人食管鳞状细胞癌组织中nm23和p53蛋白表达及意义

目的：探讨食管鳞状细胞癌（ＥＳＣ）组织中ｎｍ２３、ｐ５３蛋白表达及其意义。方法：应用免疫组织化学方法检测６３例ＥＳＣ癌组织中ｎｍ２３、ｐ５３蛋白表达，结果：ｎｍ２３蛋白表达与洒巴结转移呈负相关，与病理分级、病理分期无关。ｐ５３蛋白表达与病理分级、病理分期及淋巴结转移无关。两蛋白表达不存在相关性。ｎｍ２３阳性、ｐ５３阴性，生存期明显长于ｎｍ２３阴性、ｐ５３阳性或其它组合者。结论：ｎｍ２３低表达在ＥＳ     

食管鳞癌bcl-2和p53蛋白的表达及相互关系和临床意义

目的：探讨ｂｃｌ－２、ｐ５３蛋白在食管鳞癌（ＥＳＣ）的发生，发展中的作用及相互间的关系。方法：利用免疫组织化学技术（ＬＳＡＢ），检测了６５例ＥＳＣ和５３例癌旁鳞状上皮组织中ｂｃｌ－２与ｐ５３蛋白的表达。结果：ｂｃｌ－２蛋白与ＥＳＣ的分化程度关系密切 ，且表达与１年生存率呈负相关；Ｐ５３蛋白在ＥＳＣ组织中的表达明显高于癌旁鳞状上皮组织，且与ＥＳＣ的临床分期呈负相关，与淋巴结转移呈负相关。结论：ｂｃｌ     

胃癌Bcl-2、P53蛋白表达与细胞凋亡的关系研究

目的：了解胃癌细胞凋亡与凋亡调控基因Ｂｃｌ－２、Ｐ５３蛋白表达的关系,并探讨胃癌细胞凋亡与组织学分型的关系。方法：采用原位末端标记法（ＴＵＮＥＬ）检测细胞凋亡,采用ＡＢＣ免疫组化法检测Ｂｃｌ－２和Ｐ５３蛋白的表达。结果：从高分化、中分化到低－未分化腺癌的细胞凋亡指数逐步下降,而Ｂｃｌ－２和Ｐ５３蛋白表达无显著差异。在Ｌａｕｒｅｎ分型,肠型胃癌与弥漫型胃癌比较,细胞凋亡指数高、Ｂｃｌ－２蛋白低表达及     

膀胱移行细胞癌中细胞凋亡、Bcl-2、p53表达与预后的关系

了解膀胱移行细胞癌中细胞凋亡与细胞增殖的关系,以及与相关基因蛋白表达的关系及其预后意义。方法利用ＴＵＮＥＬ法及免疫组化Ｓ－ＰＦ法检测３０例膀胱移行细胞癌及１０例“正常膀胱粘膜”中的细胞凋亡指数以及Ｂｃｌ－２、ｐ５３的表达,同时计算核分裂指数。     

转导野生型p53基因提高K562细胞对紫外线诱导的细胞凋亡的敏感性

目的：观察野生型ｐ５３基因转染的Ｋ５６２细胞对紫外线诱导其细胞凋亡的影响。方法：应用基因转染技术将重组野生型ｐ５３的逆转录病毒载体转导ｐ５３蛋白缺失的Ｋ５６２细胞，用紫外线照射Ｋ５６２ｐ５３细胞不同时间后再培养不同时间，用ＤＮＡ片段化和细胞ＤＮＡ原位末端标记技术检测细胞凋亡情况。结果：紫外线照射Ｋ５６２ｎｅｏ和Ｋ５６２ｐ５３细胞８分钟后再培养７～１２小时，Ｋ５６２ｎｅｏ和Ｋ５６２ｐ５３两组细胞的凋亡差异显著。结论：野生型Ｐ５３蛋白在Ｋ５６２细胞表达后，能加速紫外线诱导的Ｋ５６２细胞凋亡，为临床应用ｐ５３进行基因治疗提供了有意义的实验基础     

MDM2和p53基因蛋白在急性白血病细胞中表达及与化疗反应的关系

目的：研究人急性白血病（ＡＬ）细胞ＭＤＭ２及ｐ５３基因蛋白表达水平、它们的相互关系及对ＡＬ化疗反应预测的价值。方法：免疫组化方法检测ＭＤＭ２及ｐ５３蛋白。结果：①４６例ＡＬ细胞ＭＤＭ２蛋白阳性率为７１．７％，ｐ５３蛋白阳性率为２１．７％，无细胞类型不同的差别（Ｐ＞０．０５），复发难治组比初发未治组约高１倍；②ＭＤＭ２与ｐ５３蛋白呈反向表达者多见，以ＭＤＭ２（＋），ｐ５３（－）方式表达（６７．４％）高于同向方式表达（１５．２％）（Ｐ＜０．０１）；③ＭＤＭ２蛋白阴性者骨髓缓解（ＢＭＲ）率（６９．２％）高于阳性者（３３３％）（Ｐ＜０．０５），两种蛋白不同表达关系对化疗效应有影响；④ＡＬ患者４例中２例化疗后ＭＤＭ２蛋白转阴性，获ＢＭＲ，另２例则反之。结论：人ＡＬ细胞ＭＤＭ２蛋白阳性率高，ｐ５３蛋白阳性率低；在同一ＡＬ细胞中两者多呈反向表达，且不同表达方式对化疗有影响；在ＡＬ细胞中确实存在ＭＤＭ２（＋），ｐ５３（－）表达方式。ＭＤＭ２蛋白，特别是ＭＤＭ２蛋白与ｐ５３蛋白联检可能预测ＡＬ细胞对化疗的敏感性     

肺癌p53蛋白表达的定量研究及其意义

采用流式细胞术，定量检测了３０例福尔马林固定、石蜡包埋肺癌标本ｐ５３蛋白的表达和细胞ＤＮＡ含量。结果ｐ５３蛋白在肺癌表达的阳性率为８０％，异倍体肺癌ｐ５３蛋白表达的量高于二倍体肺癌（Ｐ＜０．０５），ｐ５３蛋白表达阳性的肺癌，其Ｓ期细胞比例高于ｐ５３蛋白表达阴性者（Ｐ＜０．０５）。结果表明ｐ５３蛋白表达在促进细胞ＤＮＡ合成和增殖中起重要作用     

ELISA检测肺癌患者血清p53抗体

ＥＬＩＳＡ检测肺癌患者血清ｐ５３抗体郭华北，蒋秉坤（蚌埠医学院，安徽蚌埠２３３００３）在人类许多肿瘤细胞中发现有抗癌基因ｐ５３的突变，导致细胞内ｐ５３蛋白的高水平表达［１］。检测肿瘤患者ｐ５３抗体（ｐ５３Ａｂ）将为肿瘤发病机理及肿瘤免疫学的研究提供依...     

结直肠癌p53基因点突变和蛋白表达的研究

目的了解中国人结直肠癌ｐ５３基因的突变谱，探讨聚合酶链反应－单链构象多态（ＰＣＲ－ＳＳＣＰ）银染技术用于研究结直肠癌中ｐ５３基因突变的可行性。方法应用ＰＣＲ－ＳＳＣＰ银染技术检测４１例结直肠癌ｐ５３基因突变，以ＡＢＣ免疫组织化学染色检测结直肠癌Ｐ５３蛋白的表达。结果３４％（１４／４１）的病例显示有ｐ５３基因突变，其中外显子５，６，７和８各有４，１，５和４例突变。２０例有Ｐ５３蛋白异常表达，阳性率为４９％。结论导致Ｐ５３蛋白异常堆积的ｐ５３基因突变是结直肠癌的一种常见的分子结构改变，可能在结直肠癌的发生和发展中起着重要的作用。ＰＣＲ－ＳＳＣＰ银染技术是一简便、快速、有效的检测基因点突变的方法     

野生型p53基因转移对大鼠血管平滑肌细胞凋亡的影响

目的：血管平均滑肌细胞的凋亡在球囊损伤后３０分钟内即已经开始，用基因转移的方法加速这一经过是控制再狭窄的途径之一。选择野生型ｐ５３作为目的基因，观察其对血管平滑骨细胞生长及凋亡的影响。方法：构建了野生型ｐ５３基因重组反转录病毒载体ｐＬＸＳＮ－ｐ５３。重组载体转染培养的大鼠主动脉增滑肌细胞，测定转染效率和ｐ５３基因的表达，用细胞存活曲线、流式细胞仪和ＤＮＡ “ｌａｄｄｅｒ”法检测了细胞生长和凋亡状况     

Ligustrazine alleviates acute pancreatitis by accelerating acinar cell apoptosis at early phase via the suppression of p38 and Erk MAPK pathways

ObjectiveThis study aimed to investigate the role of ligustrazine on apoptosis and inflammatory reaction in acute pancreatitis.MethodsRats and acinar cells were treated with caerulein to induce acute pancreatitis models. Cell models were treated with saline, p38 inhibitor, Erk inhibitor and ligustrazine. Then, the levels of TNF-α, IL-1β and IL-6 were determined by ELISA assay, the protein levels of p38, Erk1/2, p53 and cleaved caspase3 were determined by western blotting, and apoptosis were measured by flow cytometry. Rat models were treated with saline and ligustrazine. Plasma amylase and pancreatic myeloperoxidase activity and the levels of TNF-α, IL-1β and IL-6 in rats were determined. The protein levels of p38, Erk1/2, p53 and cleaved caspase3 in pancreas tissues were determined by western blotting, and pancreas tissues were also performed TUNEL staining to observe apoptosis status.ResultsLigustrazine downregulated the levels of TNF-α, IL-1β, IL-6. The protein levels of p38 and Erk were reduced by p38 inhibitor, Erk inhibitor and ligustrazine, while the levels of p53 and cleaved caspase 3 were upregulated. Apoptosis of AP acinar cells and cells in AP rat models was promoted after treated with ligustrazine. Plasma amylase and pancreatic myeloperoxidase activity in AP rat models were reduced by ligustrazine.ConclusionLigustrazine alleviates acute pancreatitis by accelerating acinar cell apoptosis at early phase via the suppression on p38 and Erk MAPK pathways. It is capable of attenuating the severity of acute pancreatitis and may have a therapeutic effect on patients with acute pancreatitis.     

生长抑素区域动脉灌注对SAP鼠胰腺腺泡细胞凋亡的影响

[目的]探讨生长抑素区域动脉灌注对重症急性胰腺炎(SAP)大鼠胰腺腺泡细胞凋亡的影响.[方法]SD大鼠64只,随机分为假手术组(A组),SAP组(B组),生长抑素外周静脉注射组(C组),生长抑素区域动脉灌注组(D组).测定各组大鼠的血清淀粉酶(Amy),观察胰腺病理变化,并检测胰腺腺泡细胞的凋亡率.[结果]①制成SAP模型后,各组Amy水平显著上升,而C组和D组可使Amy下降,以D组下降更为明显.②C组和D组生长可使胰腺腺泡细胞凋亡率明显上升,胰腺病理损害程度减轻,以D组作用更强.[结论]①生长押素可诱导SAP大鼠胰腺细胞凋亡,减轻胰腺病理损害,是治疗SAP的有效方法.②生长抑素区域动脉灌注是治疗SAP的增效途径.     

Effects of early decompression and cholecystokinin inhibition in rats with acute pancreatitis induced by bile-pancreatic-duct obstruction

Biologic data related to pancreatic regeneration and acinar-cell homeostasis after ductal decompression would be useful in clinical settings to elucidate the time at which obstructions in human biliary acute pancreatitis (AP) should be removed. Our aim was to evaluate the outcome of AP after early removal of bile-pancreatic-duct obstruction (BPDO) and to ascertain whether cholecystokinin (CCK) blockade accelerates recovery from the disease. We conducted analysis of apoptosis and cell cycle, as well as measurements of enzyme and calcium load, in acinar cells using flow cytometry to ascertain the capability of the pancreas to regain its function after AP. Male Wistar rats were subjected to AP by means of BPDO for 6 hours and 24 hours. In other groups, the BPDO was opened 24 hours after induction; 3 days and 7 days later they were killed. Half of the rats in which the BPDO was opened were administered L364,718, a CCK-receptor antagonist (0.1 mg/kg/12 hours), 30 minutes before the induction of BPDO. Plasma amylase activity, hematocrit, and pancreatic weight returned to control values after BPDO opening. The highest degree of oxidative stress was found in the pancreases of rats subjected to BPDO for 6 hours, as indicated by the decrease in pancreatic glutathione content, but it was not restored 7 days after BPDO opening. Cell-cycle distribution, as measured with propidium iodide DNA staining, showed increases in the proportion of acinar cells in S-phase from 3 days after BPDO opening in L364,718-treated and nontreated rats. Annexin V-fluorescein isothiocyanate labeling revealed deletion of acinar cells by way of apoptosis 3 days after BPDO opening. However, it may be compensated 7 days after BPDO opening because regardless of whether rats were treated with L364,718, significant increases in synthesis and mitosis were detected. Accumulation of digestive enzymes and calcium in acinar cells was found during BPDO, but this appeared to have normalized 3 days after BPDO opening and onward in both L364,718-treated and nontreated rats. In conclusion, early removal of obstruction allowed rapid cell proliferation and prevented the progression of severe alterations within acinar cells induced by BPDO. CCK blockade does not accelerate pancreatic recovery after BPDO opening.     

地塞米松对重症急性胰腺炎大鼠胰腺腺泡细胞凋亡的影响

目的研究地塞米松对重症急性胰腺炎大鼠胰腺腺泡凋亡的作用。方法通过胆胰管注入脱氧胆酸钠制备重症急性胰腺炎大鼠模型,设立对照组、模型组和地塞米松治疗组。显微镜观察并进行胰腺组织病理学评分;TUNEL方法测定胰腺腺泡细胞凋亡指数;RT-PCR技术检测胰腺组织Bax与Caspase-8 mRNA水平表达;免疫组织化学检测Bax与Caspase-8蛋白水平的表达。结果同模型组比较,地塞米松组大鼠胰腺组织病理损伤明显减轻;腺泡细胞凋亡指数显著升高[(11.10±2.42)vs(6.50±1.58),P<0.05];Bax mRNA与Bax蛋白水平显著升高分别为[(1.370±0.297)vs(1.046±0.337),P<0.05;(457.20±36.56)vs(339.40±26.73),P<0.05]。结论地塞米松可上调促凋亡基因Bax表达而诱导腺泡细胞凋亡,使胰腺组织病理学改变减轻,改善了病情。     

大鼠脑组织经反复高加速度暴露后bcl-2,bax,p53和白细胞介素1β转化酶的表达

背景反复高正加速度(+Gz)暴露可引起脑损伤,但其病理机制尚不清楚.目的了解反复高正加速度(+Gz)暴露后大鼠脑组织中bcl-2,bax,p53和白细胞介素1β转化酶基因的表达变化,探讨细胞凋亡在反复高+Gz暴露所致脑损伤中的病理作用.设计以SD大鼠为研究对象的随机对照实验研究.单位一所医院的航空医学研究中心.材料选用体质量为180～220 g健康雄性SD大鼠26只,随机分成对照组和+Gz暴露组,其中对照组4只,+Gz暴露组22只.干预将大鼠固定于动物离心机的转臂上,头朝向离心机轴心,+Gz暴露组条件为G值+14 Gz,增长率1.5G/s,峰值持续时间45 s,共作用3次,两次中间间歇0.5 h.对照组大鼠亦在动物离心机上经历类似实验步骤,所承受的G值为+1 Gz.分别于暴露后0.5,6.0,24.0和48.0 h断头取脑.用半定量反转录聚合酶链反应方法检测对照组和+Gz暴露后0.5,6.0,24.0和48.0 h大鼠脑组织中bcl-2,bax,p53和白细胞介素1 β转化酶mRNA表达水平,并用原位末端脱氧核苷酸转移酶标记法检测脑组织中凋亡细胞.主要观察指标各组大鼠+Gz暴露后大鼠脑组织中bcl-2,bax,p53和白细胞介素1β转化酶mRNA表达水平.结果+Gz重复暴露后6h,大鼠脑组织bcl-2 mRNA表达水平(0.32±0.08)明显低于对照组(0.69±0.15),bax,p53和ICE mRNA表达水平[(.55±0.09),(0.48±0.12),(0.79±0.12)]明显高于对照组[(0.33±0.09),(0.31±0.05),(0.51±0.09)],差异有显著性意义(P＜0.01).+Gz重复暴露后24 h,大鼠脑组织bcl-2mRNA表达水平(0.28±0.05亦明显低于对照组(0.69±0.15),bax,p53和ICE mRNA表达水平[(0.61±0.15),(0.54±0.07),(0.84±0.15)]亦明显高于对照组[(0.33±0.09),(0.31±0.05),(0.51±0.09)],差异有显著性意义(P＜0.01).+Gz重复暴露后0.5 h和48 h,大鼠脑组织bcl-2,bax,p53和ICE mRNA表达水平与对照组比较,差异无显著性意义(P＞0.05).+Gz重复暴露后6 h和24 h在大脑皮质、海马CA1区和纹状体可见部分神经元细胞发生凋亡.结论反复高+Gz暴露可引起大鼠脑组织中bcl-2,bax,p53和白细胞介素1β转化酶表达变化,细胞凋亡可能是反复高Gz暴露致脑损伤的机制之一.     

miR-494负调控ROCK1、PTEN抑制急性胰腺炎细胞凋亡的机制研究

目的:探讨miR-494负调控ROCK1、PTEN进而抑制胰腺细胞凋亡并参与急性胰腺炎发生发展的机制研究。方法:雨蛙素处理大鼠胰腺腺泡AR42J细胞,ELISA法检测细胞培养上清液中淀粉酶、TNF-α、IL-1、IL-6水平以验证急性胰腺炎细胞模型。RT-PCR检测正常AR42J细胞（对照组）、急性胰腺炎细胞模型（模型组）中的miR-494表达水平。流式细胞法检测对照组、转染阴性对照miRNA的急性胰腺炎细胞模型（阴性对照组）以及转染miR-494的急性胰腺炎细胞模型（miR-494转染组）的细胞凋亡情况。Western Blot检测对照组、阴性对照组以及miR-494转染组中促凋亡蛋白ROCK1、PTEN的表达情况。结果:雨蛙素处理AR42J细胞8 h、12 h时的细胞培养上清液中的淀粉酶、TNF-α、IL-1、IL-6水平均显著高于0 h及对照组,差异均有统计学意义（ P<0.05）,提示模型构建成功。急性胰腺炎细胞模型构建后8 h、12 h、24 h的miR-494表达水平均显著高于4 h时及对照组,差异均有统计学意义（ P<0.05）。模型组的细胞凋亡比例显著高于对照组,miR-494转染组的细胞凋亡比例显著低于模型组,差异均有统计学意义（ P<0.05）。miR-494转染组ROCK1、PTEN蛋白的表达水平均显著低于模型组和阴性对照组,差异均有统计学意义（ P<0.05）。 结论:急性胰腺炎发生时过表达的miR-494能够抑制促凋亡蛋白表达,从而抑制胰腺腺泡细胞凋亡并促进急性胰腺炎发生发展。     

吉西他滨对HL-60细胞c-myc基因表达的影响及其诱导细胞凋亡作用

本研究探讨吉西他滨对HL-60细胞c-myc基因表达及细胞凋亡的影响及吉西他滨应用于白血病治疗的可行性。体外培养人白血病细胞系HL-60细胞,以不同浓度吉西他滨作用于HL-60细胞,用RT-PCR方法检测细胞c-myc mRNA表达的变化;以Western blot方法检测细胞C-MYC蛋白表达水平;原位酶标记法(TUNEL法)检测细胞凋亡情况。结果表明,1.0μg/ml吉西他滨作用于HL-60细胞12、24、36、48小时后,不同程度地抑制HL-60细胞c-myc mRNA的表达,并具有时间依赖性,其最适作用时间为24小时,与阿糖胞苷(Ara-C)组及空白对照组比较,抑制作用差异有统计学意义(p0.05)。1.0μg/ml吉西他滨作用于HL-60细胞24、48、72小时后,C-MYC蛋白表达水平明显下降,于48小时抑制作用最明显,抑制率为94.16%,方差分析显示,各时间点吉西他滨组与空白对照组和Ara-C组比较,差异均有统计学意义(p0.01);吉西他滨作用24小时组、48小时组及72小时组组间比较,也有显著性差异(p0.01)。1.0μg/ml吉西他滨作用于HL-60细胞24小时后,出现明显的诱导细胞凋亡作用,阳性率83.67%,与空白对照组(阳性率3.00%)和Ara-C组(阳性率10.67%)比较差异均有统计学意义(p0.01)。结论:吉西他滨对HL-60细胞c-myc基因及C-MYC蛋白表达有显著的抑制作用,能够诱导HL-60细胞凋亡,其抑制及诱导凋亡作用强于阿糖胞苷,提示吉西他滨可能作为白血病治疗的新选择。     

急性胰腺炎胰腺腺泡细胞凋亡对大鼠腹腔巨噬细胞功能影响的研究

目的：研究急性胰腺炎胰腺腺泡细胞凋亡对巨噬细胞免疫功能的影响。方法：采用奥曲肽（OCT）诱导cae-rulein处理的AR42J细胞凋亡作用于大鼠腹腔巨噬细胞,检测巨噬细胞的粘附和吞噬功能;使用ELISA试剂盒检测细胞培养上清中TNF-α的含量。结果：急性胰腺炎胰腺腺泡细胞凋亡显著降低巨噬细胞的粘附功能和吞噬功能（P〈0.05）,同时能降低巨噬细胞分泌TNF-α的功能。结论：急性胰腺炎胰腺腺泡细胞凋亡能降低巨噬细胞的功能。     

生长抑素及生长激素对重症急性胰腺炎外周血中性粒细胞凋亡的干预作用

目的探讨外周血中性粒细胞凋亡在重症急性胰腺炎(SAP)发病机制中的作用,以及生长抑素(SS)和生长激素(GH)对外周血中性粒细胞凋亡水平的调节作用。方法采用流式细胞仪检测重症急性胰腺炎外周血中性粒细胞凋亡水平,以及SS、SS+GH序贯疗法对中性粒细胞凋亡的影响。结果SAP患者外周血中,中性粒细胞凋亡明显延缓。MODS患者的中性粒细胞凋亡延缓较SIRS患者显著。SS治疗能纠正中性粒细胞凋亡延缓(P<0.05)。SS+GH序贯疗法组与SS组比较差异无显著性(P=0.05)。结论中性粒细胞凋亡延缓是重症急性胰腺炎发病的重要机制,并与疾病的严重程度相关。生长抑素通过改善中性粒细胞凋亡,对重症急性胰腺炎有治疗作用,与生长激素联用,有协同作用。