应用流式细胞术评估多发性骨髓瘤预后的研究进展

流式细胞术在多发性骨髓瘤方面的临床应用很为广泛,例如可以应用于与反应性浆细胞增多的区别诊断、疾病进展的监测、疾病预后的评估、微小残留病的监测等等.以流式细胞术为基础的免疫表型克隆分析,促进了更严格的诊断和随访技术的发展.本综述主要是介绍最新的骨髓瘤的恶性浆细胞的免疫表型、最广泛的抗原（如CD19,CD33,CD28,CD45,CD56及CD117）在正常的和恶性的浆细胞的表达的差别.本综述还着重介绍了恶性浆细胞表型和染色体异常之间的相关性,明确多发性骨髓瘤的预后因素.     

多参数流式细胞术在多发性骨髓瘤及其微小残留疾病的免疫表型分析

目的探讨多参数流式细胞术(MFC)在多发性骨髓瘤患者初诊和微小残留疾病的检测意义。方法采用多参数流式细胞技术,通过CD138或CD38抗原标记识别74例多发性骨髓瘤患者的浆细胞,联合CD45、CD56、CD19、CD20、CD117表面抗原标记及胞浆Kappa和Lambda轻链鉴别异常骨髓瘤细胞。结果 44例初诊病例中,CD138在可检测的病例中均呈阳性表达,同时CD19阴性,42例病例(95%)CD45阴性或弱阳性,其他表面抗原标记CD38、CD56、CD20、CD117的检测率分别为98%、93%、45%、41%,胞浆Kappa和Lambda轻链均呈限制性克隆型表达。14例病例用于评估初诊及治疗过程中免疫表型的变化,其中11例病例(79%)出现至少1个及以上异常表型的变化,4例(29%)病例化疗后抗原标记荧光强度显著增加,7例(50%)病例荧光强度显著降低。CD45、CD19、胞浆免疫球蛋白轻链为最稳定的标记,未见显著抗原标记的变化,2例CD38(14%)、7例CD56(50%)、4例CD20(29%)及2例CD117(14%)病例呈现显著的抗原密度的变化。30例已治疗病例用于评估MRD的免疫表型,其中25例检测出异常的瘤细胞,5例病例未见显著的限制性轻链克隆型表达,Kappa与Lambda比值在0.5~2,认定MRD阴性。结论流式细胞术用于多发性骨髓瘤的诊断疗效及预后的判断具有重要意义,采用胞浆免疫球蛋轻链的检测可提升微小残留检测的正确性。     

异常免疫表型模式在急性髓系白血病微小残留检测中的应用

目的用多参数流式细胞术区分急性髓性白血病细胞与正常骨髓原始细胞免疫表型,建立急性髓系白血病细胞异常免疫表型模式和流式细胞术检测急性白血病微小残留病的方法。方法选择正常骨髓标本和急性髓性白血病患者骨髓标本,用流式细胞术分析髓系原始细胞免疫表型特征。并将标记抗原用于分析初发白血病细胞免疫表型,以寻找急性髓系白血病细胞异常免疫表型模式和确定用于微小残留病检测的抗体组合,更好地提示患者复发情况。并将流式细胞术结果、骨髓细胞形态学结果和PCR融合基因检测结果进行比较。结果分析20例非恶性血液系统恶性疾病患者的骨髓标本中髓系原始细胞的免疫表型,CD117阳性髓系原始细胞占2.51%±0.84%,CD34阳性髓系原始细胞占1.21%±0.83%,均有特定免疫表型特征。检测346例非早幼粒细胞白血病的急性髓性白血病患者免疫表型特征,异常免疫表型有314例,占90.80%,其中跨系表达抗原主要包括CD7(31.21%)、CD56(23.70%)、CD19(13.87%),跨阶段共表达的抗原包括CD34/CD64(2.89%)、CD14/CD117(1.16%),抗原表达强度变化或抗原缺失主要包括原始粒细胞不表达HLA-DR(4.62%)、CD13(7.51%)或CD33(12.14%),以及单核细胞不表达CD14(5.20%)。早幼粒细胞白血病患者31例,有异常免疫表型的仅占16.7%,低于非早幼粒细胞白血病的急性髓性白血病。根据白血病异常免疫表型模式,与PCR结果符合度高,能很好地提示白血病进展。结论急性髓性白血病细胞具有明显不同于正常来源原始细胞的异常免疫表型特征,适合采用流式细胞术进行微小残留病检测,并能反映体内白血病细胞负荷和病情变化。     

多发性骨髓瘤的免疫表型特征的研究进展

采用流式细胞术研究多发性骨髓瘤（MM）的免疫表型特征,浆细胞特异标志物有CD38、CD138和CD56,其中CD138对MM患者骨髓浆细胞浸润的评估有临床价值,CD56有望可作为多发性骨髓瘤早期预测病程进展及预后的指标。髓系抗原CD117和CD33的表达可能与MM的预后相关。CD28的表达与MM疾病进展存在相关趋势。采用多参数流式细胞术监测微小残留病灶可考虑作为MM独立的预后因素。     

浆细胞白血病实验室诊断与鉴别的分析

目的：探讨浆细胞白血病（PCL）与多发性骨髓瘤（MM）、巨球蛋白血症（WM）的实验室诊断及鉴别方法。方法：12例PCL患者、21例MM患者和5例WM患者，检测其细胞形态学、免疫表型、细胞遗传学后，比较结果。结果：①外周血检查显示，PCL浆细胞〉20％，MM浆细胞少见，WM以淋巴样浆细胞为主。（④骨髓检查显示，PCL以原始、幼稚浆细胞为主（比例为0．65～0．91）；MM以骨髓瘤细胞为主（比例为0-21～0．43）；wM以淋巴样浆细胞为主（比例为0．02-0.28）。⑧免疫表型检查显示，PCL浆细胞表达B细胞抗原CD20和浆细胞抗原CD38、CD138；MM以表达浆细胞抗原CD38、CD138为主；WM以表达B细胞抗原CD20为主。④3种疾病患者均部分检测到染色体异常，但均无特异的染色体异常。结果表明，细胞形态学、免疫表型检测在这3种疾病鉴别中起主要作用，其中免疫表型具重要意义，细胞溃传学对答别诊断无特异性。结论：采用传统细晌形态学检测的同时,PCL诊断需结合临床及免疫表型检测进行。     

多发性骨髓瘤患者免疫表型特征分析

目的:探讨初诊多发性骨髓瘤(multiple myeloma,MM)患者免疫表型特征在诊断中及预后的应用价值。方法:采用流式细胞仪多参数直接免疫荧光技术,CD45/SSC设门,对34例初诊多发性骨髓瘤患者的浆细胞表面CD38、CD138、CD19、CD20、CD28、CD56、CD117及胞内抗原c Kappa、c Lambda进行检测。同时对10例对照组浆细胞反应性增多患者的浆细胞进行免疫表型检测。比较异常浆细胞和正常浆细胞免疫表型情况。根据临床检测β2-微球蛋白(β2-MG)及血清白蛋白(Alb)进行分期,经预后分期,比较Ⅱ期、Ⅲ期MM患者的抗原免疫表型情况。分析浆细胞表面CD56表达与反映MM疾病进展指标β2-微球蛋白(β2-MG)、乳酸脱氢酶(LDH)、血清白蛋白(Alb)、肌酐(Cr)、血钙(Ca2+)、血红蛋白(Hb)、血小板计数(PLT)的相关性。结果:异常浆细胞高表达CD38(100%)、CD138(94.1%),而CD56+(67.6%)、CD117+(29.4%)、CD19+(5.8%)、CD20+(14.7%)、CD28+(17.6%)、CD45+(14.7%)及单克隆轻链表达(97%)相对常见。MM组与对照组CD56阳性率(67.6%vs10%)、CD19阳性率(5.8%vs 100%)及CD45阳性率(14.7%vs 100%)间差异有统计学意义(P均0.01)。MM浆细胞典型免疫表型为CD38++CD138+CD56+CD19-CD45-/dim,而正常浆细胞为CD38++CD138+CD56-CD19+CD45+。经预后分期,Ⅱ期、Ⅲ期患者抗原CD45、CD38、CD138、CD56、CD19、CD117、CD20、CD28表达间差异均无统计学意义(P均0.05)。MM患者CD56阳性率与LDH水平呈负相关(P0.01);与血小板计数(PLT)水平呈正相关(P0.01)。结论:MM具有独特的免疫表型特征,通过流式细胞术进行免疫表型分析对MM的诊断及预后判断有重要价值。     

初诊多发性骨髓瘤患者CD56和CD19表达与染色体核型及预后的关系

目的:探讨初诊多发性骨髓瘤(MM)患者瘤细胞表面CD56和CD19表达与染色体核型及预后的关系。方法:选择北京大学第一医院血液科2011年-2015年的126例初诊MM患者,用流式细胞术分析细胞免疫表型,用荧光原位杂交技术检测细胞遗传学异常,用骨髓涂片检查异常浆细胞骨髓浸润程度,结合病史分析MM细胞新出现的特殊标记与染色体核型及预后的关系。结果:(1)126例初诊多发性骨髓瘤患者中,骨髓浆细胞中位数为0.24(0.01-0.97);116例检测了骨髓瘤免疫表型的患者中,骨髓浆细胞中位数为0.25(0.01-0.97);其中CD19阳性者骨髓浆细胞中位数为0.11(0.01-0.53),CD19阴性者骨髓浆细胞中位数为0.26(0.01-0.97),CD19阳性者骨髓中浆细胞浸润比例较阴性者显著降低(P=0.036)。(2)116例检测了骨髓瘤免疫表型的患者中,骨髓瘤细胞表面出现CD19,CD20,CD56和CD117等表达,其中CD56阳性者61.21%(71/116),CD56阴性者38.79%(45/116);CD56阳性者无进展生存期和总生存期较阴性者明显延长(PFS:37.50月vs 18.40月,P=0.036;OS:53.00月vs 31.00月,P=0.016);(3)CD19阳性者16.38%(19/116),CD19阴性者83.62%(97/116);CD19阳性者无进展生存期和总生存期与阴性者相比无显著差异;(4)CD19阳性患者中CD117阳性率42.11%(8/19),CD19阴性患者中CD117阳性率18.57%(18/97),CD19表达与CD117表达呈正相关趋势。(5)67例初诊多发性骨髓瘤患者进行了FISH检测,其中8例核型正常(11.94%),59例出现异常核型(88.06%);异常核型以Ig H重排为主,出现47例(70.15%),其他异常核型包括1q21+、del(13q14)、del(13q14.3)、del(17p13),分别出现37例(55.22%)、31例(46.27%)、33例(49.25%)、13例(19.40%)。CD19阳性者与CD19阴性者相比,不良核型1q21+、del(13q14.3)发生率显著降低(1q21+:33.33%vs 61.54%,P=0.016;del(13q14.3):33.33%vs 53.85%,P=0.043)。结论:CD56阳性的多发性骨髓瘤预后好于CD56阴性者。CD19阴性的多发性骨髓瘤更易出现不良核型及骨髓浸润,但未统计出预后差异。     

多发性骨髓瘤免疫表型特征及其临床意义

目的探讨流式细胞术检测多发性骨髓瘤(MM)的免疫表型特征及其临床意义。方法应用多参数流式细胞术(MP-FCM),采用CD138/CD45/SSC设门,检测40例MM患者和20例正常献髓者骨髓细胞免疫表型。结果 MM患者抗原异常表达率由高到低分别为CD45~(dim+/-)(95%)、CD81~(dim+/-)(80%)、CD56~+(70%)、CD27~(dim+/-)(50%)、CD200~(++)(48%)、CD33~+(40%)、CD28~(++)(35%)、CD117~+(18%)、CD19~+(5%)和CD20~+(3%)。CD56+、CD200~(dim+)、CD28~(dim+)在正常浆细胞的表达率分别为10%、10%和5%。结论应用MP-FCM检测MM细胞免疫表型,可准确地鉴别良恶性浆细胞,有助于MM的诊断、预后判断及靶向治疗。     

126例急性白血病异常免疫表型分析

白血病细胞异常免疫表型是区别于正常造血细胞的重要特征之一,也是流式细胞术检测微小残留病的基础。为了了解急性白血病的异常免疫表型特征,本研究采用四色流式细胞术CD45/SSC双参数散点图设门技术对126例急性白血病患者的异常免疫表型进行分析,并初步探讨其在微小残留病检测中的意义。结果显示:约76%的患者可以检测到明确的异常抗原表达,白血病异常免疫表型可分为以下四类:抗原跨系列表达、跨阶段表达、过度表达及缺失表达,其阳性率分别为39%、46%、21%和29%。约11%的患者仅发生了单一的表型异常,其余患者则可以检测到两类或更多的表型异常。结论:在大多数急性白血病患者中可以检测到明确的白血病异常免疫表型,在此基础上应用多参数流式细胞仪可以有效检测微小残留病变。     

37例CD45阳性的多发性骨髓瘤浆细胞免疫学表型特征

目的通过分析CD45阳性(CD45~+)多发性骨髓瘤(MM)浆细胞的免疫表型特征及其与CD45阴性(CD45-)MM浆细胞免疫表型的区别,探讨CD45表达与MM临床特征的相关性。方法回顾性分析192例初诊MM患者浆细胞的免疫表型,收集2个组的相关临床信息及实验室数据进行比对研究。结果根据浆细胞CD45的表达情况将192例MM患者分为CD45~+MM组(37例,浆细胞的CD45平均表达荧光强度102)和CD45-MM组(155例)。CD45~+MM组浆细胞CD138、CD38、CD19、CD56、CD20、CD71、CD117、CD33的阳性率分别为83.8%、97.3%、32.4%、64.9%、21.6%、51.4%、35.1%、24.3%;胞浆κ轻链和λ轻链的阳性率均为45.9%,有8.2%不表达轻链。2个组浆细胞CD19、CD71和CD138的阳性率差异有统计学意义(P0.05);其他抗原的阳性率及胞浆轻链的表达差异均无统计学意义(P0.05)。结论 CD45~+MM患者浆细胞CD19和CD71阳性率明显升高,而CD138阳性率明显降低,推测其分化阶段可能处于浆细胞的偏早期。     

CCR7在多发性骨髓瘤中的表达及其与髓外病变的关系

目的:检测趋化因子受体-7(CC-chemokine receptor 7,CCR7)在多发性骨髓瘤中的表达水平,探讨其与疾病特征的关系。方法:采用流式细胞术测定53例新诊断的多发性骨髓瘤患者的骨髓浆细胞CCR7的表达水平,分析其与年龄、性别、M蛋白、外周血细胞计数、血生化指标、骨髓浆细胞比例、免疫表型特点、溶骨改变、髓外病变等疾病特征的关系。结果:53例多发性骨髓瘤患者中CCR7阳性者24例,阳性率为45.28%,CCR7阳性组髓外病变发生率高于CCR7阴性组(29.17%vs 3.45%)(P0.05)。结论:CCR7在多发性骨髓瘤中表达较高,其高表达与髓外病变发生相关,CCR7可能是预测多发性骨髓瘤发生髓外病变的重要指标。     

不同预后分层的多发性骨髓瘤患者免疫表型特征分析

本研究探讨不同预后分层的初诊多发性骨髓瘤患者的免疫表型特点。采用流式细胞仪多参数直接免疫荧光技术,CD45/SSC和CD38/SSC联合设门,对62例初诊的多发性骨髓瘤患者骨髓标本标记CD45、CD38、CD138、CD56、CD19、CD117、CD13、CD20、CD22、CD34、Kappa和Lambda进行检测,并通过ISS分期及细胞遗传学特征进行预后分层,分析和比较不同预后分组患者的免疫表型特点。结果显示：异常浆细胞均表达CD138（100%）及CD38（100%）,而CD19^＋（6.5%）,CD45^＋（22.6%）,CD56^＋（59.6%）及单克隆轻链抗原表达（82%）相对常见,其他CD117^＋（27.4%）,CD13^＋（17.7%）,CD20^＋（16.1%）存在个体差异;经预后分层后显示,标高、高危组CD56表达率低于低危组（P=0.02）,而CD117表达率高于低危组（P=0.011）。结论：多发性骨髓瘤免疫表型具有异质性,在初诊的中、高危患者中CD56表达较低,而CD117表达较高,这可能与不良预后相关。     

急性双表型白血病细胞形态学和免疫表型的研究

目的探讨骨髓细胞免疫表型在急性双表型白血病中的诊断价值及其与骨髓细胞形态学的比对研究。方法对190例急性白血病患者采用流式细胞仪四色免疫荧光直接标记技术检测细胞免疫表型,通过骨髓细胞形态学分型进行分析。采用流式细胞术四色免疫荧光直接标记技术与CD45/SSC设门分析技术检测11例双表型急性白血病患者,根据欧洲白血病免疫分类协作组(EGIL)积分标准进行免疫学分型。结果 190例急性白血病中被免疫分型诊断为急性髓系白血病88例(占46.3%),急性淋系白血病88例(占46.3%),未分化白血病3例(占1.6%),与骨髓细胞形态学和组织化学诊断具有高符合率。190例急性白血病中被免疫分型诊断为急性双表型白血病11例(占5.8%),其中髓系与B系共表达的抗原7例(占3.7%),均共同表达cCD79a和cMPO,胞膜抗原CD19和CD10表达量较高;髓系与T系共表达的抗原3例(占1.6%),均共同表达cCD3和cMPO,胞膜抗原CD5和CD7表达量较高;髓系、B系与T系均表达的抗原1例(占0.5%)。此外,急性双表型白血病患者高表达CD34胞膜抗原(占81.8%),提示预后不良。结论急性双表型白血病发病率较低,骨髓细胞免疫表型对诊断及鉴别双表型急性白血病有特异性,以髓系和B系抗原共表达为主。采用骨髓细胞形态学和流式细胞术联合检测急性双表型白血病可提高诊断准确性,能有效地指导临床制订治疗方案和进行预后判断。     

流式细胞术在多发性骨髓瘤诊断中的应用

目的探讨流式细胞术免疫分型在多发性骨髓瘤（MM）诊断中的价值。方法应用多参数流式细胞仪检测35例MM和10例继发性单克隆免疫球蛋白血症骨髓细胞免疫表型。结果 35例MM患者表达CD38、CD138强阳性,平均荧光强度（MFI）分别为695.2±120.69、56.23±436.2。CD45阴性或弱阳性。33例MM患者CD19阴性。32例MM患者表达CD56强阳性,MFI为779.9±241.0。10例继发性单克隆免疫球蛋白血症患者表达CD38、CD138强阳性,MFI分别为621.3±82.8、549.6±132.7。CD45表达均阳性。8例患者CD19阳性。CD56均阴性,MFI为24.61±13.1。MM患者CD44表达荧光强度明显高于继发性单克隆免疫球蛋白血症（P〈0.01）。结论应用多参数流式细胞仪检测细胞表面CD38、CD138、CD19、CD56、CD45、CD44抗原表达情况,可方便区分骨髓瘤和良性浆细胞,是MM的重要诊断依据。     

多发性骨髓瘤免疫表型流式细胞术研究新进展

多发性骨髓瘤(multiple myeloma,MM)是一种常见的血液系统恶性肿瘤,以浆细胞恶性增殖、溶骨破坏为特征,表现为M蛋白、骨骼破坏、贫血、肾功能受损和免疫功能异常.通过流式细胞术(flow cytometry,FCM)检测其免疫表型特点,已经作为血液系统疾病的常用检测手段,在辅助诊断、评估预后以及监测微小残留病灶方面的价值,已经被越来越多的学者认同.本文就将免疫表型分析在MM中的应用进展方面作一个综述,包括流式细胞术在MM中的应用和MM中流式免疫表型的特点.     

109例慢性B淋巴系白血病免疫表型特征分析

本研究目的在于了解慢性B淋巴系白血病（B-CLL）的免疫表型特征,为临床的诊断、治疗、微小残留病灶检测及预后判断提供依据。应用流式细胞术及一组单克隆抗体,通过双色/三色流式细胞术,采用细胞表面与胞浆联合标记的方法,对109例序贯而来的B-CLL病例进行免疫表型分析。结果表明,109例B-CLL均表达CD19,其他B系抗原CD20、CD22、CD23阳性率分别为95.40%、94.50%、86.20%,无1例表达CD10。在105例B-CLL中有28.60%表达FMC-7,36.20%表达CD38。在所有B-CLL中CD5^＋B-CLL占86.23%,CD5^-B-CLL占13.76%。对50例B-CLL进行ZAP-70的检测,其中12例ZAP-70阳性。在73例B-CLL中,膜表面球蛋白κ轻链阳性多于λ轻链。结论：了解B-CLL的免疫表型特点对此类疾病的诊断及治疗后微小残留病灶的检测具有重要意义,而免疫表型与预后的关系则需作进一步研究。     

多发性骨髓瘤免疫表型的异质性:影响生物学和疾病的临床病程

作者研究112例未治疗的多发性骨髓瘤(MM)患者。其中10例Ⅰ期.30例Ⅱ期,72例Ⅲ期。105例依据浆细胞形态学分为两个亚组:分化组(成熟和中间型)69例,未分化组(未成熟和原浆细胞型)36例。中位数生存22个月,中位数年龄69岁。免疫表型分析用间接免疫萤光(TF)或酸性磷酸酶/抗碱性磷酸酶(A-PAAP)。结果大多数患者的骨髓浆细胞CD38(OKT10/GRTA4)和Han-PC1 单克隆抗体(MoAb)活性增强,阳性病例分别为96%和83%,66%的病例CD9抗原中度表达。另一方面,小于1/3的患者CD10.CD20和HLA-DR 阳性,通常表达较弱(在2/3病例阳性浆细胞<30%)。检测了21例患者与三个髓     

多参数流式细胞术检测多发性骨髓瘤免疫表型及意义

流式细胞术是研究细胞生物学的重要工具,具有快速、灵敏、客观和重复性好等特点。利用多参数流式细胞术可对多发性骨髓瘤进行细胞免疫表型检测,以及微小残留病的监测等,有助于多发性骨髓瘤的诊断、分型、预后判断及病情监测。     

流式细胞术在多发性骨髓瘤中的应用

多发性骨髓瘤(MM)是以骨髓中克隆性浆细胞恶性增殖和异常积聚为特征的肿瘤,以浆细胞恶性增殖、溶骨破坏为特征,表现为M蛋白、骨骼破坏、贫血、肾功能受损和免疫功能异常.流式细胞术(FCM)是血液系统疾病的常用检测手段,其在辅助诊断、评估预后以及监测微小残留病灶方面的作用越来越受到关注.     

急性淋巴细胞白血病患者免疫表型分析

目的:探讨急性淋巴细胞白血病(acute lymphoblastic leukemia,ALL)的免疫表型特点.方法:运用流式细胞术及特异性单克隆抗体CD2,CD3,CD4,CD5,CD7,CD8,CD10,CD13,CD19,CD20,CD22,CD33,CD34,CD38,CD45,CD56,CD117,HLA-DR,sIgM,cyIg,cyCD79a,MPO和TdT对58例形态学诊断ALL患者进行免疫表型检测.结果:通过CD3、CD19、CD33和MPO的表达情况分出T-ALL 8例(13.79%),B-ALL 49例(84.48%),混合细胞白血病1例(1.72%).B-ALL进一步根据CD10,CD20,cyIg,sIgM的表达情况分为早前B型5例(8.62%),普通B型34例(58.62%),前B型9例(15.52%),成熟B型1例(1.72%).B-ALL异常细胞存在抗原跨系列表达、跨阶段表达、缺失表达.儿童ALL免疫分型及白血痛相关免疫表型与成人ALL差异无统计学意义.结论:ALL的异常骨髓细胞有明显本系列特征、原始细胞标记和跨系表达,在此基础上应用多参数流式细胞仪可有效检测微小残留病变.