缬草醛对肠易激综合征模型大鼠胃肠敏感性和结肠中5-HIAA及5-HT相关受体蛋白表达的影响作用

目的探讨蜘蛛香环烯醚萜类成分缬草醛对慢-急性应激致肠易激综合征(IBS)模型大鼠的治疗作用及其对5-羟吲哚乙酸(5-HIAA)及5-羟色胺(5-HT)相关受体蛋白表达的影响作用。方法将SD雄性大鼠平均随机分为空白对照组、模型组及缬草醛高、中、低剂量组(0.6、0.3、0.15 mg/kg)、匹维溴铵组(25 mg/kg)。采用慢-急性应激结合孤养的方法建立IBS大鼠模型,观察缬草醛对IBS模型大鼠腹部回撤反射(AWR)评分的影响作用;使用高效液相色谱法测定大鼠结肠中5-HIAA含量;使用Western Blot法检测缬草醛对IBS模型大鼠结肠5-HT1A、5-HT3A及5-HTR4受体蛋白表达的影响。结果与模型组相比,缬草醛各剂量组均能够降低IBS模型大鼠AWR评分,并降低结肠内5-HIAA含量(P0.05);缬草醛各剂量组均可调节结肠内5-HT1A、5-HT3A及5-HTR4受体的蛋白表达。结论缬草醛对慢-急性应激致IBS模型大鼠的胃肠道功能亢进有明显抑制作用,可降低内脏敏感性,提示蜘蛛香环烯醚萜对IBS的症状有改善作用,作用机制可能与调节结肠内5-HIAA含量及5-HT相关受体的蛋白表达水平相关。     

山楂水提物对肠易激综合征大鼠结肠黏膜5-HT和5-HT3R表达的影响

目的：探讨山楂水提物对肠易激综合征（IBS）大鼠结肠黏膜5-HT和5-HT3R的影响,探讨其改善消化功能的作用机制。方法：采用乳鼠结肠PTCA球囊刺激法复制IBS大鼠模型。随机分为模型组、空白组、西沙必利组、山楂水提物高、中、低剂量组,给药2周后,应用免疫组化法检测大鼠结肠黏膜5-HT和5-HT3R表达变化。结果：与空白组比较,模型组大鼠结肠黏膜5-HT和5-HT3R水平显著升高,差异有统计学意义（P〈0．01）;给药组大鼠5-HT和5-HT3R的表达明显降低（P〈0．01;P〈0．05）。结论：山楂水提物可抑制IBS模型大鼠结肠黏膜5-HT和5-HT3R的过分表达,从而改变肠道敏感度,达到改善肠道消化功能作用。     

艾灸干预腹泻型肠易激综合征大鼠miR 24/SERT/5 HT通路改善内脏高敏感状态实验观察

目的 观察艾灸干预对腹泻型肠易激综合征（diarrhea predominant irritable bowel syndrome，IBS-D）大鼠微小RNA-24（micro RNA-24，miR-24）/5-羟色胺转运体（serotonin transporter，SERT）/5-羟色胺（5-hydroxytryptamine，5-HT）通路的影响，探究艾灸改善IBS-D大鼠内脏敏感性的作用机制。方法 将SD大鼠随机分为正常组、模型组、艾灸组共3组，每组12只。采用母子分离＋醋酸刺激＋慢性束缚法制备IBS-D大鼠模型。艾灸组给予艾灸双侧“天枢”“上巨虚”20 min，连续7 d。分别于34、45、53 d检测各组大鼠体质量、稀便率和腹部回撤反射（abdominal withdrawal reflex，AWR）的最小容量阈值；苏木精-伊红染色检测结肠组织病理学变化；ELISA法测定大鼠血清、中脑、结肠组织中5-HT、SERT、5-羟色胺受体4（serotonin receptor 4，5-HT4R）、降钙素基因相关肽（calcitonin gene related peptide，CGRP）、P物质（substance P，SP）水平的变化；Western blot、RT-PCR检测大鼠中脑、结肠组织中SERT、5-HT4R、CGRP、SP的蛋白及mRNA表达水平；RT-PCR检测中脑、结肠组织中miR-24表达水平。结果 与正常组比较，模型组大鼠稀便率升高（P＜0.05）、AWR最小容量阈值下降（P＜0.05）；血清、中脑、结肠组织中5-HT、5-HT4R、CGRP、SP水平均显著升高（P＜0.05），SERT水平均显著降低（P＜0.05）；miR-24表达水平显著升高（P＜0.05），SERT蛋白及mRNA表达水平均明显降低（P＜0.05），5-HT4R、CGRP、SP的蛋白及mRNA表达水平均明显升高（P＜0.05）；与模型组比较，艾灸组大鼠稀便率下降（P＜0.05），AWR最小容量阈值上升（P＜0.05）；血清、中脑和结肠组织中5-HT、5-HT4R、CGRP、SP水平均显著降低（P＜0.05），SERT水平显著升高（P＜0.05）；miR-24表达水平显著降低（P＜005），SERT的蛋白及mRNA表达水平显著升高（P＜0.05），5-HT4R、CGRP、SP的蛋白及mRNA表达水平显著降低（P＜0.05）。结论 艾灸干预改善IBS-D大鼠内脏高敏感性可能与下调miR-24表达，促进SERT对5-HT的重摄取，降低5-HT水平有关。     

疏肝健脾法改善功能性胃肠病内脏敏感性及其机制的实验研究

目的探讨疏肝健脾法对大鼠内脏敏感性的影响及其可能机制。方法母婴分离方法制作大鼠模型,将实验动物随机分为加味逍遥丸高、中、低剂量组,生理盐水组,模型空白组,正常对照组,雌雄各半;观察各组结肠球囊扩张(CRD)时腹部回缩反射(AWR)并评分。免疫组化法观察各组下丘脑促肾上腺皮质激素释放因子(CRF)、脊髓背角神经元c-fos、结肠5-HT3R的表达情况,采用ELISA方法检测血清中CRF含量。结果母婴分离法可使大鼠的内脏敏感性增高,雌鼠内脏敏感性更容易升高,直肠球囊扩张容量阈值明显减低(P<0.05)。加味逍遥丸组治疗前容量阈值差异无统计学意义,治疗后,容量阈值明显升高(P<0.05);治疗组下丘脑及血清CRF随着药物剂量的逐渐增加,含量逐渐减少,其中,高中剂量组,中低剂量组,差异有统计学意义(P<0.05)。脊髓c-fos、结肠5-HT3R的表达随着药物剂量的增加而逐渐减少,且有随剂量增加变化越明显的趋势(P<0.05)。结论新生期母婴分离法可使大鼠内脏敏感性增高,加味逍遥丸可降低大鼠的内脏敏感性,且有随剂量增加改善越明显的趋势,其可能的机制是通过减少下丘脑及外周CRF的分泌及释放以及抑制脊髓c-fos、结肠5-HT3R的表达,从而抑制脑肠轴兴奋,降低内脏敏感性。     

逍遥散对内脏高敏感大鼠血浆及结肠黏膜鸟苷素表达的干预作用

目的:观察逍遥散对内脏高敏感肠易激综合征(IBS)大鼠血浆及结肠黏膜鸟苷素表达的干预作用.方法:70只SD大鼠随机分为正常组20只和实验组50只,实验组采用慢性束缚+夹尾刺激作为复合应激原复制IBS大鼠模型.造模第28天,正常组、实验组各随机抽取10只大鼠处死,检测结肠黏膜病理.实验组再随机分为模型组、匹维溴胺组、逍遥散高、中、低剂量组,各8只.检测各组大鼠血浆、结肠黏膜鸟苷素的表达水平及内脏敏感性变化.结果:模型组大鼠结肠分泌增加,结肠运动增强,内脏敏感性增高,血浆、结肠黏膜鸟苷素表达水平增高,与正常组比较,差异有统计学意义(P<0.05,P<0.01).逍遥散能提高大鼠腹部收缩反射最小容量阈值(P<0.05),降低血浆、结肠黏膜鸟苷素含量,降低结肠运动(P<0.05,P<0.01).结论:IBS大鼠血浆、结肠黏膜鸟苷素表达与结肠运动功能障碍、内脏敏感性异常有一定的相关性,逍遥散可降低内脏高敏感IBS大鼠结肠分泌与运动,其机制可能与降低血浆、结肠黏膜鸟苷素的表达水平,调节其肠道运动障碍有关.     

痛泻要方对肠易激综合征作用机制的实验研究

目的探讨痛泻要方对内脏高敏感性肠易激综合征(IBS)模型大鼠的疗效和作用机制。方法采用结肠慢性刺激法制作内脏高敏感性的IBS大鼠模型。将实验动物分为正常组,模型组,阳性对照(得舒特)组,痛泻要方低、高剂量组。观察各组大鼠肠道内扩张引起腹部抬起和背部拱起的容量阈值和大鼠肠道内不同容量下扩张期间腹壁收缩次数,检测5-羟色胺(5-HT)、P物质(SP)、降钙素基因相关肽(CGRP)水平。结果与模型组相比,各治疗组大鼠行为学和电生理指标均有明显改善;各治疗组模型大鼠5-HT、SP水平明显下降,CGRP水平增加,且有一定的量效关系。结论痛泻药方能降低内脏高敏感性IBS模型大鼠血清5-HT、血浆SP水平,增加CGRP水平,大剂量痛泻药方疗效优于得舒特。痛泻药方的作用机制可能是通过降低模型大鼠血清5-HT、血浆SP水平,减弱背角神经元兴奋性,从而提高内脏痛阈、消除肠道过敏而达到治疗目的。     

IBS与靶向5-HT受体亚型的新药

由扩张刺激引起的内脏敏感性的改变被认为是肠应激综合征(IBS)的一个关键的病理生理学特征,已成为治疗IBS的靶标.基于5-HT受体配体在IBS中的基本作用原理,5-HT3和5-HT4受体亚型在胃肠道学中得以广泛研究.在5-HT3拮抗剂中,阿洛司琼(alosetron)可用于治疗腹泻性IBS.可动性减少仍是治疗IBS的一个有吸引力的靶标,新一代的原动力药包括5-HT4受体的部分激动剂,如替加色罗(tegaserod,HTF-919)和普卡必利(prucalopride,RO-93877).此外,初步证据显示5-HT4受体也对内脏敏感性有调节功能.吡波色罗(piboserod,SB-207266A)是5-HT4受体拮抗剂,正开发用于治疗腹泻性IBS.最近发现,5-HT7受体亚型介导平滑肌松弛(至少在人结肠),而舒马曲坦(5-HT1B/D受体激动剂)可影响胃肠道运动和内脏的敏感性.     

5-HT2B受体在不同亚型肠易激综合征模型大鼠发病中的作用

目的:观察5-HT2B受体在不同亚型肠易激综合征(irritable bowel syndrome,IBS)模型大鼠中表达的差异?方法:45只大鼠随机分为腹泻型IBS组(D-IBS组)?便秘型IBS组(C-IBS组)和对照组,每组15只?乙酸加束缚应激法制备D-IBS模型,冰水灌胃法制备C-IBS模型,对照组不予任何处理?从大鼠粪便湿重?含水量?结直肠扩张(CRD)刺激下腹外斜肌放电活动和结肠组织HE染色四个方面来评估造模是否成功?免疫组化法观察各组大鼠结肠组织中5-HT2B受体的分布差异;Western blot法及逆转录PCR法检测各组大鼠结肠组织中5-HT2B受体表达的不同?结果:与对照组相比,D-IBS组大鼠粪便湿重和含水量均明显增高(P < 0.05),而C-IBS组降低(P < 0.05);模型组大鼠腹外斜肌放电幅值,在压力为40?60 mmHg的CRD刺激下,均较对照组明显增加,且D-IBS组高于C-IBS组(P < 0.05);模型组结肠组织中均无炎症产生,从以上四方面可以看出造模成功?5-HT2B受体主要分布在结肠肌间神经丛?纵肌层和黏膜层?D-IBS组结肠组织中5-HT2B受体蛋白及mRNA表达量显著高于对照组(P < 0.05),而C-IBS组低于对照组(P < 0.05)?结论:5-HT2B受体可能参与了不同亚型IBS的发病?     

术芍易激胶囊对腹泻型肠易激综合征模型大鼠结肠黏膜5-HT和5-HT_3R表达的影响

目的 观察术芍易激胶囊对腹泻型肠易激综合征(D-IBS)模型大鼠结肠黏膜5-羟色胺(5-HT)和5-羟色胺3受体(5-HT3R)的表达的影响.方法 将48只SD雌性大鼠随机分为正常组、模型组、得舒特组和术芍易激胶囊高、中、低剂量组,分别予生理盐水、得舒特、术芍易激胶囊灌胃2周.取大鼠结肠黏膜一块,以免疫组化方法检测5-HT和5-HT3R的表达.结果 与模型组比较,术芍易激胶囊各剂量组容量阈值增加(P＜0.01),5-HT和5-HT3R的表达明显降低(P<0.01),尤以术芍易激胶囊高剂量组为优.结论 术芍易激胶囊能抑制D-IBS模型大鼠结肠黏膜5-HT和5-HT3R的表达,可能通过进一步影响肠道动力学和肠道敏感性来实现其治疗作用.     

蜥蜴脱敏止泄散对肠易激综合征大鼠模型的治疗效应及机制初探

目的 探讨蜥蜴脱敏止泄散对肠易激综合征 (irritable bowel syndrome, IBS)大鼠模型的疗效和作用机制.方法 采用结肠慢性刺激法制作肠易激综合征模型,将实验动物分为空白对照组、模型对照组、阳性对照(硝苯地平)组, 蜥蜴脱敏止泄散低、高剂量组.观察各组大鼠直、结肠内扩张引起腹部抬起和背部拱起的容量阈值和不同容量扩张期间腹壁收缩次数,检测血清5-羟色胺(5-HT)水平的变化.结果 与模型对照组相比,各治疗组大鼠行为学和电生理指标均有明显改善.各治疗组模型大鼠5-HT水平明显降低.结论 蜥蜴脱敏止泄散可能是通过降低模型大鼠血清5-HT,从而提高机体内脏痛觉阈值、降低肠道敏感性而达到治疗IBS作用.     

肠易激综合征肠道敏感性及动力异常机制研究进展

目前肠易激综合征研究热点主要集中于5-HT及其受体5-HT3R、5-HT4R,中枢及肠道神经系统电生理。5-HT及其受体5-HT3R、5-HT4R在中枢及肠道神经系统直接或间接影响肠道动力和内分泌功能,导致中枢诱发电位及肠道电活动异常,这些中枢及外周神经系统功能的异常导致肠易激综合征肠道敏感性及动力的改变。     

逍遥散对抑郁症模型大鼠脑和结肠中五羟色胺表达的影响

目的观察中药逍遥散对抑郁模型大鼠脑和结肠中五羟色胺(5-HT)表达的影响。方法 40只雄性SD大鼠随机分为正常组、模型组、氟西汀组、逍遥散组各10只,后3组采用慢性应激方法结合孤养法制备抑郁大鼠模型,正常组及模型组给予生理盐水,氟西汀组给予2 mg/ml的氟西汀,逍遥散组给予1.25g/ml的逍遥散,均2 ml,连续21 d。观察各组体质量增长、自主活动、糖水消耗的变化,并用免疫组化SABC法检测各组大鼠右侧大脑皮质和结肠中5-HT的表达。结果与正常组比较,模型组体质量增长数、主动活动次数及糖水消耗量下降,脑皮质及结肠中5-HT的MD值及YP值均均降低(P<0.01)。与模型组比较,氟西汀组及逍遥散组各项指标均有改善,且逍遥散组改善优于氟西汀组(P<0.05,P<0.01)。结论逍遥散的抗抑郁作用可能与增加脑内及结肠中单胺神经递质5-HT含量有关。     

5-羟色胺3受体及其应用的研究进展

5-羟色胺3受体(5-HT3R)广泛分布在中枢神经系统和外周神经系统中,现已分离出5-HT3A、5-HT3B、5-HT3C、5-HT3D和5-HT3E5种受体亚型。这些亚型可构成功能性受体,包括同源受体和异源受体,并表现出不同的生理药理特性。5-HT3R与呕吐及肠易激综合征的发病机制联系紧密,并参与精神情绪的调节,对抑郁症的治疗提供了新靶点,其受体拮抗剂得到了广泛的应用。     

针刺对卒中后抑郁大鼠5-HTT、5-HT1AR、NEα2 R蛋白表达的影响

目的观察针刺干预卒中后抑郁(PSD)大鼠神经递质及受体的调节和影响,从分子生物水平,阐述针刺干预卒中后抑郁的分子机制。方法将120只雄性SD大鼠随机分为空白组、模型组、药物组、针刺组,其中空白组10只,模型组30只,药物组和针刺组各40只,采用大脑中动脉闭塞和慢性不可预见性温和性应激法复合制备卒中后抑郁模型。药物组予以氟西汀2 mg/kg溶入生理盐水灌胃,针刺组选取百会、风府、神门、太冲穴20 min,期间行针1次,以上治疗每日1次,共27d,每7 d之间休息1 d,采用蛋白免疫印迹(Western blot)法检测卒中后抑郁大鼠海马、中缝核、蓝斑核去甲肾上腺素α2受体(NEα_2R)、5-羟色胺1A受体(5-HT_(1A)R)和5-羟色胺转运体(5-HTT)蛋白的表达。结果与空白组比较,模型组海马、中缝核、蓝斑核5-HTT蛋白表达非常显著减少(P0.01),NEα_2R蛋白表达非常显著增加(P0.01);海马、中缝核中5-HT_(1A)R蛋白表达非常显著增加(P0.01),蓝斑核5-HT_(1A)R蛋白表达显著增加(P0.05);与模型组比较,针刺组与药物组海马、中缝核、蓝斑核5-HTT蛋白表达显著增加(P0.01),NEα_2R蛋白表达非常显著减少(P0.01);海马中5-HT_(1A)R蛋白表达非常显著减少(P0.01),中缝核、蓝斑核5-HT_(1A)R蛋白表达显著减少(P0.05)。与药物组比较,针刺组海马、中缝核以及蓝斑核5-HTT蛋白、5-HT_(1A)R蛋白、NEα_2R蛋白表达无显著增加(P﹥0.05)。结论针刺能降低PSD大鼠脑内单胺神经递质5-HT_(1A)R和NEα_2R的表达量,提高5-HTT的含量,进一步提示针刺能调节大鼠脑内单胺类神经递质5-HT和去甲肾上腺(NE)的含量或转运率。从而发挥针刺抗抑郁作用。     

先天抑郁对大鼠幼年结肠乙酸刺激致慢性内脏高敏感的影响

目的：比较先天抑郁大鼠Fawn-Hooded（FH/Wjd）与普通Sprague-Dawley（SD）大鼠对幼年结肠乙酸刺激导致的内脏高敏感和脑区激活的差异,了解先天抑郁对内脏敏感性形成的影响及可能的中枢机制。方法：构建大鼠幼年结肠乙酸刺激致慢性内脏高敏感模型（irritable bowel syndrome,IBS）。结肠扩张实验检测大鼠内脏敏感性;免疫组织化学技术检测大鼠结肠黏膜肥大细胞（mast cell,MC）数目和 结肠黏膜5-羟色胺（5-hydroxytryptamine,5-HT）的表达,以及结肠黏膜和特定脑区包括前边缘皮质（prelimbic cortex,PrL）和前喙扣带皮质（rostral anterior cingulated cortex,rACC）中吲哚胺2,3-双加氧酶（indoleamine 2,3 dioxygenase,IDO）的表达。结果：（1）大鼠幼年结肠乙酸刺激导致腹壁回测反射（abdominal withdrawal reflex , AWR）评分升高（FH/Wjd：2.44±0.04 vs.1.96±0.07,P<0.05;SD：1.75±0.13 vs.1.32±0.05,P<0.05）,且FH/Wjd IBS大鼠高于SD-IBS大鼠（2.44±0.04 vs.1.75±0.13,P<0.05）;（2）大鼠幼年结肠乙酸刺激导致结肠黏膜MC数目增加（FH/Wjd：43.24±1.72 vs. 24.92±1.38,P< 0.01;SD：23.80±1.28 vs. 14.24±0.92,P < 0.01）,FH/Wjd大鼠无论是对照组还是IBS 组,结肠黏膜 MC 数目均高于SD组（P均 < 0.01）;（3）幼年结肠乙酸刺激导致FH/Wjd及SD大鼠IBS组结肠黏膜 IDO 及5-HT阳性细胞数均升高（P均<0.01）,且FH/Wjd 大鼠对照及IBS组的IDO 及5-HT阳性细胞数高于SD 大鼠（对照：IDO,24.64 ± 2.22 vs. 15.52 ± 1.39;5 HT,21.32 ± 1.26 vs. 12.72 ± 1.12。 IBS：IDO,44.92 ± 2.31 vs. 20.85 ± 1.72;5-HT,31.84 ± 1.57 vs. 19.65 ± 1.09, P均<0.01）;（4）FH/Wjd-IBS大鼠PrL 脑区IDO表达高于SD-IBS 组（49.60 ± 4.31 vs. 35.60 ± 2.42,P <0.01）,rACC脑区IDO表达高于FH/Wjd对照（45.44 ± 1.16 vs. 34.08 ± 2.76,P<0.01）。结论：先天抑郁使大鼠结肠乙酸刺激后表现出更为显著的内脏高敏感,可能与结肠MC数目和5-HT、IDO表达升高有关,提示抑郁可能通过影响机体对炎症刺激的反应而加重胃肠道功能紊乱。