GRP78/BiP在强噪声诱导下豚鼠耳蜗螺旋神经节细胞损伤过程中的动态观察

目的 观察分子伴侣葡萄糖调节蛋白78 (GRP78/BiP)在豚鼠强噪声暴露后不同时期的耳蜗螺旋神经节细胞中的表达情况,探讨GRP78/BiP在强噪声暴露后豚鼠耳蜗螺旋神经节细胞损伤中的作用.方法 选用健康雄性白色豚鼠25只,随机分为5组,将实验组动物暴露于120 dB SPL、4 kHz窄带噪声环境4h.分别对健康对照组及噪声刺激后3h、ld、4d、14d组豚鼠处死前测试听性脑干反应(auditory brainstem response,ABR).用免疫组化及Western Blot方法检测GRP78/BiP的表达及在耳蜗螺旋神经节细胞的分布情况.结果 实验组耳蜗螺旋神经节细胞的GRP78/BiP蛋白明显高于健康对照组(P＜0.01),且在3h、1d、4d、14d均维持在比较高的水平.结论 强噪声暴露后GRP78/BiP的表达可引导蛋白质正确折叠,降低细胞损伤,是听觉系统的一种自身防御机制.     

砷及MPST过表达对SH-SY5Y细胞GRP78/CHOP通路的影响

目的探讨内质网应激是否参与亚砷酸钠(NaAsO2)神经毒性损伤,明确3-巯基丙酮酸硫转移酶(3-mercaptopyruvate sulfurtransferase,MPST)过表达是否调节砷诱导的内质网应激。方法通过构建MPST基因慢病毒表达载体来获得稳定表达外源MPST基因的SH-SY5Y细胞株作为SH-MPST过表达组,另设空载体转染细胞为SH-PEB组,染砷组(NaAsO2组),内质网应激阻断剂TUDCA组,TUDCA预处理染砷组。Western blot法分别检测过表达MPST、染砷及TUDCA预处理后细胞内GRP78和CHOP蛋白表达的变化。结果单纯MPST过表达不影响SH-SY5Y细胞内GRP78、CHOP蛋白的表达水平;经NaAsO2处理后,SH-PEB细胞内GRP78、CHOP蛋白明显上调(P<0.01),而被内质网应激阻断剂TUDCA所拮抗;MPST过表达则抑制砷对GRP78、CHOP蛋白的上调(P<0.01);然而,TUDCA预处理则明显逆转MPST过表达对GRP78、CHOP蛋白的影响(P<0.01)。结论GRP78/CHOP内质网应激通路参与了砷诱导的神经毒性损伤;MPST过表达可降低砷诱导的内质网应激水平。     

阿托伐他汀对2型糖尿病大鼠心肌GRP78和CHOP表达的影响

探讨阿托伐他汀对2型糖尿病大鼠心肌组织内质网应激相关因子CCAAT/增强子结合蛋白同源蛋白（CHOP）和葡萄糖调节蛋白78（GRP78）表达的影响。将Wistar大鼠随机分为正常对照组（NC组）、糖尿病心肌病模型组（DCM组）和阿托伐他汀治疗组（DCM+Ato组）。采取高脂肪饲料喂养加一次性腹腔注射链脲佐菌素的方式制备2型糖尿病心肌病大鼠模型,DCM+Ato组大鼠予阿托伐他汀干预8周。采用左室插管评估大鼠心功能,HE染色观察心肌组织病理学改变,TUNEL法测定心肌细胞凋亡水平,Western blot检测心肌组织的GRP78和CHOP蛋白表达量。DCM组较NC组细胞肥大,排列紊乱,形态不规则,DCM+Ato组较DCM组改善。与NC组比较,DCM组左室舒张末期压（LVEDP）显著升高,左室收缩压（LVSP）和左室压力上升或下降最大速率（LV±dp/dt max）显著降低,细胞凋亡率升高,GRP78、CHOP表达明显升高（P＜0.05）;与DCM组比较,DCM+Ato组LVEDP显著降低,LVSP和LV±dp/dt max显著升高,细胞凋亡率降低,GRP78、CHOP表达明显下降（P＜0.05）。阿托伐他汀能有效减轻2型糖尿病大鼠的心肌病理损伤及改善心功能,可能与下调内质网应激相关因子GRP78、CHOP的表达,减少心肌细胞凋亡有关。     

利拉鲁肽对高糖培养的H9c2心肌细胞氧化应激和内质网应激的影响

摘 要 目的：探讨利拉鲁肽对高糖培养的H9c2心肌细胞氧化应激和内质网应激的影响。方法: 在H9c2细胞的高糖培养液中加入利拉鲁肽（LIRA）、活性氧簇分子（ROS）清除药N-乙酰半胱氨酸（NAC）处理24 h,用流式细胞术检测细胞的ROS水平,用Western blot的方法检测H9c2细胞内质网应激标志蛋白葡萄糖调节蛋白78（GRP78）和C/EBP 同源蛋白（CHOP）的表达水平。结果:与正常糖对照组比较,高糖组细胞内的ROS含量、GRP78和CHOP的蛋白表达水平显著上升（P<0.01）。与高糖组比较,利拉鲁肽显著抑制了细胞内的ROS产生（P<0.01）,降低了GRP78和CHOP的蛋白表达水平（P<0.05）。结论:利拉鲁肽能抑制高糖培养的H9c2细胞的氧化应激和内质网应激水平。     

氯沙坦抑制转录因子GADDl53/CHOP的激活在糖尿病大鼠肾脏中的保护作用

目的探讨血管紧张素Ⅱ受体1拮抗剂氯沙坦对糖尿病大鼠肾脏细胞凋亡及转录因子GADDl53/CHOP表达的影响。方法单侧肾切除大鼠腹腔注射链脲佐菌素诱发糖尿病,每日灌胃给予氯沙坦(40 mg.kg-1)共8周。应用免疫组织化学检测细胞增殖核抗原(Proliferating cell nuclear anti-gen,PCNA)、GRP78和转录因子GADDl53/CHOP的表达与定位,TUNEL染色检测细胞凋亡部位,流式细胞术检测细胞凋亡程度,并对GRP78、GADDl53/CHOP表达水平进行半定量分析,同时观察尿蛋白、BUN、Scr、Ucr等反应肾功能的相关指标。结果建模8周,糖尿病组大鼠较对照组肾小球、肾小管凋亡细胞数明显增多,GRP78、GADDl53/CHOP表达增强。氯沙坦治疗组较糖尿病组凋亡细胞数减少,GRP78表达减弱,明显抑制GADDl53/CHOP的表达。3组间PCNA阳性细胞数无差异。结论氯沙坦部分通过影响内质网应激中GADDl53/CHOP凋亡途径减少肾脏细胞凋亡,从而发挥肾脏保护作用。     

内质网应激介导白藜芦醇对心肌细胞肥大的保护作用

目的探讨白藜芦醇(resveratrol,Res)对异丙肾上腺素(isoproterenol,ISO)诱导的心肌细胞肥大的保护作用及与内质网应激的关系。方法利用ISO建立乳鼠心肌肥大细胞模型,分为正常对照组、ISO组,白藜芦醇干预组和白藜芦醇对照组。检测心肌细胞表面积和ANP基因表达;流式细胞仪检测细胞凋亡率;检测培养液中乳酸脱氢酶(LDH)和丙二醛(MDA)漏出量;实时定量PCR和Western blot分析GRP78和CHOP的基因和蛋白表达。结果 Res有效抑制ISO诱导的心肌细胞肥大和凋亡,表现为降低心肌细胞表面积和ANP基因表达,减少LDH、MDA漏出量和心肌细胞凋亡率,同时下调GRP78和CHOP的基因和蛋白表达。结论Res可能通过抑制内质网应激相关因子GRP78和CHOP表达发挥对心肌肥大的保护作用。     

杨桃根DMDD对高糖诱导的肾小管上皮细胞HK-2内质网应激IRE1α通路及炎症反应的抑制作用北大核心CSCD

目的研究杨桃根活性成分2-十二烷基-6-甲氧基-2,5-二烯-1,4-环己二酮(DMDD)对高糖诱导肾小管上皮细胞HK-2内质网应激及炎症反应的抑制作用。方法体外培养HK-2细胞,并分为正常组、高糖组、内质网应激抑制剂4-PBA组(5 mmoL·L^(-1))和DMDD高、中、低浓度组(8、4、2μmol·L^(-1))。各组细胞培养结束后,采用CCK-8法检测细胞存活率;ELISA检测细胞上清液中TNF-α、IL-6的水平;AO/EB染色法检测细胞凋亡;Western blot法检测细胞中凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax的表达水平、内质网应激标志蛋白GRP78、CHOP的表达水平以及IRE1α通路相关蛋白(IRE1α、JNK)的磷酸化水平。结果与高糖组比较,DMDD各浓度组细胞存活率明显升高;TNF-α、IL-6水平,Bax/Bcl-2、GRP78、CHOP蛋白表达水平和IRE1α、JNK蛋白磷酸化水平均明显降低,细胞中橙红色荧光明显减少。结论DMDD可能部分通过抑制内质网应激及IRE1α通路相关蛋白的表达,减少炎症反应,达到HK-2细胞的保护作用。     

低水平铅暴露对仔鼠白细胞78kd糖调蛋白表达的影响

目的 通过建立低水平铅暴露模型,研究宫内和哺乳期低水平铅暴露对仔鼠白细胞葡萄糖调节蛋白78(glucose regulated protein 78,GRP78)蛋白表达量的影响,从内质网应激的角度探讨铅的发育免疫毒性.方法 将母鼠孕0天至仔鼠出生21天分成不同时期对仔鼠进行低水平铅暴露,用原子吸收分光光度法测定血铅含量,用Western印迹法检测白细胞内质网GRP78蛋白表达量.结果 3个染铅组血铅含量均明显高于对照组,哺乳组的白细胞中GRP78蛋白表达量明显高于对照组,有显著性差异.结论 哺乳期低水平铅暴露可使仔鼠白细胞内质网上的GRP78蛋白应激性表达增加而表现出发育免疫毒性,内质网上的GRP78是铅的重要蓄积库.     

人参皂苷Rg1对单侧输尿管梗阻大鼠肾脏内质网应激的影响

目的观察人参皂苷Rg1(G-Rg1)对单侧输尿管梗阻(UUO)模型大鼠肾组织内质网应激反应(ERS)的影响。方法 22只SD大鼠随机分为假手术组、模型组、治疗组。治疗组在UUO的基础上给予G-Rg120 mg·kg-1·d-1腹腔注射,模型组及对照组均给予等剂量的生理盐水腹腔注射。14 d后处死大鼠,收集血标本检测肾功能,肾组织行肾脏病理染色及蛋白印迹法检测各组大鼠内质网应激相关蛋白GRP78、凋亡蛋白CHOP等的表达情况。结果模型组大鼠肾功能恶化明显,肾间质纤维化、炎细胞浸润等明显加重;蛋白印迹法结果表明GRP78、CHOP的表达明显增多;治疗组大鼠肾功能明显好转,肾脏病理损害减轻,同时ERS相关蛋白GRP78、CHOP的表达下降。结论 G-Rg1可以通过抑制内质网应激反应减轻UUO模型的肾间质纤维化,发挥肾脏保护作用。     

铅对大鼠C6细胞GRP78表达的影响

目的观察不用时间点暴露于不同剂量醋酸铅后大鼠神经胶质瘤C6细胞葡萄糖调节蛋白78(glucoseregulated protein 78,GRP78)表达量的影响,探讨不同时间不同剂量铅暴露对内质网应激反应的影响。方法Wistar大鼠神经胶质瘤C6细胞培养于含醋酸铅的培养液中,分别于不同时间终止染铅,用Western印迹法检测内质网GRP78表达量。结果(1)0.2μmol/L染铅组:7和30 d GRP78蛋白表达显著增高,其余各个时间点均无显著性变化;(2)1.0μmol/L染铅组:1 d后GRP78蛋白表达量开始显著增高,染铅30 d时已达到染铅前的6.3倍;(3)2.0μmol/L染铅组:0.5 h起GRP78表达量即显著增高,染铅7 d时达到高峰,是染铅前的4.3倍,到30 d时表达量又下降为染铅前的2.6倍。结论铅可以使Wistar大鼠神经胶质瘤细胞内质网上的GRP78蛋白应激性表达增加,内质网上的GRP78是铅的重要蓄积库。     

银杏叶提取物对肝纤维化大鼠肝组织GRP78及CHOP表达的影响

目的：观察银杏叶提取物（GbE）对肝纤维大鼠内质网应激通路相关分子GRP78、CHOP表达的影响,探讨GbE抗肝纤维的作用机制。方法：采用40％的CCl4皮下注射（3mL.Kg-1.d-1,2次/周,首剂加倍） 6周诱导大鼠肝纤维化模型,同时分别以200、100、50mg.Kg-1.d-1的GbE灌胃干预6周,空腹取肝组织,RealTime-PCR及免疫组化法分别检测肝组织GRP78及CHOP基因的mRNA及蛋白表达。结果：肝组织GRP78和CHOP的mRNA及蛋白的表达较正常组明显增加（P〈0.05 P〈0.01）;应用高、中、低剂量GbE干预后,大鼠肝组织GRP78和CHOP基因的mRNA及蛋白表达显著下降（P〈0.05 P〈0.01）。结论：肝纤维化大鼠肝脏发生了ERS反应,GbE下调肝纤维化大鼠肝组织内质网应激通路相关分子GRP78和CHOP的mRNA及蛋白的表达可能是其抗肝纤维化作用的机制之一。     

GRP78与 CHOP在缺血再灌注损伤中的作用

缺血再灌注（ischemia-reperfusion ,IR）过程中多种因素可导致内质网应激（endoplasmic reticulum stress response,ERS）, ERS参与缺血再灌注（ ischemia-reperfusion injury,IRI）的发展过程。总结ERS抗凋亡标志物GRP78与促凋亡标志物CHOP在IRI中的作用。 IRI时GRP78与CHOP表达的变化及其作用。明晰GRP78与CHOP参与IRI的机制。     

Apelin-13对大鼠脑缺血-再灌注损伤的保护作用

摘要: 目的 观察 Apelin-13 对大鼠脑缺血-再灌注损伤（CIRI）的保护作用并探讨其机制。方法 50 只 SD 雄性大鼠随机分为假手术组、 CIRI 模型组及低剂量(0.1 μg/kg)、 中剂量(1.0 μg/kg)和高剂量(10.0 μg/kg) Apelin-13 处理组。线栓法建立大鼠脑 CIRI 模型, 在缺血 2 h 后再灌注 72 h, Apelin-13 处理组于再灌注前 30 min 侧脑室注射 Apelin-13。对各组大鼠神经功能进行评分, TTC 染色观察并计算脑梗死体积百分比, Western blot 检测损伤侧大脑皮质中内质网应激标志蛋白葡萄糖调节蛋白 78 （GRP78） 和 C/EBP 同源蛋白 （CHOP） 的表达。结果 与假手术组比较, CIRI 模型组大鼠神经功能评分显著增加 （P < 0.05）, 脑梗死体积百分比达到 （47.63 ± 5.81） %; 损伤侧大脑皮质中 GRP78 和 CHOP 的表达量显著升高（均 P < 0.05）。与 CIRI 模型组相比, 低剂量组差异无统计学意义（P > 0.05）; 中剂量和高剂量 Apelin-13 处理组大鼠神经功能缺损明显改善, 肌力明显增强, 脑梗死体积百分比显著降低, 损伤侧大脑皮质中 GRP78 和 CHOP 的表达显著降低（均 P < 0.05）。结论 Apelin-13 对大鼠 CIRI 有保护作用, 其机制可能与抑制内质网应激有关。     

Endoplasmic reticulum may not be involved in the lead‐induced apoptosis in PC 12 cells in vitro

Recent researches indicated that mitochondrial pathway might play an important role in lead‐induced apoptosis. Our previous study also found that lead could induce apoptosis in PC 12 cells, and mitochondrial pathway events were involved in this process. As lead can disturb Ca²⁺ homeostasis, the present study was undertaken to determine whether lead can activate key cellular events in the endoplasmic reticulum (ER) pathway, including the expressions of C/EBP homology protein (CHOP) and glucose‐regulated protein 78 (GRP78), and the activation of caspase‐12 and calpain. The results showed that lead could increase the expression of GRP78, while the expressions of CHOP and procaspase‐12 remained unchanged. Moreover, the caspase‐12 and calpain were not activated, and the ultrastructure of endoplasmic reticulum was not altered. Therefore, it suggests that lead may induce apoptosis in PC 12 cells through mitochondrial pathway, but not through the endoplasmic reticulum pathway. © 2009 Wiley Periodicals, Inc. Environ Toxicol, 2010.     

利拉鲁肽对肥胖大鼠脂肪组织内质网应激的影响

目的:研究利拉鲁肽对肥胖大鼠脂肪组织内质网应激的影响。方法:取大鼠分别用基础饲料和高脂饲料喂养8周后,分为正常对照组、肥胖组、肥胖-利拉鲁肽组,前2组大鼠腹腔注射0.9%氯化钠注射液,肥胖-利拉鲁肽组大鼠腹腔注射利拉鲁肽100μg/kg,每日2次,连续8周。末次给药后隔夜禁食处死大鼠,称体质量,取肾周及睾周脂肪组织,计算脂体比,检测脂肪组织中类蛋白质激酶激活的双链RNA的内质网激酶(PERK)、肌醇需求激酶1-α(IRE1-α)、C/EBP同源蛋白(CHOP)mRNA的表达和葡萄糖转运蛋白78(GRP78)的表达。结果:与正常对照组比较,肥胖组大鼠体质量、脂体比和脂肪组织中PERK、IRE1-α、CHOP mRNA及GRP78蛋白表达均明显升高(P<0.01);与肥胖组比较,肥胖-利拉鲁肽组大鼠上述指标均明显降低(P<0.01)。结论:利拉鲁肽可显著减轻肥胖大鼠体质量及内脏脂肪组织过度累积,并可缓解脂肪组织内质网应激。     

辛伐他汀诱导人红白血病K562细胞凋亡的实验研究

目的:探讨辛伐他汀诱导K562细胞凋亡及其机制。方法:取浓度为0(阴性对照组)、10、20、30μmol·L-1的辛伐他汀作用K562细胞72h后,双染色法检测细胞凋亡率;DNALadder实验检测细胞凋亡条带;用线粒体分离试剂分离出胞浆蛋白、微粒体蛋白、线粒体蛋白;逆转录-聚合酶链反应法检测GRP78、caspase-9、caspase-3、GADD153mRNA表达;Western blot法检测GRP78、caspase-12、caspase-9、caspase-3、GADD153、细胞色素C蛋白水平。结果:与阴性对照组比较,10、20、30μmol·L-1辛伐他汀作用K562细胞72h后出现典型的凋亡条带,凋亡率分别为12.41%、19.08%、23.41%(P<0.01),GRP78、caspase-9、caspase-3和GADD153 mRNA表达上调(P<0.05),caspase-12、caspase-9、caspase-3蛋白水平下降,caspase-12定位于内质网,细胞色素C从线粒体释放,GRP78、GADD153蛋白表达上调。结论:辛伐他汀可通过内质网和线粒体途径诱导K562细胞凋亡。     

The nephroprotective effect of tauroursodeoxycholic acid on ischaemia/reperfusion-induced acute kidney injury by inhibiting endoplasmic reticulum stress

The incidence of acute kidney injury (AKI) is very high, and multiple physiopathological processes are involved, including endoplasmic reticulum stress (ERS). Tauroursodeoxycholic acid (TUDCA) is an endogenous bile acid derivative that has been reported to inhibit ERS. To determine whether TUDCA had a nephroprotective effect on AKI and to explore the exact mechanism, an ischaemia/reperfusion (I/R)-induced AKI mouse model and a tunicamycin-pre-treated TCMK-1 cell model were established. It was found that the renal tubular necrosis score and cell apoptosis index reached their peak 24 hr after I/R. GRP78 and C/EBP homologous protein (CHOP) expression and Caspase 12 activation were enhanced, reaching their peaks at 4 and 12 hr, respectively. TUDCA intervention not only decreased the renal tubular necrosis score and the cell apoptosis index but also down-regulated GRP78 and CHOP expression and Caspase 12 activation. The survival rate of TCMK-1 cells pre-treated with TUDCA was significantly higher than that of TCMK-1 cells without TUDCA pre-treatment. In conclusion, TUDCA had a nephroprotective effect on IR-induced AKI by inhibiting ERS and by blocking GRP78 and CHOP expression, reducing Caspase 12 activation and inhibiting cell apoptosis.