEVD-FMK对细胞存活率的影响，Western blot法检测p38MAPK在细胞凋亡过程中的活性变化，MTS及化学发光法检测p38MAPK抑制剂SB203580对细胞凋亡率和Caspase-3活力的影响。结果在MMT诱导的PC-3M细胞凋亡中，Caspase-3被明显激活差异有统计学意义（P〈0．01）；Z-DEVD-FMK可明显提高PC-3M细胞存活率差异有统计学意义（P〈0．01）；p38MAPK磷酸化程度明显升高；SB203580可抑制细胞凋亡差异有统计学意义（P〈0．01），同时使Caspase-3活力下降差异有统计学意义（P〈0．01）。结论Caspase-3及p38MAPK参与了MMT诱导的PC-3M细胞凋亡。     

镉诱导大鼠腺垂体细胞凋亡及与p38 MAPK&ERK1/2途径介导机制关系的初步研究

目的了解CdCl2对腺垂体的损伤以及细胞凋亡发生与p38MAPK、ERK12表达的关系,为了解镉致腺垂体毒作用的分子机制提供科学依据。方法采用健康雄性SD大鼠进行整体试验(n=12),分别每天经口灌胃给予0、1.0、2.0、4.0mgkgbwCdCl2,6周后取腺垂体进行指标检测;离体试验采用酶解分离大鼠之原代腺垂体细胞,分别以0、1.56、3.12、6.25、12.50、25.00、50.00、100.00μmolLCdCl2处理,收获细胞进行检测;特异性阻断剂阻断凋亡效应的试验采用2.65μmolLp38MAPK的特异阻断剂SB203580或10μmolLERK12激酶的特异阻断剂U0126处理细胞,然后以3.12μmolL或100.00μmolL的CdCl2处理细胞后进行相应的检测。检测指标包括:TUNEL法和流式细胞术等检测凋亡。结果整体实验和离体实验结果均显示CdCl2以剂量依赖方式诱导腺垂体细胞发生凋亡(P<0.05);特异性阻断剂效应的研究结果显示2.65μmolLSB203580和10μmolLU0126对TUNEL阳性细胞的相对灰度和凋亡细胞率均有一定的影响。结论在一定的剂量条件下,CdCl2影响腺垂体激素分泌水平,并导致发腺垂体细胞凋亡,MAPKs家族成员p38MAPK和ERK12激酶通路在凋亡发生过程中可能发挥一定的作用。     

大蒜素对培养大鼠心肌细胞缺氧/复氧损伤的抗凋亡作用通过p38MAPK细胞信号转导通路(英文)

目的探讨大蒜素对培养大鼠心肌细胞缺氧/复氧损伤的保护作用并探讨p38MAPK细胞信号转导通路是否发挥作用。方法利用新生大鼠培养心肌细胞缺氧/复氧模型,将培养的心肌细胞分为正常对照组(C组)、缺氧/复氧组(A/R组)、大蒜素组(A组)、大蒜素+SB203580(A+SB)及SB203580(SB)组共5组;各组均测定缺氧后和复氧后心肌损伤指标乳酸脱氢酶(LDH)、丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)的含量,并利用凝胶电泳及原位末端标记法(TUNEL法)检测心肌细胞凋亡。同时用蛋白免疫印迹(Western Blotting)法检测各组p38MAPK及磷酸化p38MAPK(p-p38MAPK)的表达水平。结果A组较A/R、A+SB、SB组LDH、MDA明显降低,SOD明显增高(均P<0.01);A组AI(心肌细胞凋亡指数)较A/R、A+SB、SB组明显降低(均P<0.01),与凝胶电泳结果相一致。各组p38MAPK无显著性差异,p-p38MAPK在A组表达显著高于其它各组;结论大蒜素有明显抗培养心肌细胞缺氧/复氧损伤作用,其作用是通过减少心肌细胞凋亡而发挥的,p38MAPK细胞信号转导通路在其中起到重要作用。     

p38丝裂原活化蛋白激酶信号通路在多菌灵致小鼠睾丸支持细胞增殖抑制和凋亡中的作用

目的通过建立多菌灵致小鼠睾丸支持细胞(TM4)损伤模型,探讨p38丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路在多菌灵致小鼠TM4细胞增殖抑制和凋亡中的作用。方法将TM4细胞分别暴露于0(对照)、1、2、5、10、20μmol/L多菌灵溶液和10μmol/L SB203580抑制剂溶液及10μmol/L SB203580+5μmol/L多菌灵溶液染毒48 h,采用CCK-8法检测细胞存活率。将TM4细胞分别暴露于0(对照)、5μmol/L多菌灵溶液和10μmol/L SB203580抑制剂溶液及10μmol/L SB203580+5μmol/L多菌灵溶液染毒48 h,采用碘化丙啶(PI)染色法检测细胞周期,采用Annexin V/PI双标法检测TM4细胞凋亡,采用Western blot法检测细胞P38 MAPK和p-P38 MAPK蛋白的表达水平。结果与对照组比较,5、10、20μmol/L多菌灵组TM4细胞的存活率均下降,差异有统计学意义(P0.01);且随着多菌灵暴露浓度的升高,TM4细胞的存活率呈下降趋势。与5μmol/L多菌灵组比较,10μmol/L SB203580+5μmol/L多菌灵组TM4细胞的存活率升高,差异有统计学意义(P0.01);而10μmol/L SB203580抑制剂组TM4细胞的存活率无明显改变。与对照组相比,5μmol/L多菌灵组TM4细胞的凋亡率增加,差异有统计学意义(P0.01);而10μmol/L SB203580抑制剂组的凋亡率无明显改变。与5μmol/L多菌灵组比较,10μmol/L SB203580+5μmol/L多菌灵组TM4细胞的凋亡率下降,差异有统计学意义(P0.01)。与对照组比较,5μmol/L多菌灵组TM4细胞G_1/G_0期细胞所占比例降低,而G2/M期和S期细胞所占比例升高,差异均有统计学意义(P0.01);而10μmol/L SB203580抑制剂组各期细胞所占比例均无明显改变。与5μmol/L多菌灵组比较,10μmol/L SB203580+5μmol/L多菌灵组TM4细胞仅G_2/M期细胞所占比例下降,差异有统计学意义(P0.01)。与对照组比较,5μmol/L多菌灵组TM4细胞的p-P38 MAPK蛋白表达水平升高,差异有统计学意义(P0.01);而10μmol/L SB203580抑制剂组的p-P38 MAPK蛋白表达水平无明显改变。与5μmol/L多菌灵组比较,10μmol/L SB203580+5μmol/L多菌灵组TM4细胞的p-P38 MAPK蛋白表达水平下降,差异有统计学意义(P0.01)。各组TM4细胞的P38 MAPK蛋白表达水平间比较,差异无统计学意义(P0.05)。结论多菌灵通过激活p38 MAPK信号通路抑制TM4细胞增殖,并诱导细胞凋亡及周期阻滞,从而造成细胞损伤。     

p38MAPK和ERK1／2对镉诱导NRK肾细胞c-myc与c-fos基因mRNA表达的影响

目的研究p38丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）和细胞外信号调节激酶（ERK）1／2抑制剂对镉染毒NRK肾细胞后原癌基因c—myc与c—fos表达的影响。方法用不同剂量CdCl2（0、2．5、5．0、10．0μmol／L）染毒大鼠NRK细胞12h,p38MAPK抑制剂SB20358010．0μmol／L和ERK1／2抑制剂PD9805910μmol／L预处理NRK细胞0．5h后,再加入10．0μmol／LCdCl2染毒细胞,用流式细胞技术检测细胞凋亡率,SYBRGreenI荧光定量PCR检测c-rnyc与c-fosmRNA表达。结果流式细胞仪检测NRK细胞染镉后细胞凋亡率随染毒剂量增加而增加;p38MAPK抑制剂SB203580＋10．0μmol／LCdCl2组与单独染镉组比较,细胞凋亡率显著下降;但ERK1／2抑制剂PD98058＋10．0μmol／LCdCl2组与单独染镉组比较,细胞凋亡率显著升高。实时荧光定量PCR检测NRK细胞染镉后c—myc和c—fosmRNA表达明显增强;单独用SB203580和PD98058刺激NRK细胞后c-myc和c—fosmRNA表达与对照组比较,差异无统计学意义,但SB203580和PD98058预处理NRK细胞0.5b后加入10．0μmol／LCdCl2与单纯10．0μmol／L染镉组比较,c—myc和c-fosmRNA表达显著降低。结论MAPK信号转导通路可能在镉诱导原癌基因c—myc和c—fos表达中发挥作用。     

Caspase-3和p38 MAPK在MMT诱导的PC-3M细胞凋亡中的作用

目的确定Caspase-3和p38 MAPK在大气污染物甲基环戊二烯羰基锰(MMT)诱导人前列腺细胞系PC-3M凋亡过程中的作用。方法1 mmol/L MMT诱导PC-3M细胞后,化学发光法检测细胞Caspase-3活力的变化,MTS法检测Caspase-3特异性多肽抑制剂Z-DEVD-FMK对细胞存活率的影响,Western blot法检测p38 MAPK在细胞凋亡过程中的活性变化,MTS及化学发光法检测p38 MAPK抑制剂SB203580对细胞凋亡率和Caspase-3活力的影响。结果在MMT诱导的PC-3M细胞凋亡中, Caspase-3被明显激活差异有统计学意义(P<0.01);Z-DEVD-FMK可明显提高PC-3M细胞存活率差异有统计学意义(P<0.01);p38 MAPK磷酸化程度明显升高;SB203580可抑制细胞凋亡差异有统计学意义(P<0.01),同时使Caspase-3活力下降差异有统计学意义(P<0.01)。结论Caspase-3及p38MAPK参与了MMT诱导的PC-3M细胞凋亡。     

MAPK信号转导在实验性重症急性胰腺炎大鼠中的作用

目的探讨p38MAPK信号转导通路在SAP中的作用及其特异性抑制剂SB203580对胰腺的保护作用。方法 SD大鼠48只,随机分为对照组（C）、胰腺炎组（P）及SB203580干预组（T）。各组于制模型后2及6小时分为2组,每组8只,用于抽取血样及胰腺组织学观察。P组采用胰腺被膜下均匀注射法制作模型,开腹后自胰尾至胰头方向被膜下均匀注射5%牛磺胆酸钠（4ml/kg）,C组进行同样操作,仅胰腺被膜下注射等量生理盐水,T组术前灌胃给予SB203580（10mg/kg）。结果胰腺评分见C组胰腺病理正常,T组胰腺病理损害程度较P组明显减轻（P〈0.05）。SAP大鼠模型诱导成功后,P组各时间点血清TNF-α浓度较C组明显升高（P〈0.01）,T组血清TNF-α浓度较P组比较明显下降（P〈0.01）。P组各时间点胰腺p38MAPK表达较C组明显,T组各时间点胰腺p38MAPK表达较P组下降。结论 p38MAPK信号转导通路在SAP的发展中起着重要作用,其特异性抑制剂SB203580对胰腺的保护作用。     

p38MAPK信号通路抑制剂对TNF-α诱导的乳腺癌细胞凋亡的影响

目的研究p38丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)信号通路抑制剂对肿瘤坏死因子-α(TNF-α)诱导的乳腺癌细胞凋亡的影响。方法 TNF-α处理乳腺癌细胞MDA-MB-231,Western blot检测细胞中p38MAPK信号通路激活情况。p38MAPK信号通路阻断剂SB203580和TNF-α同时处理MDA-MB-231细胞,流式细胞术检测细胞凋亡,二氯二氢荧光素-乙酰乙酸酯(DCFH-DA)法检测细胞中活性氧(ROS)水平,Western blot检测细胞中p38MAPK、p-p38MAPK、Bid、Bcl-2相关X蛋白(Bax)水平。结果 TNF-α作用后的MDA-MB-231细胞中p-p38MAPK/p38MAPK蛋白水平由(0. 25±0. 03)升高至(0. 80±0. 07),两者比较差异有统计学意义(P<0. 05)。TNF-α处理后MDA-MB-231细胞凋亡率由(2. 28±0. 47)%升高至(19. 56±1. 33)%,SB203580处理后细胞凋亡率降低至(12. 14±1. 12)%。TNF-α处理后细胞中Bax和Bid水平明显升高,ROS水平升高,而SB203580处理后细胞中Bax、Bid水平和ROS水平有所降低,与对照MDA-MB-231细胞相比差异有统计学意义(P<0. 05)。结论 TNF-α诱导Bid、Bax介导的乳腺癌细胞凋亡,提高细胞中ROS水平,p38MAPK信号通路抑制剂可以减弱TNF-α的上述作用。     

p38信号通路对白蛋白诱导肾小管上皮细胞骨调素mRNA的表达

目的探讨p38信号通路(p38MAPK)在白蛋白介导的大鼠肾小管上皮细胞表达骨调素(OPN)中的作用。方法应用W estern印迹法检测p38MAPK在白蛋白诱导的肾小管上皮细胞中的活化程度,应用逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)法观察白蛋白及p38MAPK特异性阻断剂SB203580对肾小管上皮细胞促炎症介质骨调素OPN mRNA的影响。结果白蛋白以时间依赖性刺激NRK-52E引起的p38MAPK活化,并明显上调肾小管上皮细胞OPN mRNA的表达。SB203580能显著抑制OPN mRNA的表达。结论p38MAPK在白蛋白介导的肾小管上皮细胞上调表达黏附因子OPN中起重要作用。     

Effects of pentachlorophenol and tetrachlorohydroquinone on mitogen-activated protein kinase pathways in Jurkat T cells

When Jurkat human T cells were incubated with 20 microM of pentachlorophenol (PCP) or its metabolite, tetrachlorohydroquinone (TCHQ), for 10 hr, flow cytometric analyses revealed marked increase in the number of apoptotic cells. DNA fragmentation was also observed in these cells. TCHQ was more potent than PCP in causing apoptosis. After incubation with 20 microM TCHQ for 1 hr, all mitogen-activated protein kinases (MAPKs) examined [i.e., extracellular signal-regulated protein kinase (ERK), p38, and c-Jun NH(2)-terminal kinase (JNK)] were phosphorylated, whereas no clear phosphorylation was induced by PCP. TCHQ-induced apoptosis was markedly suppressed by treatment with a p38 inhibitor (SB203580) and mildly (but significantly) suppressed by treatment with a MAPK/ERK kinase inhibitor (U0126). When cells were treated with both inhibitors at the same time, TCHQ-induced apoptosis disappeared almost completely. PCP-induced apoptosis was also suppressed by SB203580 and/or U0126. Nevertheless, treatment with LL-Z1640-2, which inhibits JNK phosphorylation, did not suppress the apoptosis caused by either TCHQ or PCP. Thus, p38 and ERK appear to be important signal transduction pathways leading to apoptosis in a human T-cell line exposed to a ubiquitous pollutant or its metabolite in the general and occupational environment.     

二甲双胍通过抑制MAPK信号通路增强卵巢癌细胞对顺铂的敏感性

目的：探讨二甲双胍是否可以提高卵巢癌细胞对顺铂的敏感性及相关的作用机制。方法：BRDU ELISA方法检测顺铂联合或者不联合二甲双胍对SKOV3细胞增殖的影响;二甲双胍联合或者不联合MAPK信号通路阻断剂后BRDU ELISA方法检测细胞增殖的变化。Western blotting检测二甲双胍作用下卵巢癌细胞系SKOV3的磷酸化AMPK/总AMPK水平和磷酸化p38 MAPK/总MAPK水平的变化。结果：（1）二甲双胍不仅能抑制卵巢癌细胞系SKOV3细胞的增殖,而且能提高对顺铂的敏感性,并且这种作用是依赖于AMPK激活的;（2）p38 MAPK阻断剂SB203580能够抑制SKOV3的增殖,二甲双胍能够增强这种抑制作用。结论：二甲双胍可增强顺铂对卵巢癌细胞的抑制作用,并且二甲双胍可能通过激活AMPK信号通路进而抑制MAPK信号通路增加顺铂对卵巢癌细胞的抑制增殖作用。