应用RT-PCR检测乳腺癌患者外周血CEA mRNA和CK-19 mRNA的研究及意义

目的：检测乳腺癌患者外周血中CEA mRNA和CK-19 mRNA的表达，建立取材于外周血早期诊断乳腺癌微转移的方法。方法：65例乳腺癌和37例乳腺良性疾病患者的外周血，分离其有核细胞后进行细胞总RNA的抽提，运用果式RT-PCR技术进行CEA mRNA和CK-19 mRNA的检测。结果：以     

乳腺癌患者外周血CEA mRNA的表达及意义

目的检测乳腺癌患者外周血中CEA mRNA的表达,建立取材于外周血早期诊断乳腺癌微转移的方法.方法采集65例乳腺癌和37例乳腺良性疾病患者的外周血,分离其有核细胞后进行细胞总RNA的抽提,运用巢式RT-PCR技术进行CEA mRNA的检测.结果以巢式RT-PCR终产物出现131 bp带定为阳性.65例乳腺癌患者中,26例CEA mRNA阳性表达,阳性率为40.0%;37例乳腺良性疾病者CEA mRNA均无表达,差异具有显著性(χ2=7.41,P＜0.001).结论RT-PCR可以用于临床检测乳腺癌患者外周血中微转移.     

外周血CK19 mRNA在乳腺癌治疗中的意义

目的 探讨乳腺癌患者外周静脉血CK19 mRNA检测对判断乳腺癌微转移的应用价值.方法 采用RT-PCR法检测110例乳腺癌及45例乳腺良性疾病患者外周血中CK19 mRNA,并比较乳腺癌患者外周血CK19 mRNA阳性表达率与乳腺良性疾病患者的差异,以及不同分期及治疗前后乳腺癌患者外周血CK19 mRNA阳性表达率的差异.结果 乳腺癌患者外周血CK19 mRNA阳性表达率明显高于乳腺良性疾病者,Ⅲ、Ⅳ期乳腺癌患者阳性表达率明显高于Ⅰ、Ⅱ期患者;乳腺癌患者治疗前CK19 mRNA阳性表达率明显高于治疗后;有淋巴结转移者CK19 mRNA阳性表达率明显高于无淋巴结转移者,差异均有统计学意义(P<0.01).结论 外周血CK19 mRNA检测可以预测乳腺癌发生的远处转移及微转移.     

CK-19mRNA表达与乳腺癌关系的研究

目的：探讨乳腺癌患者外周血中细胞角蛋白19mRNA（CK-19mRNA）的表达与手术、化疗、临床病理的关系及其临床意义。方法：应用实时荧光定量PCR检测60例Ⅱ、Ⅲ期乳腺癌患者手术及化疗前后外周静脉血CK-19mRNA的含量。选择20例乳腺良性疾病手术患者做为对照。结果：对照组外周血中未检出CK-19mRNA。术前乳腺癌组外周血CK-19mRNA阳性率为30．0％（18／60），与对照组比较有显著差异（P〈0．05）。术后1周内及术后化疗1周期后CK-19mRNA阳性率分别降至25．0％（15／60）和13．3％（8／60）。Ⅲ期乳腺癌CK-19mRNA的阳性表达率高于Ⅱ期（P〈0．05），CK-19mRNA的表达与激素受体、HER2表达无关（P〉0．05）。有神经及脉管受侵或淋巴结转移者CK-19mRNA的阳性表达率增高，与无神经及脉管受侵或淋巴结转移者有显著差异（P〈0．05）。结论：CK-19mRNA的表达与神经及脉管受侵以及淋巴结转移有关，与激素受体及HER2表达无关。随着肿瘤分期的增高，微转移检出率将升高。     

hMAM mRNA和CEA mRNA RT-PCR检测乳腺癌外周血微转移

目的:应用RT-PCR法检测乳腺癌患者外周血中的hMAM mRNA和CEA mRNA表达情况.方法:用RT-PCR法,检测52例乳腺癌患者外周血中hMAM mRNA和CEA mRNA的表达情况,另抽取28例乳腺良性疾病患者和10例健康志愿者外周血标本作为对照.结果:52例乳腺癌患者外周血中hMAM mRNA和CEA mRNA的阳性率分别为30.8%、34.6%.28倒乳腺良性疾病患者和10例健康志愿者外周血中hMAM mRNA、CEA mRNA表达均为阴性.二者的阳性表达与患者的腋淋巴结状况、TNM分期差异均有显著性意义(P＜0.05),而与患者的年龄、原发肿瘤大小、病理类型以及激素受体状况等差异均无显著性(P＞0.05).结论:hMAM mRNA、CEA mRNA均可作为标志物来检测乳腺癌患者外周血中微转移,联合检测可增加外周血中循环肿瘤细胞的检出率.     

外周血CK-19mRNA检测对乳腺癌预后的影响

目的:探讨外周血CK-19mRNA对乳腺癌患者预后的影响.方法:对86例初治乳腺癌患者根治手术后的外周血用RT-PCR方法检测了CK-19mRNA的表达,并采用S-P免疫组化法检测了手术标本的c-erbB-2、ER、PR蛋白的表达情况.结果:手术后患者外周血CK-19mRNA阳性率为52.3%;外周血CK-19mRNA状况与临床分期呈显著相关(P＜0.05),而与肿瘤大小、腋淋巴结转移、c-erbB-2、ER、PR蛋白的表达均无显著相关(P＞0.05);外周血CK-19mRNA阴性病例与阳性病例相比,无病生存期和总生存期显著延长(P＜0.05).结论:乳腺癌患者术后外周血CK-19mRNA的检测有助于评估预后.     

检测CK19 mRNA、CEA mRNA诊断非小细胞肺癌外周血微转移

目的 探讨检测细胞角蛋白(cytokeratin 19，CK19)mRNA、癌胚抗原(cancer embryonic antigen，CEA)mRNA诊断非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer，NSCLC)患者外周血微转移的临床意义。方法 应用RT-PCR法检测35例NSCLC患者外周血中的CK19mRNA、CEAmRNA，并以20例良性病变、20例健康人作对照。结果 35例NSCLC患者外周血CK19mRNA、CEAmRNA阳性表达率分别为40％和57％，两者均阳性者40％，两者均阴性者43％；肺良性疾病患者20例，CK19mRNA阳性2例(10％)，无CEAmRNA阳性者；20例健康对照2个指标检测结果均为阴性。随访发现CK-19mRNA阳性、CEAmRNA阳性和二者均阴性患者的远处转移率分别为50％、56％和27％。结论CEAmRNA和CK19mRNA是检测肺癌患者外周血微转移的良好标志物，检测外周血微转移有助于预测肺癌患者预后。     

乳腺癌新辅助化疗前后外周血中微转移癌细胞的变化及其临床意义的研究

目的:观察乳腺癌患者新辅助化疗前后外周血微转移的变化,并探讨其临床意义.方法:44例乳腺癌患者首先经半定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测外周血CK-20 mRNA为阳性表达,给予CEF方案行新辅助化疗后,再次检测外周血CK-20 mRNA的表达,并评价化疗对肿瘤的疗效.结果:新辅助化疗后14例(31.8%)乳腺癌患者外周血CK-20 mRNA表达转为阴性,21例(47.7%)表达下降,9例(20.5%)未见明显变化,与化疗前相比差异有统计学意义,P=0.006;化疗疗效临床完全缓解3例(6.8%),部分缓解34例(77.3%),疾病稳定7例(15.9%),无疾病进展病例;CK-20表达下降与新辅助化疗疗效显著相关,r=0.942.结论:新辅助化疗可明显降低乳腺癌患者外周血微转移的发生,并可作为化疗疗效判定的早期预测指标.     

乳腺癌组织中E-cadherin的表达与外周血微转移的相关性及临床意义

目的检测乳腺癌组织中E-cadherin的表达及患者外周血微转移的发生,探讨二者的相互关系及临床意义.方法应用逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）分别检测15例乳腺良性肿瘤患者及60例乳腺癌患者外周血CK-20及乳腺组织中E-cadherin mRNA的表达.结果 15例乳腺良性肿瘤组织中,均有E-cadherin阳性表达（100%）,而60例乳腺癌组织中,E-cadherin阳性表达23例（38.3%）,二者差异显著（P〈0.01）;CK-20在乳腺良性肿瘤患者外周血中未见表达.在60例乳腺癌患者外周血中,检出CK-20阳性表达28例（46.7%）,E-cadherin在相应癌组织中的阳性表达率为14.3% （4/28）,32例外周血CK-20阴性的乳腺癌病例中,E-cadherin的阳性表达率为59.3%（19/32）,二者差异显著（P〈0.01）.结论乳腺癌组织中E-cadherin的低表达与外周血高转移率显著相关,提示E-cadherin的表达缺失或低表达可能是导致乳腺癌高转移的因素之一,可作为临床判断预后的参考指标.     

实时荧光定量RT-PCR检测乳腺癌患者外周血癌胚抗原mRNA表达的临床意义

目的分析乳腺癌患者外周血癌胚抗原(CEA)mRNA的表达及其与病理分期、区域淋巴结转移的关系,评价CEAmRNA对乳腺癌外周血微转移的特异性。方法采用实时荧光定量RT-PCR技术检测53例有明确临床病理资料的乳腺癌患者和16例良性乳腺疾病患者外周血CEAmRNA的表达。结果乳腺癌患者外周血CEAmRNA总阳性率为28.3%,阳性率随着分期的升高而升高(Ⅰ期12.5%,Ⅱ期22.2%,Ⅲ期44.4%,Ⅳ期44.4%),区域淋巴结转移者(23.1%)CEAmRNA阳性率高于无转移者(18.7%),但统计分析差异无显著性。良性乳腺疾病患者无一检测到CEAmRNA的表达。结论乳腺癌患者外周血CEAmRNA检测对外周血微转移具有一定的代表性,但尚无明显证据支持可以指导乳腺癌预后判断。     

hMAM和CK19 mRNA联合检测早期乳腺癌循环肿瘤细胞的临床价值

目的:评价hMAM和CK19 mRNA联合检测早期乳腺癌循环肿瘤细胞的临床价值.方法:采用RT-PCR检测早期乳腺癌患者CK19、hMAM mRNA阳性循环肿瘤细胞.结果:hMAM和CK19 mRNA联合检测早期乳腺癌患者循环肿瘤细胞阳性率(52.0%)均高于良性乳腺疾病患者(16.7%)和健康体检者(5.0%), P值分别为0.004和0.000;阳性率与癌组织HER-2过表达相关,P=0.049.联合检测的敏感度为57.5%,特异度为88.6%.26例联合检测阳性患者,13例随访期出现转移复发,P=0.001;中位无瘤生存期明显降低,P=0.000.结论:hMAM和CK19 mRNA是一组敏感度和特异度较好的诊断早期乳腺癌患者循环肿瘤细胞的基因标志,可能作为早期乳腺癌术后监测转移复发辅助指标.     

A highly specific real-time RT-PCR method for the quantitative determination of CK-19 mRNA positive cells in peripheral blood of patients with operable breast cancer

The aim of the present study was to decrease the incidence of false positives and to better characterize marginally cytokeratin-19 (CK-19) mRNA positive peripheral blood samples from patients with early stage breast cancer. A new set of highly specific primers for CK-19, which avoids amplification of contaminating genomic DNA, was designed and evaluated to improve the specificity and sensitivity of the previously described methodology. The primers were specifically designed to avoid amplification of contaminating genomic DNA and CK-19 pseudogenes. The breast cancer cell line MCF-7 was used as positive control for the development and analytical evaluation of the assay, while peripheral blood samples from 62 healthy female individuals and 160 patients with early breast cancer were used for the evaluation of the sensitivity and specificity of the new primer pair. The novel designed primer pair was highly sensitive, as it detects up to 1 MCF-7 cell, and specific as none of the healthy individuals had detectable CK-19 mRNA positive cells in their peripheral blood. CK-19 mRNA positive cells were detected in 33 out of 160 (20.6%) patients with early breast cancer. Results obtained by the proposed optimized real-time RT-PCR protocol correlated well with those obtained in the same samples by our previously reported quantitative real-time RT-PCR [concordance in 198/222 (89.2%), p = 0.0022, McNemar test]. The improved method eliminates the incidence of false positives and is highly sensitive and specific. The method could be used in a clinical setting in the near future for continuous monitoring and quantification of circulating epithelial cells in the peripheral blood of patients with operable breast cancer, provided that a quite larger number of clinical samples with a known follow-up will be analyzed.     

结直肠癌外周血和腹膜腔微转移影响因素分析

目的 探讨结直肠癌患者外周血和腹膜腔微转移及其影响因素.方法 收集施行手术治疗的90例结直肠癌患者和25例结直肠良性疾病患者外周血及腹腔灌洗液,RT-PCR方法检测CK-20mRNA和CEAmRNA表达;手术切除标本常规病理学分析.结果 (1)结直肠癌患者外周血CK-20mRNA和CEAmRNA表达率分别为45.6%(41/90)和54.4%(49/90),两者联合检测表达的阳性率为64.4%(58/90);腹膜腔CK-20mRNA和CEAmRNA表达阳性率分别为51.1%(46/90)和58.9%(53/90),两者联合检测表达的阳性率为68.9%(62/90);上述指标均随肿瘤的浸润深度、PS因素的递进,以及淋巴结及肝脏转移而增高(P<0.05);在结直肠良性疾病患者外周血及腹腔灌洗液标本中均未检出CK-20mRNA和CEAmRNA的表达.(2)腹腔灌洗液中CK-20mRNA和(或)CEAmRNA表达的阳性率与同一指标在外周血中的表达相比无差异;外周血及腹腔灌洗液中CEAmRNA的表达与CK-20mRNA表达相比也无差异.结论 采用RT-PCR方法检测结直肠癌患者外周血和腹膜腔CK-20mRNA和CEAmRNA的表达,有助于筛选亚临床转移和预测病理分期;两者的联合检测更有意义.