PCR法与ELISA法检测丙型肝炎病毒及乙型肝炎病毒比较5

目的：探讨PCR与ELISA2种方法检测丙型肝炎病毒和惭型肝炎病毒的差异和临床意义。方法：随机抽取无偿献血者标本300份，分为ALT升高组和ALT正常组，用ELISA法检测抗－HCV和HbsAg，用RT－PCR检测HCV－RNA和HBV－DNA。结果：抗－HCV阳性标本26例阳性率为8．7％，经RT－PCR检测，HCV－RNA均为阳性，抗HCV阴性的标本中有2例HCV－RNA为阳性。HCV－RNA的阳性率为16％，2种方法检测结果差异有统计学意义（P＜0．01）；300份标本中HBsAg阳性和HBV－DNA阳性比率分别为11．3％和12．7％，两者无明显差异（P＞0．05）。结论：ELISA方法检测丙型肝炎病毒存在一定的漏检现象，应用RT－PCR检测HCV－DNA利于早期诊断，也是筛选献血员是否携带丙型肝炎病毒的较可靠方法。     

乙型肝炎病毒标志物与HBV-DNA检出率的关系

目的：探讨乙型肝炎病毒标志物（HBV－M）常见模式与HBV－DNA检出率的关系。方法：采用地高辛标记探针斑点杂交法检测200例HBV－M常见模式血清中HBV－DNA。结果：41份HBsAg、HBeAg、HBcAb三项阳性（大三阳）标本中检了HBV－DNA阳性38例（HBV－DNSA阳性率为92．6％）;52例HBsAg、HBeAb、HBcAb三项阳性（小三阳）标本中检出HBV－DNA阳性9例（阳性率17．3％）;30例HBV－M全阴性标本中检出HBV－DNA阳性2例（阳性率6．7％）;20例仅HBsAb阳性的标本,其HBV－DNA全部阴性。结论：BHeAg阳性与HBV－DNA关系极为密切,其HBV复制最活跃,传染性最强。无论何种原因产生HBsAb,都能有效地清了HBV;只有HBsAb是保护性抗体,能有效地清除HBV或抑制HBV复制。即使HBV－M全阴性人群中,仍可能有病毒复制,一般都应接种乙肝疫苗。     

PCR-微流芯片法检测HBV感染者外周血HBV cccDNA和HBV DNA

目的：探讨HBV感染的肝病患者血中HBV cccDNA、HBV DNA的临床意义。方法：采用PCR-微流芯片法检测105例HBV感染者血清HBV DNA、HBVccc DNA、白细胞中HBV cccDNA（3例进行肝组织HBV cc-cDNA检测）,以6例非乙型肝炎患者作为对照。结果：6例非乙型肝炎患者HBVM、HBV DNA、HBV cccDNA均阴性;HBV感染者中41.9%（44/105）白细胞HBVccc DNA阳性,其中2例阳性PCR产物经基因测序得到验证;HBVDNA≥105copy/ml中HBV cccDNA阳性率57.4%（35/61）显著高于HBV DNA〈105copy/ml者20.5%（9/44,P〈0.01）;18.9%HB VDNA〈103copy/mlHBV感染者HBV cccDNA阳性;抗病毒治疗的慢性肝病患者HBV cccDNA阳性率显著低于未抗病毒治疗者（5/25 VS 34/65,P〈0.01）。结论：HBV感染的患者外周血中存在HBV cccDNA;HBV DNA高浓度者HBV cccDNA检出率高;外周血白细胞HBV cccDNA、血清HBVDNA联合检测更能准确判断抗病毒治疗效果及提高HBV复制检出率。     

人工液化和洗涤法体外精液处理技术应用研究

目的：比较人工液化法和洗涤法体外处理不育症精液的疗效。方法：采用胰蛋白酶液化不育症２０例精液宫腔注入（Ａ组），其中未受孕１９表液，再采用洗涤法后宫腔注入Ｂ组），观察受孕。结果：Ｂ组精子活力、穿透力明显高于Ａ组，前者１０例受孕，后者１例受孕。结论：人工液化精液精子质量、受精能力低于人工洗涤精子。     

PCR-ELISA法及荧光定量PCR法检测HBV感染者精液HBV-DNA的探讨

目的探讨PCR-ELISA法及荧光定量PCR法（FQ-PCR）检测HBV感染者精液中HBV-DNA检出情况及其临床意义。方法选取男性HBV感染者60例,采集患者精液、静脉血,用PCR-ELISA法来检测患者精液及血清中HBV-DNA。同时采用荧光定量PCR检测患者精液中HBV-DNA。结果PCR-ELISA法：60例精液标本HBVDNA阳性12例,阳性率18.33%,拷贝数为1.267×10^3-6.532×10^5/ml,平均拷贝数为4.781×10^4/ml;60例血清标本阳性53例,阳性率为88.33%,拷贝数1.462×10^3-5.153×10^7/ml,平均拷贝数为2.451×10^6/ml。荧光定量PCR法：60例精液标本HBVDNA阳性13例,阳性率21.67%,拷贝数为1.357×10^3-7.113×10^5/ml,平均拷贝数为4.983×10^4/ml;两种检验方法检测精液HBV-DNA的阳性检出率比较无显著性意义（P〉0.05）。结论PCR-ELISA法与荧光定量PCR定量检测精液中HBVDNA同样具有较强的特异性和灵敏度,为临床了解乙型肝炎患者精液中肝炎病毒的感染状态提供了帮助,具有重要的临床意义。     

3类洗涤法处理不同质量精液标本的效果比较及在IUI中的应用选择

目的:通过比较密度梯度离心法(density-gradient centrifugation,DGC)、上游法(swim-up,SU)和简单洗涤法(simple washing,SW)处理不同质量精液标本的效果,优选出最合适的宫腔内人工授精(Intrauterine insemination,IUI)精液洗涤方法。方法:选取男科实验室行精液常规检查的患者中收集精液量≥3 m L的精液标本90份,其中精子浓度15×10~6/m L的少精症患者精液标本23份,浓度与活力正常(浓度≥15×10~6/m L,PR≥32%且PR+NP≥40%)的精液标本67份,每份精液标本各取3个1 m L分别用密度梯度离心法、上游法和简单洗涤法处理。通过不同方法的洗涤处理,比较各组精子洗涤前后的浓度、活力(PR)及回收率。结果:3种处理方法洗涤后的PR较洗涤前均有显著提高(P0.05);在处理后的精子浓度方面,简单洗涤法处理要显著高于其余两类方法(P0.05);在处理后的PR和活率(PR+NP)方面,密度梯度离心法和上游法又要高于简单洗涤法(P0.05);在回收率方面,密度梯度离心法和简单洗涤法则显著高于上游法组(P0.05)。结论:在处理少精症患者精液标本时,上游法因其较低的回收率不适宜被采用;当精子浓度15×10~6/m L且精子总数小于正常值(39×10~6个)时,为保证处理后最终前向精子总数10×10~6个,精子标本不适合过多次数的洗涤处理,宜采用简单洗涤法;而只有当精液体积较大时,在保证IUI精子终浓度的同时,密度梯度离心法较简单洗涤法能更好地去除白细胞和不成熟生殖细胞等杂质,而更适宜被采用;在处理浓度活力正常精液标本时,密度梯度离心法和上游法较之简单洗涤法能获得更高的精子活力(P0.05)而更适宜被采用;同时,密度梯度离心法因较之上游法具有更高的回收率(P0.05),且具备操作易标准化和操作时间短等特点而更具实用价值。     

胃癌组织HPV16、EB病毒及HBV感染的检测与分析

目的：探讨肿瘤相关病毒HPV16、EB病毒及HBV感染与胃癌的相关性。方法：选择临床病理确诊的胃癌组织及其癌旁正常胃黏膜组织标本各40份，用PCR方法检测标本中HPV16、EB病毒及HBV DNA。结果：胃癌及癌旁正常胃黏膜组织标本中，HPV16DNA阳性检出率分别为25％（10／40）和0（0／40），EB病毒DNA阳性检出率分别为17．5％（7／40）和0（0／40），差异均有显性（P＜0．05）；HPV16、EB病毒DNA同时呈阳性的检出率为5％（2／40）；HBV DNA在胃癌组织和癌旁正常胃黏膜组织中的检出率均为0。结论：HPV16、EB病毒感染可能与胃癌的发生相关。     

血清HBV DNAB阳性患者的其它乙肝标志物分布模式分析

采用聚合酶链反应（PCR）技术对4670份血清标本进行HBV DNA检测，并结合其它HBV标记物（HBVM）的分布模式进行分析。结果显示，1320例HVB DNA阳性患者中，     

乙肝患者血清中HBeAg与乙肝病毒DNA关系的探讨

目的：探讨乙肝患者血清中e抗原（HBeAg）与乙肝病毒DNA（HBV—DNA）之间的关系。方法：选取305例HBsAg阳性的乙肝患者血清标本．分别用微粒子酶免疫分析法（MEIA）和核酸扩增荧光定量法（FQ—PCR）检测HBeAg和HBV—DNA。结果：305例标本中,HBeAg阳性率为71．48％,而HBV—DNA阳性率为58．69％。HBeAg阳性标本中．HBV—DNA阳性率为66．05％;而HBeAg阴性标本中,HBV—DNA阳性率为40．23％,两者有显著性差异（Х^2=17．11,P〈0．01）。不同浓度组HBeAg和HBV—DNA检测结果比较,有统计学意义（Х^2=35．67,P〈0．01）。结论：HBV—DNA比HBeAg能更准确反映出乙肝病毒复制情况,可以更好地指导临床进行乙肝治疗。     

不育症患者精子DNA完整性与精液相关参数的研究

目的：探讨不育症患者精子DNA完整性与精液相关参数的相关性。方法：收集100例男性不育患者的精液标本,采用精子染色体扩散实验检测精子DNA的完整性,采用混合抗球蛋白凝集实验检测抗精子抗体（ AsAb）,通过计算机辅助精液分析系统对不育患者的精液进行常规分析。结果：年龄与精子DNA碎片率、AsAb和精液各参数均无相关关系（P〉0.05）。精子DNA碎片率与精子密度及精子活力均呈负相关关系（P〈0.01）,与AsAb无相关关系（P〉0.05）。 AsAb仅与精子摆动性和前向性呈弱相关关系（P〈0.05）。结论：精子DNA完整性和AsAb作为精液分析的补充指标,具有重要的临床应用价值。     

FQ—PCR法检测乙肝患者血清和精液中HBVDNA含量的临床意义

目的探讨应用荧光定量聚合酶链反应（FQ-PCR）法检测男性乙肝患者血清和精液中HBVDNA含量的临床意义。方法选取男性乙肝患者70例,分别采集患者的精液和静脉血,并用FQ-PCR法检测精液及血清中HBVDNA含量。结果精液标本中HBVDNA阳性16饲（占22．86％）,HBVDNA含量为2．55X103～6．18×10^5IU／ml、平均为5．08×10^4IU／ml;血清标本中HBVDNA阳性62倒（占88．57％）,HBVDNA含量为1．21×10^3～7．52×10^7Iu／ml、平均为9．40×10^5／ml。精液中HBVDNA含量与血清中HBVDNA含量呈正相关（r=0．743）,且血清HBVDNA含量高于精液含量10倍左右;结论FQ-PCR法定量检测精液中HBVDNA含量具有较强的特异性和灵敏度,为l临床了解乙肝患者精液中HBV状态提供了帮助,具有重要的临床意义。     

HBV-DNA与其病毒免疫标志物的关系

目的:探讨乙型肝炎病毒(HBV)感染者HBV-DNA与病毒免疫标志物的关系。方法:采用实时荧光定量PCR(FQ-PCR)对568份HBV感染者血清中HBV-DNA含量进行检测,同时用ELISA法检测其HBV免疫标志物。结果:HBsAg、HBeAg和HBcAb阳性组HBV-DNA阳性率约为98.9%;HBsAg、HBcAb和HBeAb阳性组HBV-DNA阳性率约为65.4%;HBsAb、HBcAb和HBeAb阳性组HBV-DNA阳性率约为13.9%;三组间HBV-DNA阳性率有明显差异(P<0.01)。HBeAg阳性标本中HBV-DNA阳性率最高,达92.0%;HBsAg与HBV-DNA的符合率最高,为77.6%。结论:检测HBV-DNA含量结合血清病毒标志物对乙型肝炎的临床诊断治疗以及病情判断有重要意义。     

两种PCR方法检测感染家兔血液中弓形虫DNA的动态比较

目的:对比两种方法检测感染家兔血液中弓形虫基因动态检测结果。方法:用RH株弓形虫感染雄性家兔16只,在感染前后耳缘静脉采集血液标本。用荧光定量PCR(Fluorescence Quantitiative PCR,FQ-PCR)和普通PCR分别检测血液标本中虫体DNA基因片段。结果:FQ-PCR检测,其总阳性率为64.42%。感染家兔血液中虫体密度高峰期在感染后1～3 wk左右,其后长期维持在较低水平;普通PCR检测感染家兔总阳性率为45%。感染后第1wk检出率仅22%,高峰期维持在感染后2～4 wk,检出率约为60%左右。其后检出率下降为25%左右并一直维持。结论:两种PCR检测方法有相同的动态检出效果,采用血液作为样品进行弓形虫PCR检测时其最佳检测时间为感染后1～4 wk,其后检出率逐渐下降。     

乙型肝炎病毒感染者血清HBV-DNA载量测定的临床意义

目的:探讨HBV-DNA载量测定的临床意义及其与HBV-M、拉米夫定治疗的相关性。方法:采用酶联免疫吸附试验和荧光定量聚合酶链反应技术对280例乙肝患者HBV-M和HBV-DNA载量进行检测;同时动态检测32例乙肝患者48周拉米夫定治疗期间血清HBV-M和HBV-DNA载量变化。结果:HBeAg(+)组患者血清HBV-DNA载量显著高于HBeAg(-)组(P<0.01);不同临床类型急性肝炎组HBV-DNA载量与其它组比较(P<0.05);其它各组HBV-DNA载量之间比较(P>0.05);拉米夫定治疗12周、24周、48周后HBV-DNA载量迅速下降,与治疗前比较(P<0.001);HBV-DNA载量下降明显较HBeAg血清学转换发生早。结论:HBeAg是反映HBV-DNA复制的重要指标;HBV-DNA载量测定是反映HBV复制和判断药物疗效的最直接、可靠的指标。     

荧光定量PCR检测HBV DNA及其与Pre-S1和HBeAg关系探讨

目的探讨慢性乙肝患者HBVDNA与血清标志物前S1抗原(Pre-S1)和HBeAg的相互关系。方法采用荧光定量聚合酶链反应技术(FluorescencequantitativePCR,FQ-PCR)和酶联免疫吸附试验(ELISA)对931份HBV-M不同阳性模式及35份HBV-M全阴模式血清进行HBVDNA及其标志物检测。结果在931例不同阳性模式乙肝患者中,HBeAg阳性总检出率为20.7%,Pre-S1抗原阳性总检出率为30.2%,HBVDNA阳性总检出率为45.3%。在422例HBVDNA(+)乙肝患者中,Pre-S1抗原阳性检出率为57.3%,HBeAg阳性检出率为44.1%。在281例Pre-S1(+)乙肝患者中,HBVDNA阳性符合率达86.1%,在Pre-S1(-)组HBVDNA阳性率仅为27.7%。结论HBVDNA检测是反映HBV复制最直接的分子生物学指标;Pre-S1抗原和HBeAg是反映HBV复制的血清学指标,Pre-S1抗原甚至比HBeAg更灵敏地反映HBV复制。     

Study on HBV Vertical Transmission via the in vitro Fertilization(IVF)Technique

Objective To study the hepatitis B virus(HB V)vertical transmission via infected spermatozoa.Methods Eighteen male patients with HBV infection who underwent in vitro fertilization (IVF)were studied,5 HBV negative patients were selected as the control.Fluorescence in situ hybridization(FISH)analysis using the partial-length HBV DNA as the hybridization probe was performed to explore the existence of HBV DNA in the sperm and in the host embryonic genome.Results FISH showed that 5 of 18 patients' sperm presented positive signals and 2 of 18 embryos presented positive signals,while no positive signals were found in control group.Conclusion The HBV DNA was found in human sperm and embryos of HBV patients.These results provide direct evidence that HBV DNA could transmit to foetus via human infected spermatozoa.     

常州地区乙型肝炎病毒基因分型及HBV DNA定量的临床研究

目的了解常州地区乙型肝炎病毒基因型的分布,探讨定量检测HBVDNA的临床意义。方法应用基于膜显色结果判读的DNA芯片检测该地区147例不同HBV感染者HBV基因型,荧光定量PCR（FQ-PCR）法定量测定HBV DNA。结果B型63例（42．86％）,C型80例（54．42％）,B、C混合型1例（0．68％）、B、D混合型3例（2．04％）。69例慢性乙型肝炎中B型33例、C型34例,63例肝癌患者检出B型15例、C型46例,两组C基因型比率比较差异有统计学意义（P〈0．01）。肝癌患者组B、C型HBV DNA含量（分别为3．58±2．23log10copies／ml和4．82±1．98log10copies／ml）差异有统计学意义（P〈0．05）;慢性乙型肝炎患者组HBV DNA含量（分别为5．92±2．38log10copies／ml和6．13±1．49log10copies／ml）差异无统计学意义（P〉0．05）。结论常州地区HBV DNA基因型主要为B型和C型,肝癌患者中C基因型较多,降低病毒载量对治疗可能有积极作用。     

基因芯片技术在检测乙型肝炎病毒 P区YMDD变异中的研究

目的 用基因芯片检测未经抗病毒治疗的HBV DNA阳性血清中HBV P区YMDD变异情况,从分子生物学角度了解YMDD两种变异的状态,为科学合理地指导临床抗病毒治疗及预测患者临床预后提供有力的依据。方法 将150份未经抗毒治疗的HBV DNA阳性血清,用PCR方法扩增P区,扩增产物与基因芯片上的寡核苷酸进行杂交,杂交结果通过扫描仪扫描到计算机上,经软件分析可得到HBVY MDD野生型及其YVDD和／或YIDD变异型结果,并对部分阳性标本用基因序列测序证实。结果 150份HBV DNA阳性血清,用基因芯片方法检出阳性标本(包括YMDD野生型和变异型)共122例,占81．3％,阴性标本28例,占18．7％;在122例阳性标本中,单纯YMDD野生型(即无变异标本)有90例,占73．8％;YVDD变异28例,占22．9％;YIDD变异2例,占1．6％;YVDD和YIDD混合变异2例,占1．60A,,变异株检出率为26．2％,而且变异株均与野生株共存。其中8份阳性标本进行基因序列测序,证实与芯片检测结果完全一致。结论(1)用当前先进的基因芯片技术检测HBVP区YMDD变异,操作简便,结果可靠,特异性高。(2)基因芯片可快速、同时、多人份检出HBVYMDD野生株及其YIDD和／或YVDD突变株的共同感染。(3)部分HBV感染者在未经抗病毒治疗情况下已自然存在HBV YMDD变异,而且变异株均与野生株共存,其中以YVDD变异为多。(4)HBV感染患者在治疗前后有必要检测是否存在HBV YMDD变异株感染,为指导临床科学合理用药和制定治疗方案提供依据。     

乙肝患者血清中HBV C基因启动子变异与病毒含量及前S1抗原的关系

目的研究HBVc基因启动子(Basic Core Promoter，BCP)基因变异与前S1(Pre—S1)抗原的关系，以及BCP基因变异与HBV DNA含量的关系。方法94例HBeAg阳性乙肝患者，用PCR-微板核酸杂交ELISA技术检测BCP中nt1762A—T和nt 1764G—A的基因突变，酶联免疫吸附分析(ELISA)检测Pre—S1抗原，PCR荧光定量技术检测HBVDNA。结果在94例HBeAg阳性乙肝患者血清检测中，Pre—S1抗原阳性者65例，其中BCP阳性51例，BCP变异率为78．5％；Pre—S1抗原阴性者29例，其中BCP阳性23例，BCP变异率为79．3％。BCP基因突变血清中HBV DNA拷贝数明显高于非BCP基因突变血清中HBV含量。结论在e抗原阳性乙肝患者中，Pre—S1抗原的存在与BCP的变异无相关性，但BCP基因变异与HBV DNA拷贝数明显相关，可反映乙肝病情的严重程度及其愈后、转归。     

河南省乙型肝炎病毒基因型的分布

目的:研究河南省乙型肝炎病毒基因型的分布.方法:随机选择HBV表面抗原携带者76例,慢性乙型肝炎患者80例,应用PCR方法检测血清HBV DNA含量,采用微板核酸杂交-ELISA技术进行血清HBV基因分型.结果:HBV携带者76例中,43例HBV DNA定量阳性;慢性乙型肝炎患者80例,HBV DNA定量均为阳性.HBV DNA定量阳性的123例中,B型65例(52.85%),C型38例(30.89%),B、C混合型5例(4.07%),B、D混合型3例(2.44%),C、D混合型4例(3.25%),未分型者8例.结论:河南省乙型肝炎病毒基因型以B、C型为主.